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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE PUEBLA<br />

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA ELECTRONICA<br />

INSTITUTO DE FISIOLOGIA BUAP<br />

FISIOLOGIA SENSORIAL<br />

SISTEMA PARA LA DETECCIÓN Y ANÁLISIS DE<br />

POTENCIALES DE ACCIÓN EN NEURONAS.<br />

TESIS PARA OBTENER EL GRADO DE<br />

LICENCIADO EN ELECTRONICA<br />

PRESENTA:<br />

SAMUEL CID GARCIA<br />

DIRECTOR DE TESIS<br />

ENRIQUE SOTO E.<br />

Puebla, Pue., Febrero <strong>de</strong>l 2001


1<br />

Resumen<br />

En la fisiología existen eventos en los cuales la secuencia <strong>de</strong> los mismos y no su<br />

forma es el parámetro a estudiar, por ejemplo los intervalos entre potenciales <strong>de</strong> acción. Por<br />

otro lado, si un registro contiene ondas <strong>de</strong> diferentes amplitu<strong>de</strong>s es posible cuantificar a un<br />

grupo <strong>de</strong> estas mientras se ignoran las restantes utilizando a la amplitud como elemento <strong>de</strong><br />

clasificación en el análisis <strong>de</strong> la señal. En este trabajo se presenta un discriminador <strong>de</strong><br />

amplitu<strong>de</strong>s y un conjunto <strong>de</strong> programas computacionales para el análisis <strong>de</strong> los potenciales<br />

<strong>de</strong> acción en la actividad eléctrica neuronal.<br />

1 Introducción<br />

El propósito <strong>de</strong> este trabajo <strong>de</strong> tesis es implementar un sistema para la <strong>de</strong>tección y<br />

análisis <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong> acción, más específicamente el código <strong>de</strong> frecuencia con el<br />

cual <strong>de</strong>scargan las neuronas aferentes <strong>de</strong>l sistema vestibular, ya que estas informan al<br />

sistema nervioso central el estado <strong>de</strong>l movimiento. El mayor problema para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong><br />

los potenciales <strong>de</strong> acción es el ruido, ya que la amplitud <strong>de</strong> este es pequeño con respecto al<br />

ruido <strong>de</strong> fondo, la frecuencia no es ningún problema puesto que el rango <strong>de</strong> frecuencia <strong>de</strong><br />

<strong>de</strong>scarga <strong>de</strong> las neuronas aferentes es <strong>de</strong> 1-250 Hz. Por lo tanto este trabajo queda<br />

estructurado <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />

En el primer capitulo se <strong>de</strong>fine que es un potencial <strong>de</strong> acción y cual es su<br />

importancia como transmisor <strong>de</strong> información en la actividad eléctrica neuronal. Se <strong>de</strong>scribe<br />

el funcionamiento <strong>de</strong>l sistema vestibular como <strong>de</strong>tector <strong>de</strong> aceleraciones lineales y<br />

angulares. A<strong>de</strong>más se muestra el sistema para el registro <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción en la<br />

actividad eléctrica neuronal (técnica <strong>de</strong> registro extracelular multiunitario).<br />

El capitulo 2 plantea los puntos a seguir para <strong>de</strong>tectar y analizar los potenciales <strong>de</strong><br />

acción y se analizan las diversas opciones para solucionar el problema planteado.<br />

El capitulo 3 presenta el funcionamiento <strong>de</strong> los comparadores <strong>de</strong> nivel que<br />

constituyen la parte central <strong>de</strong> un discriminador <strong>de</strong> ventana y el efecto <strong>de</strong>l ruido en ellos. Se<br />

establecen las condiciones <strong>de</strong> entrada y las salida <strong>de</strong>l sistema (discriminador <strong>de</strong> ventana y


2<br />

programa <strong>de</strong> captura). Se muestra el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong>l diseño <strong>de</strong>l discriminador <strong>de</strong> ventana<br />

bloque a bloque. Así como también el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong>l programa <strong>de</strong> captura y análisis <strong>de</strong> los<br />

potenciales <strong>de</strong> acción.<br />

El capitulo 4 muestra la caracterización (resultados) <strong>de</strong>l discriminador obteniendo la<br />

respuesta en frecuencia y las salidas <strong>de</strong> los pulsos arriba y a<strong>de</strong>ntro. También se caracteriza<br />

el programa mediante la captura <strong>de</strong> frecuencias conocidas y su análisis estadístico.<br />

El capitulo 5 menciona la relevancia <strong>de</strong>l trabajo y los trabajos futuros que<br />

<strong>de</strong>spegarán <strong>de</strong> éste.<br />

El apéndice 1 <strong>de</strong>scribe algunos métodos <strong>de</strong> análisis <strong>de</strong> la frecuencia <strong>de</strong> potenciales<br />

<strong>de</strong> acción como son: promedio, varianza, <strong>de</strong>sviación estándar, coeficiente <strong>de</strong> variación, el<br />

noventilo, la mediana, el coeficiente <strong>de</strong> correlación, la prueba U <strong>de</strong> Mann-Whitney y los<br />

autocorrelogramas seriales.<br />

1.1 Antece<strong>de</strong>ntes<br />

El potencial <strong>de</strong> acción<br />

El potencial <strong>de</strong> acción es un fenómeno activo que se produce gracias a la apertura, a<br />

nivel <strong>de</strong> la membrana celular, <strong>de</strong> vías selectivas para el Na + y el K + (Hodgkin y Huxley,<br />

1952 a, b; Hille, 1991). El potencial <strong>de</strong> acción se propaga como una onda por toda la<br />

membrana plasmática sin que disminuya su amplitud. Esta propagación es <strong>de</strong> capital<br />

importancia en las células excitables <strong>de</strong> gran longitud (fibras musculares estriadas y los<br />

axones <strong>de</strong> las neuronas). Sin esta propagación las neuronas no se comunicarían entre sí ni<br />

con los órganos con los que hacen contacto (glándulas y músculos), y las fibras <strong>de</strong>l músculo<br />

estriado no se contraerían en toda su extensión. El potencial <strong>de</strong> acción se propaga <strong>de</strong>bido a<br />

que origina corrientes pasivas (sin cambio <strong>de</strong> conductancia) que fluyen hacia las zonas<br />

vecinas. La corriente pasiva transmembranal da lugar a una <strong>de</strong>spolarización que cuando<br />

alcanza el umbral genera a su vez un potencial <strong>de</strong> acción en esas zonas. La velocidad <strong>de</strong><br />

conducción <strong>de</strong>l potencial <strong>de</strong> acción esta <strong>de</strong>terminada por propieda<strong>de</strong>s eléctricas pasivas<br />

(propieda<strong>de</strong>s <strong>de</strong>l cable), que a su vez <strong>de</strong>terminan las llamadas constantes <strong>de</strong> espacio (?) y<br />

<strong>de</strong> tiempo (?). Estas constantes <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>n <strong>de</strong>l diámetro <strong>de</strong> la fibra, sea esta nerviosa o<br />

muscular, y <strong>de</strong> la resistencia y capacidad eléctricas <strong>de</strong> la membrana. Cuanto más gruesa es


3<br />

la fibra, mayor es la velocidad <strong>de</strong> conducción. La morfología típica <strong>de</strong>l potencial <strong>de</strong> acción<br />

se muestra en la Figura 1 .<br />

Figura 1 Morfología <strong>de</strong>l potencial <strong>de</strong> acción. Tiene una fase <strong>de</strong> <strong>de</strong>spolarización inicial seguida <strong>de</strong> una fase<br />

rápida <strong>de</strong> <strong>de</strong>spolarización y luego una repolarización.<br />

Técnica <strong>de</strong> medida o Rango <strong>de</strong> la Rango <strong>de</strong> frec. Transductor o método<br />

parámetro<br />

medida <strong>de</strong> la señal (Hz)<br />

Electrocardiografía 0.5–4 mV 0.01 – 250 Electrodos superficiales<br />

(ECG)<br />

Electroencefalografía 5–300 ? V Dc – 150 Electrodos <strong>de</strong> cuero cabelludo<br />

(EEG)<br />

Electrocorticografia 10–5000 ? V Dc – 150 Electrodos <strong>de</strong> profundidad<br />

Electrogastrografia 10-1000 ? V Dc – 1<br />

Electrodos superficiales<br />

0.5–80 mV<br />

Electromiografia 0.1–5 mV Dc – 10000 Electrodos <strong>de</strong> aguja<br />

(EMG)<br />

Potenciales <strong>de</strong> ojo<br />

(EOG)<br />

(ERG)<br />

50–3500 ? V<br />

0–900 ? V<br />

Dc – 50<br />

Dc – 50<br />

Electrodos <strong>de</strong> cntacto<br />

Tabla 1 Parámetros médicos y fisiológicos más importantes para la instrumentación biomédica.


4<br />

Importancia <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong> acción<br />

Hay procesos biológicos en los que la sucesión <strong>de</strong> eventos es el dato pertinente. Los<br />

neurofisiólogos muy a menudo tratan con procesos <strong>de</strong> este tipo en que una pequeña o<br />

ninguna importancia básica pue<strong>de</strong> darse a la morfología <strong>de</strong> la señal en particular. Uno <strong>de</strong><br />

estos procesos es el registro <strong>de</strong> la actividad neuronal como trenes <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción<br />

(espigas). En este caso se asume que la información transmitida por una neurona esta<br />

<strong>de</strong>terminada por la distribución especifica <strong>de</strong> espigas en el tiempo (Moore et al., 1966;<br />

Glaser y Ruchkin, 1984). Por ejemplo, el sistema vestibular que <strong>de</strong>tecta el movimiento y la<br />

posición <strong>de</strong> la cabeza en el espacio. Este sistema consta <strong>de</strong> órganos otolíticos y canales<br />

semicirculares, cuya función es <strong>de</strong>tectar aceleraciones lineales y angulares,<br />

respectivamente. Las aceleraciones lineales incluyen la acción <strong>de</strong> la gravedad y se <strong>de</strong>finen<br />

como un cambio en la velocidad <strong>de</strong> objeto viajando en línea recta. Las aceleraciones<br />

angulares resultan <strong>de</strong>l movimiento circular y representan el cambio en la velocidad <strong>de</strong><br />

rotación (Soto, Bu<strong>de</strong>lli y Holmgren, 1998). A continuación <strong>de</strong>scribimos brevemente a los<br />

canales semicirculares <strong>de</strong>l axolotl; estos son tres y se encuentran localizados en tres planos,<br />

semejantes a los <strong>de</strong>finidos por los ejes X, Y y Z en una gráfica tridimensional. Cada canal<br />

tiene un ensanchamiento, el ampula, que contiene un conjunto <strong>de</strong> células ciliadas dispuestas<br />

en una superficie en forma <strong>de</strong> cresta y recubierta en su parte ciliar por una sustancia<br />

gelatinosa, llamada cúpula, cuyo <strong>de</strong>splazamiento, da lugar al movimiento <strong>de</strong> los cilios. El<br />

mecanismo <strong>de</strong> este <strong>de</strong>splazamiento es posible, gracias a que los canales semicirculares<br />

contienen un liquido <strong>de</strong>nominado endolinfa, <strong>de</strong> manera que, cuando hay una rotación <strong>de</strong> la<br />

cabeza, la endolinfa tien<strong>de</strong> a permanecer en reposo y por lo tanto la cúpula tien<strong>de</strong> a<br />

moverse en la dirección opuesta Figura 2.


5<br />

Figura 2 Estructura y función <strong>de</strong>l sistema vestibular. Este órgano sensorial consiste <strong>de</strong> una serie <strong>de</strong> sacos<br />

membranosos (utrículo, sáculo y lagena) y los tres canales semicirculares. Se encuentra ubicado<br />

simétricamente en la región temporal <strong>de</strong>l cráneo. En el esquema se muestra el funcionamiento <strong>de</strong> los canales<br />

semicirculares (<strong>de</strong>tectores <strong>de</strong> aceleraciones angulares). Al <strong>de</strong>splazarse la cabeza con una aceleración<br />

angular w , la endolinfa que es el liquido contenido en el interior <strong>de</strong> los canales se retrasa inercialmente.<br />

Este <strong>de</strong>splazamiento relativo <strong>de</strong> la endolinfa respecto al canal empuja las cúpulas <strong>de</strong> los canales<br />

semicirculares que ocluyen la luz <strong>de</strong>l canal en forma <strong>de</strong> diafragmas. En el interior <strong>de</strong> las cúpulas se<br />

encuentran embebidos los cilios <strong>de</strong> las células sensoriales, los que al flexionarse <strong>de</strong>terminan la respuesta <strong>de</strong><br />

estas y la activación <strong>de</strong> la vía sensorial.<br />

Las células ciliadas son transductores mecano-eléctricos; un movimiento <strong>de</strong>l haz <strong>de</strong><br />

cilios en la dirección <strong>de</strong>l kinocilio da lugar a una <strong>de</strong>spolarización en estas células, en<br />

contraste, un movimiento en la dirección opuesta da lugar a una hiperpolarización<br />

(Flock,1965; Hudpeth, 1983).<br />

Un <strong>de</strong>splazamiento <strong>de</strong>l haz <strong>de</strong> cilios en la dirección <strong>de</strong>l kinocilio, también tiene la<br />

función <strong>de</strong> llevar a un aumento en la frecuencia <strong>de</strong> <strong>de</strong>scarga <strong>de</strong> las aferentes primarias; en<br />

contraste, un <strong>de</strong>splazamiento en la dirección contraria, lleva a un <strong>de</strong>cremento en la<br />

frecuencia <strong>de</strong> <strong>de</strong>scarga (Figura 3).


6<br />

En general, la frecuencia <strong>de</strong> <strong>de</strong>scarga, <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción que viajan en las<br />

neuronas aferentes, informa al sistema nervioso central sobre el estado <strong>de</strong> movimiento. Por<br />

ejemplo, sabemos que la frecuencia <strong>de</strong> espigas es directamente proporcional a la magnitud<br />

<strong>de</strong>l estímulo mecánico (Lowenstein y Compton, 1978); así, estímulos mecánicos <strong>de</strong> mayor<br />

magnitud sobre las células ciliadas, dan lugar a excitaciones con mayor frecuencia <strong>de</strong><br />

potenciales <strong>de</strong> acción en las aferentes vestibulares.<br />

Figura 3 La frecuencia <strong>de</strong> <strong>de</strong>scarga <strong>de</strong> las aferentes vestibulares <strong>de</strong>pen<strong>de</strong> <strong>de</strong> la dirección <strong>de</strong> la inclinación<br />

<strong>de</strong>l kinocilio. Pue<strong>de</strong> verse cómo un estímulo mecánico, que inclina los cilios en la dirección hacia el kinocilio<br />

pue<strong>de</strong> dar lugar a una excitación en la aferente, con una adaptación en la frecuencia(Modificado <strong>de</strong> Kelly,<br />

1985).<br />

Existe consenso entre los neurofisiólogos <strong>de</strong> que la información sensorial <strong>de</strong> los<br />

estímulos y la transmisión <strong>de</strong> información en el sistema nervioso, se basa en un sistema <strong>de</strong><br />

códigos <strong>de</strong> frecuencia y <strong>de</strong> líneas marcadas. Dependiendo <strong>de</strong> la vía que se activa o modifica<br />

su frecuencia <strong>de</strong> <strong>de</strong>scarga se <strong>de</strong>fine la calidad <strong>de</strong>l estímulo. Por ello se habla <strong>de</strong> líneas<br />

marcadas, porque la calidad (gusto, olfato, visión, etcétera), <strong>de</strong>pen<strong>de</strong> <strong>de</strong> la vía que se activa.<br />

En cierta forma esto indica que el sistema nervioso utiliza un código análogo al que usamos<br />

en electrónica al indicar los cableados con alambres <strong>de</strong> colores. Por otra parte, la intensidad<br />

y características <strong>de</strong> un estímulo o señal neuronal se codifica en la frecuencia con que se<br />

producen los potenciales <strong>de</strong> acción, por ello se habla <strong>de</strong> que existe un código <strong>de</strong>


7<br />

frecuencias. Por ejemplo, en el caso en que se active una neurona proveniente <strong>de</strong> la retina<br />

en el ojo, el origen y conectividad <strong>de</strong> la neurona <strong>de</strong>termina la calidad -visual- <strong>de</strong>l estímulo,<br />

pero la intensidad <strong>de</strong>l estímulo -en este caso la intensidad lumínica- se transmite al sistema<br />

nervioso en base al número <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción que se generan en la neurona.<br />

En el caso que nos ocupa en este proyecto, en el sistema vestibular, la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong><br />

los movimientos <strong>de</strong> la cabeza y los reflejos <strong>de</strong>l equilibrio van a <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>r entonces <strong>de</strong> cuál<br />

neurona entre las miles que inervan el sistema vestibular se active, y cuál sea la frecuencia<br />

<strong>de</strong> la <strong>de</strong>scarga <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción en esa neurona. Por eso es particularmente<br />

relevante estudiar el intervalo entre los potenciales <strong>de</strong> acción, ya que esta información esta<br />

relacionada con el tipo <strong>de</strong> estímulos que activan una neurona. En cierta forma, po<strong>de</strong>mos<br />

<strong>de</strong>cir que el sistema funciona con un código binario, en el que lo que es relevante es el que<br />

una neurona este o no activado (cero o uno).<br />

Para estudiar la actividad eléctrica neuronal y en especial las características <strong>de</strong>l<br />

código <strong>de</strong> frecuencia, nos hemos propuesto crear un sistema para la <strong>de</strong>tección y análisis <strong>de</strong><br />

los potenciales <strong>de</strong> acción.<br />

Detección <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong> acción<br />

Un problema común en neurofisiología es la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción <strong>de</strong><br />

neuronas (espigas) que es pequeño respecto al ruido <strong>de</strong> fondo.<br />

En la Figura 4 se presenta un registro típico <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción en una neurona<br />

aferente <strong>de</strong>l sistema vestibular <strong>de</strong>l axolotl (Ambystoma tigrinum). La frecuencia basal para<br />

este tipo <strong>de</strong> registro es DC a 10 Hz., para el caso <strong>de</strong> los registros extracelulares es <strong>de</strong> 10 a<br />

50 Hz. aproximadamente. El rango <strong>de</strong> frecuencia para ambos tipos <strong>de</strong> registro es <strong>de</strong> 1 a 250<br />

Hz.


8<br />

Figura 4 Registro intracelular <strong>de</strong>l potencial eléctrico <strong>de</strong> una neurona. Se pue<strong>de</strong>n diferenciar claramente dos<br />

tipos <strong>de</strong> señales: unas <strong>de</strong> amplitud menor a 10 mv que son potenciales sinápticos (*) y otras <strong>de</strong> amplitud<br />

mayor y menor duración (flechas) que son potenciales <strong>de</strong> acción. Este registro fue adquirido <strong>de</strong> forma digital<br />

con una frecuencia <strong>de</strong> muestreo <strong>de</strong> 2 KHz.<br />

Para estos casos bastaría con tener solo un nivel para <strong>de</strong>tectar el cruce <strong>de</strong>l potencial,<br />

ya que se trata <strong>de</strong> un registro intracelular. Como se <strong>de</strong>sea que el sistema <strong>de</strong>tecte potenciales<br />

<strong>de</strong> acción obtenidos <strong>de</strong> los registros intra y extracelular (Figura 5), se usan dos niveles para<br />

discriminar por medio <strong>de</strong> la amplitud solo las espigas que se consi<strong>de</strong>ren importantes, ya<br />

sean las <strong>de</strong> mayor tamaño o las <strong>de</strong> menor tamaño.<br />

Figura 5 Registro extracelular multiunitario <strong>de</strong>l potencial <strong>de</strong> acción <strong>de</strong> una neurona. Se pue<strong>de</strong> ver<br />

claramente que existen diferentes amplitu<strong>de</strong>s en estos potenciales, unos <strong>de</strong> mayor amplitud (flechas) y otros<br />

<strong>de</strong> menor amplitud(*).Este registro fue adquirido <strong>de</strong> forma digital con una frecuencia <strong>de</strong> muestreo <strong>de</strong> 1 KHz.


9<br />

En la Figura 6 se muestra el sistema propuesto. Para el registro <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong><br />

acción se utilizan micro electrodos <strong>de</strong> succión; se emplea un amplificador <strong>de</strong> DC (Grass<br />

P15) <strong>de</strong> alta impedancia <strong>de</strong> entrada ya que la impedancia <strong>de</strong> los electrodos es elevada, <strong>de</strong><br />

alta ganancia y bajo ruido porque la amplitud <strong>de</strong> los potenciales es pequeña con respecto al<br />

ruido <strong>de</strong> fondo por tal motivo este amplificador contiene también una serie <strong>de</strong> filtros. Un<br />

osciloscopio (Tektronix 2216). Los registros se graban en cintas magnéticas, para ser<br />

procesados posteriormente. Nuestro trabajo es entonces <strong>de</strong>sarrollar un <strong>de</strong>tector <strong>de</strong><br />

potenciales <strong>de</strong> acción (discriminador <strong>de</strong> ventana), así como un conjunto <strong>de</strong> programas<br />

computacionales para la adquisición, análisis, almacenamiento, graficación e impresión <strong>de</strong><br />

las frecuencias <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong> acción (histogramas <strong>de</strong> frecuencia) para complementar<br />

este sistema.<br />

Figura 6 Sistema para el registro <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción en la actividad eléctrica neuronal (Técnica <strong>de</strong><br />

registro extracelular multiunitario). Se realiza registro extracelular multiunitario por medio <strong>de</strong> un electrodo<br />

<strong>de</strong> succión conectado a un amplificador, un osciloscopio, una grabadora y un discriminador <strong>de</strong> ventana cuya<br />

salida se lleva a una computadora. La preparación se coloca sobre una plataforma rotatoria, cuya velocidad<br />

y características <strong>de</strong> giro se controla con un generador <strong>de</strong> funciones.


10<br />

2 Marco <strong>de</strong> referencia<br />

2.1 Objetivos<br />

1.- Realizar un dispositivo electrónico para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong><br />

acción, que discrimine por medio <strong>de</strong> la amplitud los potenciales que son significativos <strong>de</strong><br />

los que no lo son (discriminador <strong>de</strong> ventana). Este discriminador <strong>de</strong>be <strong>de</strong> amplificar o<br />

<strong>de</strong>rivar la señal según se requiera, manejar dos niveles <strong>de</strong> referencia y producir una salida<br />

Arriba o A<strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong> las circunstancias. La <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> cada potencial <strong>de</strong><br />

acción <strong>de</strong>be producir un pulso <strong>de</strong> salida compatible con TTL para po<strong>de</strong>r ser enviado al<br />

puerto serial (RS-232) y así po<strong>de</strong>r ser procesado por la computadora.<br />

2.- Realizar un conjunto <strong>de</strong> programas <strong>de</strong> computo que permitan capturar los pulsos<br />

enviados por el discriminador <strong>de</strong> ventana. Así como también almacenarlos, procesarlos<br />

(análisis estadístico) y recuperarlos cada vez que se requiera. Este conjunto <strong>de</strong> programas<br />

<strong>de</strong> computo <strong>de</strong>berá permitir la impresión <strong>de</strong>l análisis estadístico y los histogramas <strong>de</strong><br />

frecuencia.<br />

2.2 Análisis <strong>de</strong> las diferentes opciones<br />

El mayor problema en la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción <strong>de</strong> neuronas (espigas)<br />

es el ruido <strong>de</strong> fondo ya que el potencial es pequeño respecto a éste. Existen una variedad <strong>de</strong><br />

métodos para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> espigas, como son:<br />

1.- Los conversores analógico-digital, que junto con las computadoras más recientes<br />

parecen factibles para construir <strong>de</strong>tectores <strong>de</strong> espigas en línea, basados solamente en el<br />

hardware y software <strong>de</strong> la computadora. Estos normalmente son <strong>de</strong>masiado costosos y su<br />

programación se complica, a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> que se basan en la <strong>de</strong>terminación <strong>de</strong> cruzamiento <strong>de</strong>l<br />

umbral <strong>de</strong> un nivel, emulando un discriminador analógico.<br />

2.- Algunos dispositivos comerciales (como son WPI, Fre<strong>de</strong>rick Haen, etc.) que a<strong>de</strong>más <strong>de</strong><br />

ser <strong>de</strong>masiado costosos se requiere <strong>de</strong> algunos dispositivos extra ya que carecen <strong>de</strong> un


11<br />

amplificador y <strong>de</strong> un <strong>de</strong>rivador <strong>de</strong> entrada para señales que son <strong>de</strong>masiado pequeñas y <strong>de</strong><br />

transición lenta respectivamente. Así como también <strong>de</strong> una salida directa al puerto serial y<br />

el control <strong>de</strong> niveles es analógico, dificultando con esto la fijación <strong>de</strong>l nivel <strong>de</strong> referencia <strong>de</strong><br />

manera exacta. Otra <strong>de</strong>sventaja es que no cuentan con ningún software para el análisis <strong>de</strong><br />

los potenciales <strong>de</strong>tectados.<br />

Por lo que se opto por diseñar este discriminador <strong>de</strong> ventana con las siguientes<br />

condiciones:<br />

1. Amplificación <strong>de</strong> la señal si es requerida (ganancias <strong>de</strong> 1, 2, 5, 10,100).<br />

2. Derivador <strong>de</strong> la señal para transiciones lentas (constante <strong>de</strong> <strong>de</strong>rivación <strong>de</strong> 0.1, 1, 5,<br />

10 y 50 ms).<br />

3. Salidas <strong>de</strong> pulso arriba y a<strong>de</strong>ntro tipo BNC y DB-9 (para puerto serial <strong>de</strong> la PC)<br />

compatibles con TTL, incluyendo indicadores <strong>de</strong> presencia <strong>de</strong> pulso(LED).<br />

4. Salida multiplexada <strong>de</strong> la señal y los niveles <strong>de</strong> referencia.<br />

5. Control digital <strong>de</strong> los niveles <strong>de</strong> referencia y <strong>de</strong>spliegue <strong>de</strong> los mismos.<br />

Por otro lado se necesita el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> un programa <strong>de</strong> computo para capturar los<br />

pulsos generados por el discriminador <strong>de</strong> ventana y realizar el análisis estadístico, así como<br />

mostrar los histogramas <strong>de</strong> frecuencia en tiempo real. Para esto se opto por <strong>de</strong>sarrollarlo<br />

mediante Turbo pascal 7, ya que este programa va a formar parte <strong>de</strong> un conjunto <strong>de</strong><br />

programas que han sido <strong>de</strong>sarrollados para el análisis <strong>de</strong> potenciales en el laboratorio <strong>de</strong><br />

Fisiología sensorial. Otra razón por la cual se <strong>de</strong>sarrolló en un lenguaje para sistema<br />

operativo DOS y no para Windows fue la necesidad realizar la capturar en tiempo real<br />

A continuación se muestra con <strong>de</strong>talle el <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong>l discriminador <strong>de</strong> ventana y<br />

el programa <strong>de</strong> computo que fueron realizados.


12<br />

3 Diseño <strong>de</strong>l sistema<br />

3.1 Discriminador <strong>de</strong> ventana<br />

Comparadores <strong>de</strong> nivel<br />

La parte central <strong>de</strong> un discriminador <strong>de</strong> ventana la constituyen los comparadores <strong>de</strong><br />

nivel por lo que es importante saber la manera cómo funcionan estos.<br />

Un comparador analiza una señal <strong>de</strong> voltaje en una entrada respecto a un voltaje <strong>de</strong><br />

referencia en la otra entrada. El amplificador operacional <strong>de</strong> propósito general se utiliza<br />

como sustituto <strong>de</strong> los CI diseñados específicamente para aplicaciones <strong>de</strong> comparación.<br />

Desafortunadamente, el voltaje <strong>de</strong> salida <strong>de</strong>l amplificador operacional no cambia<br />

con mucha velocidad. A<strong>de</strong>más su salida cambia, entre los limites fijados por los voltajes <strong>de</strong><br />

saturación, +V sat y -V sat, alre<strong>de</strong>dor <strong>de</strong> ?13 V. Por tanto, su salida no pue<strong>de</strong> alimentar<br />

dispositivos, como los CI <strong>de</strong> lógica digital TTL, que requieren niveles <strong>de</strong> voltaje entre 0 y<br />

+5 V. Estas <strong>de</strong>sventajas se eliminan con un circuito integrado diseñado específicamente<br />

para actuar como comparador. Un dispositivo <strong>de</strong> este tipo es el comparador 311.<br />

Tanto el amplificador operacional <strong>de</strong> propósito general como el comparador no<br />

operan con propiedad si hay ruido en cualquier entrada. Para resolver este problema, se<br />

utiliza la retroalimentación positiva. Obsérvese que la retroalimentación positiva no elimina<br />

el ruido; pero, hace que el amplificador operacional responda menos a él.<br />

Efectos <strong>de</strong>l ruido sobre los circuitos comparadores<br />

La señal <strong>de</strong> entrada E i se aplica a la entrada (-) <strong>de</strong> un amplificador operacional 301<br />

en la Figura 7 (el 301 es un amplificador operacional <strong>de</strong> propósito general). Si no hay ruido<br />

presente, el circuito opera como un <strong>de</strong>tector inverso <strong>de</strong> cruce por cero <strong>de</strong>bido a que V ref =0.


13<br />

Figura 7 Detector inversor <strong>de</strong> cruce por cero<br />

El voltaje <strong>de</strong> ruido se muestra, para simplificar, como una onda cuadrada en serie<br />

con E i . Para mostrar el efecto <strong>de</strong>l voltaje <strong>de</strong> ruido, el voltaje <strong>de</strong> señal <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong>l<br />

amplificador operacional se dibuja con y sin ruido en la Figura 8. La forma <strong>de</strong> onda <strong>de</strong> V 0<br />

comparada con el tiempo muestra con claridad como la suma <strong>de</strong> ruido causa señales falsas<br />

a la salida. V 0 <strong>de</strong>be indicar solo los cruces <strong>de</strong> E i , no los cruces <strong>de</strong> E i más el voltaje <strong>de</strong> ruido.<br />

Figura 8 Efectos <strong>de</strong> ruido en un <strong>de</strong>tector <strong>de</strong> cruce por cero<br />

Si E i se aproxima muy lentamente a V ref o se mantiene cerca <strong>de</strong> V 0 pue<strong>de</strong> seguir todas las<br />

oscilaciones <strong>de</strong>l voltaje <strong>de</strong> ruido o bien entrar bruscamente en oscilación <strong>de</strong> alta frecuencia.<br />

Estos cruces en falso pue<strong>de</strong>n eliminarse con retroalimentación positiva.


14<br />

Retroalimentación positiva<br />

La retroalimentación positiva se lleva a cabo tomando una fracción <strong>de</strong> voltaje <strong>de</strong><br />

salida V 0 y aplicándola a la entrada (+). En la Figura 9, el voltaje <strong>de</strong> salida V 0 se divi<strong>de</strong> entre<br />

R 1 y R 2 . Una fracción <strong>de</strong> V 0 se retroalimenta a la entrada (+). Cuando V 0 = +V sat , el voltaje<br />

realimentado se <strong>de</strong>nomina umbral superior <strong>de</strong> voltaje, V UT y se expresa en función <strong>de</strong>l<br />

divisor <strong>de</strong> voltaje como<br />

R2<br />

V<br />

UT<br />

? (?<br />

V sat<br />

) (1)<br />

R ? R<br />

1<br />

2<br />

Para los valores <strong>de</strong> a E i inferiores a V UT , el voltaje en la entrada (+) es mayor que el voltaje<br />

en la entrada (-). Por tanto, V 0 se fija +V sat .<br />

Cuando V 0 está en –V sat , el voltaje <strong>de</strong> retroalimentación a la entrada (+) se <strong>de</strong>nomina<br />

umbral inferior <strong>de</strong> voltaje V LT y esta dado por<br />

R2<br />

V<br />

LT<br />

? (?<br />

V sat<br />

) (2)<br />

R ? R<br />

1<br />

2<br />

Figura 9 R 1 y R 2 retroalimentan un voltaje <strong>de</strong> referencia <strong>de</strong> la salida a la terminal <strong>de</strong> entrada (+).


15<br />

Se concluye que la retroalimentación positiva induce una acción casi instantánea<br />

para cambiar V 0 con mucha velocidad <strong>de</strong> un limite a otro. Una vez que V 0 comienza a<br />

cambiar, causa una acción regeneradora que hace que V 0 cambie aun con mas velocidad. Si<br />

los voltajes <strong>de</strong> umbral son mas gran<strong>de</strong>s que los voltajes pico <strong>de</strong>l ruido, la retroalimentación<br />

positiva eliminara las transiciones falsas <strong>de</strong> salida, como se pue<strong>de</strong> ver en la Figura 10.<br />

Figura 10 Cuando E i va arriba <strong>de</strong> V UT en el tiempo (c), V 0 pasa a –V sat . El voltaje pico a pico <strong>de</strong> ruido podría<br />

ser igual o exce<strong>de</strong>r a V H para hacer que E i que<strong>de</strong> <strong>de</strong>bajo <strong>de</strong> V LT y generara un cruce falso. Por tanto V H<br />

indica el margen <strong>de</strong> voltaje pico a pico <strong>de</strong> ruido.<br />

Detector <strong>de</strong> nivel <strong>de</strong> voltaje con histéresis<br />

Hay una técnica estándar para mostrar el comportamiento <strong>de</strong> un comparador en una<br />

sola gráfica en lugar <strong>de</strong> dos gráficas, como en la Figura 10. Al graficar E i en el eje horizontal<br />

y V 0 en el eje vertical, se obtiene la característica <strong>de</strong> voltaje <strong>de</strong> entrada-salida, como en la<br />

Figura 11. Para E i menor <strong>de</strong> V LT , V 0 = +V sat . La línea vertical (a) muestra que V 0 va <strong>de</strong>s<strong>de</strong><br />

+V sat hasta –V sat conforme Ei se vuelve mayor que V UT . La línea vertical (b) muestra V 0<br />

cambiando <strong>de</strong>s<strong>de</strong> –V sat hasta +V sat cuando Ei se vuelve menor que V LT . La diferencia <strong>de</strong><br />

voltajes entre V UT y V LT se <strong>de</strong>nomina voltaje <strong>de</strong> histéresis, V H .


16<br />

Siempre que un circuito cambia <strong>de</strong> un estado a un segundo estado con cierta señal y<br />

entonces regresa <strong>de</strong>l segundo al primer estado con otra señal <strong>de</strong> entrada diferente, se dice<br />

que el circuito exhibe histéresis. Para el comparador <strong>de</strong> retroalimentación positiva, la<br />

diferencia en las señales <strong>de</strong> entrada es<br />

V ? V ? V<br />

(3)<br />

H<br />

UT<br />

LT<br />

Si el voltaje <strong>de</strong> histéresis está diseñado para que sea mayor que el voltaje <strong>de</strong> ruido<br />

pico a pico, no habrá cruces falsos <strong>de</strong> salida. Por tanto, V H indica qué tanto ruido pico a<br />

pico pue<strong>de</strong> soportar el circuito.<br />

Figura 11 Gráfica <strong>de</strong> V 0 vs E i que ilustra voltaje <strong>de</strong> histéresis en un circuito comparador.<br />

Detector no inversor <strong>de</strong> nivel <strong>de</strong> voltaje con histéresis<br />

La resistencia <strong>de</strong> retroalimentación positiva <strong>de</strong> la salida a la entrada (+) indica la presencia<br />

<strong>de</strong> histéresis en el circuito <strong>de</strong> la Figura 12. E i se aplica a través <strong>de</strong> R a la entrada (+), <strong>de</strong><br />

modo que el circuito es no inversor. El voltaje <strong>de</strong> referencia V ref se aplica a la entrada (-)<br />

<strong>de</strong>l amplificador operacional.


17<br />

Figura 12 Detector <strong>de</strong> nivel <strong>de</strong> voltaje inversor con histéresis, la razón <strong>de</strong> nR a R o n y V ref <strong>de</strong>termina a V UT ,<br />

V LT , V H y V ctr.<br />

Los voltajes <strong>de</strong> umbral superior e inferior pue<strong>de</strong>n encontrarse por las siguientes<br />

ecuaciones:<br />

V<br />

UT<br />

? ? ?<br />

? Vsat<br />

? Vref<br />

1 1<br />

n<br />

?<br />

(4)<br />

n<br />

V<br />

LT<br />

? ? ?<br />

El voltaje <strong>de</strong> histéresis VH se expresa por<br />

? Vsat<br />

? Vref<br />

1 1<br />

n<br />

?<br />

(5)<br />

n<br />

V<br />

H<br />

? V ??<br />

? V ?<br />

sat<br />

sat<br />

? VUT<br />

? VLT<br />

?<br />

(6)<br />

n<br />

En los <strong>de</strong>tectores <strong>de</strong> cruce por cero, VH está centrado en la referencia <strong>de</strong> cero volts.<br />

Para el circuito <strong>de</strong> la Figura 12 , VH no está centrado en V ref pero es simétrico alre<strong>de</strong>dor <strong>de</strong>l<br />

valor promedio <strong>de</strong> VUT y VUL. Este valor se <strong>de</strong>nomina voltaje centrado V ctr y se<br />

encuentra por la ecuación<br />

V<br />

ctr<br />

? 1?<br />

1 ?<br />

VUT<br />

? VLT<br />

? ? Vref<br />

2<br />

n<br />

(7)


18<br />

Compare la ubicación <strong>de</strong> V ctr y V ref en las Figura 13 (a) y (b). También compare las<br />

ecuaciones (6) y (7) para observar que n aparece en ambas ecuaciones. Esto significa que<br />

cualquier ajuste en la resistencia nR afecta tanto a V ctr como a V H .<br />

Figura 13 El voltaje central V ctr y V H no pue<strong>de</strong>n ajustarse en forma in<strong>de</strong>pendiente puesto que ambos<br />

<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>n <strong>de</strong> n.<br />

En la Figura 14 se muestra el diagrama a bloques <strong>de</strong>l discriminador <strong>de</strong> ventana que<br />

se construyo para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> espigas (potencial <strong>de</strong> acción). El discriminador <strong>de</strong> ventana<br />

se divi<strong>de</strong> en 10 bloques que son:<br />

1. Acondicionamiento <strong>de</strong> la señal.<br />

2. Amplificación o <strong>de</strong>rivación <strong>de</strong> la señal.<br />

3. Control <strong>de</strong> niveles <strong>de</strong> referencia (alto y bajo).<br />

4. Visualizador <strong>de</strong> niveles<br />

5. Comparador A (alto).<br />

6. Comparador B (bajo).<br />

7. Lógica digital (generador <strong>de</strong> pulsos arriba y a<strong>de</strong>ntro).<br />

8. Reloj <strong>de</strong>l multiplexor.<br />

9. Multiplexor.<br />

10. Buffer.


19<br />

Todos estos alimentados por una fuente <strong>de</strong> voltaje regulada <strong>de</strong> ?5V.<br />

Figura 14 Diagrama a bloques <strong>de</strong>l discriminador <strong>de</strong> ventana (discriminador <strong>de</strong> amplitud <strong>de</strong> dos<br />

niveles) para la <strong>de</strong>tección <strong>de</strong> los potenciales <strong>de</strong> acción en la actividad eléctrica neuronal.<br />

Acondicionamiento <strong>de</strong> la señal<br />

En esta sección solamente se utiliza un amplificador operacional como seguidor <strong>de</strong> voltaje<br />

con la finalidad <strong>de</strong> dar una alta impedancia <strong>de</strong> entrada al discriminador y acoplar en AC.


20<br />

Se propone una resistencia <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong> 1 M? y se <strong>de</strong>sea una frecuencia <strong>de</strong> corte<br />

para la señal <strong>de</strong> entrada menor a 1 Hz. El valor <strong>de</strong>l capacitor <strong>de</strong> entrada se calculó mediante<br />

la siguiente ecuación:<br />

1<br />

C ?<br />

2? fR<br />

sustituyendo<br />

C 1 1<br />

?<br />

?<br />

?<br />

? 0.1591596X10<br />

6 F ? 0.15?<br />

F<br />

6<br />

2(3.1416)(1Hz)(1M<br />

) 6.283X10<br />

El valor comercial más próximo es 0.1 ?F ó 0.22 ?F como <strong>de</strong>seamos que la frecuencia sea<br />

menor que 1 Hz, elegimos un capacitor <strong>de</strong> 0.22 ?F.<br />

En la Figura 15 se muestra el circuito <strong>de</strong> entrada para el discriminador <strong>de</strong> ventana<br />

con una impedancia <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong> 1 M? y una frecuencia <strong>de</strong> corte <strong>de</strong> 0.732 Hz.<br />

Figura 15 Acondicionamiento <strong>de</strong> la señal, la impedancia <strong>de</strong> entrada es <strong>de</strong> 1M? y la frecuencia <strong>de</strong> corte es<br />

igual 0.732 Hz.


21<br />

Amplificación o <strong>de</strong>rivación<br />

Como la señal que se obtiene <strong>de</strong>l amplificador no siempre es la a<strong>de</strong>cuada para<br />

compararla con los niveles <strong>de</strong> discriminación, en ocasiones es necesario amplificar. Por<br />

otro lado cuando la señal <strong>de</strong> interés es lenta lo más conveniente es <strong>de</strong>rivar la señal..<br />

La selección entre amplificar o <strong>de</strong>rivar se realiza por medio <strong>de</strong> un selector <strong>de</strong> dos polos, dos<br />

tiros.<br />

Amplificación<br />

La amplificación <strong>de</strong> la señal se realiza por medio <strong>de</strong> un amplificador inversor con<br />

las ganancias <strong>de</strong> 1, 2, 5,10 y 100. Los cálculos realizados son los siguientes:<br />

1. Se propone una resistencia <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong> 1K<br />

2. Se calcula R F para la ganancia <strong>de</strong> 1, mediante la siguiente ecuación:<br />

sustituyendo<br />

R ? G *<br />

F<br />

R ent<br />

R F<br />

? 1*(1K<br />

) 1K<br />

1<br />

?<br />

3. De forma análoga se calcula R F para las ganancias <strong>de</strong> 2, 5, 10 y 100. Obteniendo los<br />

siguientes valores:<br />

Derivacion<br />

R F 2<br />

? 2K<br />

R ? F 3<br />

5K<br />

R F 4<br />

? 10K<br />

R ? F 5<br />

100K<br />

La <strong>de</strong>rivación <strong>de</strong> la señal se realiza con un diferenciador inversor con las siguientes<br />

constantes <strong>de</strong> tiempo ? (RC) <strong>de</strong> 0.1, 1, 5, 10 y 50 ms. Los cálculos son los siguientes:<br />

1. Se propone una resistencia Rf = 100 K<br />

2. Se calcula C i para ? = 0.1 mediante la siguiente ecuación:


22<br />

sustituyendo<br />

?<br />

C i<br />

?<br />

Rf<br />

0.1ms<br />

C i 1<br />

? ? 0.001?<br />

F<br />

100K<br />

De forma analoga se calcula Ci para las constantes <strong>de</strong> 1,5,10,50. Obteniendo los siguientes<br />

valores:<br />

C ? i 2<br />

0.01?F<br />

C ? i 3<br />

0.05?F<br />

C ? i 4<br />

0.10?F<br />

C ? i 5<br />

0.50?F<br />

Una vez que se ha amplificado o <strong>de</strong>rivado, según sea el caso, se vuelve amplificar<br />

por medio <strong>de</strong> un amplificador no inversor <strong>de</strong> ganancia unitaria. De esta manera se recupera<br />

la polaridad inicial <strong>de</strong> la señal, a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> separar y aislar la señal hacia los comparadores<br />

<strong>de</strong> nivel y al multiplexor.<br />

Figura 16 Amplificación o <strong>de</strong>rivación <strong>de</strong> la señal, esta selección se realiza por medio <strong>de</strong> un interruptor <strong>de</strong> un<br />

polo dos tiros. Después <strong>de</strong> haber sido amplificada o <strong>de</strong>rivada la señal pasa por un amplificador inversor <strong>de</strong><br />

ganancia unitaria para recuperar la señal invertida, a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> separar la señal


23<br />

Comparadores<br />

La señal una vez amplificada o <strong>de</strong>rivada se compara con dos niveles <strong>de</strong> referencia,<br />

para esto se utilizan dos comparadores <strong>de</strong> precisión LM311, para el nivel alto y nivel bajo<br />

respectivamente. El comparador 311 es un CI diseñado y optimizado para un alto<br />

rendimiento en aplicaciones como <strong>de</strong>tector <strong>de</strong> nivel <strong>de</strong> voltaje. El comparador 311 es una<br />

elección excelente por su versatilidad. Su salida esta diseñada para no presentar rebotes<br />

entre V sat pero, pue<strong>de</strong> cambiarse con bastante facilidad. De hecho, si esta conectando un<br />

sistema con una fuente <strong>de</strong> alimentación <strong>de</strong> voltaje diferente, simplemente se conecta la<br />

salida <strong>de</strong> la nueva fuente <strong>de</strong> alimentación <strong>de</strong> voltaje a través <strong>de</strong> una resistencia a<strong>de</strong>cuada.<br />

Se diseño un circuito como <strong>de</strong>tector no inversor <strong>de</strong> nivel con 5mV <strong>de</strong> histéresis, con<br />

un voltaje <strong>de</strong> saturación positivo y negativo <strong>de</strong> 5V y 0V respectivamente.<br />

Procedimiento <strong>de</strong> diseño:<br />

1. Se propone una resistencia <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong> 10K (R1)<br />

2. Se calcula n por medio <strong>de</strong> la ecuación:<br />

n ?<br />

? Vsat ? (?<br />

Vsat)<br />

V<br />

H<br />

?<br />

? 5V<br />

? (?<br />

0V<br />

)<br />

5mV<br />

? 1000<br />

3. Se calcula Rf :<br />

Rf ? nR1 ? 1000(10k)<br />

? 10M<br />

4. Se encuentra V UT por medio <strong>de</strong> la ecuación:<br />

? 1 ? Vsat<br />

1 ? ??<br />

Vref (1.001)<br />

V UT<br />

? Vref<br />

?<br />

n n<br />

5. Se encuentra VLT por medio <strong>de</strong> la ecuación:<br />

V LT<br />

? 1 ? Vsat<br />

1 ? ??<br />

? (1.001) ? 0. 005<br />

? Vref<br />

Vref<br />

n n


24<br />

Presentamos el siguiente diagrama que nos muestra la configuración <strong>de</strong>l<br />

comparador alto (comparador A), el cual es un comparador no inversor.<br />

Figura 17 Comparador no inversor para el nivel alto, Rf1 y R1 agregan 5mV <strong>de</strong> histéresis para minimizar<br />

los efectos <strong>de</strong> ruido.<br />

Cuando la entrada (+) es menos positiva que la entrada (-) el interruptor equivalente <strong>de</strong><br />

salida <strong>de</strong>l 311 se cierra y extien<strong>de</strong> la tierra <strong>de</strong> la terminal 1 a la terminal 7 <strong>de</strong> salida. Rf y Ri<br />

agregan 5 mV <strong>de</strong> histéresis para minimizar los efectos <strong>de</strong> ruido, <strong>de</strong> modo que la terminal 2<br />

en esencia está a 0V.<br />

De forma análoga se procedió para el comparador <strong>de</strong>l nivel bajo, <strong>de</strong> esta manera lo<br />

único que cambia es el nivel <strong>de</strong> referencia para cada comparador. En la Figura 18 se muestra<br />

el circuito para el comparador bajo.


25<br />

Figura 18 Comparador no inversor para el nivel bajo.<br />

Control <strong>de</strong> niveles y <strong>de</strong>spliegue <strong>de</strong> los mismos<br />

Para el control <strong>de</strong> niveles, se utilizó un circuito generador <strong>de</strong> pulso único un<br />

contador <strong>de</strong> 8 bits (2 contadores arriba abajo) y un conversor digital analógico <strong>de</strong> 8 bits<br />

(DAC08), a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> un amplificador sumador.<br />

El DAC-08 es un conversor digital analógico multiplicador (MDAC) <strong>de</strong> bajo costo<br />

y rápido, encapsulado en un empaque doble <strong>de</strong> 16 terminales. Sus principios <strong>de</strong> operación<br />

se examinan con relación a la tarea efectuada por cada una <strong>de</strong> sus terminales. Las<br />

terminales 13 y 14 son terminales <strong>de</strong> suministro positivo y negativo respectivamente y<br />

pue<strong>de</strong>n tener cualquier valor <strong>de</strong> ? 4.5 a ?18 V.<br />

La flexibilidad <strong>de</strong>l DAC-08 se mejora porque tiene dos entradas <strong>de</strong> referencia en<br />

lugar <strong>de</strong> una. Las terminales 14 y 15 permiten voltajes <strong>de</strong> referencia positivos y negativos<br />

respectivamente. La corriente <strong>de</strong> escalera <strong>de</strong> entrada al DAC-08 se pue<strong>de</strong> ajustar con mucha<br />

facilidad, <strong>de</strong> 4 ?A a 4 mA, siendo un valor típico 2 mA. Proponemos una corriente <strong>de</strong> 1mA<br />

y calculamos la resistencia <strong>de</strong> referencia (R ref ) <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />

R<br />

Vref<br />

5V<br />

? ? ? K?<br />

I 1mA<br />

ref<br />

5<br />

ref


26<br />

tomamos el valor más cercano el cual es 4.99K, la corriente <strong>de</strong> salida <strong>de</strong>l DAC-08 se<br />

convierte en una salida <strong>de</strong> voltaje V 0 por el amplificador operacional y la resistencia RF<br />

externos, como queremos una resolución <strong>de</strong> 100 mV/bit se calcula RF <strong>de</strong> la siguiente<br />

manera:<br />

? RF ??<br />

1 ?<br />

Re solución ? V<br />

? 10mV<br />

bit<br />

ref R<br />

/<br />

? ref ??<br />

256 ?<br />

Despejando RF y sustituyendo<br />

? R ?<br />

ref<br />

RF ? 10 mV / bit<br />

K<br />

? Vref<br />

?<br />

? 256? ? 2554 ? 2.54 ?<br />

De igual manera se tomo el valor más cercano siendo 2.49K.<br />

Las patas 5 a 12 i<strong>de</strong>ntifican las terminales <strong>de</strong> entrada digital, como se muestra en<br />

Figura 19, la terminal 5 es el bit más significativo (MSB), D 7 . La pata 12 es la terminal LSB,<br />

D 0 . Las terminales son compatibles con TTL o CMOS. Estas entradas controlan ocho<br />

interruptores <strong>de</strong> corriente.<br />

Figura 19 DAC-08 Cableado para obtener voltajes positivos <strong>de</strong> salida con una resolución <strong>de</strong> 10 mV/bit.<br />

A continuación se muestra el nivel <strong>de</strong> referencia bajo y alto usando 2 contadores (4<br />

bits) y un conversor DAC-08 (8 bits) configurado para obtener 10mV por paso.


27<br />

Para evitar que los contadores se reciclaran, se diseño un circuito que limitara la<br />

cuenta, es <strong>de</strong>cir; que cuando la cuenta llegara al valor máximo (11111111) se quedara en<br />

ese valor y no se reciclara al valor mínimo (00000000). Del mismo modo para cuando<br />

llegara al nivel mínimo (00000000), no se fuera al valor máximo (11111111), en la Figura<br />

20 se muestra la implementación <strong>de</strong> este circuito. El cual se diseño <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />

se construyo una tabla:<br />

Down(TCD) Up(TCU) Reset(MR) Set(PL)<br />

H H L L<br />

H L H X<br />

L H L H<br />

L L L L<br />

Se obtuvieron las funciones boolenas<br />

PL ? TCD?<br />

TCU<br />

MR ? TCU ? TCD<br />

Y se implemento el circuito correspondiente.<br />

Figura 20 Circuito limitador para evitar el reciclaje <strong>de</strong> los contadores.


28<br />

El circuito para ajustar el nivel <strong>de</strong> referencia alto es similar al <strong>de</strong>l nivel bajo (Figura<br />

21), con la salvedad <strong>de</strong> un sumador en la etapa final que agrega el valor <strong>de</strong>l nivel bajo, es<br />

<strong>de</strong>cir que el nivel <strong>de</strong> referencia alto se fija respecto al nivel <strong>de</strong> referencia bajo, <strong>de</strong> tal modo<br />

que si este ultimo se mueve, el primero lo seguirá. Por otra parte el nivel alto nunca será<br />

menor al nivel bajo.<br />

Figura 21 Niveles <strong>de</strong> referencia alto y bajo, estos nivele se ajustan por medio <strong>de</strong> los contadores arriba y<br />

abajo, dando 10 mV/bit obteniendo <strong>de</strong> esta manera un voltaje máximo <strong>de</strong> 2.5mV para el nivel <strong>de</strong> referencia<br />

bajo y un voltaje máximo <strong>de</strong> 5V para el nivel <strong>de</strong> referencia alto, es <strong>de</strong>cir 2.5V mas el nivel <strong>de</strong> referencia bajo.<br />

Para el <strong>de</strong>spliegue <strong>de</strong> los niveles se utilizo el CI ICL7107 <strong>de</strong> Intersil que es un<br />

convertidor analógico digital (convertidor integrador <strong>de</strong> doble rampa) con manejador<br />

directo a visualizadores LED (7 Segmentos) <strong>de</strong> 3½ dígitos. El ICL7107 esta configurado


29<br />

para 20V a escala completa, los visualizadores <strong>de</strong> 7 segmentos son <strong>de</strong> ánodo común no<br />

multiplexado.<br />

En la Figura 22 se muestra el diagrama con los valores <strong>de</strong> los componentes<br />

seleccionados para 20V a escala completa<br />

Figura 22 ICL7107 con salida a visualizador numérico <strong>de</strong> tipo LED, componentes seleccionados para 20V a<br />

escala completa.<br />

Lógica digital<br />

Las salidas <strong>de</strong> los comparadores disparan a los generadores <strong>de</strong> pulsos TTL. A<br />

continuación se <strong>de</strong>scribe su funcionamiento así como los cálculos realizados. Estas salidas<br />

primero pasan por un circuito <strong>de</strong> anticoinci<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> pulsos, es <strong>de</strong>cir que cuando se genera<br />

un pulso alto, no se pue<strong>de</strong> generar un pulso bajo, este circuito se muestra en Figura 23


30<br />

Figura 23 Circuito anticoinci<strong>de</strong>ncia, elimina la producción <strong>de</strong> un pulso alto y bajo al mismo tiempo.<br />

La salida <strong>de</strong>l comparador alto se conecta directamente a la entrada <strong>de</strong> un generador<br />

<strong>de</strong> pulso único. El primer generador <strong>de</strong> pulso único a su vez dispara a un segundo<br />

generador <strong>de</strong> pulso que tiene como salida un diodo emisor <strong>de</strong> luz (LED) que indica la<br />

presencia <strong>de</strong> pulso. El ancho <strong>de</strong> pulso es <strong>de</strong>terminado mediante un capacitor y resistor<br />

externo, para el primer generador <strong>de</strong> pulso su longitud varia entre 0.1 y 1.1 ms; para el<br />

segundo tiene una longitud constante <strong>de</strong> 3.7 ms.<br />

Para los cálculos <strong>de</strong>l primer generador <strong>de</strong> pulso único se eligió un C x = 0.68 ?F,<br />

para el cual el valor <strong>de</strong> K es 0.35 y el calculo <strong>de</strong>l resistor se realizó utilizando la formula<br />

siguiente:<br />

Tw ? kR C x x<br />

<strong>de</strong>spegando y sustituyendo para Tw = 0.1ms:<br />

0.1ms<br />

R x<br />

? ? 4. 20K?<br />

? 0.35?? 0.068?<br />

F ?<br />

Del mismo modo para Tw = 1.1 ms


31<br />

1.1ms<br />

R x<br />

? ? 46. 21K?<br />

0.35<br />

? 0.068?<br />

F ?<br />

Para el segundo generador <strong>de</strong> pulso único cuya longitud <strong>de</strong> pulso es constante, se<br />

calculó <strong>de</strong> forma análoga, escogiendo un C x =0.22?F.<br />

3.7ms<br />

R x<br />

? ? 48. 05K?<br />

0.35<br />

? 0.22?<br />

F ?<br />

Figura 24 Generador <strong>de</strong>l pulso arriba, el primer generador <strong>de</strong> pulso dispara un segundo para indicar la<br />

presencia <strong>de</strong>l pulso por medio <strong>de</strong> un diodo emisor <strong>de</strong> luz (LED).<br />

La salida <strong>de</strong>l comparador bajo pasa primero por un disparador para evitar errores a<br />

transiciones lentas y <strong>de</strong>spués se conecta a la entrada <strong>de</strong>l generador <strong>de</strong> pulso


32<br />

Figura 25 Generador <strong>de</strong>l puso a<strong>de</strong>ntro, <strong>de</strong> igual manera que el pulso arriba se dispara un segundo<br />

generador <strong>de</strong> pulso para indicar la presencia <strong>de</strong>l pulso. A diferencia <strong>de</strong>l nivel alto este pasa primero por un<br />

disparador para evitar errores a transiciones lentas.<br />

Buffer<br />

En esta etapa se utilizan seguidores <strong>de</strong> voltaje (amplificadores <strong>de</strong> ganancia unitaria)<br />

para aislar la señal y los voltajes <strong>de</strong> referencia (alto y bajo) antes <strong>de</strong> ser enviados al<br />

multiplexor, así como también para enviar los voltajes <strong>de</strong> referencia a los visualizadores<br />

numéricos como se muestra en la Figura 26.


33<br />

Figura 26 Aisladores para la señal los niveles <strong>de</strong> referencia, a<strong>de</strong>más <strong>de</strong> aislar los niveles los separa para<br />

dirigirlos tanto al multiplexor como a los visualizadores.<br />

Reloj <strong>de</strong>l multiplexor<br />

Pare el reloj <strong>de</strong>l multiplexor se utilizan tres CI 4047 configurados, uno como<br />

multivibrador astable (<strong>de</strong> oscilación libre) y dos como multivibradores monoestables (un<br />

disparo), tal como se muestra en la siguiente tabla:<br />

Función A VDD A VSS Entrada pulso Salida pulso Periodo<br />

Multivibrador 4,5,6,14 7,8,9,12 10,11,13 TA=4.4RC(10,11)<br />

Astable<br />

TA=2.2RC(13)


34<br />

Multivibrador 4,14 5,6,7,9,12 8 10,11 TM=2.48RC<br />

monoestable<br />

Tabla 2 Configuraciones <strong>de</strong>l 4047,este CI pue<strong>de</strong> ser configurado como multivibrador astable y monoestable.<br />

Para el reloj <strong>de</strong>l multiplexor se tomo como base un ciclo <strong>de</strong> 33 ?seg (30 Khz). Para<br />

mostrar la señal un tiempo <strong>de</strong> 26 ?seg (78 %) y para mostrar los niveles un tiempo <strong>de</strong> 7<br />

?seg (22 %). El muestreo se realiza alternando entre la señal <strong>de</strong> entrada (13 ?seg) y uno <strong>de</strong><br />

los niveles (3.5 ?seg), minimizando perdida <strong>de</strong> información <strong>de</strong> la señal.<br />

Los cálculos realizados son los siguientes para el multivibrador aestable se propuso<br />

una resistencia <strong>de</strong> 10 K? y se calculo C <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />

TA 33?<br />

seg<br />

C ? ? ? 750 pF<br />

4.40R<br />

44K<br />

Para los multivibradores monoestables se propuso una resistencia <strong>de</strong> 30.1 K? y se calculo<br />

C <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />

TM 3.5?<br />

seg<br />

C ? ? ? 46. 89 pF<br />

2.48R<br />

74.64K<br />

El valor comercial más cercano es <strong>de</strong> 47 pF.<br />

En la Figura 27 se muestra el diseño <strong>de</strong>l reloj para manejar al CI que muestra<br />

simultáneamente la señal y los niveles <strong>de</strong> referencia.


35<br />

Figura 27 Reloj para multiplexor, el primer CI4047 genera un ciclo nominal <strong>de</strong> aproximadamente 33?S<br />

Multiplexor<br />

Para mostrar la señal y los niveles discriminatorios simultáneamente (se utilizó un<br />

CI 4046 que es un interruptor analógico. Los niveles <strong>de</strong> voltaje pasan antes por un filtro<br />

pasa bajas cuya frecuencia <strong>de</strong> corte es 15.9 Hz.


36<br />

Figura 28 Interruptores analógicos (4066) utilizados para multiplexar la señal y los niveles <strong>de</strong> referencia con<br />

una frecuencia base <strong>de</strong><br />

En la ¡Error! No se encuentra el origen <strong>de</strong> la referencia. se muestra el diagrama<br />

eléctrico <strong>de</strong>l discriminador <strong>de</strong> ventana. Las resistencias usadas son <strong>de</strong> ¼ <strong>de</strong> watt al 1%,<br />

todos los CI llevan un capacitor <strong>de</strong> 0.1µF entre las fuentes y tierra para eliminar ruido. Para<br />

minimizar los errores en el voltaje <strong>de</strong> salida <strong>de</strong>bidos a las corrientes <strong>de</strong> polarización para<br />

los amplificadores inversores y no inversores, se agrego una resistencia ( R ) compensadora<br />

<strong>de</strong> corriente en serie con la entrada (+) y es igual a la combinación en paralelo <strong>de</strong> todas las<br />

resistencias <strong>de</strong> entrada (Ri) y la resistencia <strong>de</strong> retroalimentación (Rf).<br />

Todos lo amplificadores operacionales cuentan con una resistencia <strong>de</strong> ajuste fino (trimpot)<br />

para minimizar los efectos <strong>de</strong> la <strong>de</strong>sviación <strong>de</strong> voltaje (offset null)en la entrada.


37<br />

C0<br />

0.22uF<br />

R2<br />

10K<br />

R1<br />

1M<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7<br />

4<br />

U1<br />

741<br />

S1A<br />

+5V<br />

-5V<br />

R2<br />

2K<br />

RA2<br />

1K<br />

RD1<br />

100K<br />

R4<br />

10K R5<br />

100K<br />

R3<br />

5K<br />

RA1<br />

1K<br />

R1<br />

1K<br />

RD2<br />

49.9K<br />

RC2<br />

100K<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7 4<br />

U3<br />

741<br />

2<br />

1<br />

12<br />

3<br />

14<br />

13 4<br />

U2A<br />

LM747<br />

6<br />

7<br />

10<br />

5<br />

8<br />

9<br />

U2B<br />

LM747<br />

S2B<br />

S2A<br />

C3<br />

0.047uF<br />

C2<br />

0.1uF<br />

C4<br />

0.01uF<br />

C5<br />

0.001uF<br />

C1<br />

0.47uF<br />

+5v<br />

+5V<br />

-5V<br />

S1B<br />

RC1<br />

100K<br />

RC3<br />

49.9K<br />

+5V<br />

-5V<br />

CC1<br />

5uF<br />

RM2<br />

100K<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7 4<br />

U20<br />

741<br />

RM1<br />

100K<br />

RM3<br />

49.9K<br />

+5V<br />

-5V<br />

CM1<br />

5uF<br />

P1<br />

BNC<br />

P0<br />

15<br />

P1<br />

1<br />

P2 10<br />

P3<br />

9<br />

CU 5<br />

CD<br />

4<br />

Q0<br />

3 QB<br />

2<br />

QC<br />

6<br />

QD<br />

7<br />

TCU<br />

12<br />

TCD<br />

13 PL<br />

11<br />

MR 14<br />

U11<br />

74LS193<br />

P0<br />

15<br />

P1<br />

1<br />

P2 10<br />

P3 9<br />

CU<br />

5<br />

CD 4<br />

Q0<br />

3 QB<br />

2<br />

QC<br />

6<br />

QD<br />

7<br />

TCU<br />

12<br />

TCD<br />

13<br />

PL<br />

11<br />

MR<br />

14<br />

U12<br />

74LS193<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7 4<br />

U17<br />

TL081<br />

V- 3<br />

V+<br />

13<br />

Iout<br />

4<br />

Iout<br />

2<br />

msbB1<br />

5<br />

B2<br />

6<br />

Vrf(-)<br />

15<br />

B3<br />

7<br />

B4<br />

8<br />

Vrf(+)<br />

14<br />

B5<br />

9<br />

B6<br />

10<br />

Vlc<br />

1<br />

B7<br />

11<br />

lsbB8<br />

12<br />

COMP<br />

16<br />

U15<br />

DAC0800<br />

-5V<br />

+5V<br />

RF1<br />

2.49K<br />

R1<br />

10K<br />

R26<br />

4.99K<br />

R24<br />

4.99K<br />

C42<br />

0.1uF<br />

+5V +5V<br />

+5V<br />

-5V<br />

Incrementa<br />

Decrementa<br />

P0<br />

15<br />

P1<br />

1<br />

P2 10<br />

P3<br />

9<br />

CU 5<br />

CD<br />

4<br />

Q0<br />

3 QB<br />

2<br />

QC<br />

6<br />

QD<br />

7<br />

TCU<br />

12<br />

TCD<br />

13 PL<br />

11<br />

MR 14<br />

U13<br />

74LS193<br />

P0<br />

15<br />

P1<br />

1<br />

P2 10<br />

P3 9<br />

CU<br />

5<br />

CD 4<br />

Q0<br />

3 QB<br />

2<br />

QC<br />

6<br />

QD<br />

7<br />

TCU<br />

12<br />

TCD<br />

13<br />

PL<br />

11<br />

MR<br />

14<br />

U14<br />

74LS193<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7 4<br />

U18<br />

TL081<br />

V-<br />

3<br />

V+<br />

13<br />

Iout<br />

4<br />

Iout<br />

2<br />

msbB1<br />

5<br />

B2<br />

6<br />

Vrf(-)<br />

15<br />

B3<br />

7<br />

B4<br />

8<br />

Vrf(+)<br />

14<br />

B5<br />

9<br />

B6<br />

10<br />

Vlc<br />

1<br />

B7<br />

11<br />

lsbB8<br />

12<br />

COMP<br />

16<br />

U16<br />

DAC0800<br />

-5V<br />

+5V<br />

RF2<br />

2.49K<br />

R2<br />

10K<br />

R27<br />

4.99K<br />

R25<br />

4.99K<br />

C43<br />

0.1uF<br />

+5V +5V<br />

+5V<br />

-5V<br />

Incrementa<br />

Decrementa<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7<br />

4<br />

U19<br />

TL081<br />

R3<br />

10K<br />

RF3<br />

10K<br />

-5V<br />

+5V<br />

11<br />

12<br />

13<br />

U10D<br />

74LS00<br />

8<br />

9<br />

10<br />

U10C<br />

74LS00<br />

8<br />

9<br />

U9D<br />

74LS04<br />

10 11<br />

U9E<br />

74LS04<br />

12 13<br />

U9F<br />

74LS04<br />

1<br />

2<br />

3<br />

U10A<br />

74LS00<br />

5 6<br />

U9C<br />

74LS04<br />

3<br />

4<br />

U9B<br />

74LS04<br />

1<br />

2<br />

U9A<br />

74LS04<br />

4<br />

5<br />

6<br />

U10B<br />

74LS00<br />

A<br />

9<br />

B<br />

10<br />

CLR<br />

11<br />

Q<br />

12<br />

Q<br />

5<br />

Cext<br />

6<br />

RCext<br />

7<br />

U7B<br />

74LS123<br />

A<br />

1<br />

B<br />

2<br />

CLR<br />

3<br />

Q<br />

4<br />

Q<br />

13<br />

Cext<br />

14<br />

RCext<br />

15<br />

U7A<br />

74LS123<br />

C1<br />

.068uF<br />

C2<br />

0.22uF<br />

R19<br />

330E<br />

R20<br />

330E<br />

R17<br />

47K<br />

R9<br />

1K<br />

R15<br />

4.7K<br />

+5V<br />

+5V<br />

R13<br />

50K<br />

D1<br />

LED<br />

Po1<br />

BNC<br />

+5V<br />

A<br />

9<br />

B<br />

10<br />

CLR<br />

11<br />

Q<br />

12<br />

Q<br />

5<br />

Cext<br />

6<br />

RCext<br />

7<br />

U8B<br />

74LS123<br />

A<br />

1<br />

B<br />

2<br />

CLR<br />

3<br />

Q<br />

4<br />

Q<br />

13<br />

Cext<br />

14<br />

RCext<br />

15<br />

U8A<br />

74LS123<br />

C1<br />

.068uF<br />

C2<br />

0.22uF<br />

R21<br />

330E<br />

R22<br />

330E<br />

R18<br />

47K<br />

R10<br />

1K<br />

R16<br />

4.7K<br />

+5V<br />

+5V<br />

R14<br />

50K<br />

D2<br />

LED<br />

Po2<br />

BNC<br />

+5V<br />

C40<br />

0.01uF<br />

R23<br />

2.2K<br />

+5V<br />

+5V<br />

+5V<br />

S C<br />

CLK<br />

3<br />

D<br />

2<br />

SD<br />

4<br />

CD<br />

1<br />

Q<br />

5<br />

Q<br />

6<br />

U6A<br />

74LS74<br />

R1<br />

220E<br />

R11<br />

RES1<br />

+5V<br />

+5V<br />

C41<br />

.22uF<br />

2<br />

3<br />

7<br />

6<br />

5<br />

1<br />

8<br />

4<br />

U4<br />

LM311<br />

R1<br />

10k<br />

R2<br />

10K<br />

RF1<br />

10M<br />

RS1<br />

1K<br />

+5V<br />

+5V<br />

2<br />

3<br />

7<br />

6<br />

5<br />

1<br />

8<br />

4<br />

U5<br />

LM311<br />

R1<br />

10k<br />

R2<br />

10K<br />

RF1<br />

10M<br />

RS1<br />

1K<br />

+5V<br />

+5V<br />

C6<br />

0.1uF<br />

C7<br />

0.1uF<br />

ARRIBA<br />

MR<br />

9<br />

ASTBLE<br />

5<br />

ASTBLE<br />

4<br />

Rtc 2<br />

RCtc 3<br />

Ctc<br />

1<br />

O<br />

10<br />

(-)TRG<br />

6<br />

(+)TRG<br />

8<br />

O<br />

11<br />

REtrig<br />

12<br />

OSC<br />

13<br />

U25<br />

4047<br />

MR<br />

9<br />

ASTBLE<br />

5<br />

ASTBLE<br />

4<br />

Rtc 2<br />

RCtc 3<br />

Ctc<br />

1<br />

O<br />

10<br />

(-)TRG<br />

6<br />

(+)TRG<br />

8<br />

O<br />

11<br />

REtrig<br />

12<br />

OSC<br />

13<br />

U26<br />

4047<br />

MR<br />

9<br />

ASTBLE<br />

5<br />

ASTBLE<br />

4<br />

Rtc<br />

2<br />

RCtc<br />

3<br />

Ctc<br />

1<br />

O<br />

10<br />

(-)TRG<br />

6<br />

(+)TRG<br />

8<br />

O<br />

11<br />

REtrig<br />

12<br />

OSC<br />

13<br />

U24<br />

4047<br />

11<br />

12<br />

13<br />

U27D<br />

74LS00<br />

8<br />

9<br />

10<br />

U27C<br />

74LS00<br />

1 2<br />

13<br />

U22A<br />

4066<br />

11 10<br />

12<br />

U22B<br />

4066<br />

4 3<br />

5<br />

U22C<br />

4066<br />

RR2<br />

30.1K<br />

RR3<br />

30.1K<br />

RR1<br />

7.5K CR1<br />

0.001uF<br />

CR2<br />

47pF<br />

CR3<br />

47pF<br />

+5V<br />

+5V<br />

+5V<br />

3<br />

2<br />

6<br />

1<br />

5<br />

7<br />

4<br />

U28<br />

741<br />

RM1<br />

1K<br />

RM2<br />

1K<br />

+ CM1<br />

10uF<br />

+ CM2<br />

10uF<br />

-5V<br />

+5V<br />

Po3<br />

BNC<br />

MUX<br />

ADENTRO<br />

ENTRADA<br />

DER/AMP<br />

DERIVACION<br />

AMPLIFICACION<br />

6<br />

7<br />

10<br />

5<br />

8<br />

9<br />

U21B<br />

LM747<br />

2<br />

1<br />

12<br />

3<br />

14<br />

13<br />

4<br />

U21A<br />

LM747<br />

6<br />

7<br />

10<br />

5<br />

8<br />

9<br />

U23B<br />

MC1747<br />

2<br />

1<br />

12<br />

3<br />

14<br />

13<br />

4<br />

U23A<br />

MC1747<br />

R8<br />

10K<br />

R12<br />

10K<br />

+5V<br />

-5V<br />

+5V<br />

R6<br />

10K<br />

R7<br />

10K<br />

NIVEL ALTO<br />

NIVEL BAJO<br />

+5V<br />

+5V<br />

-5V POT11<br />

10K<br />

POT10<br />

10K<br />

POT6<br />

10K<br />

POT2<br />

10K<br />

POT3<br />

10K<br />

POT12<br />

10K<br />

POT8<br />

10K<br />

POT9<br />

10K<br />

POT4<br />

10K<br />

POT7<br />

10K<br />

PO5<br />

10K<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

-5V<br />

DISCRIMINADOR DE VENTANA<br />

POT1<br />

10K<br />

-5V<br />

-5V<br />

C10<br />

0.1uF<br />

C13<br />

0.1uF<br />

C15<br />

0.1uF<br />

C17<br />

0.1uF<br />

C19<br />

0.1uF<br />

C9<br />

0.1uF<br />

C8<br />

0.1uF<br />

C21<br />

0.1uF<br />

C23<br />

0.1uF<br />

C25<br />

0.1uF<br />

C27<br />

0.1uF<br />

C29<br />

0.1uF<br />

C31<br />

0.1uF<br />

C33<br />

0.1uF<br />

C35<br />

0.1uF<br />

C11<br />

0.1uF<br />

C12<br />

0.1uF<br />

C14<br />

0.1uF<br />

C16<br />

0.1uF<br />

C18<br />

0.1uF<br />

C20<br />

0.1uF<br />

C22<br />

0.1uF<br />

C24<br />

0.1uF<br />

C26<br />

0.1uF<br />

C28<br />

0.1uF<br />

C30<br />

0.1uF<br />

C32<br />

0.1uF<br />

C34<br />

0.1uF<br />

C36<br />

0.1uF<br />

C39<br />

0.1uF<br />

C37<br />

0.1uF<br />

C38<br />

0.1uF<br />

-5V<br />

+5V<br />

1<br />

6<br />

2<br />

7<br />

3<br />

8<br />

4<br />

9<br />

5<br />

J1<br />

DB9<br />

Todas las resistencias son 1/4 W 1%<br />

Los textos en recuadro indican salidas externas<br />

TP1<br />

TP2<br />

TP3<br />

TP4<br />

TP7<br />

TP8<br />

TP9<br />

TP6<br />

TP5


38<br />

3.2 Programa<br />

Se presenta una serie <strong>de</strong> programas <strong>de</strong>sarrollados en TURBO PASCAL 7.0 para la<br />

adquisición y análisis <strong>de</strong> los datos. El programa <strong>de</strong>tecta datos (pulsos TTL) a través <strong>de</strong>l<br />

puerto serial <strong>de</strong> una IBM-PC y computadoras compatibles, y analiza su distribución en el<br />

tiempo, trazando el histograma <strong>de</strong> frecuencia instantánea (en línea). El programa permite la<br />

adquisición <strong>de</strong> los datos <strong>de</strong> dos fuentes con una resolución <strong>de</strong> tiempo <strong>de</strong> 1 ms, y el<br />

<strong>de</strong>spliegue en línea <strong>de</strong> los histogramas <strong>de</strong> frecuencia hasta un máximo <strong>de</strong> 500 min. A<strong>de</strong>más<br />

el sistema también incluye la opción <strong>de</strong> datos en disco y análisis estadístico.<br />

Cuando se adquiere datos <strong>de</strong> dos fuentes, el programa captura <strong>de</strong> forma simultanea<br />

información <strong>de</strong> pulsos TTL que entran por el puerto serial e información proveniente <strong>de</strong> un<br />

canal <strong>de</strong>l convertidor analógico digital.<br />

Los pulsos TTL se cuentan y acumulan por unidad <strong>de</strong> tiempo (bin). La frecuencia <strong>de</strong><br />

conversión por el AD es un dato por cada bin. De esta forma se construyen pares or<strong>de</strong>nados<br />

entre una señal analógica y el número <strong>de</strong> espigas por bin.<br />

Originalmente preten<strong>de</strong>mos usar este programa para correlacionar el número <strong>de</strong><br />

espigas por bin con la velocidad <strong>de</strong>l motor. Para ello, la salida <strong>de</strong>l tacómetro proveniente<br />

<strong>de</strong>l motor se dirige al canal <strong>de</strong> conversión AD y la salida <strong>de</strong>l discriminador <strong>de</strong> ventana al<br />

puerto serial. En la Figura 29 se muestra el diagrama <strong>de</strong> flujo <strong>de</strong>l programa principal.<br />

En nuestro sistema conectamos el discriminador <strong>de</strong> ventana a los pines 1-5 (sobre la<br />

ventana) y 1-22 (<strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la ventana) <strong>de</strong>l puerto serial (interfase RS-232). La computadora<br />

i<strong>de</strong>ntificará la presencia <strong>de</strong> pulsos TTL, entonces, el valor <strong>de</strong> los registros <strong>de</strong>l puerto<br />

<strong>de</strong>pen<strong>de</strong>rá <strong>de</strong> la presencia <strong>de</strong> pulsos en cada pin. Turbo Pascal le da acceso directo a los<br />

puertos <strong>de</strong> la computadora con la posibilidad <strong>de</strong> asignar el valor <strong>de</strong>l puerto a una variable.<br />

En el IBM-PC y compatibles el puerto serial 1(COM 1) en general se encuentra en la<br />

dirección hexa<strong>de</strong>cimal 3FE (Norton, 1985), la sentencia en Pascal x:=port[$3FE] asignará<br />

el valor <strong>de</strong> estado <strong>de</strong>l puerto serial registrado a “x”. El valor <strong>de</strong>l puerto será 0 si no hay<br />

ningún pulso, 17 si hay pulso en el pin 5, 64 si hay un pulso en el pin 22 y 81 si hay pulso<br />

en ambos pines 5 y 22.


39<br />

El tiempo exacto se logra programando el chip <strong>de</strong>l reloj <strong>de</strong>l PC para que sea <strong>de</strong> un<br />

milisegundo, las señales <strong>de</strong>l discriminador son <strong>de</strong> 1.1 ms previniendo cualquier pérdida <strong>de</strong><br />

datos.<br />

El programa <strong>de</strong>scrito aquí le permite al usuario seleccionar <strong>de</strong>l menú principal el<br />

análisis <strong>de</strong>seado <strong>de</strong> los datos (histogramas <strong>de</strong> frecuencia <strong>de</strong> una fuente, histograma <strong>de</strong><br />

frecuencia <strong>de</strong> dos fuentes, etc.). El usuario también pue<strong>de</strong> seleccionar la anchura <strong>de</strong>l bin y<br />

el periodo <strong>de</strong>l análisis. El procedimiento <strong>de</strong> adquisición <strong>de</strong> datos continua hasta que alcance<br />

el número seleccionado <strong>de</strong> bins (máximo 1000), o hasta que presione el usuario la tecla<br />

“N”. Apretando cualquier otra causa una marca para indicar el ataque <strong>de</strong> manipulación<br />

experimental.<br />

Funcionamiento <strong>de</strong>l programa principal (Frec_ad3.exe)<br />

Para empezar se inicializa el modo gráfico con una resolución <strong>de</strong> 800x600; así como<br />

también las variables como son: fecha, número <strong>de</strong>l experimento, puerto a usar, conversor,<br />

tiempo <strong>de</strong>l bin, número <strong>de</strong> bins, número <strong>de</strong> repetición y tipo <strong>de</strong> captura (puerto y conversor<br />

o solo puerto).<br />

Se muestra el menú principal, en el cual el primer bloque <strong>de</strong> opciones es cambiar los<br />

valores <strong>de</strong> las variables que se inicializaron y como segundo bloque, elegir entre los<br />

siguientes procesos: Leer datos <strong>de</strong>l disco, mover limites para seleccionar dos intervalos,<br />

análisis estadístico <strong>de</strong> los datos, buscar máximos y mínimos, capturar datos o terminar. Si<br />

se elige un proceso diferente a seleccionar datos, mover límites, análisis estadístico o<br />

buscar máximos y mínimos el programa checa si fue terminar en cuyo caso el programa<br />

cierra el modo gráfico y finaliza; en caso contrario programa el reloj <strong>de</strong> la computadora y<br />

comienza la captura <strong>de</strong> los datos, una vez finalizada la captura <strong>de</strong> datos se regresa al menú<br />

principal no sin antes reprogramar el reloj al valor previo y salvar los datos a disco.


Figura 29 Diagrama <strong>de</strong> flujo <strong>de</strong>l programa principal<br />

40


41<br />

Inicializar modo gráfico<br />

El programa inicializa el modo gráfico (mediante el procedimiento HiRes1) con el<br />

manejador Svga32, este manejador acepta las siguientes resoluciones:<br />

1. 320 x 200<br />

2. 640 x 400<br />

3. 640 x 480<br />

4. 800 x 600<br />

5. 1024 x 768<br />

6. 640 x 320<br />

7. 1280 x 1024<br />

La resolución inicial es <strong>de</strong> 800 x 600 pero se pue<strong>de</strong> modificar a cualquiera <strong>de</strong> las antes<br />

mencionadas y almacenar la configuración en un archivo <strong>de</strong> inicio llamado Frec-ad3.ini.<br />

Inicializar variables<br />

En esta parte <strong>de</strong>l programa se inicializan variables con valores preestablecidos como<br />

son:<br />

For i :=1 to 10 do<br />

Marca[i] := 0;<br />

(número <strong>de</strong> marcas)<br />

Graphread := false;<br />

Num_repeticion := 0;<br />

(número <strong>de</strong> repetición)<br />

Detuvo:= 0;<br />

Po := 2;<br />

Rango := 1000;<br />

vEscala := 1;<br />

Filtra := false;<br />

Landing := false;<br />

BeginProcess := true;<br />

Puerto := $2fe;<br />

(Puerto a usar COM2)<br />

Axolotl := ‘Exp’;<br />

(Número <strong>de</strong>l experimento)<br />

Disectó := GetDate(y,m,d,dow); (Fecha actual)


42<br />

Bin:= 100;<br />

(100 ms)<br />

nPuntos: = rango; (número <strong>de</strong> bins 1000)<br />

i:= 2;<br />

converter := 3;<br />

(Tipo <strong>de</strong> conversor Data Translation)<br />

options := 1;<br />

(Tipo <strong>de</strong> captura puerto y conversor)<br />

Menú principal<br />

El menú principal muestra los valores con que fueron inicializadas las variables,<br />

a<strong>de</strong>más permite cambiar los valores <strong>de</strong> estas.<br />

F. Fecha (fecha actual)<br />

E. Experimento número (Exp)<br />

P. Puerto a usar 1=COM1, 2=COM2 (2).<br />

C. Conversor 1=IBM, 2=LABMASTER, 3=DATATRANS (3)<br />

B. Bin para el conteo <strong>de</strong> espigas 10=


43<br />

Leer datos<br />

Este proceso muestra en primer lugar la opción <strong>de</strong> elegir la unidad en la cual se va a<br />

realizar la lectura, si no se especifica la unidad, se toma el directorio actual. Una vez hecho<br />

esto muestra una lista <strong>de</strong> archivos que se encuentran en el directorio especificado, <strong>de</strong>l cual<br />

se <strong>de</strong>be introducir el nombre con todo y extensión para po<strong>de</strong>r ser leído (ReadExp.pas).<br />

Existen dos tipos <strong>de</strong> archivos <strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong> cómo fueron capturados, es <strong>de</strong>cir si la captura<br />

fue solo puerto tienen la extensión F_1 y F_2 y si la captura fue puerto y conversor la<br />

extensión es F_1 y D_1.<br />

Cuando los datos son leídos correctamente se pasa a la siguiente pantalla, la cual<br />

muestra las gráficas, <strong>de</strong>pendiendo que tipo <strong>de</strong> archivo leyó. También junto con los gráficos<br />

se muestra un menú, don<strong>de</strong> el usuario pue<strong>de</strong> escoger las opciones siguientes:<br />

1: Amplificar.– Le permite al usuario exten<strong>de</strong>r la amplitud <strong>de</strong> los histogramas <strong>de</strong><br />

frecuencia. También se extien<strong>de</strong>n barras <strong>de</strong> calibración (amplificando o atenuando no se<br />

alteran los datos guardados en disco).<br />

2: Filtrar.- Para suavizar los histogramas <strong>de</strong> frecuencia, se realiza por medio <strong>de</strong> un filtro en<br />

movimiento, según la ecuación siguiente:<br />

NuevoX<br />

t<br />

xt? 1<br />

? ( ? xt?<br />

1<br />

?<br />

2 * xt<br />

)<br />

4<br />

3: Salvar.- Si se <strong>de</strong>sea salvar los datos existen dos posibilida<strong>de</strong>s, si la gráfica fue filtrada se<br />

graba en un archivo con el mismo nombre pero con la extensión FIL. En caso contrario se<br />

<strong>de</strong>be <strong>de</strong> introducir un nuevo nombre para po<strong>de</strong>r ser salvado.<br />

4: Imprimir.- Realiza una copia impresa <strong>de</strong> la gráfica y los datos <strong>de</strong>l experimento, tomando<br />

la resolución y la impresora que está dada <strong>de</strong> alta en el archivo <strong>de</strong> configuración (haciendo<br />

uso <strong>de</strong>l procedimiento printele que se encuentra en PrinOut.pas). Las opciones <strong>de</strong> la<br />

impresión son: Imprimir inmediatamente (imprime las gráficas que lleva acumuladas) o<br />

esperar a que se acumulen tres gráficas para po<strong>de</strong>r ser impresas en la misma pagina.


44<br />

5: Salir.- Con esta opción el programa regresa al menú principal con los datos cargados<br />

para po<strong>de</strong>r ser procesados.<br />

Figura 30 Al leer los archivos <strong>de</strong> disco se muestra la gráfica <strong>de</strong> los histogramas <strong>de</strong> frecuencia, en este caso<br />

la gráfica superior muestra la información <strong>de</strong> la velocidad <strong>de</strong>l motor proveniente <strong>de</strong> un convertidor<br />

analógico digital. En la gráfica inferior, número <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción por unidad <strong>de</strong> tiempo. Se pue<strong>de</strong><br />

observar que durante los periodos en que el motor se activa y produce aceleraciones sinusoidales, las<br />

neuronas aferentes <strong>de</strong>l sistema vestibular <strong>de</strong>tectan la aceleración aumentando o disminuyendo su frecuencia<br />

<strong>de</strong> <strong>de</strong>scarga.<br />

Mover limites<br />

Una vez que se han leído los datos, el usuario pue<strong>de</strong> seleccionar dos juegos <strong>de</strong> datos<br />

(intervalos) para el análisis estadístico (Figura 31). Para po<strong>de</strong>r realizar esto, se <strong>de</strong>spliegan<br />

los datos gráficamente y al usuario se le permite mover cuatro barras a lo largo <strong>de</strong>l registro.<br />

Estas cuatro barras encierran dos juegos <strong>de</strong> datos que podrían sujetarse entonces al análisis<br />

estadístico. Des<strong>de</strong> aquí se pue<strong>de</strong>n comparar datos <strong>de</strong>l registro antes y <strong>de</strong>spués <strong>de</strong>l estimulo;<br />

y pue<strong>de</strong>n eliminarse secciones in<strong>de</strong>seables <strong>de</strong>l análisis. Bajo el gráfico, se muestra<br />

información sobre la posición <strong>de</strong> las cuatro barras <strong>de</strong>l cursor. Para mover estas barras, el<br />

usuario <strong>de</strong>be empezar moviendo límite <strong>de</strong>recho <strong>de</strong>l intervalo <strong>de</strong>recho. Para hacer esto se<br />

presiona b (selecciona intervalo <strong>de</strong>recho) y presiona d (selecciona barra <strong>de</strong>recha). Para


45<br />

mover las barras se utilizan las teclas <strong>de</strong> dirección, si se <strong>de</strong>sea un movimiento más rápido es<br />

utilizan las teclas Repag y Avpag. Una vez que se posiciona el límite correcto <strong>de</strong>l intervalo<br />

b, el límite izquierdo <strong>de</strong>be posicionarse, para esto se presiona i (selecciona barra izquierda)<br />

y se usa el mismo procedimiento para mover las barras. El programa no permite que la<br />

barra izquierda cruce la <strong>de</strong>recha, ni que el intervalo a (izquierdo) intercepte al intervalo b<br />

(<strong>de</strong>recho). Para <strong>de</strong>finir los datos izquierdos se proce<strong>de</strong> <strong>de</strong> la misma manera que en intervalo<br />

<strong>de</strong>recho, presiona a (selecciona el intervalo izquierdo) y presiona d (selecciona barra<br />

<strong>de</strong>recha) mueva las barras al lugar que <strong>de</strong>sea y realizar lo mismo con el límite izquierdo<br />

presionando i (selecciona barra izquierda). Una vez que las cuatro barras contienen a los<br />

dos intervalos <strong>de</strong>l histograma, se presiona z para volver al menú principal.<br />

Figura 31 Al seleccionar los limites para el intervalo a y el intervalo b po<strong>de</strong>mos observar los puntos que<br />

limitan a los intervalos y los valores correspondientes, así como también cual limite se esta moviendo y <strong>de</strong><br />

que cual intervalo.<br />

Análisis estadístico<br />

Se consi<strong>de</strong>ra que la <strong>de</strong>scarga <strong>de</strong> potenciales <strong>de</strong> acción o espigas <strong>de</strong> una neurona es<br />

un proceso estocástico (aleatorio), porque esta sujeto a influencias internas y externas que<br />

no son completamente conocidas. La actividad <strong>de</strong> espigas cae en un rango <strong>de</strong> valores


46<br />

permisibles <strong>de</strong> una manera probabilística. Para el análisis <strong>de</strong> frecuencia, la actividad <strong>de</strong> la<br />

espiga se muestra como una función <strong>de</strong>l tiempo discreta.<br />

El programa realiza estadísticas básicas (<strong>de</strong>scriptivas, haciendo uso <strong>de</strong>l<br />

procedimiento Estadis que se encuentra en Estad3.pas) <strong>de</strong> los datos seleccionados,<br />

mostrando como resultados: el intervalo, el número <strong>de</strong> datos, el rango, el promedio, la<br />

<strong>de</strong>sviación estándar, el coeficiente <strong>de</strong> variación, la media <strong>de</strong> los 10 datos mas altos, el<br />

noventilo, la mediana, la media <strong>de</strong> B entre A, la media mayores <strong>de</strong> B entre A, máximo <strong>de</strong> B<br />

entre máximo <strong>de</strong> A, mínimo <strong>de</strong> B entre mínimo <strong>de</strong> A y el coeficiente <strong>de</strong> correlación.<br />

A<strong>de</strong>más <strong>de</strong> realizar la prueba U <strong>de</strong> Mann-Whitney. El programa prueba la autocorrelación y<br />

autocovarianza. Los valores resultantes se presentan al usuario para que él <strong>de</strong>cida si los<br />

datos son in<strong>de</strong>pendientes y convenientes para la prueba U <strong>de</strong> Mann-Whitney (Soto,<br />

Echagüe y Vega, 1989).<br />

Para los cálculos, nosotros usamos dos colas (bilateral) para la prueba U <strong>de</strong> Mann-<br />

Whitney basados en la ecuación siguiente (Siegel, 1985):<br />

n<br />

? n ? 1?<br />

1 1<br />

U ? n1n<br />

2<br />

? ?<br />

2<br />

R<br />

1<br />

Don<strong>de</strong> n 1 es el número <strong>de</strong> elementos <strong>de</strong>l intervalo a, n 2 es el número <strong>de</strong> elementos <strong>de</strong>l<br />

intervalo b y R 1 es la suma <strong>de</strong> rangos asignados al grupo con n 1 elementos.<br />

La estadística Z se calculó <strong>de</strong> la ecuación siguiente:<br />

Z ?<br />

N<br />

n1n<br />

2<br />

U ?<br />

2<br />

3<br />

n n N ? N<br />

1 2<br />

?<br />

? ?<br />

?<br />

N ? 1 12<br />

T<br />

Don<strong>de</strong> ? T es un factor <strong>de</strong> corrección para los lazos (ties) en los datos, N es el<br />

número total <strong>de</strong> elementos en los dos intervalos, n1 y n2 son igual que en la ecuación<br />

anterior y U es el valor obtenido <strong>de</strong> la ecuación anterior.<br />

El programa requiere que el número <strong>de</strong> elementos en un intervalo por lo menos sea<br />

mayor que 20. Por otra parte el usuario está informado que el número <strong>de</strong> elementos en


47<br />

intervalos seleccionados no es a<strong>de</strong>cuado para el valor establecido <strong>de</strong> Z. Si se han<br />

seleccionado intervalos válidos, los cálculos son mostrados en pantalla con la opción <strong>de</strong><br />

obtener una copia impresa <strong>de</strong> los resultados estadísticos e indica aceptación o rechazo <strong>de</strong> la<br />

hipótesis nula basada en un nivel <strong>de</strong> significación (valor <strong>de</strong> ? ) <strong>de</strong>l 5% bilateral (dos colas).<br />

Buscar máximos y mínimos<br />

El proceso <strong>de</strong> buscar máximos y mínimos muestra el intervalo b <strong>de</strong> datos<br />

seleccionados en el proceso mover limites, así como también el estimulo aplicado a ese<br />

intervalo mostrando su valor (máximo, mínimo y Diferencia) en mV. En esta parte <strong>de</strong>l<br />

proceso se muestra un menú para amplificar ya sea el estimulo o el registro. Una vez hecho<br />

esto pasa a un menú para po<strong>de</strong>r mover el estimulo (arriba, abajo, <strong>de</strong>recha e izquierda) y el<br />

nivel (solo arriba y abajo).<br />

Se obtiene como datos <strong>de</strong> salida la amplitud media (IPS), fase media (Grados), el<br />

número <strong>de</strong> experimento, el nombre <strong>de</strong>l archivo, la amplificación y el bin, para esto se<br />

necesita como datos <strong>de</strong> entrada la frecuencia <strong>de</strong> estimulación (Hz) y la amplitud <strong>de</strong><br />

estimulación (mV). Si se <strong>de</strong>sea se pue<strong>de</strong> obtener una copia impresa <strong>de</strong> los resultados y las<br />

gráficas.<br />

Capturar<br />

Programar reloj<br />

Si el proceso fue capturar se programa el chip <strong>de</strong>l reloj para generar una base <strong>de</strong><br />

tiempo <strong>de</strong> un milisegundo. La programación se realiza <strong>de</strong> la siguiente manera:<br />

Port [ $43 ]:= 54;<br />

Port [ $40 ]:= lo (1193);<br />

Port [ $40 ]:= hi (1193);<br />

Una vez programado el tiempo, captura datos <strong>de</strong>pendiendo <strong>de</strong> la configuración <strong>de</strong><br />

inicio, es <strong>de</strong>cir pue<strong>de</strong> ser solo puerto o puerto y conversor. A<strong>de</strong>más <strong>de</strong> en que puerto va a<br />

capturar y cual conversor va a usar.<br />

Cuando la ejecución <strong>de</strong>l programa progresa, los gráficos seleccionados se muestran<br />

en línea. Cada vez que un bin se completa para el histograma <strong>de</strong> frecuencia, se traza un<br />

punto que representa el número <strong>de</strong> espigas por bin. Pue<strong>de</strong> interrumpirse la adquisición <strong>de</strong>


48<br />

los datos apretando cualquier tecla (Enter para continuar (“?”), aparece en la pantalla).<br />

Cada vez que el programa esta en pausa, una marca aparece en el eje <strong>de</strong>l tiempo e indica<br />

que una manipulación experimental se ha hecho (máximo diez paradas por gráfico). Para<br />

activar la adquisición <strong>de</strong> los datos <strong>de</strong> nuevo, presione ENTER, para terminar la adquisición<br />

<strong>de</strong> los datos, el programa <strong>de</strong>be alcanzar el tiempo completo en número <strong>de</strong> bins, o el usuario<br />

<strong>de</strong>be presionar ‘n’ o ‘N’, y presionar ENTER cuándo este símbolo “n” aparece en pantalla.<br />

El rango <strong>de</strong> los valores <strong>de</strong>l bin permitido para los histogramas está entre 10 ms y 30<br />

seg. El número mínimo <strong>de</strong> puntos son 10 pudiendo exten<strong>de</strong>rse hasta 1000, entonces el<br />

intervalo más corto es 10*10 = 100 seg. y el intervalo más largo que el programa pue<strong>de</strong><br />

aceptar es 1000*30 =30000 seg (500 min. <strong>de</strong> captura continua).<br />

La adquisición <strong>de</strong> los datos o termina por ór<strong>de</strong>nes <strong>de</strong>l usuario (tecla n) o porque el<br />

tiempo <strong>de</strong>l proceso total ha pasado, en el último caso, el programa genera una música<br />

persistente y molesta. Al usuario entonces se le permite guardar los datos en disco.<br />

Guardar<br />

Se guardan todos los datos adquiridos en disco para que más a<strong>de</strong>lante puedan ser<br />

manipulados y procesados. Una vez hecho esto se pue<strong>de</strong> seguir capturando con los mismo<br />

parámetros o regresar al menú principal para cambiar los parámetros <strong>de</strong> captura, también se<br />

pue<strong>de</strong>n ver las gráficas <strong>de</strong> los datos capturados.<br />

Regresar reloj<br />

Cuando la captura terminó se vuelve a programar el chip <strong>de</strong>l reloj <strong>de</strong> la<br />

computadora para regresar a los valores anteriores<br />

Port [ $43 ]:= 54;<br />

Port [ $40 ]:= lo (0);<br />

Port [ $40 ]:= hi (0);<br />

Terminar<br />

Si eligió algún proceso el programa lo realiza y regresa al menú principal pero si el<br />

proceso elegido fue terminar, en cuyo caso el programa cierra el modo gráfico y finaliza el<br />

programa.


49<br />

4 Resultados<br />

4.1 Discriminador <strong>de</strong> ventana<br />

Se realizaron algunas pruebas en el discriminador <strong>de</strong> ventana en puntos que se<br />

consi<strong>de</strong>raron <strong>de</strong> importancia obteniéndose los siguientes resultados.<br />

La respuesta en frecuencia en la salida <strong>de</strong> la etapa <strong>de</strong> amplificación para las<br />

diferentes ganancias se muestra en la Figura 32.<br />

5<br />

Ganancia (dB)<br />

0<br />

-5<br />

-10<br />

0.1 1 10 100 1000 10000 100000 1000000 10000000<br />

Frecuencia (Hz)<br />

A)<br />

20<br />

Ganancia (dB)<br />

10<br />

0<br />

-10<br />

0.1 1 10 100 1000 10000 100000 1000000 10000000<br />

Frecuencia (Hz)<br />

B)


50<br />

Ganancia (dB)<br />

15<br />

5<br />

-5<br />

-15<br />

0.1 1 10 100 1000 10000 100000 1000000 10000000<br />

Frecuencia (Hz)<br />

C)<br />

30<br />

Ganancia (dB)<br />

20<br />

10<br />

0<br />

-10<br />

0.1 1.0 10.0 100.0 1000.0 10000.0 100000.0 1000000.0 10000000.0<br />

Frecuencia (Hz)<br />

D)<br />

E)<br />

Ganancia (dB)<br />

50<br />

40<br />

30<br />

20<br />

10<br />

0<br />

-10<br />

0.1 1 10 100 1000 10000 100000 1000000 10000000<br />

Frecuencia (Hz)<br />

Figura 32 Se muestra la respuesta en frecuencia <strong>de</strong>l amplificador <strong>de</strong> entrada con las diferentes ganancias<br />

disponibles, que son: a) 1, b) 2, c) 5, d) 10, e) 100, mostrando los valores teóricos y prácticos con líneas<br />

obscuras y claras respectivamente.


51<br />

También se muestran las señales obtenidas para las diferentes ganancias con una<br />

señal <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong> 136 mV <strong>de</strong> amplitud y 100.2 Hz. <strong>de</strong> frecuencia.<br />

a) b)<br />

c) d)<br />

Figura 33 Señal <strong>de</strong> entrada <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> haber pasado por el amplificador inversor. A)amplificación con<br />

ganancia 1, b) amplificación con ganancia 2, c)amplificación con ganancia 5, d) amplificación con ganancia<br />

10.<br />

Para caracterizar la salida en la etapa <strong>de</strong> <strong>de</strong>rivación <strong>de</strong> la señal, se realizaron las<br />

pruebas con un pulso cuadrado <strong>de</strong> 118 mV <strong>de</strong> amplitud y 100.2 Hz <strong>de</strong> frecuencia. Los<br />

resultados obtenidos se muestran en las gráficas <strong>de</strong> la Figura 34 para diferentes constantes <strong>de</strong><br />

<strong>de</strong>rivación.


52<br />

a)<br />

b) c)<br />

Figura 34 En a) se muestra la señal <strong>de</strong> entrada para la caracterización <strong>de</strong>l diferenciador, la amplitud es <strong>de</strong><br />

120mV y la frecuencia <strong>de</strong> 1.01 KHz, también se muestra la respuesta para una constante <strong>de</strong> tiempo (RC)<br />

<strong>de</strong>.0.1 ms. Para una constante <strong>de</strong> tiempo <strong>de</strong> 1 ms se muestra en b), y para una constante <strong>de</strong> 10 ms se<br />

muestra en c). Cuando ser incrementa la constante aumenta la amplitud <strong>de</strong> las frecuencias altas y mantiene<br />

igual las frecuencias bajas, es <strong>de</strong>cir la constante <strong>de</strong> <strong>de</strong>rivación es mayor.<br />

Para el funcionamiento <strong>de</strong> los comparadores y los generadores <strong>de</strong> pulso único arriba<br />

y a<strong>de</strong>ntro respectivamente se uso como entrada una señal sinusoidal <strong>de</strong> 276 mV <strong>de</strong><br />

amplitud y 100 Hz <strong>de</strong> frecuencia. Para el primer caso se uso 100 mv para el nivel <strong>de</strong><br />

referencia alto y 0 mv para el nivel <strong>de</strong> referencia bajo como se muestra en la Figura 35 a,<br />

para el segundo caso 168 mV para el nivel <strong>de</strong> referencia alto y 50 mV para el nivel <strong>de</strong><br />

referencia bajo como se muestra en la Figura 35 b. Como se pue<strong>de</strong> observar los pulsos son<br />

TTL (<strong>de</strong> 4.2 V <strong>de</strong> amplitud) y el ancho <strong>de</strong> los pulsos es variable entre 0.1 ms y 2 ms.


53<br />

a) b)<br />

Figura 35 Se muestran la señal, el nivel alto, el nivel bajo y el pulso <strong>de</strong> salida, para los casos en que la señal<br />

esta arriba <strong>de</strong> la ventana a), así como cuando la señal esta <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong> la ventana b).<br />

El multiplexor hace un muestreo <strong>de</strong> la señal y los niveles <strong>de</strong> discriminación <strong>de</strong><br />

acuerdo al tiempo programado en el reloj los cuales se pue<strong>de</strong>n observar en la Figura 36 en<br />

don<strong>de</strong> se muestra la frecuencia base, el tiempo <strong>de</strong> muestreo para la señal y los niveles <strong>de</strong><br />

discriminación.<br />

a) b) c)<br />

Figura 36 Pulsos que genera el reloj para multiplexar la señal y los niveles <strong>de</strong> discriminación. La frecuencia<br />

base se muestra en a) con una longitud nominal <strong>de</strong> 38.4 ?S, en b) se observa el tiempo en que se muestra la<br />

señal aproximadamente 28.8 ?S, c)Para los niveles <strong>de</strong> discriminación el tiempo <strong>de</strong> muestreo es 9.6 ?S.<br />

Todas las mediciones se realizaron con un osciloscopio TEKTRONICS TS-220 y un<br />

generador <strong>de</strong> funciones BK PRESICION 3020


54<br />

Después <strong>de</strong> haber realizado las pruebas al discriminador <strong>de</strong> ventana, se obtuvieron<br />

las características <strong>de</strong> entrada y salida que se muestran en las tablas<br />

Características <strong>de</strong> entrada<br />

Impedancia 1 M?<br />

Frecuencia <strong>de</strong> corte<br />

.732 Hz<br />

Ancho <strong>de</strong> banda 300 KHz G=1<br />

20 KHz G=10<br />

10 KHz G=100<br />

Rango <strong>de</strong> la entrada<br />

0 – 5 V G=1<br />

(Vpp)<br />

0 – 0.5 V G=10<br />

0 – 0.05 V G=100<br />

Niveles <strong>de</strong> referencia<br />

(nivel bajo, nivel alto)<br />

0 – 2.5 V 8 bits<br />

10 mV/bit<br />

Tabla 3<br />

Características <strong>de</strong> salida<br />

MPX Longitud <strong>de</strong>l ciclo 38 ?S<br />

Arriba y a<strong>de</strong>ntro<br />

Tabla 4<br />

Muestreo <strong>de</strong> la señal: 28 ?S (75%)<br />

Muestreo <strong>de</strong> los niveles: 9.6 ?S (25%)<br />

Impedancia menor a 100? .<br />

Pulsos <strong>de</strong> aproximadamente 4.2 V <strong>de</strong><br />

amplitud (compatible con TTL), ancho <strong>de</strong>l<br />

pulso ajustable <strong>de</strong> 0.1 a 2.0 mS. Impedancia<br />

menor a 500 ? . Indicador <strong>de</strong> presencia <strong>de</strong><br />

pulso (LED):


55<br />

4.2 Programa<br />

Para caracterizar el programa se utilizo el discriminador <strong>de</strong> ventana en cuya entrada<br />

se conecto a un generador <strong>de</strong> funciones y cuya salida fue conectado al puerto serial (RS-<br />

232). El generador se utilizo para introducir una onda sinusoidal <strong>de</strong> frecuencia conocida. En<br />

la Figura 37 se muestra la captura que se realizo con un bin <strong>de</strong> 1000 ms, se capturaron 1000<br />

datos y se utilizo la captura <strong>de</strong> solo puerto.<br />

Figura 37 Se utilizo una onda sinusoidal con una frecuencia <strong>de</strong> 10, 20, 50, 100,200 Hz para a, b, c, d y e<br />

respectivamente. Las divisiones equivalen a 10 espigas. Las flechas en el eje x indican las interrupciones en<br />

la captura <strong>de</strong> los datos. La línea superior indica que no hubo estimulación mecánica.<br />

Para po<strong>de</strong>r observar la captura <strong>de</strong> frecuencias mayores a 500 Hz, se realizo la<br />

captura con un bin <strong>de</strong> 100 ms en don<strong>de</strong> se pue<strong>de</strong> apreciar que <strong>de</strong>spués <strong>de</strong> una frecuencia <strong>de</strong><br />

1.1 Khz se empiezan a per<strong>de</strong>r los datos <strong>de</strong> la captura, como se muestra en la Figura 38.<br />

También se muestra la selección <strong>de</strong> los intervalos para ser procesados estadísticamente


56<br />

como se muestra en la Figura 39, los resultados <strong>de</strong>l análisis para estos intervalos<br />

seleccionados se muestran en la Figura 40.<br />

Figura 38 Las frecuencias utilizadas fueron 100, 200, 500, 1000, 1100 Hz para a, b, c, d y e respectivamente.<br />

Para frecuencias mayores 1100 Hz la captura empieza a ser errónea (f).<br />

Figura 39 Se muestra el mismo experimento para la selección <strong>de</strong> los intervalos a y b, el programa muestra<br />

que intervalo se esta moviendo y cual limite, al mismo tiempo muestra el número <strong>de</strong> bin con su respectivo<br />

valor (número <strong>de</strong> espigas).


57<br />

Figura 40 Se muestran los resultados <strong>de</strong>l análisis estadístico para los intervalos seleccionados, como se<br />

pue<strong>de</strong> observar en la ultima parte se realiza la prueba U <strong>de</strong> Mann Whitney.<br />

En la Figura 41 se muestra la captura con un bin <strong>de</strong> 400 ms, utilizando puerto y<br />

conversor para ver los efectos <strong>de</strong> la estimulación mecánica sinusoidal en condiciones reales<br />

<strong>de</strong> experimentación utilizando el programa y el discriminador <strong>de</strong> ventana aquí <strong>de</strong>scritos.<br />

Figura 41 Actividad eléctrica <strong>de</strong> las neuronas aferentes <strong>de</strong>l sistema vestibular <strong>de</strong>l oído <strong>de</strong>l axolotl. Se<br />

muestra la actividad basal y la respuesta a un estimulo mecánico sinusoidal con una frecuencia <strong>de</strong> 0.2 Hz y<br />

una aceleración angular <strong>de</strong> 440 grados / segundo (a), como se pue<strong>de</strong> observar hay un incremento en la<br />

frecuencia en las partes que fueron estimuladas. Posteriormente se muestra la aplicación <strong>de</strong> un fármaco (<br />

Naloxona 10?M ) y se observa la actividad basal.


58<br />

También se muestra la selección <strong>de</strong> los intervalos para po<strong>de</strong>r ser procesados<br />

estadísticamente por el programa, así como los resultados estadísticos <strong>de</strong> estos intervalos<br />

como se pue<strong>de</strong> observar en la Figura 42 y Figura 43 respectivamente. Para todos los<br />

experimentos se pue<strong>de</strong> obtener una copia impresa (Epson FX-850, IBM propinter, HP<br />

Laser, HP Deskjet y compatibles) tanto, <strong>de</strong> la captura como <strong>de</strong> los intervalos y <strong>de</strong> los<br />

resultados <strong>de</strong>l análisis estadístico.<br />

Figura 42 Se muestra la selección <strong>de</strong> los intervalos para ser procesados estadísticamente. Como se pue<strong>de</strong><br />

observar los puntos importantes en este experimento son la actividad basal y la respuesta a una estimulación<br />

química (Naloxona 10?M).<br />

Figura 43 Resultados estadísticos <strong>de</strong> los intervalos seleccionados en don<strong>de</strong> se pue<strong>de</strong> observar el rechazo <strong>de</strong><br />

la hipótesis nula (h0).


59<br />

Por ultimo se muestra en la Figura 44 un experimento típico en don<strong>de</strong> se exportaron<br />

los datos capturados por nuestro sistema.<br />

Figura 44 En A, registro <strong>de</strong> actividad en condiciones control. En B, luego <strong>de</strong> la aplicación <strong>de</strong> D-<br />

turbocurarina en concentración 10 ?M. En C, se aplicó el fármaco betahistina 1 mM. En D y E efecto <strong>de</strong> la<br />

betahistina a los 5 y 10 min <strong>de</strong> su aplicación. En F, lavado <strong>de</strong> todas las drogas. La línea gris bajo <strong>de</strong> cada<br />

registro representa los periodos durante los cuales se estimulo la preparación con aceleraciones<br />

sinusoidales. Para construir esta grafica los datos obtenidos con el programa fueron exportados a Sigmaplot.


60<br />

5 Comentarios y conclusión<br />

Al término <strong>de</strong> este proyecto pudimos constatar que una <strong>de</strong> las tareas <strong>de</strong> la<br />

electrónica es la solución a problemas específicos en las diferentes áreas <strong>de</strong> aplicación, en<br />

nuestro caso específicamente en fisiología, no necesariamente requiere gran tecnología, ya<br />

que la solución encontrada <strong>de</strong>be ser <strong>de</strong> preferencia <strong>de</strong> bajo costo y <strong>de</strong> fácil reproducción.<br />

El <strong>de</strong>sarrollo <strong>de</strong> equipo <strong>de</strong> electrónica para los laboratorios <strong>de</strong> investigación se<br />

requiere cada vez más, con el fin <strong>de</strong> solucionar problemas específicos <strong>de</strong>l laboratorio, bajar<br />

costos y obtener mantenimiento rápido, ya que el equipo <strong>de</strong> importación es <strong>de</strong>masiado<br />

costoso y en la mayoría <strong>de</strong> los casos sobrado, es <strong>de</strong>cir no da una solución <strong>de</strong> manera rápida<br />

y precisa. A<strong>de</strong>más cada vez que se requiere mantenimiento <strong>de</strong>l equipo, es costoso y<br />

tardado.<br />

El discriminador aquí <strong>de</strong>scrito que fue diseñado originalmente para correlacionar el<br />

número <strong>de</strong> espigas por bin con la velocidad <strong>de</strong>l motor en estimulación mecánica sinusoidal<br />

<strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l laboratorio <strong>de</strong> Fisiología Sensorial, pero este tiene muchas aplicaciones en otros<br />

laboratorios como por ejemplo en el laboratorio <strong>de</strong> Neurofisiología Integrativa se utiliza<br />

para <strong>de</strong>terminar el papel que tiene la actividad espontánea <strong>de</strong> la medula espinal en el<br />

control <strong>de</strong> los movimientos, esto se realiza utilizando el pulso como sincronía para<br />

visualizar la actividad y al mismo tiempo estimular.<br />

Este sistema se comparó con equipos que existen en el mercado como son WPI y<br />

Fre<strong>de</strong>rick Haen obteniendo cero errores, <strong>de</strong> hecho po<strong>de</strong>mos <strong>de</strong>cir que tiene un mejor<br />

funcionamiento. Ya que tanto el dispositivo <strong>de</strong> WPI como el Fre<strong>de</strong>rick Haen no tiene un<br />

circuito anticonci<strong>de</strong>ncia <strong>de</strong> pulsos , no contienen un amplificador y <strong>de</strong>rivador <strong>de</strong> entrada, y<br />

el control <strong>de</strong> niveles es analógico por lo que dificulta la fijación <strong>de</strong> los niveles <strong>de</strong><br />

referencia. Nuestro dispositivo cuenta con todo lo anterior y a<strong>de</strong>más en cuanto a costo hay<br />

una gran diferencia<br />

Por otro lado el programa presentado le permite al usuario <strong>de</strong>terminar si una<br />

manipulación experimental tiene un efecto (excitador o inhibidor) en la actividad eléctrica<br />

neuronal. Parece particularmente útil para extraer valiosa información <strong>de</strong> los archivos en<br />

que la actividad basal y su variación natural pue<strong>de</strong> ten<strong>de</strong>r a disimular el efecto <strong>de</strong>


61<br />

manipulaciones experimentales. Aunque el programa se <strong>de</strong>sarrollo para el análisis <strong>de</strong><br />

frecuencia <strong>de</strong> potenciales, pue<strong>de</strong> adaptarse para realizar análisis estadístico <strong>de</strong> otros tipos <strong>de</strong><br />

datos fácilmente.<br />

El programa se ha diseñado para funcionar como parte <strong>de</strong> un conjunto <strong>de</strong> programas<br />

<strong>de</strong> computo para el análisis <strong>de</strong>l tren <strong>de</strong> espigas neuronales <strong>de</strong>sarrollado en nuestro<br />

laboratorio. Es fácil <strong>de</strong> usar y no requiere <strong>de</strong> ninguna especialización computacional. El<br />

programa pue<strong>de</strong> ser una valiosa herramienta en otros campos <strong>de</strong> investigación. A<strong>de</strong>más que<br />

los datos obtenidos pue<strong>de</strong>n ser exportados a programas como Sigmaplot, Excel, etc. para<br />

ser manipulados con otro tipo <strong>de</strong> estadística.<br />

Por ultimo se tiene planeado a futuro incluir un monitor <strong>de</strong> audio para mejorar en<br />

cuanto a funcionamiento, en cuanto a costo será reemplazar prácticamente toda la lógica<br />

digital mediante un microcontrolador (PIC) ya que tien<strong>de</strong>n a ser muy comunes y <strong>de</strong> muy<br />

bajo costo, con esto también se reducirían las dimensiones físicas <strong>de</strong>l dispositivo.


62<br />

Apéndice.<br />

Descripción <strong>de</strong> algunos cálculos estadísticos.<br />

Damos una explicación <strong>de</strong> cómo se obtiene cada uno <strong>de</strong> los cálculos que a<br />

continuación se enlistan.<br />

a) El promedio.<br />

b) Varianza<br />

X<br />

n<br />

?<br />

i?<br />

1<br />

?<br />

n<br />

Xi<br />

c) La <strong>de</strong>sviación estándar.<br />

s<br />

2<br />

? ( Xi ? X )<br />

?<br />

n ? 1<br />

2<br />

d) El coeficiente <strong>de</strong> variación.<br />

e) La media <strong>de</strong> los 10 datos más altos.<br />

s ?<br />

n<br />

?<br />

i?1<br />

CV ?<br />

Xi<br />

2<br />

n ? X<br />

s<br />

X<br />

f) El noventilo<br />

g) La mediana.<br />

MediaDecil o<br />

?<br />

last<br />

?<br />

Noventilo ? X ? last<br />

~<br />

X ? X fist ? ( n/<br />

2)<br />

i?<br />

last?<br />

( n10?<br />

1)<br />

10<br />

Xi<br />

n10


63<br />

h) la media <strong>de</strong> B entre A.<br />

MediaAB ?<br />

X<br />

X<br />

2<br />

1<br />

i) la media mayores <strong>de</strong> B entre A.<br />

j) máximo <strong>de</strong> B entre máximo <strong>de</strong> A.<br />

k) mínimo <strong>de</strong> B entre mínimo <strong>de</strong> A.<br />

MediaDecil oAB ?<br />

Max2<br />

MaxBA ?<br />

Max<br />

Min2<br />

MinBA ?<br />

Min<br />

MediaDecilo<br />

MediaDecilo<br />

1<br />

1<br />

2<br />

1<br />

l) El coeficiente <strong>de</strong> correlación.<br />

? ?<br />

r ?<br />

s s<br />

? ?<br />

? Xi ? X 1<br />

? X? ? X ?<br />

i?<br />

lag 2<br />

El coeficiente <strong>de</strong> correlación es un número sin dimensiones entre –1 y 1, a<strong>de</strong>más r 2<br />

mi<strong>de</strong> la fuerza <strong>de</strong> la asociación lineal.<br />

1<br />

2<br />

m) La prueba U <strong>de</strong> Mann-Whitney.<br />

n<br />

? n ? 1?<br />

1 1<br />

U ? n1n<br />

2<br />

? ?<br />

Para llegar a tomar <strong>de</strong>cisiones, conviene hacer <strong>de</strong>terminados supuestos o conjeturas<br />

acerca <strong>de</strong> las poblaciones que se estudian. Tales supuestos que pue<strong>de</strong>n ser o no ciertos se<br />

llaman hipótesis estadísticas y, en general, lo son sobre las distribuciones <strong>de</strong> probabilidad<br />

<strong>de</strong> las poblaciones.<br />

En muchos casos se formulan las hipótesis estadísticas con el solo propósito <strong>de</strong><br />

rechazarlas o invalidarlas. Por ejemplo, si se quiere <strong>de</strong>cidir sobre si un procedimiento es<br />

mejor que otro, se formula la hipótesis <strong>de</strong> que no hay diferencia entre los procedimientos<br />

(es <strong>de</strong>cir, cualquier diferencia observada se <strong>de</strong>be meramente a las fluctuaciones en el<br />

2<br />

R<br />

1


64<br />

muestreo <strong>de</strong> la misma población). Tales hipótesis se llaman también hipótesis nulas y se<br />

<strong>de</strong>notan por H 0 .<br />

Cualquier hipótesis que difiera <strong>de</strong> una hipótesis dada se llama hipótesis alternativa.<br />

Una hipótesis alternativa <strong>de</strong> la hipótesis nula se <strong>de</strong>nota por H 1 .<br />

n) Los autocorrelogramas seriales son un indicador <strong>de</strong> la <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>ncia serial <strong>de</strong>ntro <strong>de</strong>l<br />

tren <strong>de</strong> espigas y son construidos a partir <strong>de</strong> los coeficientes <strong>de</strong> correlación serial r k<br />

<strong>de</strong> or<strong>de</strong>n k (Perkel y cols., 1967) que se calcula según la ecuación siguiente:<br />

r<br />

k<br />

n?<br />

k<br />

? Xt<br />

? X ?? X<br />

t?<br />

k<br />

? X ?<br />

t?<br />

1<br />

?<br />

k<br />

n?<br />

2<br />

? Xt<br />

? X ?<br />

t?<br />

1<br />

don<strong>de</strong> r k es la autocorrelación <strong>de</strong> or<strong>de</strong>n k y X es el promedio.


65<br />

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