Extraction et quantification de la matière organique des - laboratoire ...

4. MATERIAUX ET METHODES
Echantillons
La préparation des échantillons est un étape important dans cette étude. Pour cela,
les échantillons ont été broyés à l’aide d’un mortier d’agate. Ensuite ils sont passés à
travers un tamis de 0,6 mm et un tamis de 0,4 mm. Des sous échantillons sont pris
pour l’analyse de carbone total (CT).
Matériaux :
- Centrifugeuse : pour la séparation de surnageant et de résidu
- Tubes à centrifugeuse.
- Agitateur : pour secouer et homogénéiser les mélanges.
Réactifs utilisés :
- Solution de HCl 1M
- Solution de HCl 6M
- Solution de NaOH 1 M
- Solution de NaOH 0,1M
Toutes les solutions sont préparées avec de l’eau desionisée obtenue par un
système de Millipore-Q.
Extraction des acides humiques (AH), acides fulviques (AF) et les Humines
Ce protocole permet le fractionnement des substances (SH) en acides humique et
fulvique en fonction de leur solubilité différente selon le pH (figure 4). La séparation
de AF et FNH en utilisant une résine XAD 8 n’a pas été faite, faute du temps. Ce
Protocol a été modifié à partir de celui de Swift (1996). Pour chaque type de sol, un
triplicat a été fait.
Etape 1
1 g de sol est mis en suspension avec 30 ml de HCl 1M dans un tube à centrifuger
jusqu’à pH 1. Ceci permet la précipitation des acides humiques AH (insoluble à pH
acide). La suspension est secoué sur un agitateur pendant 1 heure, en suite
centrifugé à une vitesse (2800 tours/min) pendant 30 minutes pour enlever le
surnageant (S1) qui contient les acides fulviques (FA). Le résidus (R1) est solubilisé
de nouveau avec 30 ml de HCl 1M à pH 1. Ce procédé est répétée trois fois pour
chaque réplica pour donner trois surnageant, qui sont mis en commun et seront
analysés pour le carbone organique associé aux fulviques plus humines.
Etape 2
Le résidu (R1) est mis en suspension avec 15 ml de NaOH 1M et 15 ml de NaOH
0,1M jusqu’à pH 13. Le milieu alcalin permet l’entrainement en suspension des
acides humiques (AH) et des acides fulviques (AF) n’ayant pas été extraits lors de
l’étape 1. La suspension est agitée pendant 3 heures sous atmosphère d’azote et
centrifugée avec une vitesse (2800 tours/min) pendant 30 minutes. Le résidu (R2) est
récupéré séché à l’étuve à une température