Diagnóstico Microbiológico de Helicobacter pylori

Diagnóstico Microbiológico
de Helicobacter pylori
Dra. Mónica Lafourcade R.
Microbiología
Clínica Santa María
FALP
Historia
• 1875: científicos alemanes descubrieron
bacterias espirales en el epitelio del estómago
humano. No podían ser cultivadas
• 1892: el investigador italiano Giulio Bizzozero
describió una serie de bacterias espirales que
vivían en el ambiente ácido del estómago de
perros
• El profesor Walery Jaworski, en Cracovia,
investigó sedimentos de lavados gástricos
obtenidos de humanos en 1899 : Vibrio rugula

1982
Los médicos australianos Robin Warren y Barry
Marshall identificaron por primera vez el vínculo entre
la bacteria Helicobacter pylori y las úlceras
gastroduodenales

Premio Nobel Medicina 2005
Por el descubrimiento de la bacteria
Helicobacter pylori y su rol en gastritis y
úlcera péptica

Epidemiología I
• Hp es una de las causas más frecuentes de infección
bacteriana crónica
• Afecta a toda la población y todas las edades
• Prevalencia aumenta con la edad (50%)
• Países desarrollados infección excepcional en
primer año de vida
• Prevalencia baja en la infancia y aumenta
posteriormente
• Países en desarrollo prevalencia alta ya en primer año
y
afecta a la mayor parte de la población al final de
adolescencia
Epidemiología II
• Incidencia en países desarrollados es de 0,5% por
año en población susceptible vs 3-10% por año
en países en desarrollo (1)
• En los países en desarrollo 70% niños infectados
a los 15 años vs 10% a los 10 años en países
desarrollados (2)
(1) J Pediatrc Gastroenterol Nutr, Vol 31, No. 5, Nov 2000
(2) J Pediatrc 2005; 146:S21-S26

Prevalencia Helicobacter pylori
60-75% 60%-75%
http:\\www.helico.com
Epidemiología Infección Helicobacter
pylori
Frecuencia
infección n (%)
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
Alta infección n en
la infancia
Paises en desarrollo
Países
desarrollados
20 40 60 80
Evidencia de alta
infección n previa en la infancia
Edad (años)

Familia Helicobacteriacea: géneros
Helicobacter y Wolinella
H. pylori
H. cinaedi
H. fennelliae
Bacilos Gram negativos pequeños , forma de coma
Nutrientes escasos: forma cocoide
Microaerófilos, oxidasa y catalasa positivo
Ureasa positivo (H. pylori)
Móviles (flagelos lofótricos)
Agente etiológico de gastritis, úlceras y adenocarcinoma gástrico
Mecanismos de transmisión de
Helicobacter pylori
• Transmisión persona-persona: oral-oral (saliva y placa
dental)
fecal-oral
• Altas tasas relacionadas con:
– Hacinamiento
– Baja condición socioeconómica
– Malas condiciones sanitarias
– Posible papel del agua y comida contaminadas
• No se conoce reservorio animal
• Se desconoce su período de incubación
J Pediatr 2005;14:S21-S26
J Pediatric Gastroenterol Nutric, Vol. 31,No 5,

Productos bacterianos
1. Ureasa
2. Toxina vacuolizante asociada gen vacA
VacA
3. Citotoxina asociada a gen cagA CagA
4. Otros: babA2 , dupA
– Virulentos: cagA + , babA2 + , vacAs1m1
– Comensales: cagA - , babA2 - , vacAs2m2
Factores de virulencia de H. pylori
Factor
Ureasa
Flagelos
NAP
BabA
LPS
Ag de Lewis x,y
IceA
VacA
cag PAI
CagA
Función
Tamponización del medio
Movilidad
Activación de neutrófilos
Adhesina
Baja toxicidad
Mimetismo molecular
Adhesión
Citotoxicidad
Complejo
parte del cag PAI

Helicobacter pylori:
patología asociada
• Gastritis 100%
• Ulcera GD 10%
• Ca gástrico

Historia natural
H.pylori
semanas/meses
años/décadas
Gastritis atrófica
crónica
Cáncer
gástrico
Linfoma MALT
Gastritis
superfici
al
crónica
Ulcera
péptica
Helicobacter pylori :ubicación

Métodos diagnósticos
INVASIVOS (BIOPSIA)
NO INVASIVOS
DIRECTOS
INDIRECTOS
Métodos diagnósticos
INVASIVOS (BIOPSIA)
NO INVASIVOS
cultivo
técnicas moleculares
DIRECTOS
histología
técnicas moleculares
ag en deposición
INDIRECTOS
ureasa rápida
pba del aliento
serología
acpos en saliva

Biopsia
Naranja de
acridina
Ureasa rápida
PCR
Cultivo
Cultivo
•Macerar biopsia gástrica
•Agar base (Brain heart, Columbia)
•+ sangre o suero
•+ antibióticos
•CO2
•37°C
•7-10 d incubación
•Estudio de susceptibilidad
IDENTIFICACION
•Morfología colonia
•Gram
•Catalasa
•Oxidasa
•Ureasa
•S 98-100%
•E 100%

Test de ureasa
Tecnicas invasivas
VENTAJAS
DESVENTAJAS
Mayor S y E : histología y cultivo Invasivo, especialista, alto costo
Permite biopsia: histología (cáncer)
cultivo (referencia) Falsos negativos, lento, engorroso
• estudio susceptibilidad
• factores de virulencia Epidemiología
técnica
Alto costo, falsos negativos
moleculares
test de ureasa Falsos negativos, positivos
rápida

Técnicas no invasivas
Test de urea espirada
Serología ELISA (IgG)
Acpos en orina y saliva
VENTAJAS
Alta S y E
Permite control post tto
Alta S y E adultos
Dg en sangramiento
Util en tto con IBP/Atb
Util en gastritis atrófica
Epidemiología
DESVENTAJAS
Engorrosa/ cara
Inútil en control de tto
Baja respuesta en niños
Validación local cutoff
Rx cruzada
Campylobacter
No bien validado
Antígeno en
deposiciones
Rápido
Adecuada S y E
(monoclonal)
Util en control
erradicación
Policlonales baja S y E
Test de úrea en aire espirado
• La urea marcada con C 13 , es administrada al paciente vo
• Urea será hidrolizada por la ureasa y producirá amonio y
bicarbonato que se exhalará como CO 2 marcado
• El del 13C en la respiración se expresa como
diferencia entre el cuociente 13C/12C antes de la
administración de la urea (valor basal) y 20 min
después.
• D 13CO2 igual o superior a 2,5 (‰), el paciente se
considera infectado por H. pylori
• Puede usarse en niños y embarazadas
• S 98-100% E 98-100

Serología
• Más empleado ELISA
• Detección de IgM
• Muestras de sangre
• Saliva, orina no validados
• Puntos de corte validados para cada región
• Falsos negativos en reinfecciones
• Falsos positivos Campylobacter
• Anticuerpos + meses hasta 1 año post
erradicación
• S 95-98% E 88-92 %
Antígenos en deposición
• Test con anticuerpos monoclonales mejor
rendimiento
• Ideal para control de erradicación
• Sensibilidad: 89% Especificidad: 95%

Antígeno Hp en deposiciones
(monoclonal)

Antígeno de Hp en deposición
Rev. méd. Chile v.130 n.1 Santiago ene. 2002
Métodos diagnósticos para la detección H. pylori
Rev. chil.
pediatr. v.76 n.3 Santiago jun. 2005

PCR en deposición
Diagnóstico
• Adulto > 45 años sintomático:
Endoscopía-biopsia-test de ureasa-estudio
histológico (escencial)
• Adulto dispepsia < 45 años : “ test and treat ”
Test de urea en aire espirado
Ag en deposiciones (Acpo monoclonal)
Serología (pacientes con inh bomba protones)

Diagnóstico
• Niños: poca inflamación
poca respuesta de anticuerpos
muy raro lesiones premalignas
Dolor abdominal recurrente + alteración
crecimiento déficit de Fe: endoscopía más Bp
Test de urea en aire espirado: >10 años
Antígeno en deposición (Acpo. monoclonal)
Serología: >10 años
Helicobacter pylori
Curación
Ausencia de microorganismo
por pruebas realizadas luego de 4 semanas
completado del tratamiento antibiótico

Tratamiento Helicobacter pylori
• Antibióticos
– Amoxicilina
– Tetraciclina
– Metronidazol
– Claritromicina
• Antisecretores
– Bismuto
– Inhibidores ATP
asa H+/K+
– Antagonistas
receptores H2
Resistencia antimicrobianos
Rev. méd.
Chile v.135 n.3 Santiago mar. 2007

Resistencia antimicrobianos
Rev. méd.
Chile v.129 n.6 Santiago jun. 2001
Carlos González C 1 , Apolinaria García C 1 ,
Fabiola Daroch M 2 , Fernando Kawaguchi P, Henry Solar R 3 ,
Nancy Rivera F 4 y Edith Vega C 5
Vacuna: varios candidatos para antígenos
• Estar expuestos en la superficie de la bacteria
• Ser atacados fácilmente por la respuesta inmune
• Abundantes y con alta capacidad inmunogénica
• Conservados en todas las cepas
• Representar factores de virulencia

Vacunas de células totales
inactivadas
Individuos infectados y no
infectados
Aumento significativo en los AC
IgA en heces y saliva
en los dos grupos
No se obtuvo erradicación
en el grupo de infectados
APROBADA FDA,2003 PARA NUEVOS ENSAYOS
Kotloff et al.
Infect Immun.2001,69:3581-3590
Vacunas con otros factores de virulencia
CagA, VacA,
NAP
Hidróxido de aluminio
como adyuvante
Ensayada en individuos no
infectados
Se produce respuesta de anticuerpos tras meses
después de la administración
Malfertheiner et al.
Gastroent, 2002,122:A585

Muchas gracias