BACTEC MYCO/F-Sputa Culture Vials - BD

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Organismus Bereich der Nachweiszeit (Tage)
Mycobacterium tuberculosis, H37Rv, ATCC 27294 8 bis 12
Mycobacterium fortuitum, ATCC 6841 1 bis 3
Mycobacterium kansasii, ATCC 12478 6 bis 12
Vorbereitung des positiven Kontrollfläschchens:
1. Organismus in 7H9-Bouillon anzüchten.
2. Mit Hilfe von steriler NaCl-Lösung wird eine Suspension des Organismus auf McFarland-Standard Nr. 1 (≈ 107 KBE/mL) eingestellt.
3. Die Suspension wird mit steriler NaCl-Lösung auf 104 KBE/mL) verdünnt.
4. 1 mL dieser Suspension wird in ein MYCO/F-Sputa-Kulturfläschchen inokuliert, das mit 2,0 mL rekonstituierter BACTEC PANTA/F-Lösung angereichert wurde. Ein
Inokulum von 1,0 mL wird nur bei den Qualitätskontrollorganismen verwendet.
Die Fläschchen mit den positiven und negativen Kontrollen sollten in das Gerät eingelesen und getestet werden. Das positive Kontrollfläschchen muß als Geräte-positiv
innerhalb des in der vorstehenden Tabelle angegebenen Bereichs nachgewiesen werden. Die negative Kontrolle muß negativ bleiben. Gibt eines dieser Fläschchen
nicht die erwarteten Ergebnisse, benachrichtigen Sie bitte vor Verwendung der Medien unseren Technischen Kundendienst.
Informationen zur Qualitätskontrolle des BACTEC 9000MB-System entnehmen Sie bitte der Bedienungsanleitung für das BACTEC 9000MB-System (MA-0092).
ERGEBNISSE
Eine Wachstums-positive Probe wird vom BACTEC 9000MB-System bestimmt und durch einen Ausstrich auf säurefeste Bakterien bestätigt. Ein positives Ergebnis weist
auf die vermutliche Anwesenheit von lebensfähigen Mikroorganismen im Fläschchen hin.
VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN
Kontamination
Die externe Kontamination der Proben während der Entnahme, Digestion, Dekontamination und Inokulation in die BACTEC-Fläschchen muß sorgfältig vermieden werden.
Aufgrund der Nahrhaftigkeit des Mediums und der nicht-selektiven Natur des Fluoreszenznachweises des Sauerstoffverbrauchs kann es zu einer Durchbruchskontamination
kommen. Außerdem muß bei der Digestion und Dekontamination vorsichtig vorgegangen werden, um eine Durchbruchskontamination von nicht
mykobakteriellen Organismen zu vermeiden. Es dürfen nur die angegebenen Probentypen getestet werden. Eine kontaminierte Probe ergibt einen positiven Wert ohne
klinische Relevanz. Eine entsprechende Beurteilung muß vom Anwender auf der Basis von Faktoren wie z.B. Ergebnis des Ausstrichs auf säurefeste Bakterien, Art des
isolierten Organismus, Vorkommen desselben Organismus in mehreren Kulturen, Patientenanamnese usw. vorgenommen werden. (Siehe Bedienungsanleitung für das
BACTEC 9000MB-System, MA-0092, für Verfahren zur erneuten Dekontamination von Fläschchen.)
Es wird die Dekontamination mit Hilfe der N-Acetyl-L-Cystein-Natriumhydroxid-(NALC-NaOH)-Methode empfohlen. Andere Dekontaminationsmethoden sind im
Zusammenhang mit BACTEC MYCO/F-Sputa-Medien nicht untersucht worden. Derartige zur Digestion und Dekontamination verwendete Substanzen haben möglicherweise
schädliche Wirkungen auf Mykobakterien.
Probentyp
Gegebenenfalls mit BACTEC Supplement/F und BACTEC PANTA/F angereicherte MYCO/F-Sputa-Kulturfläschchen sind zur Kultivierung und Isolierung von digerierten, dekontaminierten,
klinischen Proben sowie anderen sterilen Körperflüssigkeiten als Blut vorgesehen. Die untere Nachweisgrenze dieses Tests kann je nach Art der vorliegenden
Mykobakterien-Spezies variieren.
Kulturfläschchen mit MYCO/F-Sputa-Medium NICHT zur Isolierung von Mykobakterien aus Blut VERWENDEN.
Pleuralflüssigkeiten können rote und weiße Blutkörperchen10 enthalten, die eine hohe oxidative Stoffwechselrate aufweisen und daher falsche positive Ergebnisse liefern
können.
Allgemeine Erwägungen
Der Nachweis mykobakterieller Spezies in klinischen Proben ist abhängig von der Zahl der in der Probe vorliegenden Organismen, der Methode der Probenentnahme,
von Patientenfaktoren wie z.B. dem Vorliegen von Symptomen, früherer Therapie und der Verarbeitungsmethode. Die Einhaltung der Verfahrensvorschriften ist von
entscheidender Bedeutung, um eine optimale Ausbeute der Mykobakterien zu erhalten. Kontamination mit saprophytischen Mykobakterien im Leitungswasser oder
anderen Laborreagenzien und -geräten kann zu falsch-positiven Ergebnissen führen.
Eine optimale Ausbeute an Isolaten wird durch die Zugabe von 0,5 mL verarbeitetem und resuspendiertem Probeninokulum pro Fläschchen erzielt. Die Intensität des
Digestions- und Dekontaminationsprotokolls bei der Verarbeitung der Proben kann die Isolierung und die Zeit bis zum Nachweis ebenfalls beeinflussen.
Mykobakterien können sich in Abhängigkeit vom jeweiligen Stamm, dem Alter der Kultur und anderen Variablen in bezug auf die Säurefestigkeit unterscheiden. Alle
Fläschchen, die vom Gerät als positiv ausgewiesen werden oder nach Ablauf des Testprotokolls trüb erscheinen, müssen sowohl auf selektiven als auch auf nicht-selektiven
Mykobakterien-Medien subkultiviert werden. Nicht-mykobakterielle Spezies können eventuell vorliegende Mykobakterien überwachsen. Diese Kulturfläschchen
müssen erneut dekontaminiert und angezüchtet werden. (Verfahren zur erneuten Dekontamination von Fläschchen entnehmen Sie bitte der Bedienungsanleitung für
das BACTEC 9000MB-System, MA-0092).
Koloniemorphologie und Pigmentierungseigenschaften können nur auf festen Medien bestimmt werden. Weitere Identifizierungstests können durchgeführt werden,
um die mykobakterielle Spezies eines positiven MYCO/F-Sputa-Kulturfläschchens zu bestimmen.
BACTEC MYCO/F-Sputa-Kulturfläschchen, die positiv erscheinen, können eine oder mehrere Mykobakterien-Spezies und/oder andere nicht-mykobakterielle Spezies enthalten.
Die Identifizierung der vorliegenden Mykobakterien erfordert die Anlage einer Subkultur auf einem festem Medium und zusätzliche Verfahren zur Identifizierung
anderer, eventuell vorliegender Organismen. Die Beständigkeit der mikroskopischen Morphologie im BACTEC MYCO/F-Sputa-Medium wurde noch nicht festgelegt.
BACTEC MYCO/F-Sputa-Kulturfläschchen werden bei 37 °C inkubiert, so daß die Isolierung von Mykobakterien, die andere Inkubationstemperaturen erfordern, möglicherweise
verhindert wird (z.B. M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum). Die Isolierung derartiger Organismen erfordert zusätzliche Kulturverfahren. Organismen mit besonderen
Wachstumsanforderungen (z.B. M. haemophilum) werden möglicherweise mit Hilfe des BACTEC MYCO/F-Sputa-Mediums nach Inkubation bei der entsprechenden Temperatur
nicht isoliert. Bei internen bzw. klinischen Untersuchungen wurden die folgenden Isolate vom BACTEC 9000MB-System unter Verwendung der BACTEC MYCO/F-Sputa-
Kulturfläschchen als positiv bestimmt: Mycobacterium abscessus, Mycobacterium avium, Mycobacterium bovis, Mycobacterium celatum, Mycobacterium chelonae,
Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium intracellulare, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium simiae,
Mycobacterium szulgai, Mycobacterium terrae, Mycobacterium tuberculosis und Mycobacterium xenopi.
Die Verwendung von BACTEC PANTA/F-Antibiotika-Supplement, die bei allen nichtsterilen Proben erforderlich ist, kann eine hemmende Wirkung auf bestimmte
Mykobakterien ausüben.
Abschließende Subkulturen wurden im Rahmen der klinischen Untersuchungen nicht routinemäßig durchgeführt. Eine tatsächliche Häufigkeit falsch-negativer
Ergebnisse, definiert als ein MYCO/F-Sputa-Kulturfläschchen, das während der sechswöchigen Inkubationsdauer negativ blieb, subkultiviert wurde und einen mykobakteriellen
Organismus ergab, kann zur Zeit nicht bestimmt werden.
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