Vibrio

Costa Rica, 27 de abril – 2 de mayo 2009
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.
Diagnóstico Diagn Diagnóstico stico de laboratorio de vibrios
causantes de ETAs
Hilda Ma. Bolaños Bola os Acuña Acu
Centro Nacional de Referencia en Bacteriología
Bacteriolog
INCIENSA – Costa Rica

Características Caracter sticas microbiológicas
microbiol gicas
Los miembros del género g nero Vibrio son:
Bacilos Gram-negativos Gram negativos (0,5 a 0,8 x
1,4 a 2,6 µm) m)
Móviles viles por flagelos polares
Anaerobios facultativos
Oxidasa positivos (excepto V. metschnikovii)
metschnikovii
Su metabolismo es fermentativo
Miembros de la familia Vibrionaceae
(Aeromonas Aeromonas, , Plesiomonas y Vibrio)
Vibrio

Diferenciación Diferenciaci n entre el género g nero Vibrio y otros
Prueba bioquímica
bioqu mica
Crecimiento en agar
TCBS
Fermentación Fermentaci n de glucosa
Gas de glucosa
Fermentación Fermentaci n de inositol
Fermentación Fermentaci n de manitol
Prueba de cordón cord
Crecimiento requiere o es
estimulado por iones Na+
Gram-negativos Gram negativos oxidasa (+)
Vibrio
+
+
-
-
+
+
+
Aeromonas
- (+)
+
+
-
+
-
-
Plesiomonas
-
+
-
+
-
-
-

Especie
V. cholerae O1
V. cholerae no O1
(incluyendo O:139)
V. mimicus
V. parahaemolyticus
V. vulnificus
V. alginolyticus
Vibrios de importancia clínica cl nica
Gastrointestinal
++
++
++
++
+
Presentación Presentaci n clínica cl nica
Infección Infecci n de
heridas, oídos o dos
(+)
+
+
+
++
++
++: Presentación Presentaci n más m s común; com n; +: otra presentación presentaci n clínica; cl nica; (+) presentación presentaci n poco usual
Septicemia
+
(+)
++

V. cholerae O1*
• 2 biotipos: Clásico Cl sico
Vibrio cholerae
El Tor
• 3 serotipos:
serotipos:
Inaba
Ogawa
Hikojima
* Cepas epidémicas
epid micas
V. cholerae no O1
(> 200 serogrupos):
serogrupos):
• V. cholerae O139 *
• V. cholerae no O1,
no O139

Espectro clínico cl nico del cólera c lera
75% infección asintomática*
2% enfermedad grave
5% enfermedad moderada
18% enfermedad leve
* Portadores: personas que que no presentan síntomas s ntomas pero pueden
transmitir la enfermedad. Importantes en diseminación diseminaci n de la enfermedad.

Recolección Recolecci n y transporte de
muestras fecales
• En el período per odo agudo de la enfermedad
• Antes de iniciar el tratamiento antibiótico antibi tico
• Heces enteras o hisopado fecal en Cary Blair (máx. (m x.
5 días) d as) a temperatura ambiente (no no refrigerar) refrigerar
• Es ideal procesar la muestra dentro de 2 a 4 horas
después despu s de recolectada
• Normas de bioseguridad

Flujograma de aislamiento de vibrios
a partir de materia fecal
Pruebas bioquímicas
bioqu micas
complementarias
Muestra de materia fecal
APA
Agar TCBS / TSA
35- 37º C x 6-8 hs
35 - 37º C x 18-24 hs
KIA – LIA - indol - estría estr a TSA
35 -37º C x 18-24 hs
V. cholerae O1, O139 o no O1 no O139
Oxidasa, cordón cord
Serotipificación Serotipificaci n O1 y O139

Crecimiento de vibrios en agar TCBS
Agar TCBS
Sacarosa (+)
V. V. cholerae
Sacarosa (-) (-)
V. V. mimicus
V. V. parahaemolyticus

Característica
Caracter stica
Colonias en TCBS
Ferm. Ferm.
sacarosa
Ferm. Ferm.
lactosa
Ferm. Ferm.
arabinosa
Crec. Crec.
0% NaCl
Crec. Crec.
1% NaCl
Crec. Crec.
8% NaCl
Sens O129 (10 µg)
Sens O129 (150 µg)
Diferenciación Diferenciaci n bioquímica bioqu mica de vibrios
V.
cholerae
Amarillas
+
-
-
+
+
-
S
S
causantes de ETAs
V.
mimicus
Verdes
-
-
-
+
+
-
S
S
V.
parahaemolyticus
Verdes
-
-
+
-
+
+
R
S
V.
vulnificus
Verdes
-
+
-
-
+
+
S
S

Serotipificación Serotipificaci n de Vibrio cholerae
Aglutinación:
Aglutinaci n: organismo (antígeno) (ant geno) + suero inmune (anticuerpo)
• Cultivo fresco (18-24 (18 24 horas)
• Control de aglutinación aglutinaci
• Seguir especificaciones de
fabricantes de antisueros
Si el antisuero contiene aglutininas contra la bacteria se produce rápidamente r pidamente una
aglutinación aglutinaci n fuerte, firme y granular

Cepa con caract BQ de
V. cholerae en ABHI o ATS
Aglutinar en SS
0.85%
-
Aglutinar con
antisuero poly O1
-
V. cholerae no O1
+
+
Cepa rugosa
V. cholerae O1
Aglutinar con
antisuero O139
-
+
V. cholerae no O1, no O139
Serotipificación Serotipificaci n de
Vibrio cholerae
Pasajes en AS
1
NOTIFICAR *
V. cholerae O139
Determinación Determinaci n de factores de
virulencia (PCR)

1
Aglutinar con
antisuero Inaba
Serotipificación Serotipificaci n de V. cholerae O1
-
Aglutinar con
antisuero Ogawa
+
+
V. cholerae O1 Inaba NOTIFICAR *
Determinación Determinaci n de factores de
virulencia (PCR) y PSA
V. cholerae O1 Ogawa
NOTIFICAR *
Si aglutina con Inaba y Ogawa corresponde al serotipo Hikojima (el aislamiento se debe
referir a un Centro de Referencia Internacional para su confirmaci
confirmación)
n)
RSI: Cólera por V. cholerae O1, O139: NOTIFICACION INTERNACIONAL

Diferenciación Diferenciaci n de los biotipos de
Ensayo
Voges Proskauer (+ 1% NaCl) NaCl
V. cholerae O1
Hemólisis Hem lisis en agar sangre de carnero
Zona de inhibición inhibici n alrededor del disco
de polimixina B (50U)
Lisis por bacteriófago bacteri fago El Tor 5
Lisis por bacteriófago bacteri fago clásico cl sico IV
Clásico Cl sico
-
-
+
-
+
Biotipo
El Tor
+
+
-
+
-

Desempeño Desempe o del Cholera-SMART Cholera SMART en el
diagnóstico diagn stico rápido r pido del cólera c lera en Costa Rica
• Evaluar el desempeño desempe o de dos pruebas rápidas r pidas utilizadas en
Costa Rica para el diagnóstico diagn stico del cólera c lera en comparación
comparaci n
con el cultivo tradicional
• Evaluar la utilidad del análisis an lisis de la motilidad “al al fresco”, fresco ,
como tamizaje para priorizar el uso de las pruebas rápidas r pidas
• Proponer una estrategia para el uso de estas pruebas
Bolaños Bola os H, et al. 2004. 2004.
Desempeño Desempe o de los sistemas Cholera-SMART Cholera SMART y Pathogen Detection Kit en el
diagnóstico diagn stico del cólera. c lera. Rev. Panam. Panam.
Salud Pública P blica 16:233-241. 16:233 241.

Materiales y métodos m todos
Se procesaron 237 especímenes espec menes fecales:
SMART TM
Cultivo
(“standard standard de oro”)
oro
Pathogen Detection Kit
Kit TM

ufc/ml /ml
10 ufc
log log10 12
10
8
6
4
2
0
Sensibilidad analítica anal tica del SMART
• Alta
• Mediana
• Baja
(líquidas, (l quidas, agua de arroz)
(semi semi-formadas, formadas, moco y sangre)
(h. rectales o muestras post-antibi post antibiótico) tico)
0 6 12 18 24 30 36 42 48 Horas
SMART-D SMART-6 SMART-18
Motilidad Motilidad Motilidad
Cultivo-D Cultivo APA-6 Cultivo APA-18
Resultado

Observación
Observaci n
de motilidad
(n = 138)
Análisis An lisis de la motilidad
Sospechosa
65 (47%)
No sospechosa
73 (53%)
V. cholerae O1
V. cholerae no O1
V. mimicus, mimicus,
otros
Todas negativas
por V. cholerae y
otros vibrios

Conclusiones
Las prueba rápida r pida de SMART mostró mostr un desempeño desempe o excelente (100%
especificidad y 100% sensibilidad) al establecer el diagnóstico diagn stico de V. cholerae
O1 en todas las muestras de heces que fueron positivas por cultivo, cultivo,
en un tiempo menor.
Estas pruebas, utilizadas en conjunto con la observación observaci n de la
motilidad de la muestra, constituyen un recurso accesible para ser ser
utilizado en la vigilancia del cólera, c lera, aún a n en países pa ses en vías v as de
desarrollo.

Muchas gracias