testosterone ria ct ref ks24ct - Radim S.p.A.

TESTOSTERONE
REF KS24CT
Italiano p. 3
English p. 8
Deutsh S. 13
Français p. 18
Español p. 23
RIA CT
100
M104 - Rev.10 – 09/2007

Reagenti del Kit - Kit Reagents - Kit Reagenzien - Reactifs de la Trousse - Reactivos del
Kit.
Reag, Reac Quant, Cant Stato fisico, Physical state, Aggregatzustand,
État physique, Estado fisico.
CT
100
(4 x 25)
Pronte per l'uso, Ready for use,
Gebrauchsfertig, Prêt à l'emploi, Listo para el
uso.
CAL
1 x 2 mL
5 x 1.5 mL
Pronti per l'uso, Ready for use,
Gebrauchsfertig, Prêt à l'emploi, Listo para el
uso.
CONJ I 125 Pronto per l'uso, Ready for use,
1 x 50 mL Gebrauchsfertig, Prêt à l'emploi, Listo para el
uso.
CTR
1 x 2 mL Liof, Lyoph
"Le Istruzioni per l'uso tradotte nelle altre lingue di interesse sono consultabili sul sito Internet all'indirizzo
www.radim.com".
“The instructions for use available in the other languages of interest can be viewed on our website
www.radim.com".
“Οι οδηγίες χρήσης μεταφρασμένες στις άλλες ενδιαφερόμενες γλώσσες όπως επίσης στην ηλεκτρονική
διεύθυνση www.radim.com".
“In den anderen Sprachen von Interesse ist die Bedienungsanleitung kann auf der Website unter der
Adresse www.radim.com konsultiertwerden”.
"Le mode d’emploi dans les autres langues intéressées est consultable sur le site Internet à l'adresse
www.radim.com”.
“Las instrucciones de uso traducidas en los otros idiomas de interés se pueden consultar en nuestro
sitio Internet www.radim.com”.
"As instruções de uso traduzidas nos outros idiomas de interesse podem ser consultadas no nosso site
Internet, ao endereço www.radim.com"
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DOSAGGIO RADIOIMMUNOLOGICO PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DEL
TESTOSTERONE NEL SIERO UMANO
PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO
APPLICAZIONI CLINICHE
Il Testosterone è uno steroide androgeno a 19 atomi di carbonio di peso molecolare 288.4. E'
sintetizzato dalla zona interstiziale del testicolo, precisamente dalle cellule di Leydig a partire da Δ5-
Pregnenolone e dal Progesterone seguendo le due vie biosintetiche Δ4 e Δ5. A livello testicolare sembra
essere preferita la via Δ5. Una piccola parte è prodotta dalla zona reticolare del corticosurrene ed ha
come precursori il Δ4-Androstenedione ed il DEA. Nel sangue l'ormone è veicolato da una betaglobulina.
Circa il 97- 99 % del Testosterone circolante è legato alla proteina vettrice; il rimanente, libero, è
considerato metabolicamente attivo. E' escreto come glucuronato oppure trasformato in Δ4-
Androstenedione che subisce ulteriori processi metabolici. I suoi principali cataboliti sono l'Androsterone,
l'Etiocolanolone e l'Epiandrosterone. Può inoltre trasformarsi in Epitestosterone, importante catabolita
agente sull'ipotalamo ed in Diidrotestosterone (DHT) ad opera di una 5-α-reduttasi. Il DHT è più attivo
del Testosterone a livello delle cellule bersaglio.
Il Testosterone determina le caratteristiche modificazioni dei diversi stadi puberali stimolando lo sviluppo
dei caratteri sessuali secondari (voce, statura, apparato pilifero) ed agendo sul pene, scroto, vescicole
seminali e prostata. Aumenta la sintesi proteica, positivizza il bilancio di azoto, fosforo e potassio,
stimola l'epitelio germinativo del follicolo pilifero. Agisce nella differenziazione del comportamento
sessuale e mantiene la normale spermatogenesi.
Esiste inoltre un meccanismo di feedback negativo con le strutture ipotalamo-ipofisarie svolgentesi sulle
gonadotropine FSH e LH. Nell'uomo è importante valutare la concentrazione del Testosterone in caso di:
ipogonadismo, neoplasie testicolari, sindrome di Klinefelter.
Nella donna lo valutiamo in caso di: neoplasie ovariche, ipertricosi, sindrome di Stein-Leventhal.
PRINCIPIO DEL METODO
Il presente metodo analitico consiste in una competizione che si instaura tra antigene marcato
(coniugato radioattivo) ed antigene non marcato (calibratore, campione) a legarsi ad un numero limitato
di siti leganti specifici sull'antisiero adeso alle provette. Dopo l'incubazione il liquido contenuto nelle
provette viene eliminato mediante aspirazione, e le provette contate in un gamma counter.
REAGENTI CONTENUTI NEL KIT: PREPARAZIONE E STABILITA'
− I reagenti sono sufficienti per 100 tubi.
− Il kit deve essere conservato a 2 -8°C.
− La data di scadenza di ciascun reagente é indicata sulla rispettiva etichetta.
CT Provette Sensibilizzate: 100 provette (4x25) sensibilizzate con anticorpo policlonale anti-
Testosterone (coniglio). Le provette non utilizzate devono essere riposte nella loro custodia a 2-8°C,
accuratamente richiusa.
CAL Calibratori: 6 flaconi di Testosterone in matrice sierica: 1 flacone di Zero Calibratore (2 mL) e 5
flaconi (1.5 mL) alle seguenti concentrazioni: 0.25, 0.5, 1.5, 6.0 e 15.0 ng/mL. Pronti per l'uso.
Conversione: 1 ng/mL = 3.467 nmol/L. Conservante: NaN3 (< 0.1%).
N.B.: verificare sempre l'esatta concentrazione sul foglio di C.Q.
CONJ I 125 Coniugato Radioattivo: 1 flacone (50 mL) di Testosterone- 125 I in tampone fosfato e
proteine. Contenuto di radioattività: 77.7 KBq. Pronto per l'uso e colorato in rosso. Conservante: NaN3
(

MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO
− Provette in plastica monouso (12x75 mm).
− Portaprovette.
− Micropipette automatiche a punte intercambiabili a volume variabile.
− Vortex.
− Bagno termostatato a 37°C.
− Pompa aspirante oppure apparecchiatura automatica equivalente.
− Contatore gamma a scintillazione.
− Carta logit-log o semilogaritmica.
− H2O distillata.
MATERIALE RADIOATTIVO
Radionuclide presente: I 125
INFORMATIVA (D.Lgs. 230/95 – D.Lgs. 241/00 art. 19) E NORME DI SICUREZZA E PREVENZIONE
Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le seguenti norme:
− Non mescolare reagenti di lotti differenti.
− Non usare i reagenti dopo la data di scadenza.
− Non esporre i reattivi e i campioni a calore intenso o a forti sorgenti di inquinamento.
− Usare vetreria perfettamente pulita ed esente da contaminazioni di ioni metallici o sostanze
ossidanti.
− Usare acqua distillata o deionizzata, conservata in recipienti perfettamente puliti.
− Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni; a tal fine è consigliabile usare pipette con
puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo.
− Non modificare in alcun modo il Procedimento Operativo di esecuzione del test. Eventuale non
rispetto di:
• sequenza e quantità nell’aggiunta dei reattivi
• tempi e temperatura di incubazione
può dare luogo a risultati clinici errati.
− Ricostituire gli eventuali reagenti liofili secondo le modalità descritte sulle etichette. Eventuale
utilizzo di reattivi o volumi non idonei, può provocare l’ottenimento di dati clinici non attendibili.
− In caso di procedura manuale è importante l’utilizzo di pipette calibrate e possedere un’adeguata
manualità tecnica. In particolare è essenziale una buona precisione nella preparazione e
dispensazione dei reattivi. E’ necessario un adeguato piano di manutenzione (pulizia e calibrazione)
di tale strumentazione.
− Accertarsi che tutta la strumentazione usata (vetreria, bagno termostatato, agitatore e lavatore,
contatore gamma, frigoriferi usati per la conservazione dei kit e dei campioni) sia perfettamente
funzionante, adeguatamente calibrata e sia soggetta ad un regolare piano di manutenzione. Un
uso non accurato di ognuno di questi strumenti può produrre errori metodologici che possono
condizionare la riproducibilità e l’affidabilità dei risultati ottenuti.
− Utilizzare un adeguato metodo per la corretta identificazione dei campioni. Possibili conseguenze
possono essere sia la perdita di specificità del dispositivo che risultati analitici errati.
Con lo scopo di ridurre i rischi di tipo fisico, biologico e chimico, è necessario osservare le
seguenti norme di sicurezza:
− Utilizzare dispositivi di protezione individuale (es.: guanti monouso, camice, ecc.) durante la
manipolazione di materiale radioattivo e/o potenzialmente infetto e durante il dosaggio.
− Non pipettare i reagenti con la bocca.
− Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio.
− La manipolazione di sostanze radioattive deve essere eseguita in aree specificamente predisposte.
− Le sostanze radioattive devono essere conservate nei loro contenitori originali in un’area
specificamente predisposta.
− E’ necessario compilare un registro che indichi dettagliatamente l’ingresso, la conservazione e
l’eliminazione di tutto il materiale radioattivo ricevuto.
− E’ necessario eliminare immediatamente qualunque contaminazione radioattiva secondo le
procedure stabilite.
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− I materiali di origine umana utilizzati nella preparazione del presente kit sono stati saggiati per la
presenza di HBsAg, anti-HIV e anti-HCV e sono risultati ripetutamente negativi. Comunque nessun
test attualmente disponibile garantisce l'assenza degli agenti virali responsabili della sindrome da
immunodeficienza acquisita, dell'epatite B ed epatite C. Tutti i reagenti contenenti materiale
biologico e tutti i campioni di siero umano devono essere considerati potenzialmente infettivi.
− Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; qualora ciò si verificasse ripulire
accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la
pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità
opportune.
− La sodio azide contenuta come conservante in alcuni reagenti, può reagire con il piombo ed il rame
delle tubature formando azidi di metallo altamente esplosive. Per evitare la formazione e l'accumulo
di tali composti far scorrere abbondante acqua sui reagenti eliminati.
− Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del 05.02.97, che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE,
91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono
classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER 180103 (rifiuti infetti o
potenzialmente infetti); devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo
smaltimento.
− Tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni con radioisotopi devono essere smaltiti affidandoli a ditte
autorizzate al ritiro in accordo a quanto previsto nel D.Lgs. 241/2000.
− L'acquisto, la detenzione, l'impiego e lo smaltimento di materiale radioattivo (sia solido che liquido)
sono soggetti alle disposizioni locali previste dalle autorità legislative.
� La quantità di radioattività alla data di riferimento è specificata nell’etichetta esterna del kit.
RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
Il dosaggio può essere effettuato su siero. I campioni fortemente lipemici od emolizzati devono essere
scartati. I campioni possono essere conservati a 2 -8°C per 1-2 giorni; per periodi più lunghi conservarli
a -20°C. Assicurarsi pertanto che i campioni siano perfettamente limpidi prima di dosarli. Si consiglia di
non congelare e scongelare ripetutamente i campioni.
PROCEDIMENTO OPERATIVO
− Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente.
− Agitare i campioni per inversione prima dell'uso.
1 - Preparare le provette non sensibilizzate per l'Attività Totale (T) e per il Legame aspecifico (NSB) e
provette sensibilizzate per Zero Calibratore (Bo), Calibratori (1-5), Siero di Controllo e Campioni.
2 - Dispensare 100 µl di ciascun Calibratore, del Siero di Controllo e dei Campioni nelle rispettive
provette.
3 - Dispensare nelle provette del legame aspecifico (NSB) 100 µl del Calibratore a concentrazione
zero.
4 - Dispensare 500 µl di Coniugato Radioattivo in tutte le provette.
5 - Agitare su vortex.
6 - Incubare per 60 minuti a 37°C.
7 - Aspirare accuratamente la miscela d'incubazione da tutte le provette, eccetto quelle dell'attività
totale, mediante pompa aspirante oppure decantare asciugando il bordo delle provette su carta
bibula.
8 - Misurare la radioattività presente nelle provette in un contatore gamma per 1 minuto. Si
raccomanda di controllare il fondo dello strumento prima di effettuare il conteggio. Per non variare
la sensibilità del sistema é necessario che il fondo sia ridotto al minimo oppure opportunamente
corretto.
SCHEMA DEL DOSAGGIO: vedi p. 31
CALCOLO DEI RISULTATI
Cpm Bo - Cpm NSB
Capacità legante % = --------------------------- x 100
Cpm T - Cpm NSB
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Percentuale di legame per i Calibratori, Controlli, Campioni =
B Cpm Calibratori o Campioni - Cpm NSB
----- % = ---------------------------------------------------- x 100
Bo Cpm Bo - Cpm NSB
Tracciare la curva di taratura su carta logit-log o semi-log, ponendo sull'asse delle ascisse le dosi dei
calibratori e su quello delle ordinate il rapporto B/Bo % relativo ad ogni dose dei calibratori. Calcolare le
percentuali relative ad ogni campione ed interpolarle sulla curva di taratura per ottenere la
concentrazione di Testosterone presente nei campioni in esame, espressa in ng/mL.
ESEMPIO DI CALCOLO
I valori sotto riportati devono essere considerati unicamente un esempio e non devono essere utilizzati
in luogo dei dati sperimentali.
Descrizione cpm B/Bo% B/T % Testosterone
Attività Totale (T) 38475
Legame Aspecifico (NSB) 160 0.41
Calibratore 0.0 ng/mL 15788 41.2
Calibratore 0.25 ng/mL 12734 80.6
Calibratore 0.5 ng/mL 11367 71.9
Calibratore 1.5 ng/mL 8729 55.2
Calibratore 6.0 ng/mL 4924 30.5
Calibratore 15.0 ng/mL 3061 19.3
Campione 9788 62.0 1.0 ng/mL
VALORI NORMALI
I valori riportati nella tabella seguente sono soltanto indicativi. Si raccomanda a ciascun laboratorio di
stabilire i propri intervalli di riferimento.
Donna 0.1 - 1.0 ng/mL
Uomo 2.5 - 8.5 ng/mL
Bambino 0.0 - 0.3 ng/mL
Conversione: 1 ng/mL = 3.467 nmol/L.
CRITERI DI ACCETTAZIONE
Prima di procedere al calcolo dei risultati, verificare che la concentrazione del siero di controllo rientri nel
range di accettazione descritto nel Foglio di Controllo Qualità.
CARATTERISTICHE METODOLOGICHE
SPECIFICITÀ
Il presente metodo analitico ha mostrato le seguenti reazioni crociate: 100% con Testosterone, 5.6% con
5-α-Diidrotestosterone, 3.8% con 1,(5α)-Androsten-17-β-ol-3one, 2.6% con 19-Idrossi-Androstenedione,
1.6% con Androstenedione e inferiore allo 0.1% con Androstenediolo, SHBG, Danazolo, Estrone, DHEA-
S, Estradiolo, 5-α-Androstan-3α-ol-17one e 5-β-Androstan-17 α -ol 3one.
La percentuale di interferenza é calcolata utilizzando la formula di Abraham : X/Y x 100 dove X e Y sono
rispettivamente il peso della sostanza da dosare ed il peso della sostanza interferente tali da ridurre la
capacità legante del 50 %.
SENSIBILITÀ
La sensibilità é la dose più bassa di Testosterone in grado di abbassare del 5% la capacità legante
iniziale. Tale dose é risultata pari a 0.017 ng/mL.
PRECISIONE
La precisione é stata valutata misurando la variabilità intra-saggio ed inter-saggio su 3 sieri a differenti
concentrazioni di Testosterone.
Intra-saggio (Ripetibilità)
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Siero Media ± D.S. C.V. Replicati
(ng/mL) % n.
a 0.53 ± 0.0327 6.1 10
b 0.91 ± 0.0356 3.9 10
c 4.45 ± 0.0685 1.5 10
Inter-saggio (Riproducibilità)
Siero Media ± D.S. C.V. Dosaggi
(ng/mL) % n.
a 0.425 ± 0.04 9.3 10
b 1.65 ± 0.15 9.0 10
c 4.47 ± 0.35 7.8 10
ACCURATEZZA
L'accuratezza del metodo é stata valutata mediante il test di recupero ed il test di parallelismo:
Test di Recupero
Quantità scalari di Testosterone sono state aggiunte ad un pool di sieri normali e dosate.
Aggiunto Atteso Misurato Recupero
(ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) %
P ---- 0.43 ----
P + 0.1 0.53 0.50 94.3
P + 0.5 0.93 0.86 92.4
P + 1.0 1.43 1.40 97.4
P + 2.0 2.43 2.3 94.6
P + 4.0 4.43 4.15 93.6
P + 7.0 7.43 7.0 94.2
Test di Parallelismo
Due sieri ad elevato contenuto di Testosterone sono stati dosati a varie diluizioni effettuate con lo Zero
Calibratore.
Diluizione Atteso Misurato
(ng/mL) (ng/mL)
S1 indiluito ---- 4.30
1:2 2.15 2.25
1:4 1.07 1.21
1:8 0.54 0.63
1:16 0.27 0.28
S2 indiluito ---- 8.60
1:2 4.30 4.35
1:4 2.15 2.35
1:8 1.07 1.05
1:16 0.53 0.53
LIMITI DEL DOSAGGIO
I risultati del dosaggio devono essere interpretati con cautela e convalidati da valutazioni cliniche ed
ulteriori prove diagnostiche
LEGENDA SIMBOLI: vedi p. 28
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RADIOIMMUNOASSAY FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF TESTOSTERONE IN HUMAN
SERUM
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY
CLINICAL APPLICATIONS
Testosterone (M.W.: 288.4) is an androgen steroid of 19 carbon atoms. Mainly, it is synthesized in the
testes by Leydig interstitial cells, from 5-pregnenolone and progesterone, by following both Δ4 and Δ5
metabolic pathways. The Δ5 pathway seems to be predominant in the testes. A small amount is
produced by the reticular adrenal cortex, with Δ4-Androstenedione and DHEA as precursors. In the
blood it is carried by a beta-globulin. About 97-99% of circulating testosterone is bound to this carrier
protein; the remaining free fraction is considered to be biologically active. It is then excreted in the form
of glucuronides or else converted into Δ4-androstenedione which is then further metabolized, the main
catabolites being androsterone, etiocholanolone and epiandrosterone. It can also turn into
epitestosterone, an important catabolite acting on the hypothalamus as well as dihydrotestosterone
(DHT), by a 5-α-reductase. DHT is more potent than testosterone on target cells.
Testosterone determines the changes which are typical in the various pubertal stages, by stimulating the
development of the secondary sexual features (voice, height, body hair). It also acts on the penis,
scrotum, seminal vesicles and prostate. It enhances protein synthesis, makes the nitrogen, phosphorus
as well as potassium balance positive and stimulates the germinal epithelium of hair follicles. It is
involved in the differentiation of sexual behavior and regulates normal spermatogenesis. Moreover there
is a hypothalamic-pituitary negative feedback mechanism working on FSH and LH gonadotropins.
In males, testosterone levels are evaluated in cases of: hypogonadism, testicular neoplasia and
Klinefelter syndrome.
In females, testosterone levels are significant in cases of: ovarian neoplasia, hypertrichosis and Stein-
Leventhal syndrome.
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The present method is based on a competition between labeled antigens (radioactive conjugate) and
non-labeled antigens (calibrators, samples) for binding to a number of specific sites of the antiserum
coated tubes. After the incubation, the liquid in the tubes is removed by aspiration and the radioactivity is
measured in a gamma counter.
REAGENTS PROVIDED WITH THE KIT: PREPARATION AND STABILITY
− The reagents are sufficient for 100 tubes.
− Store the kit at 2-8°C.
− The expiry date of each reagent is shown on the vial label.
CT Coated Tubes: 100 tubes (4x25) coated with rabbit polyclonal anti-Testosterone antibody. Unused
tubes should be stored at 2-8°C in the appropriate bag and accurately sealed.
CAL Calibrators: 6 vials of Testosterone in serum matrix: 1 vial of Zero Calibrator (2 mL) and 5 vials
(1.5 mL) at the following concentrations: 0.25, 0.5, 1.5, 6.0 and 15.0 ng/mL. Ready for use. Conversion:
1 ng/mL = 3.467 nmol/L. Preservative: NaN3 (< 0.1%).
NOTE: refer to the C.Q. sheet, for exact concentrations.
CONJ I 125 Radioactive Conjugate: 1 vial (50 mL) of 125 I-Testosterone in phosphate and protein buffer.
Radioactivity contents: 77.7 KBq. Ready for use and red colored. Preservative: NaN3 (< 0.1%).
CTR Control Serum: 1 vial of Testosterone in animal serum. Preservative: Thimerosal (< 0.05%).
Lyophilized. Reconstitute with 2 mL of distilled H2O. After reconstitution, store at 2-8°C for 2 weeks; for
longer periods freeze at -20°C.
NOTE: refer to the C.Q. sheet, for exact concentrations.
MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
− Plastic test tubes (12 x 75 mm).
− Test tube racks.
− Adjustable, automatic micropipettes with disposable tips.
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− Vortex mixer.
− Water-bath, adjustable at 37°C.
− Aspiration pump or automated tube washing device.
− Scintillation gamma counter.
− Logit-log or semi-log graph paper.
− Distilled H2O.
RADIOACTIVE MATERIAL
Radionuclide: 125 I
ITALIAN DECREES (D.Lgs. 230/95 – D.Lgs. 241/00 art. 19) AND RULES OF PREVENTION AND
SECURITY
In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must be observed:
− Do not mix reagents of different lots.
− Do not use reagents beyond their expiry date.
− Do not store or leave reagents and samples at high temperatures or areas of possible
contamination.
− Use thoroughly clean glassware, free from metal ion contamination or oxidizing substances.
− Use distilled or deionized water, stored in perfectly clean containers.
− Carefully avoid any contamination among samples; for this purpose, disposable tips should be used
for each sample and reagent.
− Do not modify the "Assay Procedure", in any way. Altering:
• volume of reagent added
• exact temperature and incubation times
may cause incorrect clinical results.
− Reconstitute lyophilized reagents, if present, as described on the relative labels. Any deviation in
reagent use or wrong volumes, may affect the reliability of results obtained.
− In case of manual procedure, it is important to use calibrated pipettes and have appropriate technical
manuals. Primary importance is a good precision preparing and dispensing the reagents. Ensure
that all the equipment used is in perfect working order, has been correctly calibrated and is regularly
maintained.
− Ensure that all the equipment used (glassware, incubators, shakers, tube washers, gamma counter
and fridge/freezers used for reagent and sample storage) is in perfect working order, has been
correctly calibrated and is regularly maintained. Any deviation from the correct use of the equipment
listed can produce errors in the methodology, this may affect the reproducibility and reliability of
results obtained.
− Utilise a suitable method for the correct identification of patient samples. Incorrect identification may
cause a specificity losses of the system and wrong clinical results.
In order to reduce physical, biological and chemical risks, the following precautions must be
observed:
− Use protective individual articles (ex.: disposable gloves, lab coats, etc.) while handling radioactive
materials and/or potentially infectious material as well as during the assay.
− Do not pipette reagents by mouth.
− Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay.
− All radiological work should be done in a designated area.
− Radioactive materials should be stored in their original container in a designated area.
− A record book for logging receipt and disposal of all radioactive materials should be kept.
− Any radioactive spills should be taken care of immediately in accordance with established
procedures.
− All material of human origin used for the preparation of this kit was tested negative for HBsAg, anti-
HIV and anti-HCV. Since no test at present can guarantee complete absence of these viruses, all
samples and reagents containing biological material used for the assay must be considered
potentially infectious.
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− Avoid splashing and aerosol formation; in such cases, carefully wash with a 3% sodium
hypochlorite solution. Any cleaning material used for that purpose must be treated as potentially
infectious and disposed accordingly.
− The sodium azide used as preservative in some reagents may react with lead and copper
plumbing; to prevent build-up of explosive metal azides, the reagents should be discarded by
flushing the drain with large amounts of water.
− According to Italian decree D.L. no. 22 dated 05.02.97, in compliance with EEC directives
(91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), all waste products originating from either manual and/or
automated processing are classified as hazardous special waste material (European classification
code 180103, infectious waste or potentially infectious waste). As such, they must be eliminated
(by) delegating them to special enterprises (companies), qualified for waste collection and disposal.
− All radioactive waste originating from either manual and/or automated processing, must be
eliminated delegating them to special enterprises, qualified for waste collection and disposal,
according to D.Lgs.241/2000.
− Acquisition, storage, use and disposal of radioactive material (liquid and solid) are subjected to
regulation and ordination of local authorities.
� Radioactivity contents to the reference date is shown on the kit external label.
SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION
The assay can be performed in serum samples. Highly lipemic or hemolyzed samples must be
discarded. Keep samples at 2-8°C for 1-2 days; for longer periods it is advisable to freeze samples at -
20°C. Make sure that samples are always perfectly clear before testing. Repeated freezing and thawing
of samples should be avoided.
ASSAY PROCEDURE
− Allow reagents and samples to warm up at room temperature.
− Mix samples by inversion before use.
1 - Prepare coated tubes for: Zero Calibrator (Bo), Calibrators (1-5), Control Serum and Samples. Use
uncoated tubes for Total Activity (T) and Non-specific Binding (NSB).
2 - Pipette 100 µl of each Calibrator, Control Serum and Sample into the corresponding tubes.
3 - Pipette 100 µl of the Zero Calibrator into the Non-specific Binding (NSB) tubes.
4 - Add 500 µl of Radioactive Conjugate into all tubes.
5 - Mix on vortex.
6 - Incubate for 60 minutes at 37°C.
7 - Carefully aspirate the incubation mixture from all tubes, except those for total activity, with a
vacuum pump or decant by drying the edges of the tubes with blot-paper.
8 - Count the radioactivity in the tubes for 1 minute by using a gamma counter. We suggest to check
the background of the instrument before counting the assay. In order to avoid variations in the
sensitivity of the system, the background should be reduced to a minimum or adjusted properly.
ASSAY SCHEME: see p. 31
CALCULATION OF RESULTS
Bo Cpm - NSB Cpm
Binding Capacity % = ------------------------------- x 100
T Cpm - NSB Cpm
Percent binding for calibrators, controls and samples =
B Calibrators or Samples Cpm - NSB Cpm
-----% = ----------------------------------------------------- x 100
Bo Bo Cpm - NSB Cpm
Draw a calibration curve on logit-log or semi-log graph paper, by plotting the B/Bo% of each calibrator (yaxis)
against the relative concentration (x-axis).
Calculate the B/Bo% for each sample and read the concentration by interpolating on the calibration
curve in order to obtain the Testosterone concentration in the tested samples, expressed in ng/mL.
EXAMPLE OF CALCULATION
KS24CT TESTOSTERONE RIA CT
M104 - Rev.10 – 09/2007 - Pag. 10/32

The values shown below must be considered as an example and must not be used in place of
experimental data.
Description cpm B/Bo% B/T % Testosterone
Total Activity (T) 38475
Non-specific binding (NSB) 160 0.41
Calibrator 0.0 ng/mL 15788 41.2
Calibrator 0.25 ng/mL 12734 80.6
Calibrator 0.5 ng/mL 11367 71.9
Calibrator 1.5 ng/mL 8729 55.2
Calibrator 6.0 ng/mL 4924 30.5
Calibrator 15.0 ng/mL 3061 19.3
Sample 9788 62.0 1.0 ng/mL
NORMAL VALUES
The values reported below are indicative. We suggest that each laboratory establishes its own normal
range.
Women 0.1 - 1.0 ng/mL
Men 2.5 - 8.5 ng/mL
Children 0.0 - 0.3 ng/mL
Conversion: 1 ng/mL = 3.467 nmol/L.
VALIDATION CRITERIA
Before proceeding to calculation of results, make sure the control serum concentration is included within
the value described on the Quality Control Sheet.
PERFORMANCES OF THE ASSAY
SPECIFICITY
The present method has shown the following cross-reactions: 100% with Testosterone, 5.6% with 5-α-
Dihydrotestosterone, 3.8% with 1, (5α)-Androsten-17 β-ol-3one, 2.6% with 19-Hydroxy-
Androstenedione, 1.6% with Androstenedione and lower than 0.1% with Androstenediol, SHBG,
Danazol, Estrone, DHEA-S, Estradiol, 5-α-Androstane-3 α -ol-17one and 5-β -Androstane- 17 α -ol
3one. The percentage of cross-reactivity is calculated by using the Abraham formula: X/Y x 100, X and Y
being the weight of the substance to be tested and the weight of the cross-reacting substance
respectively, both able to reduce the binding capacity by 50%.
SENSITIVITY
The sensitivity is the lowest dose of Testosterone capable of reducing the initial binding capacity by 5%.
This dose is 0.017 ng/mL.
PRECISION
Precision was evaluated upon intra- and inter-assay variability, in 3 sera at different Testosterone
concentrations.
Intra-assay (Repeatability)
Serum Mean ± S.D. C.V. Replicates
(ng/mL) % no.
a 0.53 ± 0.0327 6.1 10
b 0.91 ± 0.0356 3.9 10
c 4.45 ± 0.0685 1.5 10
Inter-assay (Reproducibility)
Serum Mean ± S.D. C.V. Assays
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(ng/mL) % no.
a 0.425 ± 0.04 9.3 10
b 1.65 ± 0.15 9.0 10
c 4.47 ± 0.35 7.8 10
ACCURACY
Accuracy of the method has been checked by recovery and parallelism tests:
Recovery Test
Know amounts of Testosterone have been added to a pool of normal sera and tested.
Added Expected Measured Recovery
(ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) %
P ---- 0.43 ----
P + 0.1 0.53 0.50 94.3
P + 0.5 0.93 0.86 92.4
P + 1.0 1.43 1.40 97.4
P + 2.0 2.43 2.3 94.6
P + 4.0 4.43 4.15 93.6
P + 7.0 7.43 7.0 94.2
Parallelism Test
Two sera with high Testosterone concentration were tested at different dilutions with the Zero Calibrator.
Dilution Expected Measured
(ng/mL) (ng/mL)
S1 undiluted ---- 4.30
1:2 2.15 2.25
1:4 1.07 1.21
1:8 0.54 0.63
1:16 0.27 0.28
S2 undiluted ---- 8.60
1:2 4.30 4.35
1:4 2.15 2.35
1:8 1.07 1.05
1:16 0.53 0.53
LIMITS OF THE ASSAY
The results of the assay must be carefully interpreted and confirmed by clinical evaluations and further
diagnostic tests.
SYMBOLS LEGEND: see p. 28
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RADIO-IMMUNASSAY ZUR QUANTITATIVEN BESTIMMUNG DES TESTOSTERONS IN HUMANEM
SERUM
Für den Gebrauch in der IN-VITRO-DIAGNOSTIK
KLINISCHE ANWENDUNG
Das Testosteron ist ein androgenes Steroid, bestehend aus 19 Kohlenstoffatomen mit einem
Molekulargewicht von 288.4. Es wird im interstitiellen Bindegewebe der Hoden, und zwar in den
Leydig'schen Zwischenzellen ausgehend von Δ5-Pregnenolon und Progesteron über die
Biosynthesewege Δ4 und Δ5 synthetisiert, wobei auf testikulärer Ebene die Synthese vorwiegend über
Δ5 erfolgt. Ein kleiner Teil des Testosterons wird in der Zone reticularis der NNR gebildet und hat als
Vorläufer das Δ4-Androstendion und das DEA. Der Transport im Blut erfolgt durch ein Betaglobulin. Ca.
97-99 % des zirkulierenden Testosterons sind an das Trägerprotein gebunden, der Rest ist frei und stellt
die stoffwechselaktive Hormonfunktion dar. Testosteron wird entweder als Glukuronat ausgeschieden
oder in Δ4-Androstendion umgewandelt, das wiederum anderen Stoffwechselprozessen unterliegt. Die
wichtigsten Abbauprodukte des Testosterons sind Androsteron, Aetiocholanolon und Epiandrosteron.
Außerdem kann eine Umwandlung in Epitestosteron, einen wichtigen Kataboliten mit Wirkung auf den
Hypothalamus, sowie durch die 5-α-Reduktase in Dihydrotestosteron (DHT) erfolgen. Das
Dihydrotestosteron weist an den Zielzellen eine größere Aktivität als Testosteron auf. Testosteron ist
verantwortlich für die typischen Veränderungen in den verschiedenen Stadien der Pubertät, indem es die
Entwicklung der sekundären Geschlechtsmerkmale (Stimme, Körperbau, Körperbehaarung) fördert und
einen Einfluß auf Penis, Skrotum, Samenblasen und Prostata ausübt. Es erhöht die Proteinsynthese,
führt zu einer positiven Stickstoff-, Phosphor- u. Schwefelbilanz und stimuliert das Keimepithel der
Haarfollikel. Es wirkt weiterhin an der Differenzierung des Sexualverhaltens mit und hält die normale
Spermiogenese in Gang. Außerdem besteht der Mechanismus eines negativen Feedbacks zwischen
Testosteron und den Strukturen des Hypothalamus und der Hypophyse mit Einfluß auf die
Gonadotropine LH und FSH. Eine Bestimmung der Testosteronkonzentration ist in den folgenden Fällen
von Wichtigkeit:
Beim Mann: Hypogonadismus, Hodentumoren, Klinefelter-Syndrom.
Bei der Frau: Ovarialtumoren, Hypertrichosis, Stein-Leventhal-Syndrom.
TESTPRINZIP
Die vorliegende Analysenmethode beruht auf der Kompetition zwischen dem markierten Antigen
(radioaktiver Konjugat) und dem nicht markierten Antigen (Kalibrator, Proben) um eine beschränkte
Anzahl an Bindungsstellen des auf dem Röhrchen haftenden spezifischen Antiserums. Nach
Inkubationsende wird die ungebundene Fraktion durch Absaugen entfernt. Die in den Röhrchen
verbleibende Radioaktivität wird mit einem Gamma-Zähler gemessen.
INHALT DER TESTPACKUNG: VORBEREITUNG UND STABILITÄT
− Die Reagenzien reichen für 100 Tests.
− Die Testpackung bei 2 -8°C lagern.
− Die Verfallsdaten der einzelnen Reagenzien sind jeweils auf den Flaschenetiketten angegeben.
CT Beschichtete Teströhrchen: 100 (4x25) mit Anti-Testosteron Antikörper (Kaninchen) beschichtete
Teströhrchen. Die nicht verwendeten Teströhrchen müßen in der sorgfältig verschlossenen
Originalpackung bei 2-8°C aufbewahrt werden.
CAL Kalibratoren: 6 Fläschchen enthalten Testosteron in Serummatrix: 1 Fläschchen Nullkalibrator (2
mL) und 5 Fläschchen (1.5 mL) enthalten Testosteron in den folgenden Konzentrationen: 0.25, 0.5, 1.5,
6.0 und 15.0 ng/mL. Gebrauchsfertig. Umrechnungsfaktor: 1 ng/mL = 3,467 nmol/L.
Konservierungsmittel: NaN3 (< 0.1%).
N.B.: die genaue Konzentrierung im C.Q. Blatt immer nachprüfen.
CONJ I 125 Radioaktiver Konjugat: 1 Fläschchen (50 mL) enthält 125 I markiertes Testosteron in
Phosphatpuffer und Proteine. Radioaktivität: 77.7 KBq. Gebrauchsfertig und rot gefärbt.
Konservierungsmittel: NaN3 (

CT Kontrollserum: 1 Fläschchen enthält Testosteron in Tierserum. Konservierungsmittel: Thiomersal
(< 0.05%). Lyophilisiert. Den Inhalt mit 2 mL Reinstwasser lösen. Das gelöste Kontrollserum für 2
Wochen bei 2-8°C lagern, andernfalls bei -20°C tiefgefrieren.
N.B.: die genaue Konzentrierung im C.Q. Blatt immer nachprüfen.
ERFORDERLICHES ZUBEHÖR (nicht mitgeliefert)
− Einmalreagenzröhrchen aus Kunststoff (12x75 mm).
− Teströhrchenhalter.
− Automatische Mikropipette mit Einmalspitzen und variabler Volumeneinstellung.
− Vortex.
− Thermostatbad zu 37°C.
− Absaugpumpe oder gleichwertige automatische Waschvorrichtung.
− Gamma-Szintillationszähler.
− Doppelt logarithmisches oder halb logarithmisches Millimeterpapier.
− Reinstwasser.
RADIOAKTIVES MATERIAL
Radionuclide: I 125
HINWEISE (ital. Verordnung D.Lgs. 230/95 – D.Lgs. 241/00 art. 19) UND NORMEN ÜBER
SICHERHEIT UND VORBEUGUNG
Um korrekte und reproduzierbare Resultate zu erzielen, sind die folgenden Vorschriften
einzuhalten:
− Reagenzien verschiedener Chargen nicht gegeneinander austauschen.
− Reagenzien nicht über das Verfallsdatum hinaus verwenden.
− Nur absolut saubere Glasbehältnisse verwenden, je frei von Metallionen, Verschmutzung oder
anderen oxidierenden Substanzen.
− Reinstwasser nur aus sauberen Glasbehältnissen verwenden.
− Kontamination zwischen den Proben vermeiden; deshalb nur Pipetten mit Einmalspitzen für jede
einzelne Probe und jedes einzelne Reagenz verwenden.
− Inkubationszeiten, gem. „Testdurchführung“, sollten genau beachtet werden.
Um physikalische, biologische und chemische Risiken zu mindern, sollten die folgenden
Sicherheitsnormen beachtet werden:
− Tragen von individueller Schutzbekleidung (z.B.: Einweghandschuhe, Laboranzüge, etc.) im
Umgang mit radioaktivem und/oder potentiell infektiösem Material während des gesamten Testes.
− Niemals mit dem Mund pipettieren.
− Im Labor nicht rauchen, essen, trinken oder schminken.
− Mit radioaktivem Material darf nur in dafür zugelassenen Räumen gearbeitet werden.
− Radioaktives Material sollte in der Originalverpackung nur an dafür bestimmten Plätzen gelagert
werden.
− Über Empfang und Verbrauch radioaktiven Materials ist Buch zu führen.
− Jede Kontamination sofort mit entsprechender Sorgfalt beseitigen.
− Die bei der Herstellung dieses Kits verwendeten Bestandteile humaner Herkunft sind auf das
Vorhandensein der HBsAg, anti-HIV und anti-HCV geprüft worden und sind wiederholt als negativ
bestätigt worden. Allerdings kann keine der derzeit bekannten Testmethoden mit absoluter
Sicherheit das Vorhandensein von Virusaktivitäten ausschliessen, die für AIDS und Hepatitis B und
C verantwortlich sind. Alle Humanserumproben, Reagenzien und die für die Testdurchführung
verwendeten Materialien humaner Herkunft sind daher als potentiell infektiös anzusehen.
− Spritzer und die Bildung von Aerosolen vermeiden: verschüttete Reagenzien mit 3%-iger
Natriumhypochlorit-Lösung entfernen. Das zur Reinigung verwendete Material als potentiell infektiös
behandeln und entsprechend entsorgen.
− Die Testkomponenten enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel. Weil Natriumazid explosives
Blei- oder Kupferazid in Rohrleitungen bilden kann, wird empfohlen, den Abfluss, nach dem
Wegschütten von Substanzen die Natriumazid enthalten, vollständig mit Wasser durchzuspülen.
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− Entsprechend der italienischen Verordnung D.L. n. 22, vom 05.02.97, gem. EWG-Richtlinien
(91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC), sind alle Abfallprodukte, die bei manueller und/oder
automatischer Verarbeitung entstehen, als spezieller, gefährlicher Abfall zu deklarieren. Der
europäischer Zuordnungscode lautet 180103 (infektiöser oder potentiell infektiöser Abfall). Als
solcher muss er gekennzeichnet sein und durch zugelassene Unternehmen beseitigt werden.
− Alle radioaktiven Abfallprodukte dürfen nur durch Unternehmen entsorgt werden, die für eine
Übernahme und Abfallbeseitigung eine Genehmigung vorweisen können, gem. D.Lgs. 241/2000
beseitigt werden.
− Der Kauf, die Lagerung, die Verwendung und die Abfallbeseitigung von radioaktivem Material
(sowohl festem als auch flüssigem) unterliegen den jeweiligen behördlichen Bestimmungen und
Genehmigungen.
� Das Bezugsdatum für den Radioaktivitätsgehalt befindet sich auf dem Etikett ausserhalb des
Kits.
PROBEN UND DEREN HANDHABUNG
Es kann Serum verwendet werden. Keine hämolytischen oder lipämischen Proben verwenden. Die
Proben können 1-2 Tage bei 2-8°C lagern; andernfalls bei -20°C tiefgefrieren. Wiederholtes Tiefgefrieren
und Auftauen vermeiden. Sollte man sich vor der Verwendung versichern, daß die Proben vollkommen
klar sind.
TESTDURCHFÜHRUNG
− Alle Reagenzien und Proben vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen.
− Die Proben vor Gebrauch leicht schütteln.
1 - Beschichtete Teströhrchen für Nullkalibrator (Bo), Kalibratoren (1-5), Kontrollserum und Proben
vorbereiten. Für Totalaktivität (T) und unspezifische Bindung (UB) nicht beschichtete
Einmalteströhrchen verwenden.
2 - Je 100 µl jedes Kalibratoren, des Kontrollserums und der Proben in die entsprechenden
Teströhrchen pipettieren.
3 - 100 µl des Nullkalibrators in die Teströhrchen der unspezifischen Bindung (UB) pipettieren.
4 - 500 µl des Radioaktiven Konjugats in alle Teströhrchen pipettieren.
5 - Auf dem Vortex schütteln.
6 - Bei 37°C 60 Minuten inkubieren.
7 - Mit Ausnahme der Teströhrchen für die Totalaktivität, die Inkubationslösung sorgfältig aus allen
Teströhrchen entweder absaugen oder dekantieren, wobei die letzten Tropfen am Röhrchenrand
mit saugfähigem Papier abzufangen sind.
8 - Die Radioaktivität an der festen Phase in den Teströhrchen mit einem Gamma-Zähler 1 Minute
lang messen. Es wird empfohlen, den "Background" des Gerätes vor der Messung zu kontrollieren.
Um die Empfindlichkeit des Systems nicht zu beeinträchtigen, sollte auf einen möglichst geringen
"Background" geachtet, bzw. dieser entsprechend korrigiert werden.
INKUBATIONSSCHEMA: siehe S. 31
BERECHNUNG DER ERGEBNISSE
Aus den Impulsraten des Nullkalibrators (Bo) und der Totalaktivität (T) sowie der unspezifischen
Bindung (UB) wird zur qualitativen Beurteilung des Tests die Bindungskapazität berechnet:
Impulsrate Bo - Impulsrate UB
Bindungskapazität % = ---------------------------------------- x 100
Impulsrate T - Impulsrate UB
Aus den Impulsraten der Kalibratoren (So-S5), der Kontrollen und Proben sowie der unspezifischen
Bindung (UB) wird der Bindungsprozentsatz berechnet:
Bindungsprozentsatz der Kalibratoren, der Kontrollen und der Proben =
B Impulsrate der Standards bzw. der Proben - Impulsrate UB
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----- % = ------------------------------------------------------------------------------ x 100
Bo Impulsrate Bo - Impulsrate UB
Auf doppelt log bzw. halb log Millimeterpapier werden die B/Bo-Werte in % (Ordinate) gegen die
Konzentration der Kalibratoren (Abszisse) aufgetragen. Die Konzentrationen der Proben können dann
durch Interpolation der entsprechenden B/Bo-Werte an der Eichkurve auf der Abszisse direkt abgelesen
werden und sind in ng/mL angegeben.
BERECHNUNGSBEISPIELE
Die hier aufgeführten Werte dienen nur als Beispiel und sollten nicht anstelle der eigentlichen
Analysenresultate verwendet werden.
Beschreibung cpm B/Bo% B/T % Testosteron
Totalaktivität (T) 38475
Unspezifische Bindung (UB) 160 0.41
Kalibrator 0.0 ng/mL 15788 41.2
Kalibrator 0.25 ng/mL 12734 80.6
Kalibrator 0.5 ng/mL 11367 71.9
Kalibrator 1.5 ng/mL 8729 55.2
Kalibrator 6.0 ng/mL 4924 30.5
Kalibrator 15.0 ng/mL 3061 19.3
Probe 9788 62.0 1.0 ng/mL
REFERENZBEREICH
Die in der folgenden Tabelle aufgeführten Werte sind lediglich richtungsweisend. Es wird jedem Labor
empfohlen, eigene Referenzbereiche zu erstellen.
Frau 0.1 - 1.0 ng/mL
Mann 2.5 - 8.5 ng/mL
Kind 0.0 - 0.3 ng/mL
Umrechnungsfaktor: 1 ng/mL = 3,467 nmol/L.
ANNAHMESKRITERIEN
Bevor die Berechnung der Ergebnisse zu machen, muss man nachprüfen dass die Konzentrierung des
Kontrollserums ins Annahmesbereich, das im Qualitätskontrolle Blatt beschrieben ist, fällt.
ASSAYCHARAKTERISTIK
SPEZIFITÄT
Bei der vorliegenden Analysenmethode wurden die folgenden Kreuzreaktivitäten: 100% mit Testosteron,
5.6% mit 5α-Dihydrotestosteron, 3.8% mit 1,(5α)-Androsten-17β-ol-3one, 2.6% mit 19-Hydroxy-
Androstenedion, 1.6% mit Androstenedion und kleiner der 0.1% mit Androstenediol, SHBG, Danazol,
Östron, DHEA-S, Östradiol, 5-α-Androstan-3α-ol-17on und 5-β-Androstan-17α-ol-3on gefunden.
Die Berechnung der Kreuzreaktivitäten basiert auf der Formel von Abrahams: X/Y x 100, wobei X und Y
jeweils das Gewicht der zu bestimmenden Substanz und das Gewicht der interferrienden Substanz
darstellen, die dabei die Bindungskapazität um 50% verringern.
EMPFINDLICHKEIT
Die Empfindlichkeit der Methode wird als die geringste Menge an Testosteron definiert, welche die
Bindungskapazität (Bo) um 5% zu senken vermag. Diese Menge wurde zu 0.017 ng/mL bestimmt.
PRÄZISION
Die Präzision wurde aus der Intra-Assay- und der Inter-Assay-Variation an 3 Seren unterschiedlicher
Konzentrationen von Testosteron ermittelt.
Intra-Assay (Wiederholpräzision)
Serum Mittelwert ± Standardabw. V.K. Replikate
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(ng/mL) % Nr.
a 0.53 ± 0.0327 6.1 10
b 0.91 ± 0.0356 3.9 10
c 4.45 ± 0.0685 1.5 10
Inter-Assay (Vergleichpräzision)
Serum Mittelwert ± Standardabw. V.K. Analysenläufe
(ng/mL) % Nr.
a 0.425 ± 0.04 9.3 10
b 1.65 ± 0.15 9.0 10
c 4.47 ± 0.35 7.8 10
RICHTIGKEIT
Die Richtigkeit wurde mittels Wiederfindungstest und Verdünnungstest bestimmt:
Wiederfindung
Steigende Mengen an Testosteron wurden einem Pool von Normalseren beigefügt und diese Proben
analysiert.
Zugefügt Berechnet Gefunden Wiederfindung
(ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) %
P ---- 0.43 ----
P + 0.1 0.53 0.50 94.3
P + 0.5 0.93 0.86 92.4
P + 1.0 1.43 1.40 97.4
P + 2.0 2.43 2.3 94.6
P + 4.0 4.43 4.15 93.6
P + 7.0 7.43 7.0 94.2
Verdünnung
Zwei Seren mit einem hohen Gehalt an Testosteron wurde mit dem Nullkalibrator seriell verdünnt und
diese Proben analysiert.
Verdünnung Berechnet Gefunden
(ng/mL) (ng/mL)
S1 unverdünnt ---- 4.30
1:2 2.15 2.25
1:4 1.07 1.21
1:8 0.54 0.63
1:16 0.27 0.28
S2 unverdünnt ---- 8.60
1:2 4.30 4.35
1:4 2.15 2.35
1:8 1.07 1.05
1:16 0.53 0.53
BESTIMMUNGSGRENZEN
Die Ergebnisse der Bestimmung müssen vorsichtig interpretiert und durch klinische Bewertungen und
weitere diagnostische Untersuchungen bestätigt
ZEICHENERKLÄRUNG: siehe S. 28
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DOSAGE RADIOIMMUNOLOGIQUE POUR LA DETERMINATION QUANTITATIVE DU
TESTOSTERONE DANS LE SERUM HUMAIN.
POUR DIAGNOSTIC IN-VITRO
APPLICATIONS CLINIQUES
La Testostérone est un stéroïde androgène à 19 atomes de carbone d'un poids moléculaire 288.4. Elle
est synthétisée dans la zone interstitielle du testicule par les cellules de Leydig à partir de Δ5-
Pregnenolone et Progestérone suivant les deux voies biosynthétiques Δ4 et Δ5. Au niveau testiculaire, la
voie Δ5 est préférée. Une petite partie est produite dans la zone réticulaire de la corticosurrénale et a
comme précurseur le Δ4-Androstenedione et le DEA. Dans le sang, il est véhiculé par une bétaglobuline.
Environ 97-99% du Testostérone circulant est lié à la protéine vectrice; la fraction libre, est considéré
comme l'hormone métaboliquement actif.
Elle est excrétée comme glucuronate ou transformée en Δ4-Androstenedione par les ultérieurs
processus métaboliques. Ses principaux catabolites sont l'Androstérone, l'Etiocolanone et
l'Epiandrosterone. Il peut en autre se transformer en Epitestostérone, qui est un agent catabolique
important sur l'hypothalamus et en Diidrotestostérone (DHT) à 5-α réductase. La DHT est plus actif que
la Testostérone au niveau des cellules cibles.
La Testostérone détermine les modifications caractéristiques des différents états pubères stimulant le
développement des caractères sexuels secondaires (voix, morphologie, appareil pileux) et agissant sur
le pénis, le scrotum, les vésicules séminaux et la prostate. La synthèse protéique augmente, rend
positive la balance de l'azote, phosphore et potassium, stimule l'épithélium germinatif du follicule pileux.
Agit dans la différenciation du comportement sexuel et maintient la spermatogenèse normale. Il existe
en outre un mécanisme de feed-back négatif sur les gonadotrophines FSH et LH avec les structures
hypothalamus-hypophyse.
Chez l'homme, il est important d'évaluer la concentration de la Testostérone dans les cas suivants:
hypogonadisme, néoplasie testiculaires, syndrome de Klinefelter.
Chez la femme, on l'évalue dans les cas suivants: néoplasie ovulaires, hypertrichose, syndrome de
Stein-Leventhal.
PRINCIPE DU TEST
La présente méthode d'analyse consiste en une compétition entre l'antigène marqué (conjugué
radioactif) et l'antigène non marqué (calibrateur, échantillon) pour se lier à un nombre limité de sites
spécifiques de l'antisérum absorbé sur le tube. Après incubation, le liquide contenu dans les tubes est
éliminé et les tubes sont comptés dans un compteur gamma.
REACTIFS CONTENUS DANS LA TROUSSE: PREPARATION ET STABILITE
− Les réactifs sont suffisants pour réaliser 100 tubes.
− La trousse doit être conservée à 2-8°C.
− La date de péremption de chaque réactif est indiquée sur l'étiquette correspondant.
CT Tubes Sensibilisés: 100 tubes (4x25) sensibilisés avec l'anticorps polyclonal anti-Testostérone
(lapin). Les tubes non utilisés doivent être conservés dans leur sachet soigneusement refermé à 2-8°C.
CAL Calibrateurs: 6 flacons de Testostérone en matrice sérique: 1 flacon du Calibrateur Zéro (2 mL) et
5 flacons (1.5 mL) aux concentrations suivantes: 0.25, 0.5, 1.5, 6.0 et 15.0 ng/mL. Prêt à l'emploi.
Conversion: 1 ng/mL = 3.467 nmol/L. Conservateur: NaN3 (

N.B.: vérifier toujours l’exact concentration sur la feuille de C.Q.
MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI AVEC LA TROUSSE
− Tubes (12 x 75 mm).
− Porte-tubes.
− Micropipettes automatiques avec embouts disposables de différents volumes.
− Vortex.
− Bain thermostatisé réglable à 37°C.
− Pompe aspirante ou appareillage automatique équivalent.
− Compteur gamma.
− Papier logit-log ou semi-log.
− Eau distillée.
MATERIEL RADIOACTIF
Radionucléide: I 125
DÉCRET DE LOI (D.Lgs. 230/95 – D.Lgs. 241/00 art. 19), NORME DE SURETE ET PRÉVENTION
Dans le but d’obtenir des résultats corrects et reproductibles, l'observation stricte des règles
suivantes est nécessaire:
− Ne pas mélanger les réactifs de lots différents.
− Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption.
− Utiliser de la verrerie parfaitement propre et absente de contamination de la part d’ions metalliques
ou de substances oxidantes.
− Utiliser de l'eau distillée conservée dans des récipients parfaitement propres.
− Eviter soigneusement les contaminations entre échantillons. Il est conseillé d'utiliser des pipettes
avec embouts jetables pour chaque échantillon et chaque réactif.
− Respecter les temps d’incubation décrits dans le mode opératoire.
Dans l’objectif de réduire les risques physique, biologique et chimique, il est nécessaire
d'observer les règles de sûreté suivantes:
− Utiliser des dispositifs de protection individuelle (ex.: gants jetables, blouses, …) pendant
manipulation de produits radioactifs et/ou partiellement infectés et pendant le dosage.
− Ne pas pipetter les réactifs à la bouche.
− Ne pas fumer, manger, boire ou appliquer des cosmétiques pendant la réalisation du dosage.
− La manipulation de produits radioactifs doit être faite dans des zones spécifiquement prédisposées.
− Les produits radioactifs seront stockés à l’intérieur de leur conteneur d’origine, des zones
spécifiquement prédisposées.
− Un cahier de réception, de stockage et d’élimination des produits radioactifs sera tenu à jour.
− Chaque cas de contamination ou perte de substance radioactive devra être résolu immédiatement
selon les procédures établies.
− L'ensemble du matériel d’origine humaine utilisé dans la préparation de cette trousse a été dosé en
vue de rechercher la présence d'anticorps anti-HIV et anti-HCV ainsi que l'antigène HBs. Les tests
se sont révélés négatifs. Cependant, il est à noter qu'aucun réactif; actuellement disponible ne peut
garantir l'absence d'agents viraux responsables autant du syndrome immunodéficitaire acquis que
de l'hépatite B et C. Tous les échantillons de sérum humain et les réactifs contenant du materiel
biologique utilisés pour le dosage doivent être considérés comme potentiellement infectieux.
− Eviter les éclaboussures ainsi que la formation d'aérosol; au cas échéant, nettoyer soigneusement
en utilisant de l’hypochlorite de sodium à une concentration de 3%. Le matériel utilisé pour le
nettoyage doit être traité comme déchet potentiellement infecté et doit être éliminé conformément
aux modalités en vigueur.
− L'azide de sodium contenu comme conservateur dans certains réactifs peut réagir avec le plomb et
le cuivre des tuyauteries formant des produits hautement explosifs. Pour éviter la formation et
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l'accumulation de tels composés, les réactifs doivent être abondamment dilués avec de l'eau lors de
leur élimination.
− Au sens du D.L. italien n.22 du 05.02.97, qui se réfère aux directives CEE (91/156/CEE,
91/689/CEE, 94/62/CEE) tous les déchêts provenants d'opérations manuelles et/ou en automatique
sont classifiés " déchêts spéciaux dangereux" avec un code de classification CER 180103; ils
doivent donc être éliminés en les donnant à des sociétés authorisées au prélèvement et à
l'élimination.
− Tout les déchêts provenants d’opérations avec radioisotopes doivent être éliminés utilizant
l’intermédiaire de sociétés authorisées au prélèvement et à l'élimination accordamment au D. Lgs
241/2000.
− L'achat, la détention, l’emploi et la distribution de matériel radioactif (qu'il soit solide ou liquide) sont
sujets aux dispositions locales prévues par la loi.
� Le contenu radioactif à la date de réference est spécifié sur l’étiquette externe au kit.
RECOLTE ET PREPARATION DES ECHANTILLONS
Le dosage peut être réalisé sur sérum. Les échantillons fortement lipémiques ou hémolysés doivent être
éliminés. Conserver les échantillons à 2-8°C pendant 1-2 jours; pour des périodes plus longues, les
congeler à -20°C. Il est nécessaire de s'assurer de la limpidité des échantillons avant de les doser. Il est
conseillé de ne pas congeler et décongeler les échantillons plusieurs fois.
MODE OPERATOIRE
− Attendre que les réactifs et les échantillons atteignent la température ambiante avant de les utiliser.
− Homogénéiser les échantillons par inversion avant l'usage.
1 - Préparer les tubes non sensibilisés pour l'Activité Totale (T) et la fixation non spécifique (NSB) et
les tubes sensibilisés pour le Zéro Calibrateur (Bo), les Calibrateurs (1-5), le Sérum de Contrôle et
les Echantillons.
2 - Pipetter 100 µl de chaque Calibrateur, Sérum de Contrôle et Echantillon dans les tubes
correspondants.
3 - Pipetter 100 µl du Calibrateur Zéro dans les tubes de la fixation non spécifique (NSB).
4 - Pipetter 500 µl de Conjugué Radioactif dans tous les tubes.
5 - Agiter sur vortex.
6 - Incuber pendant 60 minutes à 37°C.
7 - Aspirer soigneusement le milieu d'incubation de tous les tubes, sauf dans ceux de l'activité totale,
avec une pompe aspirante ou décanter en ayant soin de sécher le bord des tubes sur du papier
absorbant.
8 - Mesurer la radioactivité présente dans les tubes avec un compteur gamma pendant 1 minute.
Nous recommandons de contrôler le bruit de fond du compteur gamma avant d'effectuer le
comptage. Afin de ne pas modifier la sensibilité du test, il est nécessaire que le bruit de fond soit
réduit au minimum ou corrigé de manière appropriée.
SCHEMA DU DOSAGE: voir p. 31
CALCUL DES RESULTATS
Cpm (Bo) - Cpm NSB
% Fixation (B/T%) = ----------------------------------- x 100
Cpm (T) - Cpm NSB
Pourcentage de fixation des Calibrateurs, Contrôles et Echantillons
B Cpm Calibrateurs ou Echantillons - Cpm NSB
------- % = --------------------------------------------------------------------- x 100
Bo Cpm Bo - Cpm NSB
Porter sur papier logit-log ou semi-log, en abscisse, les concentrations des calibrateurs et, en ordonnée,
les Cpm ou les rapports (B/Bo %) correspondants. Calculer le pourcentage de fixation pour chaque
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échantillon et par interpolation sur la courbe, lire la concentration de Testostérone présente dans
l'échantillon analysé, exprimée en ng/mL.
EXEMPLE DE CALCUL
Les valeurs indiquées ci-dessous sont données uniquement à titre indicatif et ne peuvent en aucun cas
être utilisées comme système de référence.
Description cpm B/Bo% B/T % Testostérone
Activité Totale (T) 38475
Fixation non spécifique (NSB) 160 0.41
Calibrateur 0.0 ng/mL 15788 41.2
Calibrateur 0.25 ng/mL 12734 80.6
Calibrateur 0.5 ng/mL 11367 71.9
Calibrateur 1.5 ng/mL 8729 55.2
Calibrateur 6.0 ng/mL 4924 30.5
Calibrateur 15.0 ng/mL 3061 19.3
Echantillon 9788 62.0 1.0 ng/mL
VALEURS DE REFERENCE
Les valeurs reportées dans le tableau suivant sont uniquement indicatives. Il est conseillé à chaque
laboratoire d'établir ses propres valeurs de référence.
Femme 0.1 - 1.0 ng/mL
Homme 2.5 - 8.5 ng/mL
Enfant 0.0 - 0.3 ng/mL
Conversion: 1 ng/mL = 3.467 nmol/L.
CRITERES D’ACCEPTATION
Avant de procéder au calcul des résultats vérifier que la concentration du sérum de contrôle soit
comprise dans le range d’acceptation décri sur la feuille de Contrôle Qualité.
PERFORMANCE DU DOSAGE
SPECIFICITE
La présente méthode donne les réactions croisées suivantes: 100% avec la Testostérone, 5.6% avec la
5-α-Diidrotestosterone, 3.8% avec le 1,(5α)-Androsten-17-β-ol-3one, 2.6% avec le 19 Hydroxy-
Androstenedione, 1.6% avec l'Androstenedione et inférieure à 0.1% avec l'Androstenediole, le SHBG, le
Danazole, l'Estrone, la DHEA-S, l'Oestradiol, le 5-α-Androstan-3α-ol-17-one et le 5-β-Androstan-17 α-ol
3one.
Les réactions croisées sont évaluées en utilisant la formule d'Abraham x/Agx100 où X et Ag
représentent respectivement la concentration de la substance interférente et la concentration de
l'antigène donnant un déplacement de 50% de l'antigène marqué.
LIMITE DE DETECTION
Concentration minimale de Testostérone capable de déplacer 5% de la capacité initiale de détection.
Cette concentration est égale à 0.017 ng/mL.
PRECISION
La précision intra-essai et inter-essai à été déterminée à 3 niveaux de concentration sérique en
Testostérone.
Intra-essai (Répétabilité)
Sérum Moyenne ± D.S. C.V. Effectif
(ng/mL) % n.
a 0.53 ± 0.0327 6.1 10
b 0.91 ± 0.0356 3.9 10
c 4.45 ± 0.0685 1.5 10
Inter-essai (Reproductibilité)
Sérum Moyenne ± D.S. C.V. Essais
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(ng/mL) % n.
a 0.425 ± 0.04 9.3 10
b 1.65 ± 0.15 9.0 10
c 4.47 ± 0.35 7.8 10
EXACTITUDE
L'exactitude de la méthode a été évaluée par un test de récupération et par un test de parallélisme:
Test de Récupération
Des quantités connues de Testostérone ont été ajoutées à un pool de sérums normaux et les
concentrations ont été évaluées.
Ajoutées Attendues Observées Récupération
(ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) %
P ---- 0.43 ----
P + 0.1 0.53 0.50 94.3
P + 0.5 0.93 0.86 92.4
P + 1.0 1.43 1.40 97.4
P + 2.0 2.43 2.3 94.6
P + 4.0 4.43 4.15 93.6
P + 7.0 7.43 7.0 94.2
Test de Parallélisme
Deux sérums élevés en Testostérone on été dilués avec le Calibrateur Zéro et les concentrations ont été
évaluées.
Dilution Attendues Observées
(ng/mL) (ng/mL)
S1 non dilué ---- 4.30
1:2 2.15 2.25
1:4 1.07 1.21
1:8 0.54 0.63
1:16 0.27 0.28
S2 non dilué ---- 8.60
1:2 4.30 4.35
1:4 2.15 2.35
1:8 1.07 1.05
1:16 0.53 0.53
LIMITES DU DOSAGE
Les résultats du dosage doivent être interprété avec précaution et convalidés par des valutations
cliniques et ultérieurs essai diagnostiques.
LEGENDE DES SIMBOLES: voir p. 28
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RADIOINMUNOENSAYO PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA TESTOSTERONA EN
SUERO HUMANO.
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
APLICACIONES CLÍNICAS
La testosterona (P. M.: 288.4) es un esteroide andrógeno de 19 átomos de carbono. Se sintetiza
principalmente en los testículos por las células intersticiales de Leydig, a partir de Δ5-pregnenolona y
progesterona, por las vías metabólicas Δ4 y Δ5. La vía Δ5 parece ser la predominante en los testículos.
Una pequeña cantidad se produce por la capa reticular de la corteza suprarrenal, con Δ4androstenediona
y DHEA como precursores. En la sangre es transportada por una betaglobulina.
Aproximadamente 97-99% de la testosterona circulante se encuentra unida a esta proteína
transportadora; la fracción libre remanente se considera la biológicamente activa. Se excreta en forma
de glucurónidos o se convierte en Δ4-androstenediona, la cual se sigue metabolizando, produciendo
como catabolitos principales la androsterona, la etiocolanolona y la epiandrosterona. También se puede
convertir en epitestosterona, un catabolito importante que actúa en el hipotálamo, así como en
dihidrotestosterona (DHT), por una 5-α-reductasa. DHT es más potente que la testosterona en las
células diana.
La testosterona determina los cambios típicos de varios estadios de la pubertad, estimulando el
desarrollo de los caracteres sexuales secundarios (voz, talla, vello corporal). También actúa en el pene,
el escroto, las vesículas seminales y la próstata. Aumenta la síntesis de proteínas, provoca un balance
positivo de nitrógeno, fósforo y potasio y estimula el epitelio germinal de los folículos pilosos. Está
involucrada en la diferenciación del comportamiento sexual y regula la espermatogénesis normal.
Además existe un mecanismo de feedback negativo entre hipotálamo e hipófisis que actúa sobre las
gonadotropinas FSH y LH.
En los varones los niveles de testosterona se deben evaluar en caso de: hipogonadismo, neoplasias
testiculares y síndrome de Klinefelter.
En las mujeres los niveles de testosterona son importantes en casos de: neoplasias ováricas,
hipertricosis y síndrome de Stein-Leventhal.
PRINCIPIO DEL MÉTODO
El presente método analítico se basa en una competencia entre antígeno marcado (conjugado
radioactivo) y antígeno no marcado (calibrador, muestra) por unirse a un número de sitios específicos
de los tubos sensibilizados con el antisuero. Después de la incubación, el líquido de los tubos se elimina
por aspiración y la radioactividad se mide en un contador gamma.
REACTIVOS CONTENIDOS EN EL KIT
− Los reactivos son suficientes para 100 tubos.
− El kit debe conservarse a 2-8°C.
− La fecha de caducidad de cada reactivo está indicada en su etiqueta.
CT Tubos Sensibilizados: 100 tubos (4x25) sensibilizados con anticuerpo policlonal anti-Testosterona
(conejo). Los tubos no utilizados deben guardarse a 2-8°C, en su bolsa cuidadosamente cerrada.
CAL Calibradores: 6 viales de Testosterona en matriz sérica: 1 vial de Calibrador Cero (2 mL) y 5
frascos (1.5 mL) a las siguientes concentraciones: 0.25, 0.5, 1.5, 6.0 y 15.0 ng/mL. Listo para el uso.
Conversión: 1 ng/mL = 3.467 nmol/L. Conservante: NaN3 (

N.B.: Verificar siempre la concentración exacta en la hoja del C.C.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
− Tubos de plástico desechables (12 x 75 mm).
− Gradillas.
− Micropipetas automáticas con puntas monouso de volumen variable.
− Vortex.
− Baño termostático regulable a 37°C.
− Bomba aspirante o equipo automático para el lavado de los tubos.
− Contador gamma de centelleo.
− Papel logit-log o semi-logarítmico.
− H2O destilada.
MATERIAL RADIOACTIVO
Radionúclido presente: I 125
NOTA INFORMATIVA (D.L. 230/95 – D.L. 241/00 art. 19) Y NORMAS DE SEGURIDAD Y
PREVENCIÓN
Para obtener resultados correctos y reproducibles es necessario observar la siguientes normas:
− No mezclar los reactivos de lotes diferentes.
− No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad.
− No exponer los reactivos y las muestras al calor intenso ni a fuentes importantes de contaminación.
− Utilizar material de vidrio perfectamente limpio y libre de contaminación por iones metálicos o
sustancias oxidantes.
− Utilizar agua destilada o desionizada, conservada en recipientes perfectamente limpios.
− Evitar cuidadosamente la contaminación entre muestras; para ello es aconsejable utilizar pipetas
con puntas desechables para cada muestra y reactivo.
− No modificar el “Procedimiento Operativo” de ejecución del ensayo. Eventuales alteraciones de:
• secuencia y cantidades al añadir los reactivos
• tiempos y temperatura de incubación
pueden dar lugar a resultados clínicos erróneos.
− Reconstituya los reactivos liofilizados, si es que están presentes, como se describe en la etiqueta
correspondiente. Cualquier variación en el uso del reactivo o en los volúmenes puede afectar la
confiabilidad de los resultados obtenidos.
− En el caso de procedimiento manual es importante utilizar pipetas calibradas y tener una adecuada
manualidad técnica. En particular es importante la precisión en la preparación y dispensación de los
reactivos. Es necesario un adecuado mantenimiento (limpieza y calibración) de tales instrumentos.
− Asegurarse de que todo el equipo utilizado (material de vidrio, baño termostático, agitadores y
lavadores de tubos, contador gama, refrigeradores utilizados para el almacenamiento de los
reactivos y de las muestras) funcione correctamente, que sea sometido a una adecuada calibración
y reciba mantenimiento regular. La utilización incorrecta de tales sistemas puede producir errores
en la metodología y afectar la reproducibilidad y la confiabilidad de los resultados obtenidos.
− Utilizar un método adecuado para la correcta identificación de las muestras de los pacientes. Una
identificación incorrecta puede provocar pérdida de la especificidad del sistema y resultados clínicos
erróneos.
Para evitar contaminaciones personales y ambientales, deberán observarse las siguientes
normas de seguridad:
− Utilizar medios de protección individuales (ej.: guantes desechable, batas, ect) durante la
manipulación de materiales radiocativos y/o potencialmente infeccioso, así como durante el ensayo.
− No pipetear los reactivos con la boca.
− No fumar, comer, beber o aplicar cosméticos durante la ejecución del ensayo.
− La manipulación de sustancias radioactivas deve realizarse en zonas específicamente preparadas.
− Las sustancias radioactivas deben conservarse en los viales originales en zonas específicamente
predispuestas.
− Es necesario hacer un registro que indique detalladamente la entras, el almacenamiento y
eliminación de todo el material radioactivo recivido.
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− Es necesario eliminar inmediatamente cualquier contaminación radioactiva según los
procedimientos establecidos.
− Todos los materiales humanos suministrados con el kit han sido sometidos a análisis resultando
negativos a la presencia de HBsAg, anti-HIV y anti-HCV. Sin embargo, los ensayos mencionados no
garantizan la total ausencia de los agentes vírales responsables del síndrome de inmunodeficiencia
adquirida y de la hepatitis B y C. Por eso todos los reactivos contenentes material biológico y todas
las muestras deben considerarse potencialmente infecciosos.
− Evitar salpicaduras y formación de aerosoles; en caso de que se produzcan, limpiar cuidadosamente
con hipoclorito sódico a una concentración final de 3%. Todo el material utilizado para la limpieza
debe tratarse como residuo potencialmente infeccioso y desecharse según las oportunas
modalidades.
− La azida sódica, contenida como conservante en algunos reactivos, puede reaccionar con el plomo
y el cobre de los desagües formando azidas metálicas altamente explosivas. Para evitar la
formación y la acumulación de dichos compuestos deje correr abundantemente el agua al eliminar
los reactivos.
− Conforme al Decreto Italiano D.L. no. 22, del 05.02.97 y conforme a las directivas de la CEE
(91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE), todos los desechos originados por procesos manuales y/o
automáticos se clasifican como material de deshecho peligroso, código de Clasificación CER
180103: como tales, deben eliminarse delegando su recolección y desecho a empresas especiales
autorizadas para ello.
− Todos los desechos provenientes de ensayos con radioisotopos deben eliminarse confiándolos
empresas autorizadas, conforme al D.L.no 241/2000.
− La compra, el almacenamiento, el empleo y desecho de material radioactivo (sólido o líquido) están
sujetos a las diposiciones y normas locales previstas por la autoridad y legislación vigente.
� La cantidad de radioactividad en la fecha de referencia está especificada en la etiqueta
externa del kit.
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
El ensayo puede efectuarse en muestras de suero. Las muestras fuertemente lipémicas o hemolizadas
deben descartarse. Las muestras pueden conservarse a 2-8°C durante 1-2 días; para periodos más
largos, conservarlas a -20°C. Las muestras deben ser perfectamente limpias antes someterlas a
análisis. Se aconseja no congelar y descongelar repetidamente las muestras.
PROCEDIMIENTO OPERATIVO
− Esperar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente.
− Agitar las muestras por inversión antes del uso.
1 - Preparar los tubos no sensibilizados para Actividad Total (T) y Enlace Inespecífico (NSB) y tubos
sensibilizados para: Calibrador Cero (Bo), Calibradores (1-5), Suero de Control y Muestras.
2 - Dispensar 100 µl de cada Calibrador, Suero de Control y Muestras en los tubos correspondientes.
3 - Dispensar 100 µl de Calibrador a concentración cero en los tubos del enlace inespecífico (NSB).
4 - Dispensar 500 µl de Conjugado Radioactivo en todos los tubos.
5 - Agitar en vortex.
6 - Incubar durante 60 minutos a 37°C.
7 - Aspirar cuidadosamente la mezcla de la incubación de todos los tubos, excepto los de la actividad
total, mediante bomba aspirante o decantar secando el borde de los tubos con papel secante.
8 - Medir la radioactividad de los tubos en un contador gamma durante 1 minuto. Se recomienda
controlar el fondo del instrumento antes de realizar el cómputo. Para no variar la sensibilidad del
sistema es preciso que el fondo se reduzca al mínimo o bien se corrija oportunamente.
ESQUEMA DEL ENSAYO: ver p. 31
CÁLCULO DE RESULTADOS
Cpm Bo – Cpm NSB
Capacidad de unión % = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ x 100
Cpm T – Cpm NSB
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Porcentaje de unión para calibradores, controles y muestras =
B Cpm calibradores o muestras – Cpm NSB
⎯⎯% = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ x 100
Bo Cpm Bo - Cpm NSB
Trace la curva de calibración en papel para gráficas logit/log o semilogarítmico, colocando en el eje de
las abscisas las concentraciones de los calibradores y, en el eje de las ordenadas, la relación B/Bo %
correspondiente a cada uno. Para obtener la concentración de testosterona presente en las muestras
en estudio (expresada en ng/mL), calcule los porcentajes correspondientes a cada muestra e
interpólelos en la curva de calibración.
EJEMPLO DE CÁLCULO
Los valores que se indican a continuación son simplemente ilustrativos y no deben emplearse en lugar
de los datos obtenidos durante el ensayo.
Descripción cpm B/Bo% B/T % Testosterona
Actividad total (T) 38475
Enlace Inespecífico (NSB) 160 0.41
Calibrador 0.0 ng/mL 15788 41.2
Calibrador 0.25 ng/mL 12734 80.6
Calibrador 0.5 ng/mL 11367 71.9
Calibrador 1.5 ng/mL 8729 55.2
Calibrador 6.0 ng/mL 4924 30.5
Calibrador 15.0 ng/mL 3061 19.3
Muestra 9788 62.0 1.0 ng/mL
VALORE NORMALES
Los siguientes valores son indicativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
rangos de referencia.
Mujer 0.1 – 1.0 ng/mL
Hombre 2.5 – 8.5 ng/mL
Niño: 0.0 – 0.3 ng/mL
CRITERIOS DE VALIDACIÓN
Antes de proceder al cálculo de los resultados, verificar que la concentración del suero de control esté el
rango de aceptación descrito en la hoja de control de calidad.
CARACTERISTÍCAS METODOLÓGICAS
ESPECIFICIDAD
El presente método analítico ha mostrado las siguientes reacciones cruzadas: 100% con Testosterona,
5.6% con 5-α-dihidrotestosterona, 3.8% con 1,(5α)-androsteno-17-β-ol-3ona, 2.6% con 19hidroxiandrostenediona,
1.6% con Androstenediona y menos del 0.1% con Androstenediol, SHBG,
Danazol, Estrona, DHEA-S, Estradiol, 5-α-androstano-3 α-ol-17ona y 5-β-androstano-17 α -ol 3ona. El
porcentaje de reactividad cruzada se calcula mediante la fórmula de Abraham: X/Y x 100, donde X e Y
son, respectivamente, el peso de la sustancia que se somete a análisis y el peso de la sustancia
interferente que reduce la capacidad de unión en un 50%.
SENSIBILIDAD
La sensibilidad es la dosis más baja de testosterona capaz de reducir la capacidad de unión inicial, en
un 5%. Esta dosis es de 0,017 ng/mL.
PRECISIÓN
La precisión se evaluó sobre la variabilidad intra e interensayo, en 3 sueros a diferentes
concentraciones de testosterona.
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Repetibilidad (intra-ensayo)
Suero Media ± D.E. C.V. Replicados
(ng/mL) % no.
a 0.53 ± 0.0327 6.1 10
b 0.91 ± 0.0356 3.9 10
c 4.45 ± 0.0685 1.5 10
Reproducibilidad (inter-ensayo)
Suero Media ± D.E. C.V. Ensayos
(ng/mL) % no.
a 0.425 ± 0.04 9.3 10
B 1.65 ± 0.15 9.0 10
c 4.47 ± 0.35 7.8 10
EXACTITUD
La exactitud del método ha sido evaluada mediante pruebas de recuperación y paralelismo.
Prueba de recuperación
Cantidades escalares de testosterona se agregaron a un pool de sueros normales y se sometieron a
análisis.
Adición Previsto Medición Recuperación
(ng/mL) (ng/mL) (ng/mL) %
P ---- 0.43 ----
P + 0.1 0.53 0.50 94.3
P + 0.5 0.93 0.86 92.4
P + 1.0 1.43 1.40 97.4
P + 2.0 2.43 2.3 94.6
P + 4.0 4.43 4.15 93.6
P + 7.0 7.43 7.0 94.2
Prueba de paralelismo
Dos sueros con una elevada concentración de testosterona se analizaron a distintas diluciones
realizadas con el calibrador cero.
Dilución Previsto Medición
(ng/mL) (ng/mL)
S1 sin diluir ---- 4.30
1:2 2.15 2.25
1:4 1.07 1.21
1:8 0.54 0.63
1:16 0.27 0.28
S2 sin diluir ---- 8.60
1:2 4.30 4.35
1:4 2.15 2.35
1:8 1.07 1.05
1:16 0.53 0.53
LÍMITES DEL ANÁLISIS
Los resultados del ensayo deben interpretarse cuidadosamente y confirmarse mediante evaluaciones
clínicas y ulteriores pruebas diagnósticas.
LEYENDA SÍMBOLOS: ver pag. 28
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SIMBOLI, SYMBOLS, SYMBOLES, SÍMBOLOS, SÍMBOLOS, SYMBOLE, ΣΥΜΒΟΛΑ,
SYMBOLIT, SYMBOLER
EN 980 - EDMA
REF Codice di riferimento o di ordine / reference or order code / Référence ou numéro de
commande / referencia o número de pedido / referência ou número da encomenda / Referenz
oder Bestellnummer / κωδικός προϊόντος ή παραγγελίας / Refarans veye sipariş numarsı /
referenční nebo objednací čísl
LOT Lotto / lot / Lot / lote / lote / charge / παρτίδα / parti / šarže
IVD
100
RDATE
Data di scadenza / expiry date / date d’expiration / Fecha de caducidad / Data de vencimento
/ Verfallsdatum / Ηµεροµηνία λήξης / Son kullanma targhi / datum expirace
Per uso diagnostico in-vitro / For in-vitro diagnostic use / Pour diagnostic in-vitro / Para uso
diagnóstico In-vitro / aplicação do diagnóstico In-vitro / Für den Gebrauch in der IN-
VITRO-DIAGNOSTIK / για in vitro διαγνωστική χρήση / in –vitro diagnostik kullanım /
pro použití in-vitro
Marcatura CE secondo le direttive IVD 98/79/CE / CE marking according to IVD guidelines
98/79/EC / marquage CE conforme aux directives IVD 98/79/EC / marcado CE según
directiva de IVD 98/79/CE / marcação-CE segundo a directriz-IVD 98/79/CE / CE-
Markierung bei Erfüllung der IVD Richtlinie 98/79/EG / Σηµανση CE βάσει κοινοτικής
οδηγίας IVD 98/79/EC / 98/79/EC IVD tüzüğüne göre CE işareti / CE označení dle IVD
98/79/EU
Conservare a 2-8°C / keep at 2-8°C / conserver à 2-8°C / Conservar a 2-8°C / conservar a 2-
8°C / Lagerung bei 2-8°C / φύλαξη στους 2-8°C / 2-8°C da saklayınız / skladovat při 2-8°C
Fabbricante / Manufacturer / Fabriquant / produzido por / Fabricante / produkt der /
κατασκευάζεται από / tarafından üretilmiştir / výrobce
Rischio biologico / Biohazard / Risque Biologique / Riesgo Biológico / Risco Biológico /
Bιολογικός κίνδυνος/ Riziko tehlike biyolojik/ Biologicky nebezpečné
Consultare la metodica operativa / consult instructions for use / consulter le mode opératoire
/ consultar las instrucciones de uso / consultar as instruções de uso / Schauen Sie die
Arbeitsanleitung an / συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / kullanımda başvurulacak bilgiler /
Sledujte návod k použití
Sufficiente per 100 test / sufficient for 100 tests / suffisant pour 100 déterminations /
suficiente para 100 determinaciones / Componentes para 100 testes / genügend für 100 Tests
/ επαρκεί για 100 τεστ / 100test için yeterli / dostačující pro 100 testů
Data di Riferimento / Reference date / Date de référence / Fecha de referencia / Data de
refêrencia / Referenzdatum / ημερομηνία βαθμονόμησης / Referans Targhi / referenční
datum
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RCNS
H2O
Ricostituire con / reconstitute with / reconstituer avec / reconstituir con / reconstituir com /
rekonstituiren mit / ανασυστάται με / ile karıştırma / rekonstituovat
Acqua distillata o deionizzata / deionized or distilled water / eau deionisée ou distillée / agua
destilada o desionizada / água destilada ou deionizada / Deionisiertes oder Destilliertes
Wasser / απιονισμένο -απεσταγμένο νερό / deiyonize veya distile su / deionizovaná nebo
destilovaná voda
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Bibliografia – References – Literaturverzeichnis – Bibliographie - Bibliografía
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radioimmunoassay, B.M. Jaffe, H.R. Behrman eds., Academic Press, New York, p.590.
2 - Auletta, B.V. Caldwell, G.L. Hamilton (1979): Androgens testosterone and
dihydrotestosterone. Methods of hormone radioimmunoassay, 2nd edition B.M. Jaffe, H.R.
Behrman eds., Academic Press, New York, p.715.
3 - C.W. Bardin, C.A. Paulsen (1961): The Testes. Textbook of Endocrinology, R.H. Williams
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p.333.
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Schema del Dosaggio, Assay Scheme, Schema du Dosage,
Inkubationsschema, Esquema del Ensayo
Provette,Tubes
Röhrchen,Tubos
Reag,Reac
A.Tot
Tot/Act
Akt
(T)
NSB/UB CAL
(0-5)
CTR Campioni,
Samples,
Echantillon
,Proben,
Muestras
CAL 0 ---- 100 µl ---- ---- ----
CAL 0 - 5 ---- ---- 100 µl ---- ----
CTR ---- ---- ---- 100 µl ----
Campioni
Samples,
Echantillons,
Proben, Muestras
---- ---- ---- ---- 100 µl
CONJ I 125 500 µl 500 µl 500 µl 500 µl 500 µl
− Agitare e incubare, Mix and incubate, Schütteln und inkubieren, Agiter et
incuber, Agitar y incubar: 60' 37°C.
− Aspirare o decantare, Aspirate or decant, Absaugen oder dekantieren, Aspirer
ou décanter, Aspirar o bien decantar.
− Leggere, Read, Messen, Lire, Leer.
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