BACTEC MYCO/F-Sputa Culture Vials - BD

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As repicagens para os testes de identificação e de susceptibilidade a fármacos podem ser efectuadas utilizando líquido proveniente dos frascos de cultura
MYCO/F-Sputa BACTEC.
Repicagem e Re-introdução dos Frascos: A repicagem deverá ser efectuada numa estante de segurança biológica e utilizando vestuário apropriado,
incluindo luvas e máscaras. Antes de efectuar a repicagem, coloque o frasco em posição vertical e coloque uma compressa com álcool sobre o septo.
Para libertar a pressão positiva que possa existir no frasco, a qual pode ser provocada pelo crescimento de contaminantes, introduza uma agulha estéril
de 25 gauge (ou com diâmetro inferior), equipada com um filtro ou um tampão apropriado, através da compressa com álcool e do septo. A agulha deverá
ser retirada após a libertação da pressão existente no frasco e antes da recolha da amostra do frasco para efectuar a repicagem. A introdução e a
remoção da agulha devem ser efectuadas com um movimento em linha recta, evitando quaisquer movimentos de lateralidade que possam danificar
permanentemente o septo. Para efectuar uma repicagem do frasco ventilado, inverta-o para misturar bem o conteúdo e introduza uma seringa nova,
com uma agulha de 25 gauge, para retirar o meio de cultura para o processamento subsequente. Não volte a colocar a tampa na agulha. Elimine as
agulhas e as seringas para um recipiente de resíduos contaminados resistente a objectos cortantes.
O utilizador poderá desejar que um frasco com um esfregaço negativo seja novamente colocado no instrumento para que continue a ser monitorizado
pelo protocolo do teste.
No fim do período de seis semanas de incubação, inspeccione visualmente todos os frascos negativos existentes no instrumento. Se o frasco apresentar
sinais de positividade (isto é, se estiver turvo com possíveis colónias de micobactérias), deverá ser efectuada uma repicagem, uma coloração ácida rápida
e o frasco deverá ser tratado como sendo presuntivamente positivo, desde que o resultado da coloração ácida rápida seja positivo. Se o frasco não apresentar
sinais de positividade, deverá ser esterilizado antes de ser eliminado.
CONTROLO DE QUALIDADE
Em cada caixa de meios de cultura, são fornecidos Certificados do Controlo de Qualidade.
Recomenda-se que cada nova remessa ou lote de meios de cultura MYCO/F-Sputa BACTEC seja testada com os organismos de controlo ATCC, identificados
na tabela em baixo, como controlo positivo, e um frasco não inoculado como controlo negativo.
Organismo Intervalo de Tempo até à Detecção (dias)
Mycobacterium tuberculosis, H37Rv, ATCC 27294 8 a 12
Mycobacterium fortuitum, ATCC 6841 1 a 3
Mycobacterium kansasii, ATCC 12478 6 a 12
Para preparar o frasco de controlo positivo:
1. Cultive o organismo no meio líquido 7H9.
2. Utilizando soro fisiológico estéril, prepare uma suspensão McFarland #1 (≈ 107 UFC/ml) do organismo.
3. Dilua a suspensão para 104 UFC/ml, utilizando soro fisiológico estéril.
4. Inocule 1 ml desta suspensão dentro de um frasco de cultura MYCO/F-Sputa previamente suplementado com 2,0 ml de PANTA/F BACTEC reconstituído.
O inóculo de 1 ml destina-se a ser utilizado apenas para os organismos do Controlo de Qualidade.
Os frascos de controlo positivo e negativo deverão ser passados pelo scanner e introduzidos dentro do instrumento, e em seguida testados. O frasco de
controlo positivo deverá ser detectado pelo instrumento como positivo no intervalo de tempo referido na tabela anterior. O controlo negativo deverá
permanecer negativo. Se, qualquer um destes frascos não fornecer os resultados esperados, não utilize os meios até entrar em contacto com os Serviços
de Assistência Técnica pelo número de telefone 1-800-638-8663 (apenas nos Estados Unidos).
Para obter informações sobre o controlo de qualidade para o Sistema 9000MB BACTEC, consulte o Manual do Utilizador do 9000MB BACTEC (MA-0092).
RESULTADOS
A determinação da positividade da cultura de uma amostra é efectuada pelo Sistema 9000MB BACTEC, sendo confirmada por um esfregaço com coloração
ácida rápida. Um resultado positivo indica a presença presuntiva de microorganismos viáveis no frasco.
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
Contaminação
Deverá ter cuidado de forma a evitar a contaminação externa da amostra durante a colheita, digestão, descontaminação e inoculação dentro do frasco
BACTEC. Devido à riqueza do meio e à natureza não selectiva da detecção do consumo de oxigénio pela fluorescência, poderá haver contaminação por
sobreposição de crescimento.
Os procedimentos de digestão e de descontaminação deverão ser efectuados com cuidado, de forma a diminuir a contaminação pela sobreposição de
crescimento de outros organismos além das micobactérias. Teste apenas os tipos de amostras indicados. Um frasco contaminado apresentará uma leitura
positiva no instrumento, mas não indicará um resultado clinicamente relevante. Tal determinação deverá ser efectuada pelo utilizador com base em
determinados factores tais como, o resultado do esfregaço com coloração ácida rápida, o tipo de organismo isolado, a ocorrência do mesmo organismo
em múltiplas culturas, a história do doente, etc. (Consulte o Manual do Utilizador do 9000MB BACTEC, MA-0092 relativamente ao procedimento de
repetição da descontaminação do frasco).
É recomendada a descontaminação com o método da N-acetil-L-cistena-hidróxido de sódio (NALC-NaOH). Não foram testados outros métodos de
descontaminação em conjunto com o meio MYCO/F-Sputa BACTEC. As substâncias utilizadas para a digestão-descontaminação podem exercer efeitos
prejudiciais sobre as micobactérias.
Tipo de Amostra
Quando for apropriado, os frascos de cultura MYCO/F-Sputa BACTEC suplementados com o Suplemento/F BACTEC e com o PANTA/F BACTEC devem ser
utilizados para a cultura e isolamento de amostras clínicas e de líquidos corporais estéreis, excepto o sangue, digeridos e descontaminados. O nível de
detecção mínimo deste teste pode variar de acordo com as espécies de micobactérias presentes.
NÃO UTILIZE os frascos do meio de cultura MYCO/F-Sputa para o isolamento de micobactérias a partir de sangue.
Os líquidos pleurais podem conter glóbulos vermelhos e glóbulos brancos10, os quais possuem uma elevada taxa de metabolismo oxidativo, podendo
provocar falsos positivos.
Considerações Gerais
A detecção de espécies de micobactérias em amostras clínicas depende do número de organismos presentes na amostra, dos métodos de colheita da
amostra, de factores relacionados com o doente, tais como a presença de sintomas e tratamentos anteriores, e do método de processamento. O cumprimento
das instruções do procedimento é primordial para a optimização do isolamento de micobactérias. A contaminação com micobactérias saprófitas
presentes na água corrente ou em outros reagentes e equipamento de laboratório pode dar origem a resultados falsos positivos.
A detecção óptima de isolados será obtida adicionando 0,5 ml de inóculo da amostra processada e ressuspendida a cada frasco. O rigor do protocolo de
digestão e de descontaminação utilizado para processar a amostra também pode afectar o isolamento e período de tempo até á detecção.
As micobactérias podem variar na rapidez com que adquirem a coloração ácida, dependendo da estirpe, da idade da cultura e de outras variáveis. Todos
os frascos positivos, seja por indicação do instrumento, seja por se apresentarem turvos no fim do protocolo do teste, devem ser submetidos a uma
repicagem em meio selectivo e em meio não selectivo para micobactérias. O crescimento de outras espécies que não a das micobactérias poderá sobrepor-se
ao crescimento das micobactérias presentes. Estes frascos de cultura devem ser novamente descontaminados e cultivados. (Consulte o Manual do
Utilizador do 9000MB BACTEC, MA-0092, relativamente ao procedimento de repetição da descontaminação do frasco.)
A morfologia e pigmentação características das colónias podem ser determinadas apenas em meios sólidos. A partir de um frasco de MYCO/F-Sputa positivo,
poderão ser efectuados outros testes de identificação para determinar a espécie da micobactéria.
Os frascos MYCO/F-Sputa BACTEC que pareçam positivos, podem conter uma ou mais espécies de micobactérias e/ou outras espécies além das micobactérias.
Para identificar as micobactérias presentes é necessária uma repicagem em meio sólido, bem como a realização de procedimentos suplementares
para identificar os organismos presentes. A consistência da morfologia microscópica no MYCO/F-Sputa BACTEC ainda não foi estabelecida.
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