HTLV-1/2 - Revista EXPERIENCIA MÉDICA
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ر°Ð®·ªïóîððèò¯¨¼ ðîñðéñîððè ïîæëç ÐZ¹·²¿ ë<br />
TRABAJOS ORIGINALES<br />
Problemática del diagnóstico de la infección por retrovirus humanos<br />
(<strong>HTLV</strong>-1/2) productores de leucemias/linfomas T y síndromes<br />
neurológicos degenerativos. Propuesta de un algoritmo alternativo.<br />
Balangero Marcos (1), Barbás María Gabriela (2), Berini Carolina (3), Gastaldello René (1), Biglione Mirna (3), Gallego Sandra (1)<br />
(1) Instituto de Virología Dr. "J M Vanella" Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Córdoba.<br />
(2) Laboratorio Central, Ministerio de salud de la provincia de Córdoba.<br />
(3) Centro Nacional de Referencia para el SIDA, Departamento de Microbiología, Parasitología e Immunología, Facultad de Medicina,<br />
Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina<br />
Resumen<br />
Evaluamos la utilidad de una Inmunofluorescencia indirecta (IFI) como una prueba confirmatoria adicional para<br />
dilucidar el diagnóstico de infección con <strong>HTLV</strong>-1/2 en individuos con perfiles de serológicos indeterminados por la técnica<br />
de Western blot (Wb). Estos perfiles indeterminados son muy prevalentes y generan incertidumbre en el diagnóstico. Fueron<br />
estudiadas por IFI y PCR un total de 47 muestras de sangre con patrones indeterminados por Wb, 71 muestras confirmadas<br />
positivas para <strong>HTLV</strong>-1/2 por Wb y 63 muestras negativas para <strong>HTLV</strong>-1/2. 12,8% de las muestras indeterminadas por Wb<br />
fueron confirmadas positivas por IFI y PCR y el 70% de las muestras fueron concordantemente negativas por IFI y PCR.<br />
Además, se encontraron resultados discordantes en el 17% de las muestras, resultando estas positivas por IFI pero negativas<br />
por PCR. Basados en los resultados se propone un algoritmo alternativo para el diagnóstico mediante el cual utilizando la IFI<br />
se descartaría rápidamente el alto porcentaje (70%) de los resultados indeterminados por Wb que corresponden a los casos en<br />
los que no existe infección y evitando, de este modo, la necesidad de recurrir a técnicas moleculares para la definición del<br />
diagnóstico y también la ansiedad que genera en el paciente la opción de un seguimiento serológico.<br />
Palabras clave: <strong>HTLV</strong>-1/2 - IFI- Algoritmo.<br />
Troublesome diagnosis of human retroviruses causative agents of T leukaemias/lymphomas and<br />
degenerative neurological diseases (<strong>HTLV</strong>-1/2). Proposal of an alternative algorithm for diagnosis.<br />
Summary<br />
The present study shows the potential usefulness of IFA in elucidating the status of <strong>HTLV</strong>-1/2 infection in<br />
individuals with indeterminate Wb profiles. These indeterminate Wb patterns are prevalent worldwide. 47 blood samples from<br />
indeterminate Wb subjects, 71 samples confirmed positive for <strong>HTLV</strong>-1/2 by Wb and 63 negative samples for <strong>HTLV</strong>-1/2 by<br />
Wb, were studied using IFAand Nested-PCR. 12, 8% of the indeterminate Wb samples were confirmed positive by IFAand<br />
PCR and 70% of the samples were concordantly negative by IFAand PCR. Furthermore, discordant results were found in<br />
17% of the samples. These samples were IFApositive but PCR negative.<br />
Based on our results we propose an alternative algorithm using IFAto resolve the diagnosis in the high rate (70%)<br />
of indeterminate Wb patterns not associated with <strong>HTLV</strong>-1/2 infection. Thus, it would not be necessary to use molecular assays<br />
nor a serological follow-up of the patient.<br />
Key Words: <strong>HTLV</strong>-1/2 - IFA- Algorithm.<br />
Experiencia Médica - Vol. 26 - N° 1 - Pág. 7 a 13 - 2008.<br />
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ر°Ð®·ªïóîððèò¯¨¼ ðîñðéñîððè ïîæëç ÐZ¹·²¿ ê<br />
Experiencia Médica - Vol. 26 - Nº 1 - 2008<br />
Introducción<br />
El virus <strong>HTLV</strong>-1 ha sido identificado como el<br />
agente causante de la leucemia/linfoma a células Tdel<br />
adulto y de la paraparesia espástica tropical (TSP/ HAM)<br />
(1, 2). Además, ha sido demostrado que el virus <strong>HTLV</strong>-1<br />
está relacionado con otras enfermedades inflamatorias<br />
incluyendo varias enfermedades autoimmunes, como<br />
artropatía inflamatoria crónica y síndrome de Sjögrens. El<br />
virus <strong>HTLV</strong>-1 se asocia también a polimiositis, uveítis,<br />
alveolitis y dermatitis infecciosa (3). El virus <strong>HTLV</strong>- 2 ha<br />
sido relacionado con neoplasias de células Ty casos de<br />
enfermedad neurodegenerativa (4).<br />
La transmisión de los virus <strong>HTLV</strong>-1/2 podría<br />
ocurrir por transfusión de sangre, por vía sexual, de la<br />
madre infectada al niño por vía vertical y por el uso drogas<br />
endovenosas. El contacto de célula-célula es necesario<br />
para una transmisión eficiente del virus <strong>HTLV</strong>-1 (5) y la<br />
transmisión requiere contactos frecuentes entre<br />
individuos. Fue demostrado que el riesgo de la infección<br />
aumenta con los periodos más prolongados de<br />
amamantamiento (> 6 meses) (6, 7) y que el riesgo de<br />
transmisión sexual se incrementa en relación con un<br />
mayor número de parejas sexuales (8, 9).<br />
La infección con <strong>HTLV</strong>-1/2 ha sido ampliamente<br />
documentada en el mundo en zonas endémicas en el sur<br />
de Japón, el Caribe, África sub- sahariana y países de Sud<br />
América incluyendo Brasil, Colombia, Argentina, Perú,<br />
Guayana Francesa y Chile (10, 11, 12, 13,14). El <strong>HTLV</strong>-2<br />
es endémico entre los amerindios de América del norte,<br />
centro y sud América y está diseminado entre<br />
consumidores de drogas intravenosas (15, 16).<br />
El diagnóstico de las infecciones por <strong>HTLV</strong>-1/2<br />
se realiza por la detección de anticuerpos específicos en<br />
suero o plasma usando ensayos de screening:<br />
inmunoensayo ligado a enzimas (enzime linked<br />
immunoassay, ELISA) o aglutinación de partícula (AP).<br />
Todas las muestras repetidamente reactivas por las pruebas<br />
Correspondencia:<br />
Dr. Marcos Balangero<br />
Juan Ramirez de Velazco 760<br />
Córdoba. Argentina<br />
TE: 0351-4732723<br />
E-mail:marcosbalangero@yahoo.com.ar<br />
Recibido: 4 de enero de 2008<br />
Aceptado: 14 de febrero de 2008<br />
de screening requieren la confirmación de la presencia de<br />
anticuerpos específicos para <strong>HTLV</strong>-1/2 por otras<br />
metodologías. El Western blot (Wb) es la técnica de<br />
referencia para la confirmación de la infección y es la que<br />
define un resultado positivo o negativo para los<br />
anticuerpos anti-<strong>HTLV</strong>-1/2. Sin embargo, una proporción<br />
importante de ELISAs reactivos para <strong>HTLV</strong>-1/2 resulta en<br />
un patrón de bandas insuficiente por Wb (17, 18, 19). Los<br />
individuos que presentan estos resultados son<br />
categorizados serológicamente como indeterminados para<br />
<strong>HTLV</strong>-1/2. Estos perfiles indeterminados por Wb han sido<br />
descritos en todo el mundo siendo más frecuentes en áreas<br />
tropicales (18, 19, 20). El agente o los agentes causales y<br />
la trascendencia médica del estado de indeterminado para<br />
<strong>HTLV</strong>-1/2 están en la actualidad poco claros. Varias<br />
explicaciones potenciales han sido sugeridas, incluyendo<br />
(I) la reactividad cruzada con otros agentes infecciosos<br />
(por ejemplo., Plasmodium sp.) (21) (II) infección con<br />
partículas de <strong>HTLV</strong>-1 defectivas (22, 23), (III) infección<br />
con retrovirus nuevos que tienen alta homología con<br />
<strong>HTLV</strong>-1 (24), (IV) e infección con <strong>HTLV</strong>-1 en individuos<br />
que presentan cargas virales que están debajo del alcance<br />
de los métodos que se utilizan para la detección.<br />
Diferentes secuencias de genes de <strong>HTLV</strong>-1 pueden<br />
ser amplificadas por PCR en los linfomonocitos de sangre<br />
periférica (PBMCs) de casi todos los individuos infectados<br />
con <strong>HTLV</strong>-1. Se ha publicado que la mayoría de los<br />
individuos indeterminados para <strong>HTLV</strong>-1/2 son negativos<br />
por PCR para las secuencias de genes del virus (18, 19, 25).<br />
El objetivo de esta investigación es evaluar la<br />
utilidad de una Inmunofluorescencia indirecta (IFI) como<br />
una prueba confirmatoria adicional para el diagnóstico<br />
rápido de la infección con <strong>HTLV</strong>-1/2 en individuos con<br />
perfiles de Wb indeterminados.<br />
Materiales y métodos<br />
Fueron analizadas un total de 181 muestras de<br />
sangre periférica correspondientes a personas de diferentes<br />
regiones de la Argentina (Buenos Aires, Córdoba, Jujuy).<br />
Los pacientes firmaron un consentimiento<br />
informado previo a la toma de muestra de sangre. Setenta y<br />
una muestras eran positivas para anticuerpos contra los virus<br />
<strong>HTLV</strong>1/2 (66 <strong>HTLV</strong>-1 y 5 <strong>HTLV</strong>-2), 63 muestras eran<br />
negativas para <strong>HTLV</strong>1/2 y 47 eran reactivas por el ensayo de<br />
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PROPUESTA DE ALGORITMO DIAGNÓSTICO DE <strong>HTLV</strong>-1/2<br />
screening e indeterminadas por Wb para estos virus. Todas las<br />
muestras fueron ensayadas por ELISA (Vironostika <strong>HTLV</strong>-<br />
1/2 Organon Teknika), Aglutinación de Partículas de Gelatina<br />
(Serodia <strong>HTLV</strong>-1 Fujirebo Inc., Tokio, Japón) y<br />
posteriormente confirmadas por Western blot (<strong>HTLV</strong>Blot<br />
2.4, Genelabs, Singapur). Todos los ensayos fueron realizados<br />
siguiendo las instrucciones del fabricante. Los resultados de<br />
los ensayos de Wb fueron interpretados según los estrictos<br />
criterios de Genelabs Diagnostics. El Wb fue considerado<br />
positivo para <strong>HTLV</strong>-1 solo si la banda para las proteínas gag<br />
(p19 y/o p24) y dos proteínas env (GD 21 y rgp 46 I) estaban<br />
presentes. Una muestra fue considerada positiva para <strong>HTLV</strong>-<br />
2 cuando estaban presentes las bandas para las proteínas gag<br />
(p24 y/o p19) y dos proteínas env (GD21 y rgp 46 II). El test<br />
fue considerado indeterminado si bandas específicas para<br />
<strong>HTLV</strong>estaban presentes pero no cumplían con el criterio<br />
suficiente de positividad. Las muestras fueron consideradas<br />
negativas cuando no presentaban ninguna banda específica<br />
para proteínas de <strong>HTLV</strong>-1/2.<br />
Inmunofluorescencia Indirecta<br />
Todas las muestras de suero fueron probadas por<br />
medio de una Inmunofluorescencia Indirecta "in house".<br />
Los vidrios fueron preparados utilizando linfocitos T<br />
humanos trasformados (MT-2 y Mo-T) e infectados con los<br />
virus <strong>HTLV</strong>-1 y <strong>HTLV</strong>-2, respectivamente. Estas células<br />
expresan antígenos virales en su superficie y en su<br />
citoplasma. La línea celular no infectada Molt-3 fue incluida<br />
en los vidrios como control de inespecificidad. La IFI fue<br />
realizada siguiendo el procedimiento descrito previamente<br />
por Gallego et al (26). Brevemente, se colocan 10-20 ul<br />
(dilución 1:4) de las muestra de suero y de los sueros control<br />
en los pocillos que contienen las células infectadas y las<br />
células no infectadas. Las muestras son incubadas por 30<br />
minutos a 37 ºC en cámara húmeda. Luego el vidrio es<br />
lavado tres veces con PBS y posteriormente secado, 10ul de<br />
una dilución 1:100 de FITC-conjugado anti IgG humana<br />
(Kallestad TM fluorescein conjugated antiserum/Sanofi<br />
Diagnostics Pasteur) fue posteriormente agregado a cada<br />
pocillo e incubado a 37 ºC en cámara húmeda por 30<br />
minutos. Luego del último lavado una solución de buffer<br />
glicerol (pH:8) fue utilizada para el montaje de los vidrios.<br />
Los sueros fueron considerados positivos para anticuerpos<br />
anti <strong>HTLV</strong>-1/2 cuando presentaban la fluorescencia<br />
característica en el citoplasma de las células infectadas y<br />
ausencia de fluorescencia en las células no infectadas.<br />
Nested-PCR.<br />
Las células mononucleares de sangre periférica<br />
(PBMCs) fueron separadas de muestras de sangre entera por<br />
Ficoll-Hypaque. Las células de la interfase fueron recolectadas<br />
y lavadas con buffer fosfato (PBS). Las alícuotas conteniendo<br />
1x10 6 células fueron resuspendidas en 100 ul de buffer de lisis<br />
conteniendo 5 mM Tris CLH, 0,5% Twen 20, 0,5% Triton y 80<br />
ug/ml de proteinasa K (Fungal 100mg, Gibco).<br />
Se hizo la digestión con proteinasa K por 1 h a 60º<br />
C y luego la enzima se inactivó por 10 min. a 95º C. Los<br />
lisados fueron mantenidos a 20º C hasta ser utilizados.<br />
Una secuencia de -actina fue amplificada como<br />
control de calidad del DNAextraído en las muestras (27).<br />
Apartir de los PBMCs de todas las muestras<br />
extraídas se realizó una Nested-PCR para la amplificación<br />
de secuencias del provirus de <strong>HTLV</strong>-1 y <strong>HTLV</strong>-2. Una<br />
secuencia de la región tax/rex, una secuencia genérica del<br />
gen tax y una secuencia del gen pol fueron amplificadas en<br />
ensayos de Nested-PCR diferentes.<br />
Una muestra fue considerada positiva para <strong>HTLV</strong>-<br />
1 o <strong>HTLV</strong>-2 cuando se amplificaron al menos dos<br />
secuencias de genes.<br />
Resultados<br />
Fueron estudiadas por IFI y PCR un total de 47<br />
muestras de sangre con patrones indeterminados por Wb,<br />
71 muestras confirmadas positivas para <strong>HTLV</strong>-1/2 por Wb<br />
y 63 muestras negativas para <strong>HTLV</strong>-1/2.<br />
Las 71 muestras positivas y las 63 negativas fueron<br />
positivas y negativas para anticuerpos anti <strong>HTLV</strong>-1/2 por<br />
IFI, respectivamente, existiendo una completa concordancia<br />
entre los resultados de la IFI y el Wb. Por IFI fueron<br />
negativas 33/47 (70,2%) de las muestras indeterminadas por<br />
Wb, y 14/47 (29,8%) de las muestras indeterminadas por<br />
Wb pero positivas por IFI presentaron bajos títulos de<br />
anticuerpos por esta ultima técnica (rango 1:4 a 1:64).<br />
Se obtuvieron los PBMCs a partir de 181 muestras<br />
de sangre entera y la presencia del provirus de <strong>HTLV</strong>1/2<br />
fue investigada en ellas. Los resultados se muestran en la<br />
Tabla 1. Todas las 71 muestras positivas fueron positivas<br />
para <strong>HTLV</strong>-1/2 por PCR. Así, fueron amplificadas en estas<br />
muestras secuencias de 128 pb del gen tax/rex, 219 pb del<br />
gen tax (secuencia genérica) y 198 pb o 132 pb del gen pol.<br />
Las 63 muestras negativas fueron negativas para todas las<br />
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Experiencia Médica - Vol. 26 - Nº 1 - 2008<br />
secuencias del virus evaluadas por PCR. De las 47 muestras<br />
indeterminadas por Wb, 6 fueron positivas para al menos<br />
dos secuencias virales. De estas últimas fueron tipificadas<br />
por PCR 5 como <strong>HTLV</strong>-1 y 1 como <strong>HTLV</strong>-2.<br />
Se realizó el análisis de los patrones por Wb de<br />
las 14 muestras positivas por IFI. De ellos 7 fueron gag<br />
indeterminados, 4 env indeterminados y 3 gag/env<br />
indeterminados. De las 47 muestras indeterminadas por<br />
Wb, 14 fueron positivas por IFI y 6 de ellas fueron<br />
concordantemente positivas por PCR. Tres de estas 6<br />
muestras mostraron reactividad contra las proteínas gag y<br />
env y dos contra proteínas de gag (Tabla II). De las 3<br />
muestras con reactividad contra gag y env, 2 fueron<br />
positivas para <strong>HTLV</strong>-1 (bandas para P21, P24, P28, P32) y<br />
(bandas para GD21, P24) y 1 muestra fue positiva para<br />
<strong>HTLV</strong>-2 (bandas para GD21 y P24). Una de las 2 muestras<br />
con reactividad para gag fue positiva para <strong>HTLV</strong>-1 (p19 y<br />
p24) y la otra para <strong>HTLV</strong>-2 (p19) (Tabla II).<br />
Todas las muestras con reactividad para las<br />
proteínas del gag (p36, p32, p28, p26, p19 o p36, p28, p26,<br />
p19 o p24 solamente) o proteínas env (solamente GD21)<br />
fueron negativas por PCR.<br />
Tabla I: Presencia de anticuerpos para <strong>HTLV</strong>-1/2 y de secuencias del provirus en las muestras de sangre<br />
correspondientes a las diferentes categorías estudiadas.<br />
Patrones de Wb Nº PCR IFI Muestras<br />
POLI a TAX I b POLII c TAX II d Tax generice + - positivas PCR vs. IFI<br />
<strong>HTLV</strong>-1 positivo<br />
<strong>HTLV</strong>-2 positivo<br />
Indeterminado<br />
Negativo<br />
Total<br />
66 66 66 0 0 66 66 0 66/66<br />
5 0 0 5 5 5 5 0 5/5<br />
47 5 5 1 1 6 14 33 6/14<br />
63 0 0 0 0 0 0 63 63/63<br />
181 71 71 6 6 77 85 96<br />
a- gen pol 198 pb (<strong>HTLV</strong>-1) (30).<br />
b- 128 pb de la secuencia del gen tax digerida con la enzima Taq I en 122 pb y 6 pb (perfil <strong>HTLV</strong>-1) (28).<br />
c- gen pol 138 pb (<strong>HTLV</strong>-2) (30).<br />
d- 128 pb de la secuencia del gen tax digerida con la enzima Taq I resultando en 69 pb, 53 pb y 6 pb (perfil <strong>HTLV</strong>-2) (28).<br />
e- gen tax 219 pb (genérica, <strong>HTLV</strong>-BLV) (29).<br />
Tabla II: Reactividad por Western Blot y PCR de las muestras positivas por IFI.<br />
Nº IFI Patrones de reactividad porWb PCR<br />
POLI a TAX I b POLII c TAX II d<br />
1 + Wb Indeterminado (p36, p32, p28, p26, p19) - - - -<br />
1 + Wb Indeterminado (P36, P28, P26, P19) - - - -<br />
1 + Wb Indeterminado (GD 21, P24, P28, P32) + + - -<br />
1 + Wb Indeterminado (GD 21, RGP46I, RGP46II ) + + - -<br />
2 + Wb Indeterminado (GD21 ,P24) 1/2 1/2<br />
- - 1/2 1/2<br />
2 + Wb Indeterminado (p19, p24) 1/2 1/2 - -<br />
3 + Wb Indeterminado (GD 21) - - - -<br />
1 + Wb Indeterminado (P24) - - - -<br />
2 + Wb Indeterminado P19) - - 1/2 1/2<br />
a- gen pol 198 pb (<strong>HTLV</strong>-1) (30).<br />
b-128 pb de la secuencia tax digerida con la enzima Taq I en 122 pb y 6 pb (perfil <strong>HTLV</strong>-1 ) (28).<br />
c- gen pol 138 pb (<strong>HTLV</strong>-2) (30).<br />
d-128 pb de la secuencia tax digerida con la enzima Taq I resultando en 69 pb, 53 pb y 6bp (perfil <strong>HTLV</strong>-2) (28).<br />
e-gen tax 219pb (generica, <strong>HTLV</strong>-BLV) (29).<br />
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PROPUESTA DE ALGORITMO DIAGNÓSTICO DE <strong>HTLV</strong>-1/2<br />
Discusión<br />
Los patrones indeterminados por Wb para <strong>HTLV</strong>-<br />
1/2 son muy frecuentes en todo el mundo con prevalencias<br />
que varían considerablemente de acuerdo al país: Francia<br />
(0,033 por mil) (25), Estados Unidos (0,035%) (26, 28),<br />
Camerún (11% en población rural) (29) y en Congo (3% en<br />
población de mujeres embarazadas) (30). Además los<br />
patrones de Wb indeterminados persistentes son muy<br />
frecuentes en población de bajo riesgo como los donantes<br />
de sangre, en los cuales para resolver el diagnóstico debe<br />
recurrirse a un seguimiento serológico prolongado o a la<br />
definición del diagnóstico por técnicas moleculares.<br />
La evaluación de técnicas serológicas alternativas<br />
para ser utilizadas en la confirmación de la infección por<br />
<strong>HTLV</strong>-1 y en la resolución de perfiles serológicos<br />
indeterminados, adquiere importancia en los países en<br />
desarrollo con zonas endémicas para el virus donde los<br />
recursos son limitados y, por ello, las técnicas moleculares<br />
no pueden ser usadas masivamente en el diagnóstico. Esta<br />
última es la situación de la mayoría de los países de<br />
América incluyendo Argentina. El presente estudio<br />
demuestra la utilidad de la técnica de inmunofluorescencia<br />
indirecta (IFI) para resolver el diagnóstico serológico de la<br />
infección por <strong>HTLV</strong>-1/2 en individuos con perfiles<br />
indeterminados por Wb.<br />
En este trabajo demostramos que 14 (29,8%) y 33<br />
(79,2%) de los 47 individuos con Wb indeterminados<br />
fueron positivos y negativos respectivamente por IFI para<br />
<strong>HTLV</strong>1/2.<br />
Seis de las 14 (12,8%) muestras positivas por<br />
IFI fueron también positivas por PCR. Estos resultados<br />
muestran claramente que la mayoría de los individuos<br />
con Wb indeterminados no están infectados con <strong>HTLV</strong>-1<br />
o <strong>HTLV</strong>-2. Sin embargo 4/6 (66,7%) y 2/6 (33,3) de estos<br />
individuos están infectados con <strong>HTLV</strong>-1 y <strong>HTLV</strong>-2<br />
respectivamente (Tabla I y II), siendo la frecuencia global<br />
de positividad entre los indeterminados de 12,o %<br />
(<strong>HTLV</strong>-1 (8,5 %) y <strong>HTLV</strong>-2 (4,3 %). Nuestros hallazgos<br />
son concordantes con lo descrito por autores de otros<br />
países que encontraron tasas de positividad por PCR de<br />
15 % a 31 % en grupos de individuos con perfiles<br />
indeterminados (31).<br />
El significado de estos perfiles indeterminados<br />
por Wb no está claro hasta el momento. Algunos autores<br />
argumentan que la presencia de dichos perfiles en áreas no<br />
endémicas sugiere que los individuos no están infectados<br />
con <strong>HTLV</strong>-1 o <strong>HTLV</strong>-2 ya que la mayoría no portan el<br />
provirus (32, 33, 34, 35).<br />
Sin embargo, otros autores sugieren que estos<br />
datos pueden indicar que la prevalencia del virus está muy<br />
subestimada en ciertos grupos poblacionales (36, 34).<br />
Estudios recientes en Buenos Aires, Argentina<br />
(25) mostraron que 5/34 individuos indeterminados por<br />
Wb estudiados fueron positivos para <strong>HTLV</strong>-1 por PCR y<br />
4/5 tenían un perfil de Wb con reactividad para proteínas<br />
del env (GD21 o rgp 46II), sugiriendo que la reactividad<br />
principalmente con la proteína del env GD21 podría ser<br />
indicativa de infección por <strong>HTLV</strong>-1/2. En este estudio<br />
hemos encontrado varios diferentes perfiles de Wb<br />
indeterminados en el grupo de individuos positivos por<br />
PCR. Así, en estas muestras evaluadas no hemos<br />
encontrado patrones específicos que puedan ser sugeridos<br />
como indicativos de infección por <strong>HTLV</strong>-1/2. Además, en<br />
este estudio el 50% de las muestras positivas por PCR no<br />
tenían reactividad contra la proteína GD21 y todas las<br />
muestras que solo presentaban reactividad contra la<br />
proteína GD21 fueron negativas por PCR (Tabla II). En<br />
estudios realizados en otros países tampoco se encontró<br />
asociación entre algún perfil de indeterminado por Wb y la<br />
infección confirmada con <strong>HTLV</strong>-1/2 (37). Sin embargo,<br />
sería interesante poder realizar en Argentina estudios<br />
multicéntricos para seguimiento de cohortes mayores de<br />
estos individuos seroindeterminados a fin de clarificar si es<br />
posible determinar uno o más patrones de Wb<br />
indeterminados que sean útiles como indicativos de<br />
infección. Además, en este tipo de estudios prospectivos<br />
otros factores deberían ser considerados tales como<br />
conductas y factores de riesgo ambientales, tal como fue<br />
realizado previamente en otros grupos poblacionales de<br />
Brasil. (38)<br />
En estudios previos realizados por nuestro grupo<br />
demostramos que la IFI tiene sensibilidad y especificidad<br />
comparable con el Wb (39) y que puede entonces ser<br />
utilizada como una sencilla técnica alternativa para la<br />
confirmación de la infección por <strong>HTLV</strong>-1/2. Los resultados<br />
obtenidos en este trabajo corroboran esto último ya que la<br />
IFI detectó correctamente las 71 muestras positivas (66<br />
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Experiencia Médica - Vol. 26 - Nº 1 - 2008<br />
<strong>HTLV</strong>-1 y 5 <strong>HTLV</strong>-2) y las 63 muestras negativas.<br />
Además, la IFI mostró más sensibilidad que el Wb debido<br />
a que detectó 6 muestras positivas entre las 47 muestras<br />
indeterminadas por Wb. Estas 6 muestras positivas por IFI<br />
fueron concordantemente positivas por PCR (Tabla I).<br />
Las principales conclusiones se basan en los<br />
siguientes resultados: 12,8 % de las muestras<br />
indeterminadas por Wb fueron confirmadas positivas por IFI<br />
y PCR y el 70 % de las muestras fueron concordantemente<br />
negativas por IFI y PCR. Además, se encontraron resultados<br />
discordantes en el 17 % de las muestras, resultando estas<br />
positivas por IFI pero negativas por PCR.<br />
Basados en nuestros resultados proponemos que<br />
sean utilizados una combinación de ensayos serológicos<br />
para la confirmación de la presencia de anticuerpos contra<br />
<strong>HTLV</strong>-1/2. Básicamente proponemos que todas las<br />
muestras indeterminadas por Wb sean probadas por IFI.<br />
Todas las muestras que resulten negativas por IFI<br />
demostrarían ausencia de anticuerpos contra <strong>HTLV</strong>-1/2 y<br />
todas las muestras que resulten positivas por IFI deberán<br />
ser estudiadas por PCR.<br />
Así, las muestras concordantemente positivas por<br />
IFI y PCR confirman una infección por <strong>HTLV</strong>-1/2,<br />
mientras que el porcentaje muy bajo de los individuos con<br />
resultados discordantes (positivos por IFI y negativos por<br />
PCR) deberían ser estudiados en un seguimiento<br />
serológico.<br />
Este esquema propuesto permitiría realizar un<br />
diagnóstico confirmatorio rápido de la infección por<br />
<strong>HTLV</strong>-1/2, descartando rápidamente el alto porcentaje<br />
(70%) de los resultados indeterminados por Wb que<br />
corresponden a los casos en los que no existe infección y<br />
evitando, de este modo, la necesidad de recurrir a técnicas<br />
moleculares para la definición del diagnóstico y la<br />
ansiedad que genera en el paciente la opción de un<br />
seguimiento serológico.<br />
Agradecimientos<br />
Las autores agradecen a las Dras. Lisa Sen y<br />
Andrea Mangano del laboratorio de Biología Celular y<br />
Retrovirus, Hospital Nacional de Pediatría "J. P.<br />
Garrahan", Buenos Aires, Argentina por haber cedido<br />
amablemente muestras con patrones indeterminados por<br />
Wb para la infección con <strong>HTLV</strong>-1/2, las cuales fueron<br />
utilizadas en este estudio.<br />
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