Lettre nÂ° 3 - Direction des sciences du vivant - CEA

More documents

Recommendations

Info

L ettre de l’iBEB—n° 3P a ge 8Plateau de microscopie et microdissection laserLe Laboratoire de Biologie du Développementdes Plantes (SBVME/LBDP) héberge un plateau de microscopieouvert à tous les membres del’iBEB. Les équipements sont en libreservice,sous réserve de suivre au préalableles formations associées (pourplus d’information, contacter HélèneJavot). Sur ce plateau sont rassemblésdes outils d’imagerie de routine(microscopes et loupes binoculaireséquipés de caméra et de fluorescence),mais aussi des microscopes plus sophistiqués: un microscope confocal,un système d’analyse FLIM et un microdissecteurlaser (détaillés cidessous).Pour compléter cet ensemble,des équipements d’analyses histologiquesont été installés : microtomes,robot InSituPro pour la réalisationautomatisée d’hybridation in situ oud’immunodétection, etc.Récemment, notre plateau a accueillile microscope droit Leica LMD6000équipé pour la microdissection laser.Pour l’observation des échantillons, cemicroscope dispose d’une caméraanalogique, d’une caméra numérique,de filtres de fluorescence et systèmed’illumination approprié, et enfin deprismes pour l’imagerie champ clair,DIC, etc. Grâce à un puissant faisceauUV (355 nm) et à une platine motorisée,il est possible de découper et trierdes cellules ou tissus peu épais de manièreextrêmement précise et rapide.Ces cellules peuvent ensuite être exploitéespour de multiples applications,telles que des analyses transcriptomiques,protéomiques,… Grâce àcet outil, le LBDP a démontré le rôledes premières couches de cellules de lapointe racinaire (coiffe) dans la perceptionde la carence en phosphatechez Arabidopsis (Svistoonoff et al.,2007 Nature Genetics). En disséquantces cellules, les membres de ce laboratoireont confirmé que les comportementsdistincts de deux écotypes faceà la carence en phosphate pouvaientêtre attribués à l’expression différentielledu gène LPR1 au niveau de lacoiffe.Le microscope confocal, un LeicaSP2 avec système AOTF et AOBS, estmonté sur un microscope inversé DMIRE2. Il est équipé de quatre lasers(argon, diodes 405 et 561 nm, HeNe633 nm) offrant 8 raies d'excitationlaser. Grâce au système AOBS, l'utilisateurpeut choisir au nm près, la zonedu spectre d'émission qu'il souhaitecollecter. A l'aide de ce microscope,des chercheurs du LEMS ont déterminéla localisation vacuolaire du transporteurde métaux lourds AtHMA3d'Arabidopsis et son rôle dans l’accumulationde cadmium à l’intérieur dela vacuole (Morel et al., 2009, PlantPhysiol).Ce même microscope est couplé à unmodule TCSPC Becker Hickl permettantde faire des acquisitions FLIM(Fluorescence Lifetime Imaging). Cemode d'imagerie repose sur l'utilisationd'un laser pulsé (une diode laser405 nm) qui permet de caractériser lesfluorochromes sur la base du temps dedécroissance de leur fluorescence. Lespropriétés de temps de décroissancede fluorochromes peuvent être moduléespar la proximité avec d'autresmolécules fluorescentes. De ce fait, lesmesures de temps de décroissancesont souvent exploitées dans des étudesd'interactions protéine-protéine.Pour favoriser l'utilisation de cettetechnique dans le domaine du végétal,des membres du LBDP ont identifiéun couple de fluorochromes (T-Sapphire et mOrange) adapté aux étudesd'interactions entre protéines chezles plantes (Bayle et al., 2008 Plant Physiol).Ils ont de plus démontré quel'utilisation de cet outil pouvait êtreétendue à l'étude de multiples compartimentscellulaires.À l’avenir, le plateau de microscopiedevrait s'enrichir d'un système dédiéaux mesures de bioluminescence àl'échelle cellulaire (basé sur la combinaisond'un microscope avec une camérahautement refroidie). De nouvellespossibilités et collaborations enperspective !Contacts : helene.javot@cea.fr et laurent.nussaume@cea.fr.
L ettre de l’iBEB—n° 3P a ge 9Institut de Biologie Environnementale et BiotechnologieService de Biochimie et Toxicologie NucléaireCEA Marcoule30207 Bagnols-sur-Cèze04-66-79-19-01Service de Biologie Végétale et de Microbiologie EnvironnementalesCEA Cadarache13108 St Paul lez Durance04-42-25-27-53SBTN MarcouleiBEBSBTN-TIRO NiceSBVME Cadarachehttp://www-dsv.cea.fr/ibebSBVME-LGBP MarseilleLes laboratoires de l’iBEBSBTN MarcouleEric QUEMENEURLaboratoire de Biochimie des Systèmes Perturbés (LBSP)Laboratoire de Détection et de Caractérisation des Agentsdu Risque Environnemental (LDCAE)Laboratoire d'Étude des Protéines Cibles (LEPC)Laboratoire d'Ingénierie Cellulaire et Biotechnologique(LICB)Laboratoire des Interactions et Reconnaissance Moléculaires(LIRM)Laboratoire des Transporteurs en Imagerie et Imagerie enSBVME CadaracheThierry HEULINLaboratoire de Bioénergétique et Biotechnologie des Bactéries etMicroalgues (LB3M)Laboratoire de Bioénergétique Cellulaire (LBC)Laboratoire de Biologie du Développement des Plantes (LBDP)Laboratoire d'Écologie Microbienne de la Rhizosphère et d'EnvironnementsExtrêmes (LEMIRE)Laboratoire d'Écophysiologie Moléculaire des Plantes (LEMP)Laboratoire des Échanges Membranaires et Signalisation (LEMS)Laboratoire de Génétique et Biophysique des Plantes (LGBP)Directeur de la PublicationThierry HEULINComité de RédactionCyrille FORESTIER, Gilles PELTIER, Éric QUEMENEURCorrespondants RédactionW. ACHOUAK , J. ARMENGAUD, L. BELLANGER, C. BERTHOMIEU, B. GENTY, F. GIBIAT, L. NUSSAUME, J.L.PELLEQUER, G. PELTIER, D. PIGNOL, T. POURCHER, C. ROBAGLIA, V. TANCHOU, A. VAVASSEUR, C. VIDAUDAbonnement et questionsCyrille FORESTIER
Page 3 and 4: L ettre de l’iBEB—n° 3P a ge 3
Page 5 and 6: L ettre de l’iBEB—n° 3P a ge 5
Page 7: L ettre de l’iBEB—n° 3P a ge 7

Lettre nÂ° 3 - Direction des sciences du vivant - CEA

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?