Diagnostic LCR SERION ELISA classic - virion\serion

Fabricant
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SERION ELISA classic
Diagnostic du liquide
céphalorachidien (LCR)
Mode d´emploi - français
(Version 3.03/05-1)

Diagnostic LCR SERION ELISA classic
SOMMAIRE
1. INTRODUCTION AU DIAGNOSTIC DU LCR
1.1 CHAMP D‘APPLICATION
1.2 DÉTERMINATION DU QUOTIENT D‘ALBUMINE
1.3 DÉTERMINATION DU QUOTIENT D’IMMUNOGLOBULINES TOTALES
1.3.1 Mesure de la concentration totale d’IgG et calcul du quotient
1.3.2 Mesure de la concentration totale d’IgM et calcul du quotient
1.3.3 Mesure de la concentration totale d’IgA et calcul du quotient
1.4 CALCUL DU QUOTIENT DE LIMITE
2. DÉTERMINATION DU QUOTIENT D’ANTICORPS SPÉCIFIQUES
DE L’AGENT PATHOGÈNE
2.1 RÉALISATION DU TEST SERION ELISA classic
2.1.1 Dilution des prélèvements
2.1.2 Absorption du facteur rhumatoïde
2.1.3 Aperçu du déroulement du test IgG, IgM, IgA SERION ELISA classic
2.2 EXPLOITATION
2.2.1 Exploitation manuelle
2.2.2 Exploitation automatisée du test avec le logiciel SERION easy base 4PL
2.3 CALCUL DU QUOTIENT D’ANTICORPS SPÉCIFIQUES
DE L’AGENT PATHOGÈNE
3. CALCUL DE L’INDEX D‘ANTICORPS (IA)
4. INTERPRÉTATION
5. EXEMPLE DE CALCUL
6. CARACTÉRISTIQUES ET PERFORMANCES
6.1 REPRODUCTIBILITE ET REPETABILITE
7. INSTRUCTIONS POUR LE PROGRAMME D‘ÉVALUATION (SERION LCR)
français 1
V 3. 03/05-1

1. INTRODUCTION AU DIAGNOSTIC DU LCR
Le diagnostic du LCR (liquide céphalorachidien) permet la caractérisation et la différenciation
de processus inflammatoires dans le système nerveux central (SNC). Pour cela, la distinction
doit être faite entre des tableaux de maladies dont la cause est l’infection par des agents
pathogènes microbiens ou des processus inflammatoires chroniques d’autres origines (par ex.
sclérose multiple).
En présence de symptômes neurologiques et de suspicion d’une infection du SNC ou d’un
processus inflammatoire chronique, le diagnostic étendu du LCR se base sur le recensement des
anticorps formés dans l’espace intrathécal.
Lors d’une infection aiguë du SNC, des anticorps locaux sont formés contre l’agent pathogène
responsable, dont la caractérisation appuie le diagnostic. Les tentatives de caractérisation
directe de l’agent pathogène dans le liquide céphalorachidien, soit échouent (par ex. Borrelia
burgdorferi) soit demandent du temps (virus). C’est pour cette raison que dans la plupart des cas
de doute, le diagnostic différentiel se fait exclusivement à l’aide de méthodes sérologiques.
Des processus inflammatoires chroniques dans le SNC vont de pair avec une réponse
immunitaire intrathécale polyspécifique. Dans ce cas, des anticorps contre plusieurs agents
pathogènes viraux peuvent être détectés. Ces derniers n’étant pas obligatoirement à l’origine de
la maladie.
Une analyse isolée du LCR ne suffit en effet pas à caractériser une synthèse intrathécale
d’anticorps, d’autres facteurs doivent être pris en considération.
Bien que le passage de molécules et de cellules du sang artériel dans le parenchyme cérébral
(barrière sang-cerveau) et dans l’espace du LCR (barrière sang-LCR) soit limité (perméabilité
des parois vasculaires), il ne peut être complètement exclu. Diverses catégories de corps (acides
aminés, sucres, protéines) ont des conditions de passages très différentes. Le glucose par ex.
passe très rapidement du sang dans le LCR, tandis que le lactate ne franchit pratiquement pas la
barrière. La perméabilité pour les protéines est déterminée par la diffusion liée à la taille des
molécules. La concentration totale de protéines dans le liquide céphalorachidien chez des
personnes saines, est environ 10 2 à 10 4 fois plus basse que la concentration de protéines dans le
sérum correspondant. Pour différentes raisons, les concentrations de protéines dans le LCR
peuvent se trouver nettement augmentées („troubles fonctionnels de perméabilité“).
Les anticorps présents dans le LCR peuvent aussi bien avoir été diffusés du plasma vers le LCR,
que provenir d’une synthèse locale. Pour le diagnostic du processus inflammatoire dans le LCR,
ces deux possibilités doivent être clairement différenciées. Une conclusion quant aux anticorps
formés dans l’espace intrathécal est possible seulement par la détermination des diverses
protéines dans le sérum et le LCR, le calcul du quotient LCR-sérum pour ces protéines et
l’établissement d’un index d’anticorps (IA).
français 2

Résumé : Lors de l’analyse des prélèvements de patients, il doit être répondu aux questions
suivantes :
La concentration de protéines plasmatiques dans le LCR augment t-elle ?
Est-on en présence d’une synthèse polyclonale intrathécale d’immunoglobulines ?
Est-on en présence d’une synthèse intrathécale d’anticorps spécifiques de l’agent
pathogène ?
(Calcul de la proportion d’anticorps issus du plasma pour faire la distinction avec les
anticorps réellement formés dans l’espace intrathécal)
En raison des rapports complexes des calculs décrits par la suite, il est important d’utiliser
des méthodes de mesures adaptées et les plus précises possibles, pour garantir un diagnostic
sûr. Il faut veiller à ce que les prélèvements de sang et de LCR soient effectués le même jour
et que les analyses du sérum et du LCR soient toujours réalisées en parallèle dans la même
série de mesure.
Les instructions de travail décrites ici se réfèrent au guide du diagnostic de LCR, élaboré par
H. Reiber (pour une description détaillée voir aussi H. Reiber 1995, Lab. med. 19: 444-462 et H.
Reiber, J. B. Peter 2001, J. Neurol. Sci. 184: 101-122). Nous nous ferons un plaisir de vous
envoyer sur demande, une bibliographie plus étendue concernant le diagnostic du LCR.
1.1 Champ d’application
L’Institut Virion\Serion GmbH met à disposition un programme d’évaluation
SERION LCR fonctionnant sous Excel (voir aussi point 7. „instructions pour le
Serion LCR“), à l’aide duquel vous pourrez calculer sans problème l’index
d’anticorps.
Les caractérisations par SERION ELISA classic pour le diagnostic du LCR suivantes ont été
évaluées :
SERION ELISA classic- IgG IgM IgA
Virus de la rougeole X
Virus de la rubéole X
Virus varicelle-zona X
Virus herpès simplex 1+2 X
Virus des oreillons X
Cytomégalovirus X
Virus de la méningoencéphalite
verno-estivale
français 3
X X
Borrelia burgdorferi X X

1.2 DÉTERMINATION DU QUOTIENT D’ALBUMINE
Une augmentation de la concentration des protéines plasmatiques dans le LCR (ancienne
interprétation : trouble fonctionnel de la barrière sang-LCR; nouvelle interprétation : réduction
de la vitesse de flux du LCR) peut fausser le diagnostic basé sur la caractérisation des anticorps.
C’est la raison pour laquelle un diagnostic fiable doit toujours prendre en compte la proportion
d’anticorps ayant diffusé. La protéine de référence utilisée pour le calcul est l’albumine, car
cette protéine est exclusivement synthétisée en dehors de l’espace céphalorachidien.
Par une mesure néphélémétrique (tests/instruments de mesure disponibles dans le commerce),
la concentration d’albumine dans le sérum et dans le LCR correspondant est mesurée. Le
quotient doit être calculé de la façon suivante :
Q Albumine =
français 4
Conc. Albumine LCR
Conc. Albumine Sérum
Dans l’évaluation du „trouble fonctionnel de barrière“, la relation du quotient d’albumine avec
l’âge est à prendre en compte. Une haute perméabilité s’observe particulièrement chez les
nouveau-nés et les nourrissons.
Âge Q Albumine
Naissance 8 - 28 x 10 -3
1 mois 5 - 15 x 10 -3
2 mois 3 - 10 x 10 -3
3 mois 2 – 5 x 10 -3
4 mois à 6 ans 0,5 – 3,5 x 10 -3
Jusqu’à 15 ans < 5 x 10 -3
Jusqu’à 40 ans < 6,5 x 10 -3
Jusqu’à 60 ans < 8 x 10 -3

1.3 DÉTERMINATION DU QUOTIENT D’IMMUNOGLOBULINES TOTALES
Pour le calcul de l’index d’anticorps, la détermination du quotient d’immunoglobulines totales,
servant de grandeur de référence, (exception voir point 4), est indispensable dans l’étape
suivante.
1.3.1 Mesure de la concentration d’IgG totales et calcul du quotient
La mesure des IgG totales dans le LCR et le sérum est réalisée par néphélémétrie de manière
analogue à la détermination de concentration d’albumine.
Le quotient d’IgG totales est calculé comme suit :
Q IgG totales =
français 5
Conc. IgG totales LCR
Conc. IgG totales Sérum
1.3.2 Mesure de la concentration d’IgM totales et calcul du quotient
La simple caractérisation par néphélémétrie est trop peu sensible pour la détermination de
concentration des IgM totales. C’est la raison pour laquelle une mesure au moyen d’essais
immuno-néphélémétriques amplifiés (procédé de caractérisation disponible dans le commerce)
est recommandée.
Le quotient pour les IgM totales est calculé comme suit :
Q IgM totales =
Conc. IgM totales LCR
Conc. IgM totales Sérum
1.3.3 Mesure de la concentration d’IgA totales et calcul du quotient
La mesure des IgA totales est effectuée de manière analogue à la détermination de
concentration des IGM.
Le quotient pour les IgA totales est calculé comme suit :
Q IgA totales =
Conc. IgA totales LCR
Conc. IgA totales Sérum

1.4 CALCUL DU QUOTIENT DE LIMITE :
Diverses maladies chroniques inflammatoires du SNC peuvent être accompagnées d’une
synthèse intrathécale et polyspécifique d’anticorps. La concentration d’immunoglobulines
totales dans le LCR se trouve alors augmentée de cette partie synthétisée localement par
rapport à la concentration de la partie issue du plasma. Le quotient d’immunoglobulines totales
(Q IgG totales, Q IgM totales, Q IgA totales) se trouve augmenté de façon correspondante, et ne peut pas
servir de grandeur de référence pour le calcul de l’index d’anticorps, car cela fausserait sa
valeur et la synthèse intrathécale d’anticorps spécifiques de l’agent pathogène ne serait pas
détectable dans certaines conditions.
Pour identifier une telle synthèse intrathécale polyspécifique d’immunoglobulines, le quotient
de limite (Qlim) doit être calculé en appoint. Il présente la valeur, qui serait obtenue sans la
proportion supplémentaire d’immunoglobulines synthétisées localement. Le calcul de Qlim est
effectué selon un rapport établi empiriquement par H. Reiber entre le quotient d’albumine et le
quotient d’immunoglobulines pour le domaine de fonctionnement normale de la barrière
jusqu’à des troubles fonctionnels fortement prononcés de celle-ci.
Étant donné que la base de calculs présentent les constantes de diffusion des molécules en
question, le calcul du quotient doit se faire selon des formules différentes pour les IgG et les
IgM :
IgG:
IgM:
IgA:
Q Lim IgG = 0,93 x
Q Lim IgM = 0,67 x
Q Lim IgA = 0,77 x
français 6
2
-6
(Q Albumine) + 6 x 10 - 1,7 x 10-3 2
-6
(Q Albumine) + 120 x 10 - 7,1 x 10-3 2
-6
(Q Albumine) + 23 x 10 - 3,1 x 10-3 Une synthèse intrathécale polyspécifique (IgG, IgM et IgA) se produit, quand
Q IgG totales / IgM totales / IgA totales > Q Lim IgG / Lim IgM / Lim IgA
2. DÉTERMINATION DU QUOTIENT D’ANTICORPS SPÉCIFIQUES DE L’AGENT
PATHOGÈNE
2.1 RÉALISATION DU TEST SERION ELISA classic
Les anticorps spécifiques de l’agent pathogène dans le sérum et le LCR sont caractérisés par
l’IgG/IgM/IgA SERION ELISA classic respectif. Veuillez suivre les instructions de travail
contenues dans le kit, pour lesquelles, dans le cas du diagnostic de LCR, les dilutions suivantes
doivent être choisies pour le sérum et le LCR.

2.1.1 Dilution du prélèvement
Étant donné les exigences élevées d’exactitude de la quantification des anticorps pour le
diagnostic du LCR, le domaine dynamique doit être rigoureusement limité à la partie pseudolinéaire
de la courbe standard (voir courbe standard spécifique du kit). De plus, il est
recommandé d’utiliser pour le calcul, des paires de sérums se trouvant le plus proches
possibles. En respectant les dilutions recommandées pour le LCR et le sérum, des valeurs de
DO situées dans cette zone sont généralement obtenues, dans la mesure où des anticorps sont
décelables.
Jusqu’à l’acquisition suffisante d’expérience, par le laboratoire, concernant le diagnostic du
LCR, les échantillons de sérum et de LCR devraient être si possible, testés à chaque fois sur 2
dilutions. Des calculs d’IA peuvent alors être effectués suivant toutes les combinaisons. Dans le
cas d’une linéarité de dilution donnée, des IA concordants sont obtenus (confirmation des
résultats). Lorsque les valeurs de DO isolées se trouvent dans la partie aplatie supérieure ou
inférieure de la courbe standard, de plus grandes différences (>30%) dans les valeurs calculées
peuvent en effet survenir; la linéarité de dilution n’étant dans ce cas, plus optimale.
Dilution de sérum :
1 : 400 10 µl sérum de patient
pour 4000 µl tampon de dilution (= 1 + 400)
Dilution de LCR :
1 : 2 100 µl LCR
pour 100 µl tampon de dilution (= 1 + 1)
Pour des concentrations plus élevées d’anticorps dans le sérum et le LCR, les dilutions
suivantes pour les deux prélèvements ont été éprouvées dans de nombreux tests :
Dilution de sérum :
1 : 1000 10 µl sérum de patient
pour 1000 µl tampon de dilution (= 1 + 100)
français 7
20 µl de la première dilution
pour 180 µl tampon de dilution (1 + 9)
Dilution de LCR :
1 : 10 20 µl LCR
pour 180 µl tampon de dilution (= 1 + 9)
Les prélèvements dilués doivent être soigneusement mélangés et mesurés en détermination
double par ELISA.

Remarque :
Très souvent la quantité de prélèvement de LCR n’est pas suffisante, de sorte que des dilutions
plus élevées doivent être choisies. Dans ce cas, une dilution plus élevée du sérum doit
également être choisie. Une dilution plus élevée peut cependant aller dans certains cas de pair
avec une perte de la sensibilité.
2.1.2 Absorption des facteurs rhumatoïdes
Lors de déterminations d’IgM, une absorption du facteur rhumatoïde (FR) peut être réalisée
pour les prélèvements de sérum et de LCR. Les instructions suivantes se rapportent au produit
SERION Rf-Absorbens (réf. Z100 (5 ml) et Z200 (20 ml)).
Réalisation de l’absorption du facteur rhumatoïde pour le sérum :
1. Bien mélanger 10 µl de prélèvement de sérum avec 200 µl de Rf-Absorbens et 800 µl de
tampon de dilution SERION ELISA classic (donne une dilution de sérum de 1:100).
2. Incuber durant 15 minutes à température ambiante, ou durant une nuit à +2 -+ 8 o C;
de nouveau, bien mélanger
3. Réaliser la seconde étape de dilution (1:4 et 1:10) avec le tampon de dilution SERION ELISA
classic. À présent, utiliser 100 µl de cette dilution de 1:400 et 1:1000 pour l’essai de test
SERION ELISA classic.
Réalisation de l’absorption du facteur rhumatoïde pour le LCR :
1. Diluer préalablement le SERION Rf-Absorbens à 1:5 avec le tampon de dilution SERION
ELISA classic,
par ex. : 100 µl de Rf-Absorbens + 400 µl de tampon de dilution SERION ELISA classic; bien
mélanger l’essai.
2. Diluer le prélèvement de LCR avec cette pré-dilution de Rf-Absorbens à 1:2 ou 1:10, par ex. :
100µl de pré-dilution + 100 µl de LCR (1:2) ou
180 µl de pré-dilution + 20 µl de LCR (1:10); bien mélanger l’essai.
3. Incuber durant 15 minutes à température ambiante, ou durant une nuit à +2 - +8o C; de
nouveau, bien mélanger.
4. Utiliser 100 µl du mélange pour un essai de test avec SERION ELISA classic.
français 8

2.1.3 Diagramme synoptique du déroulement du test IgG/IgM/IgA SERION ELISA classic
(voir aussi pour cela le mode d’emploi fourni dans le kit de test respectif)
Dilution des échantillons (patients) :
Sérum: 1:400 / 1:1000
LCR : 1:2 / 1:10
Dépôt dans les puits des prélèvements dilués
et des sérums de contrôle/standard prêts à l’emploi (100 µl)
INCUBATION 60 min./ 37°C
chambre humide
LAVER
Addition de la solution de conjugué dilué (100 µl)
INCUBATION 30 min./ 37°C
chambre humide
LAVER
Addition de la solution de substrat (100 µl)
INCUBATION 30 Min./ 37°C
chambre humide
Addition de la solution d’arrêt (100 µl)
MESURE D’EXTINCTION À 405 nm
français 9

2.2. Exploitation
Un certificat de contrôle qualité accompagné d’une table des valeurs et d’une courbe standard
est fourni dans chaque kit. Sur le certificat de contrôle de qualité, les "valeurs théoriques" du
sérum standard, dont la zone de validité ainsi que les 4 paramètres de la formule d’évaluation
pour l’exploitation automatisée du test sont indiquées.
La lecture des valeurs en U/ml à partir de la table des valeurs n’est pas adapté au diagnostic du
LCR.
2.2.1 Exploitation manuelle
Pour l’exploitation du test, une courbe standard a été jointe, au moyen de laquelle chaque
valeur de DO obtenue lors du test peut être affectée à l’activité d’anticorps correspondante.
La valeur de témoin du substrat (blanc) doit être déduite de tous les résultats de la mesure,
avant toute exploitation.
Les variations de tests survenant d’un jour à l’autre ou d’un laboratoire à l’autre (dite Variance
d’inter-essais) sont compensées par la multiplication de la valeur actuelle mesurée de
l’échantillon du patient par un facteur de correction F :
F =
Valeur théorique DO (du sérum standard)
Valeur journalière DO (du sérum standard)
Ce procédé est nécessaire pour ajuster et normaliser le niveau actuel de mesure de l’utilisateur à
la courbe standard spécifique du lot.
Tout d’abord, les variations journalières doivent être corrigées par le calcul d’un facteur :
1. À partir des 2 valeurs d’extinctions de la valeur moyenne du standard, établir et vérifier si
la valeur se trouve dans l’intervalle de validité indiquée.
2. Calcul du facteur "F" : La valeur théorique indiquée du standard est divisée par la valeur
moyenne d’extinction :
F = Valeur théorique d’extinction standard / Valeur moyenne d’extinction standard.
3. Toutes les valeurs mesurées des échantillons de patient sont multipliées par "F".
4. Grâce aux valeurs mesurées corrigées au moyen de la courbe des standards, les activités des
anticorps peuvent être lues en UI/ml ou U/ml. 1)
français 10

2.2.2 Exploitation automatisée avec le logiciel SERION easy base 4PL
Par l’introduction des 4 paramètres et de la valeur théorique du sérum standard, les activités
des anticorps sont calculées, après mesure, par le programme d’exploitation.
Dans le cas où une valeur se situerait en dehors de la zone de validité, les messages d’erreurs
suivants peuvent s’afficher :
”Les standards se trouvent en dehors de la zone de tolérance”; et/ou: ”L’écart entre les
standards est supérieur à 20 %.” Dans ce cas, le test n’est pas valide et devrait être recommencé.
Les paramètres et les valeurs théoriques ne devraient être changés qu’à chaque changement de
lot (les paramètres et les valeurs théoriques sont donnés dans la table des valeurs).
L’introduction correcte de ces données spécifiques au lot, peut être contrôlée au moyen des
valeurs en U/ml attribués au sérum standard. La valeur moyenne des unités obtenue doit
correspondre à la valeur unitaire indiquée sur le certificat spécifique au lot. Une correction de la
valeur mesurée se fait automatiquement. Dans l’expression des résultats mesurés, apparaissent :
français 11
Description de l’échantillon
Valeur de DO
U/ml 1)
Évaluation 2)
1) Les valeurs en U/ml doivent encore être recalculées comme suit, avec les dilutions choisies
pour le sérum et le LCR !
2) Les évaluations indiquées ici sont sans importance pour le diagnostic LCR.
Elles ne sont valables que pour des prélèvements de sérums avec une dilution de 1:100.
2.3 Calcul du quotient pour les anticorps spécifiques de l’agent pathogène
Comme le sérum et le LCR ont été mesurés à des dilutions différentes (par ex. 1:400 pour le
sérum, 1:2 pour le LCR), les concentrations obtenues pour le sérum et le LCR doivent être
rapportés à une dilution unique (ici 1:100). C’est la raison pour laquelle les valeurs U/ml du
sérum sont multipliés par un facteur 4 tandis que les valeurs en U/ml du LCR sont divisées
par un facteur 50. Les valeurs unitaires obtenues pour le sérum peuvent être évaluées, après le
calcul, de manière spécifique au test.
IgG:
IgM:
IgA:
Q IgG spéc. =
Q IgM spéc. =
Q IgA spéc. =
U/ml IgG spéc. LCR
U/ml IgG spéc. Sérum
U/ml IgM spéc. LCR
U/ml IgM spéc. Sérum
U/ml IgA spéc. LCR
U/ml IgA spéc. Sérum

3. CALCUL DE L’INDEX D‘ANTICORPS (IA)
Pour l’identification d’une synthèse locale d’anticorps spécifiques de l’agent pathogène dans le
SNC, le quotient LCR-sérum spécifique de l’agent pathogène (Q IgG spéc./IgM spéc./IgA spéc.) est divisé
par le quotient LCR-sérum des Ig totales (Q IgG totales/IgM totales /IgA totales):
Q
IA =
Q
français 12
IgG spéc. / IgMspéc.
/ IgA spéc.
IgG totales
/ IgM totales/ IgA totales
En présence d’une synthèse polyspécifique intrathécale d’IgG totales, d’IgM totales et d’IgA
totales, le quotient d’IgG, d’IgM, et d’IgA spécifique de l’agent pathogène, est divisé par le
Q Lim IgG / Lim. IgM / Lim. IgA calculé.
(Rappel : une synthèse intrathécale d’IgG a lieu, lorsque
Q IgG totales/IgM totales /IgA totales > Q Lim. IgG Lim. IgM / Lim. IgG):
IA
4. INTERPRÉTATION
Q
AI =
Q
IgG spéc. / IgM spéc. / IgA spéc.
Lim. IgG / Lim. IgM / Lim. IgA
IA > 1,5 Formation pathologique
d’anticorps spécifiques de l’agent pathogène
dans le LCR
IA = 0,7 à 1,3 Domaine normal,
pas de synthèse d’anticorps spécifiques
de l’agent pathogène dans le LCR
Remarque :
Lorsque dans le LCR, des anticorps sont mesurés, et sont dus à la diffusion du sérum vers le
LCR, dans le cas idéal, et avec la plus grande précision possible de mesure, un IA de 1 est
obtenu.
Le comportement des concentrations des anticorps spécifiques et des immunoglobulines totales
est identique, du fait que les deux diffusent de la même manière. Cela est aussi valable an cas de
trouble fonctionnel de la barrière.
Le procédé de Reiber fixe la zone normale de l’IA entre 0,7 et 1,3 (marge d’erreurs des mesures).
Les valeurs > 1,5 sont considérées comme pathologiques.
Si un IA de 1 est déterminé, la détermination a été réalisée de manière optimale, dans la mesure
où les autres paramètres d’analyses donnent également un résultat normal. (contrôle de
qualité).

5. EXEMPLE DE CALCUL
Exemple :
Patient de sexe masculin, 32 ans, suspicion d’une encéphalite due au virus herpès simplex
Calcul du quotient d’albumine
La mesure a donné une concentration d’albumine de 349 mg/l dans le LCR et de 49,3 g/l dans
le sérum. Selon la formule (Paragraphe 1.2),
Q Albumine =
Conc. Albumine LCR
Conc. Albumine Sérum
349 mg/l
Q Albumine = Q Albumine = 7,08 x 10
49,3 g/l
-3
Remarque : Selon le tableau donné en 1.2, on peut soupçonner un léger dysfonctionnement de
la barrière.
Calcul du quotient pour les IgG totales :
Par la mesure, des concentration en IgG de 33,1 mg/l dans le LCR et de 7,48 g/l dans le sérum
ont été obtenues. Selon la formule (Paragraphe 1.3),
Q IgG totales =
Conc. IgG totales LCR
Conc. IgG totales Sérum
33,1mg/l
7,48 g/l
Q IgG totale s = Q IgG totales = 4,43 x 10 -3
Calcul du quotient de limite :
Par l’application de la formule décrite au point 1.4, on obtient
Q Lim IgG = 0.93 x
Q Lim IgG = 0.93 x
Q Lim IgG = 5,27 x 10 -3
2
-6
(Q Albumine) + 6 x 10 - 1,7 x 10-3 -6
-6
(50,13 x 10 ) + 6 x 10 - 1,7 x 10-3 Le Q IgG totales étant plus petit que le Q IgG-lim, la valeur de Q IgG totales est prise comme grandeur de
référence dans le calcul de l’IA suivant.
Calcul du quotient d’anticorps spécifiques de l’agent pathogène :
Après mise en œuvre de la caractérisation SERION ELISA classic correspondante (par ex. IgG
HSV), les concentrations suivantes d’anticorps spécifiques de l’agent pathogène dans le sérum
et le LCR ont été obtenues et recalculées avec le facteur de dilution (voir pour cela le point 5.3):
français 13

IgG HSV SERION ELISA classic :
Concentration dans
le LCR
Concentration dans
le sérum
Dilution (par ex.)
À partir de là, le quotient se calcule comme suit :
Q IgG spéc. =
Q IgG spéc.
U/ml IgG spéc.
U/ml IgG spéc.
Calcul de l’index d’anticorps (IA):
français 14
Calcul pour une dilution
unique de 1:100:
LCR 1:2 15,7 U/ml : 50 = 0,314 U/ml
Sérum 1:400 6,66 U/ml x 4 = 26,64 U/ml
LCR
Sérum
0,314 U/ml
= Q. IgG spéc. = 11,79 x 10
26,64 U/ml
-3
Avec les valeurs obtenues plus haut pour les différents quotients, l’IA peut être calculé comme
suit :
Q
IA =
Q
IgG spéc.
IgG totales
-3
11,79 x 10
IA = IA = 2,66
-3
4,43 x 10
Évaluation du résultat :
Il existe une indication de synthèse intrathécale d’anticorps spécifiques de l’HSV.

6. CARACTÉRISTIQUES ET PERFORMANCES
6.1 REPRODUCTIBILITE ET REPETABILITE
Précision des quotients d’anticorps spécifiques dans le LCR/sérum
Écart - type
Coefficient de variation (CV) = x 100
Moyenne
Coefficient de
variation (%)
IgG
Reproductibilité
(n=10)
Répétabilité
(n=10)
français 15
Rougeole Rubéole VZV HSV
14,8 7,01 6,30 7,81
9,95 8,00 8,75 7,77
Des valeurs doubles servent de base de calcul.
Type de prélèvement: sérums et LCR regroupés (31 paires sérum-LCR).
7. INSTRUCTIONS POUR LE PROGRAMME D’EXPLOITATION (SERION LCR)
Programme de logiciel fonctionnant sous MS-Excel
Sur demande, nous vous enverrons une disquette avec le logiciel mentionné ci-dessus. Votre
conseiller commercial habituel se tient volontiers à votre disposition pour répondre à toute
autre question.
7.1 Démarrage du programme :
Démarrer le programme sous MS-Excel. Insérer la disquette dans le lecteur de disquette A.
Sélectionner sous „Fichier - ouvrir “ le lecteur de disquette A et charger le fichier
„CSFVers15-E.xls“. À présent, la feuille de données spécifiques du patient s’affiche sur votre
écran.
7.2 Données du patient et résultats mesurés :
Saisissez tout d’abord toutes les données du patients disponibles, dans les champs en grisé
prévus à cet effet :
Numéro du laboratoire
Nom du patient
Âge du patient
Date de l’analyse

Reporter ensuite les résultats obtenus lors des mesures du sérum et du LCR, ainsi que les
dilutions choisies pour l’analyse des anticorps spécifiques de l’agent pathogène, dans les
champs en grisé prévus à cet effet. Veuillez observer la bonne ponctuation lors de la saisie des
valeurs décimales (correct : 3,45 / incorrect : 3.45).
Concentrations d’albumine*
Concentrations d’immunoglobulines totales (IgG totales et/ou IgM totales)*
Concentrations des anticorps spécifiques (IgG et/ou IgM)
ainsi que les dilutions choisies pour le sérum et le LCR **
(par ex. 1:2 pour le LCR, 1:400 pour le sérum)
Remarques :
* Attention aux unités demandées en mg/l pour le LCR et en g/l pour le sérum ! Si
d’autres unités ont été données lors des mesures, une conversion est nécessaire !
** Dans le cas où des dilutions différentes pour la caractérisation de chaque agent
pathogène auraient été choisies pour la caractérisation des anticorps spécifiques (par ex.
dilution de sérum pour les IgG de la rougeole 1:400, pour les IgG Borrelia 1:200), le calcul
ne peut alors pas se faire sur la même feuille. En cas de dilutions différentes, une feuille
de données supplémentaires doit être utilisée.
7.3 Calcul du quotient et de l’IA :
Le calcul des quotient est réalisé par le programme lui-même, dès lors que toutes les données
exigées ont été saisies. Dans la colonne „Valeurs IA “, l’index d’anticorps calculé s’affiche.
7.4 Enregistrement des données :
Veuillez enregistrer les feuilles de données spécifiques au patient sous un nom de fichier
individuel (Menu: „Fichier – Enregistrer sous “).
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