HTLV-1/2 - Revista EXPERIENCIA MÉDICA

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Ø±°Ð®·ªïóîððèò¯¨¼ ðîñðéñîððè ïîæëç ÐZ¹·²¿ è Experiencia Médica - Vol. 26 - Nº 1 - 2008 secuencias del virus evaluadas por PCR. De las 47 muestras indeterminadas por Wb, 6 fueron positivas para al menos dos secuencias virales. De estas últimas fueron tipificadas por PCR 5 como HTLV-1 y 1 como HTLV-2. Se realizó el análisis de los patrones por Wb de las 14 muestras positivas por IFI. De ellos 7 fueron gag indeterminados, 4 env indeterminados y 3 gag/env indeterminados. De las 47 muestras indeterminadas por Wb, 14 fueron positivas por IFI y 6 de ellas fueron concordantemente positivas por PCR. Tres de estas 6 muestras mostraron reactividad contra las proteínas gag y env y dos contra proteínas de gag (Tabla II). De las 3 muestras con reactividad contra gag y env, 2 fueron positivas para HTLV-1 (bandas para P21, P24, P28, P32) y (bandas para GD21, P24) y 1 muestra fue positiva para HTLV-2 (bandas para GD21 y P24). Una de las 2 muestras con reactividad para gag fue positiva para HTLV-1 (p19 y p24) y la otra para HTLV-2 (p19) (Tabla II). Todas las muestras con reactividad para las proteínas del gag (p36, p32, p28, p26, p19 o p36, p28, p26, p19 o p24 solamente) o proteínas env (solamente GD21) fueron negativas por PCR. Tabla I: Presencia de anticuerpos para HTLV-1/2 y de secuencias del provirus en las muestras de sangre correspondientes a las diferentes categorías estudiadas. Patrones de Wb Nº PCR IFI Muestras POLI a TAX I b POLII c TAX II d Tax generice + - positivas PCR vs. IFI HTLV-1 positivo HTLV-2 positivo Indeterminado Negativo Total 66 66 66 0 0 66 66 0 66/66 5 0 0 5 5 5 5 0 5/5 47 5 5 1 1 6 14 33 6/14 63 0 0 0 0 0 0 63 63/63 181 71 71 6 6 77 85 96 a- gen pol 198 pb (HTLV-1) (30). b- 128 pb de la secuencia del gen tax digerida con la enzima Taq I en 122 pb y 6 pb (perfil HTLV-1) (28). c- gen pol 138 pb (HTLV-2) (30). d- 128 pb de la secuencia del gen tax digerida con la enzima Taq I resultando en 69 pb, 53 pb y 6 pb (perfil HTLV-2) (28). e- gen tax 219 pb (genérica, HTLV-BLV) (29). Tabla II: Reactividad por Western Blot y PCR de las muestras positivas por IFI. Nº IFI Patrones de reactividad porWb PCR POLI a TAX I b POLII c TAX II d 1 + Wb Indeterminado (p36, p32, p28, p26, p19) - - - - 1 + Wb Indeterminado (P36, P28, P26, P19) - - - - 1 + Wb Indeterminado (GD 21, P24, P28, P32) + + - - 1 + Wb Indeterminado (GD 21, RGP46I, RGP46II ) + + - - 2 + Wb Indeterminado (GD21 ,P24) 1/2 1/2 - - 1/2 1/2 2 + Wb Indeterminado (p19, p24) 1/2 1/2 - - 3 + Wb Indeterminado (GD 21) - - - - 1 + Wb Indeterminado (P24) - - - - 2 + Wb Indeterminado P19) - - 1/2 1/2 a- gen pol 198 pb (HTLV-1) (30). b-128 pb de la secuencia tax digerida con la enzima Taq I en 122 pb y 6 pb (perfil HTLV-1 ) (28). c- gen pol 138 pb (HTLV-2) (30). d-128 pb de la secuencia tax digerida con la enzima Taq I resultando en 69 pb, 53 pb y 6bp (perfil HTLV-2) (28). e-gen tax 219pb (generica, HTLV-BLV) (29). 10
Ø±°Ð®·ªïóîððèò¯¨¼ ðîñðéñîððè ïîæëç ÐZ¹·²¿ ç PROPUESTA DE ALGORITMO DIAGNÓSTICO DE HTLV-1/2 Discusión Los patrones indeterminados por Wb para HTLV- 1/2 son muy frecuentes en todo el mundo con prevalencias que varían considerablemente de acuerdo al país: Francia (0,033 por mil) (25), Estados Unidos (0,035%) (26, 28), Camerún (11% en población rural) (29) y en Congo (3% en población de mujeres embarazadas) (30). Además los patrones de Wb indeterminados persistentes son muy frecuentes en población de bajo riesgo como los donantes de sangre, en los cuales para resolver el diagnóstico debe recurrirse a un seguimiento serológico prolongado o a la definición del diagnóstico por técnicas moleculares. La evaluación de técnicas serológicas alternativas para ser utilizadas en la confirmación de la infección por HTLV-1 y en la resolución de perfiles serológicos indeterminados, adquiere importancia en los países en desarrollo con zonas endémicas para el virus donde los recursos son limitados y, por ello, las técnicas moleculares no pueden ser usadas masivamente en el diagnóstico. Esta última es la situación de la mayoría de los países de América incluyendo Argentina. El presente estudio demuestra la utilidad de la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para resolver el diagnóstico serológico de la infección por HTLV-1/2 en individuos con perfiles indeterminados por Wb. En este trabajo demostramos que 14 (29,8%) y 33 (79,2%) de los 47 individuos con Wb indeterminados fueron positivos y negativos respectivamente por IFI para HTLV1/2. Seis de las 14 (12,8%) muestras positivas por IFI fueron también positivas por PCR. Estos resultados muestran claramente que la mayoría de los individuos con Wb indeterminados no están infectados con HTLV-1 o HTLV-2. Sin embargo 4/6 (66,7%) y 2/6 (33,3) de estos individuos están infectados con HTLV-1 y HTLV-2 respectivamente (Tabla I y II), siendo la frecuencia global de positividad entre los indeterminados de 12,o % (HTLV-1 (8,5 %) y HTLV-2 (4,3 %). Nuestros hallazgos son concordantes con lo descrito por autores de otros países que encontraron tasas de positividad por PCR de 15 % a 31 % en grupos de individuos con perfiles indeterminados (31). El significado de estos perfiles indeterminados por Wb no está claro hasta el momento. Algunos autores argumentan que la presencia de dichos perfiles en áreas no endémicas sugiere que los individuos no están infectados con HTLV-1 o HTLV-2 ya que la mayoría no portan el provirus (32, 33, 34, 35). Sin embargo, otros autores sugieren que estos datos pueden indicar que la prevalencia del virus está muy subestimada en ciertos grupos poblacionales (36, 34). Estudios recientes en Buenos Aires, Argentina (25) mostraron que 5/34 individuos indeterminados por Wb estudiados fueron positivos para HTLV-1 por PCR y 4/5 tenían un perfil de Wb con reactividad para proteínas del env (GD21 o rgp 46II), sugiriendo que la reactividad principalmente con la proteína del env GD21 podría ser indicativa de infección por HTLV-1/2. En este estudio hemos encontrado varios diferentes perfiles de Wb indeterminados en el grupo de individuos positivos por PCR. Así, en estas muestras evaluadas no hemos encontrado patrones específicos que puedan ser sugeridos como indicativos de infección por HTLV-1/2. Además, en este estudio el 50% de las muestras positivas por PCR no tenían reactividad contra la proteína GD21 y todas las muestras que solo presentaban reactividad contra la proteína GD21 fueron negativas por PCR (Tabla II). En estudios realizados en otros países tampoco se encontró asociación entre algún perfil de indeterminado por Wb y la infección confirmada con HTLV-1/2 (37). Sin embargo, sería interesante poder realizar en Argentina estudios multicéntricos para seguimiento de cohortes mayores de estos individuos seroindeterminados a fin de clarificar si es posible determinar uno o más patrones de Wb indeterminados que sean útiles como indicativos de infección. Además, en este tipo de estudios prospectivos otros factores deberían ser considerados tales como conductas y factores de riesgo ambientales, tal como fue realizado previamente en otros grupos poblacionales de Brasil. (38) En estudios previos realizados por nuestro grupo demostramos que la IFI tiene sensibilidad y especificidad comparable con el Wb (39) y que puede entonces ser utilizada como una sencilla técnica alternativa para la confirmación de la infección por HTLV-1/2. Los resultados obtenidos en este trabajo corroboran esto último ya que la IFI detectó correctamente las 71 muestras positivas (66 11
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