BACTEC MYCO/F-Sputa Culture Vials - BD

PP101G(0604).qxd 09/09/2004 11:06 AM Page 23
Brugeren kan nære ønske om at sætte et glas med et negativt udstrygningsresultat tilbage i instrumentet til fortsat overvågning.
Efter seks ugers inkubering skal man udføre en visuel kontrol af alle instrumentnegative glas. Hvis glassene ser positive ud (dvs. er uklare med mulige
klumper af mycobakterier) skal de videredyrkes, farves for syrefasthed og behandles som formodet positive, forudsat at de viser sig positive i undersøgelsen
for syrefasthed. Hvis glasset ikke viser tegn på positivitet, skal det steriliseres inden bortskaffelse.
KVALITETSKONTROL
Kvalitetskontrolcertifikater følger med hver pakke med medium.
Det anbefales, at hver ny levering eller parti BACTEC MYCO/F-Sputa-dyrkningsmedium testes med ATCC-kontrolorganismerne, der er identificeret
herunder, som positiv kontrol og et ikke-inokuleret glas som negativ kontrol.
Organisme Tidsforløb inden detektion (dage)
Mycobacterium tuberculosis, H37Rv, ATCC 27294 8 til 12
Mycobacterium fortuitum, ATCC 6841 1 til 3
Mycobacterium kansasii, ATCC 12478 6 til 12
For at klargøre det positive kontrolglas:
1. Dyrk organismen i 7H9-bouillon.
2. Klargør en #1 McFarland (≈ 107 CFU/ml)-suspension med organismen vha. sterilt saltvand.
3. Fortynd opløsningen til 104 CFU/ml med sterilt saltvand.
4. Inokulér 1 ml af denne opløsning i et MYCO/F-Sputa-dyrkningsglas, der er tilsat 2,0 ml rekonstitueret BACTEC PANTA/F. Inokulering med 1 ml må
kun bruges i forbindelse med kvalitetskontrolorganismer.
Det positive og det negative kontrolglas skal scannes af instrumentet og undersøges. Instrumentet skal identificere det positive kontrolglas som positivt
inden for de rammer, der er angivet herover. Den negative kontrol skal forblive negativ. Hvis et af glassene ikke giver de ønskede resultater, skal du
ikke bruge medierne, før du har kontaktet vores tekniske serviceafdeling på 1-800-638-8663 (kun i USA).
Se brugsanvisningen til BACTEC 9000MB (MA-0092) for at få oplysninger om kvalitetskontrol af BACTEC 9000MB-systemet.
RESULTATER
En positiv prøve idenrificeres af BACTEC 9000MB-systemet og bekræftes ved et syrefast opstrøg. En positiv aflæsning angiver den formodede tilstedeværelse
af levedygtige mikroorganismer i dyrkningsglasset.
BEGRÆNSNINGER AF PROCEDUREN
Kontaminering
Man skal være omhyggelig med at forhindre ekstern kontaminering af prøven under prøvetagning, afkogningen, dekontamineringen og inokuleringen
i BACTEC-glasset. Pga. mediets næringsrigdom og fluorescensdetektionen af iltforbrugets ikke-selektive natur kan en kontaminering bryde igennem.
Afkogning og dekontamineringsprocedurer skal udføres omhyggeligt for at reducere risikoen for, at en kontaminering med ikke-mycobakterielle
organismer bryder igennem. Undersøg kun de angivne prøvetyper. Et kontamineret glas vil give en positiv aflæsning på instrumentet, men vil ikke
angive et klinisk relevant resultat. En sådan afgørelse skal træffes af brugeren og baseres på faktorer såsom resultatet af syrefaste udstrygninger,
hvilken type organisme, der er isoleret, tilstedeværelsen af den samme organisme i flere kulturer, sygdomsforløbet etc. (Se brugsanvisningen til BACTEC
9000MB, MA-0092, for at få oplysninger om dekontamineringsprocedurer for glas.)
Det anbefales at dekontaminere med N-acetyl-L-cystein-natriumhydroxid (NALC-NaOH). Man har ikke undersøgt andre dekontamineringsmetoder sammen
med BACTEC MYCO/F-Sputa-mediet. Afkogningsdekontaminanter kan have skadelige virkninger på mycobakterier.
Prøvetype
BACTEC MYCO/F-Sputa-dyrkningsglas tilsat BACTEC Supplement/F og BACTEC PANTA/F bruges til dyrkning og opsamling af afkogte og dekontaminerede
kliniske prøver og andre sterile kropsvæsker end blod. Minimumsdetektionsniveauet afhænger af, hvilke mycobakteriearter, der er til stede.
BRUG IKKE MYCO/F-Sputa-dyrkningsglas til opsamling af mycobakterier fra blod.
Pleuralvæske kan indeholde røde og hvide blodlegemer, der kan have et højt oxiderende stofskifte, der kan resultere i falske positiver.
Generelle betragtninger
Detektionen af mycobakteriearter i kliniske prøver afhænger af antallet af organismer i prøven, de anvendte metoder til indsamling af prøverne og
patientfaktorer såsom symptomer, tidligere behandling og behandlingsmetode. Overholdelse af instruktionerne angående procedurer er afgørende for
optimal opsamling af mycobakterier. Kontaminering af postevand eller andre laboratoriereagenser og –udstyr med saprofytte mycobakterier kan give
falske postitive resultater.
Man opnår den optimale opsamling af isolater ved at tilsætte hvert glas 0,5 ml behandlet og genopløst prøveinokulat. Graden af afkogning og dekontaminering
af prøven kan også påvirke opsamlingstiden og den tid, der går, inden detektering.
Mycobakteriers syrefasthed kan variere alt afhængig af arten, kulturens alder og andre variabler. Alle glas, der er positive ifølge instrumentet, eller som ser
uklare ud ved undersøgelsens afslutning, skal videredyrkes i både selektive og ikke-selektive mycobakteriemedier. Arter, der ikke er mycobakterier, kan
udkonkurrere de tilstedeværende mycobakterier. Disse kulturglas skal dekontamineres og videredyrkes igen. (Se brugsanvisningen til BACTEC 9000MB, MA-0092,
for proceduren til gen-dekontaminering.)
Kolonimorfologi og pigmenteringskarakteristika kan kun bestemmes på faste medier. Yderligere identifikationstests kan udføres for at bestemme
mycobakteriel artsdannelse fra et positivt MYCO/F-Sputa-glas.
BACTEC MYCO/F-Sputa-glas, der synes positive, kan indeholde en eller flere mycobakteriearter og/eller andre ikke-mycobakteriearter. Identifikation af
de tilstedeværende mycobakteriearter kræver videredyrkning på et fast medium og yderligere procedurer til at identificere organismerne. Der er ikke
eftervist konsistent, mikroskopisk morfologi i BACTEC MYCO/F-Sputa.
BACTEC MYCO/F-Sputa-glas inkuberes ved 37°C, hvilket potentielt udelukker opsamlingen af mycobakterier, der kræver andre inkuberingstemperaturer
(f.eks., M. marinum, M. ulcerans og M. haemophilum). Opsamlingen af sådanne organismer kræver yderligere dyrkningsmetoder. Organismer med
særlige vækstkrav (f.eks. M. haemophilum) kan ikke isoleres i BACTEC MYCO/F-Sputa, når de inkuberes ved den rette temperatur. Følgende isolater blev
dømt positive af BACTEC 9000MB-systemet ved brug af BACTEC MYCO/F-Sputa ved både de interne og/eller kliniske undersøgelser. Mycobacterium
abscessus, Mycobacterium avium, Mycobacterium bovis, Mycobacterium celatum, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium
gordonae, Mycobacterium intracellulare, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium simiae, Mycobacterium szulgai,
Mycobacterium terrae, Mycobacterium tuberculosis og Mycobacterium xenopi.
Selv om det er nødvendigt at bruge BACTEC PANTA/F antibiotisk supplement til alle ikke-sterile prøver, kan det have en hæmmende effekt på visse
mycobakterier.
Der blev ikke rutinemæssigt udført terminale videredyrkninger under de kliniske undersøgelser. Derfor kan en falsk negativ defineret som et MYCO/F-
Sputa-dyrkningsglas, der forblev negativt i hele den seks uger lange inkuberingsperiode, men som blev videredyrket og viste sig at indeholde en
mycobakterieorganisme, ikke bestemmes på dette tidspunkt.
23