o Manuel de procédures techniques - Direction des laboratoires

Identification biochimique d’abord qui est effectuée grâce :
- au test à l’oxydase qui est positif
- à l’ensemencement d’une galerie d’identification minimale (Kligler-Hajna, Mannitol-Mobilité, Citrate
de Simmons, Urée-Indole, Eau peptonée sans indole, Eau peptonée nitratée).
Les principaux caractères biochimiques de Vibrio cholerae sont les suivants : Glucose (+) fermenté sans
gaz, Lactose (-) ou lent avec test à l’ONPG (+), SH2 (-), uréase (-), indole (+), nitrate réductase (+),
catalase (+), oxydase (+). La classique sensibilité au composé O/129 n’est plus un test spécifique à cause
de la circulation de plus en plus fréquente, de souches résistantes.
/ Identification immunologique par agglutination sur lame grâce à un test au latex pour déterminer
le sérogroupe et le sérotype. Les sérogroupes O1 et O139 sont responsables d’épidémies ; le sérogroupe
O1 compte trois sérotypes : Ogawa, Inaba et Hikojima.
Test d’agglutination sur lame pour le sérogroupage
(positif à gauche, négatif à droite) [Source : A. Dodin]
NB : En cas d’épidémie, une démarche plus rapide (ci-dessous décrite) est adoptée et lorsque
l’épidémie est confirmée les analyses de selles sont réalisées chez 1 malade sur 10.
- Après les examens macroscopique et microscopique, un milieu d’enrichissement est ensemencé
et incubé pendant 3 heures.
- Le 1 er tube est repiqué sur un 2 e contenant de l’EPHA et réisolé parallèlement sur milieux d’isolement
(GNA, TCBS).
- Au bout de trois autres heures, la même opération est répétée à partir du 2 e tube d’EPHA.
- Après 16 à 18 heures, les tests suivants sont réalisés sur colonies suspectes isolées sur GNA : examen
microscopique, test à l’oxydase et tests d’agglutinations.
NB : à défaut de GNA, on peut utiliser la gélose Mueller Hinton
le test d’agglutination ne doit pas être effectué sur les colonies de TCBS
d) Antibiogramme :
Il est réalisé sur gélose Mueller Hinton (MH) selon la technique décrite plus loin.
Les antibiotiques suivants doivent être testés pour les besoins de la surveillance comme du traitement :
amoxicilline, tétracycline, doxycycline, chloramphénicol, cotrimoxazole, furazolidone, érythromycine,
norfloxacine.
e) Acheminement des souches au Laboratoire National de Référence :
Les souches identifiées et isolées en culture pure seront envoyées au Laboratoire National de Référence
sur milieu de conservation qui sera mis à la disposition des laboratoires du Réseau, et conformément aux
règles d’expédition des échantillons infectieux.
RNL Sénégal : Manuel de Procédures techniques (Page 24)