bio n°37 - Direction des sciences du vivant - CEA

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Bioscopie
Valorisation et partenariat
industriel: un bilan
globalement positif. p. 2
Des outils de valorisation
pour réussir. p. 3
Biotope
Développement
d’antiparasitaires
et d’herbicides. p. 4
Bio-partenaires
Dans la recherche d’un
vaccin contre le VIH, les
chercheurs se focalisent
sur le transactivateur
transcriptionnel (Tat). p. 5
Biorythmes
Zoom sur la régulation
des gènes, l’immunologie,
le diagnostic biomédical
et l’immunochimie. p. 6
Bio-notes
Ouvrages, séminaires,
outils pratiques, etc. p. 8
Lettre d’information
scientifique
Éditorial
bio n°37
Octobre 2007
D I R E C T I O N D E S S C I E N C E S D U V I V A N T
La valorisation de la recherche
une priorité pour DSV
LA VALORISATION EST LE PROLONGEMENT
DE LA RECHERCHE, MAIS CETTE
CAPACITÉ À VALORISER NÉCESSITE
UNE SENSIBILISATION DE TOUS
LES ACTEURS.
La recherche fondamentale n’est
pas seulement l’acquisition de
nouveaux « savoirs » mais aussi
une source de progrès social et un
remarquable moteur de développement
économique. C’est cette
reconnaissance du rôle de la recherche
qui constitue le fondement
primordial de l’objectif que s’est fixé
l’Union européenne au Sommet de
Lisbonne en 2000: « Devenir l’économie
de la connaissance la plus
compétitive et la plus dynamique, capable
d’une croissance économique durable,
accompagnée d’une amélioration quantitative
et qualitative de l’emploi et d’une plus grande
cohésion sociale. »
DÉGAGER DES LIGNES D’ACTIONS
La prise de conscience des enjeux sociétaux
de la recherche a largement contribué à faire
évoluer les mentalités: la recherche « fondamentale
» n’est plus systématiquement opposée
à la recherche dite « finalisée », l’innovation
et la valorisation de la recherche ont
fait l’objet de nouvelles mesures législatives
visant, d’une part, à intéresser les chercheurs
à l’exploitation de leurs travaux et, d’autre
part, à faciliter la création et l’incubation de
jeunes entreprises innovantes. Les appels à
projets de l’Agence nationale pour la recherche
et les pôles de compétitivité sont venus
renforcer le dispositif en encourageant la
recherche partenariale public/privé.
La mise en place d’une telle politique
publique doit s’accompagner de mesures
visant à évaluer son efficacité. De cette évaluation
des institutions de recherche, notamment
du rapport sur la valorisation de la
recherche publié en début d’année 1 , le CEA
dans sa globalité – et la Direction des sciences
du vivant en particulier – sort conforté
dans sa politique de valorisation, puisqu’il est
cité en modèle à côté de deux autres organismes
de recherche.
Cette reconnaissance doit nous inciter à être
à l’avenir encore plus performants, d’autant
que la concurrence internationale s’est fortement
accrue, notamment dans le domaine
des biotechnologies. Non seulement nous
devons maintenir notre objectif d’excellence
de la recherche, qui est le premier facteur
d’attractivité pour nos partenaires industriels,
mais également accroître notre capacité à
innover et à transférer les résultats de cette
recherche pour les transformer en produits et
services utiles à la société.
Cette capacité à valoriser tient bien évidemment
à la qualité de l’organisation
mise en place à DSV et aux moyens
qui lui sont consacrés. Mais elle ne
peut réellement s’exprimer sans
l’assimilation par les chercheurs de
la mission de valorisation comme
un prolongement de leur recherche.
Sur ce point, le séminaire stratégique
sur la valorisation, organisé
en avril dernier par Christian Vincent
à Cadarache, a permis de définir les
bases d’une nouvelle organisation
mieux adaptée à la forte augmentation
des effectifs de DSV et à l’émergence des
instituts de recherche. Il nous a également
permis de dégager des lignes d’actions pour
mieux sensibiliser et responsabiliser tous les
acteurs de cette recherche.
Cette édition de CEA Bio est totalement dédiée
à la valorisation. C’est l’occasion de décrire la
nouvelle organisation de la valorisation à DSV,
les processus de valorisation, ainsi que les
actions de sensibilisation et de formation qui
vous sont destinées. C’est également l’occasion
d’illustrer par l’exemple la transformation
de résultats de recherche fondamentale en projets
de valorisation transférés, ou en voie de
l’être, à des partenaires industriels.
1. « Rapport sur la valorisation de la recherche
n° 2006-82, Inspection générale de l’administration
de l’Éducation nationale et de la recherche et de
l’Inspection générale des finances », janvier 2007.
Roger Genet
Directeur adjoint des sciences du vivant
OCTOBRE 2007 _ DIRECTION DES SCIENCES DU VIVANT_ N° 37

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Bioscopie
2
© CEA/DSV
© CEA/DSV
Développer une valor@ttitude à DSV
Indissociables d’une politique
volontariste d’excellence de la
recherche, la valorisation et le
partenariat industriel ont toujours
été une priorité à DSV. Cela se traduit
par un bilan positif unanimement
reconnu dans les rapports
d’audits conduits tant en interne
CEA qu’en externe [ 1 ]. En avril
2007, la DSV détient ainsi un portefeuille
de 110 familles de brevets
prioritaires largement étendus à
l’étranger, 33 licences en vigueur et
le cumul des redevances perçues
depuis 2001 s’élève à un peu plus
de 50 millions d’euros. Sur le plan
de notre contribution à l’effort de
R&D industriel, effort allant de simples
prestations à des collaborations
et partenariats, nous oscillons entre
80 et 130 nouveaux contrats par an
pour des montants de l’ordre de
3,5 à 5,5 millions d’euros.
Sur la base du seul critère « redevances
», DSV aurait pu être dans les
tout premiers rangs du top 10 des
universités américaines les plus performantes
en termes de transfert en
biotechnologies si elle avait fait partie
du panel d’études du Milken Institute,
un institut d’évaluation faisant
référence aux États-Unis [ 2 ]. Cet
excellent résultat ne doit cependant
pas masquer certaines faiblesses:
Répartition du portefeuille licences par institut de recherche
Répartition du portefeuille brevets par institut de recherche
Données avril 2007. L’Institut de génomique a rejoint DSV
en mai et n’a pas été comptabilisé dans le bilan.
© CEA/DSV
pas assez de déclarations d’inventions
d’où un nombre de brevets
insuffisants, et par conséquent un
nombre de projets de valorisation
trop limité pour être certains d’aboutir,
dans des délais raisonnables,
sinon à un nouveau blockbuster
comme l’a été celui du test de
détection de l’ESB, du moins à un
ensemble de licences de fort rapport
économique [ 3 ].
Du côté des collaborations et des
partenariats, il est plus difficile de
se comparer en l’absence de critères
standardisés pertinents. Néanmoins,
malgré un bilan honnête
pour une direction de recherche
fondamentale, l’analyse détaillée
par institut, voire par laboratoire,
IBS : Institut
de biologie structurale
IBEB : Institut
de biologie
environnementale
et de biotechnologie
IRSTV : Institut
de recherches
en technologies
et sciences
pour le vivant
IRCM : Institut
de radiobiologie
cellulaire et moléculaire
IMETI : Institut des
maladies émergentes
et thérapies innovantes
I2BM : Institut d’imagerie
biomédicale
IBITEC-S : Institut
de biologie et
technologies – Saclay
montre une disparité importante
quant aux efforts faits pour collaborer
avec l’industrie. En d’autres
termes, ce sont bien souvent les
mêmes laboratoires, les mêmes
chercheurs, qui recherchent ce
contact avec leurs collègues de la
R&D industrielle. Enfin,
force est de constater
que notre portefeuille
de partenaires industriels
n’est pas assez
diversifié, donc fragile.
S’il est vain de penser
que les revenus des
licences, des collaborations
et partenariats
industriels peuvent financer
la recherche, il
n’en reste pas moins
qu’ils y contribuent de
façon significative (41 %
des recettes externes).
Enfin, ces revenus constituent
un levier puissant
de la politique d’investissement
de DSV, notamment à travers la
création de plateformes technologiques
qui donnent aux chercheurs
un avantage certain dans la compétition
internationale, et ce pour les
RÉFÉRENCES
CHRISTIAN VINCENT
Responsable de la
cellule de valorisation
et de transfert de
technologie
Tél. : 01 46 54 83 73
christian.vincent@cea.fr
décennies à venir. Accroître les ressources
externes via notamment la
valorisation et les partenariats industriels
est ainsi un objectif majeur de
DSV pour les années à venir.
Suite à un séminaire organisé les
16 et 17 avril par la cellule de valorisation
et regroupant la direction de
DSV, les chefs d’institut et un panel
de chercheurs, de nouveaux objectifs
ont été d’ores et déjà décidés
pour la valorisation : 1) tripler les
déclarations d’invention pour au final
doubler le nombre de dépôts de brevets
d’ici deux ans; 2) renforcer la
maturation des projets de valorisation
jugés les plus porteurs sur le
plan socioéconomique afin d’augmenter
leur chance d’être transférés
à un industriel ou de conduire à
la création d’une start-up. Sur le
plan des partenariats industriels,
pas d’objectifs chiffrés mais une
réflexion en cours visant à les augmenter,
notamment via les réponses
aux différents appels à projets
tant nationaux qu’européens.
Atteindre ces objectifs
nécessite une forte implication
des instituts
en particulier pour la
sensibilisation des chercheurs
à la déclaration
d’inventions et la recherche
de nouveaux
partenaires industriels.
Aussi certains d’entre
eux se sont déjà dotés
de correspondants de
valorisation qui interagiront
avec la cellule
valorisation de DSV. Des
formations vont être
prochainement lancées ainsi qu’une
École d’été de la valorisation. Ces
premières actions préfigurent le
volontarisme de DSV à accentuer
encore sa politique de valorisation
et de partenariat industriel.
1 AUDITS
- De la gestion financière des accords de licences de brevets d’invention
juin 2007 – Direction Financière – CEA
Rapport sur la valorisation de la recherche – janvier 2007 – Inspection
générale des finances
- La gestion de la recherche publique en sciences du vivant – mars 2007
Rapport public thématique de la Cour des comptes
2 Mind to Market : A Global Analysis of University Biotechnology Transfer
and Commercialization – September 2006 – Milken Institute
3 En avril 2007, 16 projets de valorisation sont en cours dont certains
sont exposés dans ce CEA Bio.
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© CEA/DSV
Valoriser : des outils pour réussir
La cellule valorisation de DSV
dispose d’outils et de méthodes
qui lui permettent d’optimiser
ses activités de transfert tout
en répondant du mieux possible
aux attentes des chercheurs.
Brevets: déposer vite – et au bon
moment – pour ne pas retarder la
publication
Le dépôt de brevet se fait à DSV sur
la base d’un mémoire technique
rédigé par le chercheur. Ce document
nous permet d’évaluer la brevetabilité
de l’invention au regard de
l’état de l’art. Il est donc nécessaire
de bien le compléter et d’y joindre
tout article ou brevet illustrant
l’invention de manière significative.
Un mémoire de qualité permet
d’envisager un dépôt de brevet entre
un et trois mois. Si le chercheur souhaite
publier ses résultats, il doit
donc, dans l’idéal, nous envoyer un
dossier dès qu’il dispose de suffisamment
de données pour initier la
rédaction d’un article, qui dure en
général plusieurs semaines. Dans
ces conditions, le dépôt de brevet
ne retarde pas la publication des
résultats.
Maturation: faciliter le transfert tout
en accélérant le projet de recherche
Classiquement, les résultats DSV,
s’ils semblent a priori brevetables,
sont protégés par une demande de
brevet national étendue un an
après à l’international par voie PCT
(Patent cooperation treaty). Cette
phase internationale se termine
au bout de trente mois au terme
desquels il faut choisir les pays
dans lesquels la protection sera
effective. La fin de la phase internationale
est stratégique
(où protéger
l’invention ?) et coûteuse
(du fait des traductions
exigées à ce
stade), d’où la nécessité
d’approcher des
industriels dans ce
délai de trente mois,
sur la base de résultats
suffisamment
matures.
Un processus a été mis
en place (voir figure
ci-dessus) qui permet,
dès les premières
années, d’ajouter de la
valeur à l’invention afin
d’en faciliter le transfert.
Dans les mois suivant
le premier dépôt,
idéalement dans la
première année et en
tout état de cause
avant le passage en
phases nationales,
une étude « flash »
est réalisée [ 1 ] qui
aide à établir un plan
de valorisation – dont
un des objectifs est
d’apporter la preuve
de concept de l’invention
pour une application
donnée. Pour les
projets stratégiques de
DSV ou encore pour
les projets complexes
en raison des divers
EMMANUELLE KEMPF
Ingénieur, Brevet à DSV
emmanuelle.kempf@cea.fr
ROMAIN MARLANGE
Chargé d’affaires
Licensing à DSV
romain.marlange@cea.fr
JEAN-PAUL MORLIER
Chargé d’affaires
Partenariats industriels
à DSV
jean-paul.morlier@cea.fr
champs d’application, nous bénéficions
de la remarquable expertise
du BEM [ 2 ]qui peut réaliser une
étude de marketing
technologique et positionner
la technologie
dans son environnement
technologique et
économique.
Par la suite, avec la participation
du chercheur
et du chef d’institut
(et/ou le correspondant
de valorisation), un plan
d’actions de valorisation
est construit en
3 volets :
1) « Développements
complémentaires » : il
s’agit de définir les
axes de développement
du projet en
vue d’établir la preuve
de concept qui s’impose
comme un prérequis
indispensable
au transfert pour une
application. De nombreux
dispositifs de
financement permettent
de réaliser ces
développements.
2) « Brevet » : il s’agit
par exemple de définir
l’étendue géographique
de la protection,
d’envisager le
dépôt de brevets complémentaires,
etc.
3) « Prospection » : il
s’agit de définir quand
et comment les industriels
identifiés seront approchés (prospection
ciblée ou sur Internet,
présentation à un congrès, etc.).
L’approche d’industriels est facilitée
par les outils disponibles à
DSV (bases de données, accords
de confidentialité, etc.) et par
l’appui du BEM. Les échanges
avec les industriels peuvent aboutir
à la négociation de contrats de
collaboration ou de licence, et sont
très souvent constructifs y compris
du point de vue du chercheur.
Grâce aux financements publics
ou privés qu’il permet d’obtenir,
notamment pour l’établissement
de la preuve de concept, le plan
d’actions de valorisation est aussi,
pour le chercheur, un accélérateur
de projet pouvant conduire à une
publication de plus fort impact
(avec par exemple l’obtention de
données in vivo [ 3 ]).
Financement des projets
de valorisation
De nombreux dispositifs permettent
de financer la réalisation de
la preuve de concept d’une technologie.
L’appel à projets « Émergence
» de l’ANR et le Fonds de
maturation DSV permettent ainsi
de financer des projets à hauteur
de 150 à 200 K€ sur une durée
de un à deux ans. D’autres moyens
de cofinancement ont été mis en
place ces dernières années pour
soutenir les projets collaboratifs
en particulier avec les industriels
(pôles de compétitivité, ANR RIB
et Tecsan, Oséo, etc.). La cellule
valorisation peut conseiller et
accompagner le chercheur dans le
montage d’un projet.
RÉFÉRENCES
1 Ce type d’étude est réalisé
en collaboration avec CEA
Valorisation, une filiale du CEA
réalisant sur mandat du CEA
des actions de valorisation.
2 Le Bureau d’études marketing
(DRT/Dir-Valo) est une
structure interne au CEA unique
en son genre dans le paysage
de la recherche académique
française, pouvant réaliser
des études de marketing
technologique pour le compte
des pôles du CEA.
3 Voir les exemples de M. Léonetti
(IBITEC-S) et É. Maréchal
(IRTSV) en pages suivantes.
3
OCTOBRE 2007 _ DIRECTION DES SCIENCES DU VIVANT _ N° 37

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Développement d’antiparasitaires
et d’herbicides à partir de la cible MGDG synthase
Biotope
4
De la recherche
fondamentale…
Le laboratoire de physiologie
cellulaire végétale (LPCV/iRTSV,
Grenoble) est spécialisé dans
l’étude de constituants et de
processus essentiels pour le
développement des cellules végétales.
Dans le cadre de ces études,
Éric Maréchal a mené une
analyse structurale et fonctionnelle
d’une des enzymes les plus
importantes du métabolisme lipidique
des plantes, la MGDG synthase.
Cette enzyme synthétise
le monogalactosyldiacylglycérol,
le lipide majeur des plastes
et unique au règne végétal.
L’absence de mutants connus,
l’importance pondérale de ce
galactolipide ainsi que des études
complémentaires montrent
que la MGDG synthase est vitale
et unique non seulement pour la
biogenèse des plastes mais aussi
pour la biogenèse de toutes les
membranes des cellules végétales.
Par conséquent, elle est
essentielle au maintien de
l’intégrité cellulaire.
Parallèlement à ces études, deux
équipes indépendantes décèlent
en 1997 chez des parasites apicomplexes
la présence d’un
compartiment cellulaire végétal,
en fait une forme vestigiale d’un
chloroplaste dénommé par la
suite « apicoplaste ». Ces parasites
apicomplexes sont responsables
de graves maladies tant
pour l’homme que pour les animaux
: paludisme, toxoplasmose,
coccidiose, neosporose et piroplasmose.
Considérant que
l’apicoplaste était proche des
chloroplastes de plantes, Éric
Maréchal a émis l’hypothèse et
démontré depuis que l’agent du
paludisme, Plasmodium falciparum,
et de la toxoplasmose, Toxoplasma
gondii, possédaient une
activité de synthèse de MGDG, et
que les galactolipides étaient des
composants des membranes
parasitaires. Fort de ces travaux
fondamentaux, il était naturel de
© CEA/DSV
conclure à la pertinence de cette
enzyme comme cible novatrice
pour sélectionner des molécules
inhibitrices présentant non seulement
des propriétés herbicides
mais aussi antiparasitaires.
… au développement
d’un projet de
valorisation
Persuadée de l’importance
des résultats
obtenus, la cellule de
valorisation de DSV protège
la cible ainsi que
des procédés de criblage
par deux dépôts
de brevets en 1999 et
2000 [ 1 ]. Jugeant
que seule l’obtention de
familles d’inhibiteurs de
la MGDG synthase dûment
protégées par des
brevets peut permettre
de présenter un dossier
susceptible d’intéresser
des industriels, la cellule
de valorisation, en concertation
avec Éric Maréchal,
élabore un plan de valorisation
et les actions
nécessaires pour obtenir
les moyens financiers
indispensables au
projet.
> Recherche d’inhibiteurs
par criblage sur la cible
(phase 1 : 2000-2004) : en
2000, pas de chimiothèques ni
de capacités de criblage haut
débit au CEA. En conséquence,
il est décidé d’approcher la
société CEREP. Les tests biologiques
sont réalisés au CEA pour
les propriétés herbicides et dans
les laboratoires de parasitologie
de l’institut Jean-Roget (Grenoble)
et de l’université de Montpellier
pour les propriétés antiparasitaires.
Pour le financement,
une demande d’aide
au transfert est présentée
avec succès
auprès d’Oséo-Anvar.
Après une étape indispensable
de miniaturisation
et d’automatisation
du test
de criblage sur une
MGDG synthase de
plante, 24 000 molécules
sont testées :
deux inhibiteurs sont
retenus pour leurs
effets significatifs
herbicides et antiparasitaires.
> Synthèse chimique
de familles de composés
biologiquement
actifs (phase 2 :
2005-2007): la cellule
de valorisation de
DSV introduit le projet
auprès des chimistes
du Service de chimie
bio-organique et de
marquage (Bernard
Rousseau) avec le soutien de
Pierre Legrain, chef de l’institut
iBITEC-s à Saclay. Après analyse
structurale des deux hits obtenus
ÉRIC MARÉCHAL
(iRTSV/LPCV) :
eric.marechal@cea.fr
www-dsv.cea.fr/lpcv
ROMAN LOPEZ
(iBiTec-S/Groupe de
Chimie Combinatoire et
Criblage à haut débit).
roman.lopez@cea.fr
www-dsv.cea.fr/lcb
dans la phase précédente, Roman
Lopez et son équipe élaborent un
plan de synthèse chimique de dérivés
desdits hits. Pour le financement,
une demande d’aide au
transfert complémentaire est obtenue
auprès d’Oséo-Anvar. Fin
2005, la cellule de valorisation
obtient un financement de l’ANR
« Émergence et maturation des
projets de biotechnologies ». Plusieurs
centaines d’analogues ont
depuis été synthétisés et testés :
pour un certain nombre, leur activité
herbicide et/ou antiparasitaire
a été améliorée de plus
d’un facteur 100, avec une
baisse très significative des effets
toxiques sur cellules humaines.
Deux brevets ont été déposés en
juin 2007 [ 2 ] protégeant pour
l’un une famille de molécules
antiparasitaires, pour l’autre une
famille de molécules herbicides.
La cellule de valorisation de
DSV a lancé une campagne de
prospection internationale en vue
d’identifier les partenaires industriels
les plus à même de prendre
le relais pour développer ces
herbicides et molécules antiparasitaires.
RÉFÉRENCES
Figure
Des molécules
herbicides (inhibant
la croissance
d’Arabidopsis
thaliana à droite)
ayant des propriétés
antiparasitaires
(inhibant la croissance
de Toxoplasma gondii
à gauche).
1 Brevet FR 9903434 (mars 1999) ;
Brevet FR 0013976 (octobre 2000)
2 Brevets EP 07290683.7 et
EP 07290684.5 (juin 2007).
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Développement de formes Tat inactivées
hautement immunogènes: application contributive à un vaccin anti-VIH
Bio-partenaires
© CEA/DSV
La préparation d’un vaccin
capable de protéger contre les
infections par le virus de
l’immunodéficience humaine (VIH)
ou de ralentir l’apparition des signes
cliniques du Sida représente un
enjeu majeur en termes de santé
publique. C’est pourquoi de nombreux
groupes de recherche focalisent
leurs études sur la sélection de
cibles vaccinales dérivées de protéines
du VIH et sur l’évaluation de
leur pouvoir vaccinant dans des
modèles animaux appropriés. Parmi
les cibles sélectionnées, le transactivateur
transcriptionnel (Tat) du
VIH est considéré comme un candidat
particulièrement attractif car
cette protéine possède un grand
nombre d’activités biologiques qui
pourraient jouer un rôle dans la
dissémination virale et dans la
progression de la maladie, et car la
non- progression vers le stade Sida
est corrélée à la présence d’une
réponse immunitaire anti-Tat élevée.
A
Tat présente cependant l’inconvénient
d’être faiblement immunogène, ce qui
limite le potentiel vaccinant des candidats
vaccins qui en dérivent. Nous
avons donc cherché à augmenter son
immunogénicité afin de contribuer à
la mise en place de candidats vaccins
anti-VIH plus efficaces. Différentes
approches peuvent être envisagées
pour moduler l’immunogénicité
selon les caractéristiques de la protéine
étudiée (1, 2). Nous avons
pour notre part observé que la
conformation hautement flexible de
Tat le rend très sensible à la protéolyse.
Or, on sait que le caractère
faiblement immunogénique d’une
protéine peut être dû à sa forte
susceptibilité enzymatique. Donc,
nous avons choisi de rendre Tat plus
résistant à la protéolyse. L’approche
que nous avons employée consiste
à stabiliser sa conformation à l’aide
de ligands. Nous avons complexé
Tat à divers polysaccharides sulfatés
et nous avons ainsi pu le rendre
plus résistant à l’action enzymatique
mais aussi, et surtout, plus
immunogène chez la souris (fig. 1).
Nous avons aussi observé que certaines
activités biologiques de Tat
sont inhibées en présence du ligand,
ce qui suggère que la formation du
complexe peut contribuer à la détoxification
de la protéine. Ces résultats
Figure 2
Le candidat vaccin Tat stabilisé induit une forte réponse immunitaire chez
le macaque. A : Le dosage immunoenzymatique des anticorps anti-Tat présents
dans les sérums indique que le candidat vaccin induit une forte réponse humorale
chez les animaux vaccinés. B : Le dosage ELISPOT, de l’interféron gamma sécrété
par les cellules du sang périphérique des animaux vaccinés indique que le candidat
vaccin induit une réponse cellulaire.
B
ont conduit au dépôt d’un brevet
protégeant l’utilisation de candidats
vaccins Tat stabilisés hautement
1
immunogènes [ ].
Vers la preuve de concept
Dans le cadre du plan de valorisation
du brevet mis en place sous l’impulsion
de la cellule de valorisation de
© CEA/DSV
DSV, nous avons projeté d’éprouver
l’immunogénicité de l’un de nos
candidats vaccins dans un modèle
animal représentatif de l’infection
par le VIH, le primate
non humain. Cette
MICHEL LEONETTI
iBiTec-S/groupe
de modulation
de l’immunogénicité
des protéines.
michel.leonetti@cea.fr
Figure 1
Lorsque Tat (Tat101) est
complexé à un polysaccharide
sulfaté (Hep6000), il induit
des réponses en anticorps
anti-Tat qui sont 10 à 300 fois
supérieures à celles procurées
par deux molécules Tat
(Tat101 et Tat101Scam)
présentant des
caractéristiques similaires à
celles de candidats vaccins
développés par d’autres
groupes de recherche.
étape vers la preuve de
concept était d’autant
plus facile à construire
que le CEA bénéficie
d’une des meilleures
équipes européennes
pour réaliser ce type
de projet, à savoir le
Service d’immunovirologie
dirigé par
Roger Legrand. Pour
résoudre le problème
du financement, la cellule
de valorisation a
présenté ce projet avec succès à
l’appel d’offres de l’ANR « Émergence
et maturation de projets de
biotechnologie à fort potentiel de
valorisation ». Les premiers résultats
de ces études d’immunogénicité,
conduites chez le macaque cynomolgus,
montrent que pour des
doses injectées cinq fois inférieures
à celles couramment utilisées lors
de ce type d’études, et après une
seule immunisation, le candidat
vaccin Tat stabilisé est capable
d’induire des lymphocytes T auxiliaires,
des lymphocytes T cytotoxiques
et des anticorps spécifiques
(fig. 2). Cette observation indique
que notre candidat vaccin stimule
l’ensemble des acteurs de l’immunité
adaptative antivirale. De plus,
une proportion non négligeable des
lymphocytes T spécifiques est polyfonctionnelle.
Ce dernier point n’est
pas le moindre, car la découverte
récente du rôle des lymphocytes T
polyfonctionnels dans la non-progression
vers le stade
Sida conduit à considérer
que les vaccins
anti-VIH doivent nécessairement
induire ce
type de cellules.
Les résultats prometteurs
des études d’immunogénicité
ont conduit à
envisager l’essai vaccinant,
proprement dit.
De nouvelles sources de
financement étaient
nécessaire. Forts des
résultats précédents,
nous avons proposé
notre projet au Fonds de soutien à
la maturation des projets innovants
de DSV. Le projet a été accepté, ce
qui a permis de lancer récemment
l’essai vaccinant. Les résultats sont
attendus dans le courant de l’année
2008. De grands groupes pharmaceutiques
internationaux, approchés
en 2006, ont déjà manifesté leur
intérêt et attendent les résultats
de cet essai. S’ils sont positifs,
notre approche viendrait compléter
leurs candidats vaccins anti-
Sida.
RÉFÉRENCES
1 J. Immunol (1998) 160 : 3820-3827
2 J. Biol. Chem. (2004) 279 : 50257-50266
3 Brevet n° 0403429, avril 2004.
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OCTOBRE 2007 _ DIRECTION DES SCIENCES DU VIVANT _ N° 37

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Biorythmes
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Régulation des gènes
DE NOUVEAUX VECTEURS ULTRA-PERFORMANTS
SUR L’INTERFÉRENCE ARN (RNAI) APPLIQUÉE
À LA GÉNOMIQUE FONCTIONNELLE
Le silence des gènes imposé par des siRNA (small interfering RNA)
est un outil puissant pour étudier leur fonction. Néanmoins,
le potentiel des siRNA n’est pas utilisé de façon optimale en raison
des limitations liées aux vecteurs d’expression classiquement
utilisés (vecteurs intégratifs ou vecteurs viraux). Le Laboratoire
de génétique de la radiosensibilité (iRCM – Fontenay-aux-Roses)
a développé de nouveaux vecteurs pEBVsiRNA qui présentent les
avantages suivants : forte efficacité de transfection et d’extinction
de l’expression du gène ciblé (de l’ordre de 90 % ; dépendant
du gène ciblé), permanence de l’extinction (plus de 500 jours
en culture) permettant l’obtention de lignées cellulaires stables.
De plus, ces vecteurs ne s’intègrent pas dans le génome cellulaire,
ils sont présents en faible nombre de copies dans la cellule
(d’où absence de toxicité) et enfin l’extinction de l’expression
du gène peut être réversible. À ces avantages,
il faut ajouter leur faible coût, leur facilité
d’utilisation, notamment l’absence de risques
biologiques pour l’expérimentateur. À ce jour plus
de 300 vecteurs pEBVsiRNA ont été conçus, ciblant
60 gènes impliqués dans les voies de signalisation des dommages
de l’ADN et de réparation du génome. Plus de 20 lignées cellulaires
stables ont ainsi été développées par le laboratoire. Concernant
l’universalité de ces vecteurs, ils ont été utilisés avec succès sur
des cellules HeLa, RKO, MCF-7, HCT-116, U2OS, des lignées
cellulaires immortalisées par SV40 ou encore des lymphoblastes
humains immortalisés. Récemment, des essais ont été menés
avec succès sur des Caco2 en collaboration avec la société
TEBU-BIO. Cette société, qui commercialise en France et en
Europe des produits et des services pour la recherche et l’aide
au développement de médicaments, est le premier licencié de
cette technologie CEA protégée par un brevet déposé en 2005
et depuis largement étendu à l’étranger. Plusieurs autres sociétés
ont manifesté leur intérêt à obtenir une licence. Les lignées
> CONTACT :
denis.biard@cea.fr
www-dsv.cea.fr/ircm
CEA Fontenay-aux-Roses
© CEA/DSV
cellulaires développées par le CEA seront ainsi accessibles à la
communauté scientifique via ces licenciés, eux-mêmes pouvant
développer, pour le compte d’industriels pharmaceutiques, des
lignées cellulaires stables dont l’expression d’un gène cible
sera considérablement réduite.
Nucleic Acids Res (2007), 35, 3535-3550
Cancer Res (2007) 67, 2526-2534
Immunologie
DÉCRYPTER LES RÉPONSES IMMUNITAIRES
Leucémies, maladies auto-immunes (sclérose
en plaques, diabète, polyarthrite
rhumatoïde…), mise au point de stratégies
vaccinales : autant de situations où il est
nécessaire d’évaluer, de quantifier et de
suivre la réponse immunitaire des patients.
Cela est maintenant possible à partir
d’1 millilitre de sang seulement grâce la
plateforme Immun-TraCkeR© développée
par la société Immun ID. Cette plateforme
repose sur l’application d’un brevet
CEA/Inserm déposé en 2003 et les développements
que la société a su mettre
en œuvre pour valider la technologie et
surtout la rendre pleinement opérationnelle
tant sur le plan de sa robustesse que
de sa miniaturisation et de son automatisation.
La technologie CEA/ Inserm
est un procédé d’évaluation quantitative
des réarrangements des gènes V-J codant
pour les récepteurs membranaires
TCR des lymphocytes T. En travaillant
ainsi sur de l’ADN génomique,
les échantillons à analyser
sont très stables, facilitant ainsi
leur logistique notamment pour
les études de patients multicentriques.
Grâce à une collaboration étroite entre
les porteurs du projet et la cellule de valorisation
de DSV, la direction de l’iRTSV
> CONTACTS :
Nicolas Pasqual
Tél.: 0438785770
www.immunid.com
et le CEA de Grenoble, la société ImmunID
a été créée le 25 mars 2005 et a été lauréate
de nombreux concours tant régionaux
que nationaux. Depuis sa création,
la société a réalisé la preuve de son
concept avec des laboratoires
académiques de premier rang
et accroît désormais ses développements
dans le domaine
du diagnostic personnalisé.
ImmunID a déjà signé un
contrat très important avec un grand
groupe international et plusieurs autres
sont en fin de négociation.
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Diagnostic biomédical
DES TESTS INNOVANTS DE DIAGNOSTIC SÉROLOGIQUE
©CEA/DSV
La société AbAg, créée en
novembre 2001 1 , se destine à
devenir un acteur majeur du diagnostic
biomédical des maladies
infectieuses à bactéries pathogènes
en développant et en produisant
des tests innovants de
diagnostic sérologique in vitro.
AbAg a développé son cœur de
métier sur la recherche et l’identification
des antigènes bactériens
(les marqueurs) et sur le développement
du concept de « profil
Immunochimie
PRÉDIRE ET DIMINUER L’IMMUNOGÉNICITÉ
DES PROTÉINES THÉRAPEUTIQUES
Laboratoire d’évaluation de la réponse cellulaire.
La société de biotechnologie nîmoise Proteus
vient de s’associer à l’équipe Immunochimie
de la réponse immunitaire cellulaire de l’institut
de biologie et de technologies de Saclay afin
de répondre aux problèmes que pose
aux industriels l’immunogénicité
des protéines thérapeutiques.
La nature protéique de ces
nouveaux médicaments fait qu’ils
peuvent comporter des séquences
immunogéniques (épitopes T) qui, en
activant les lymphocytes T du patient, favorisent
l’apparition d’anticorps neutralisant leur activité
thérapeutique. Via l’accord de partenariat
signé en 2007 avec le CEA, Proteus est
à même de pouvoir proposer aux industriels
biopharmaceutiques une offre de service
construite en deux étapes:
1) évaluation des risques de réactions
immunitaires provoquées par l’utilisation
de protéines thérapeutiques suivie d’une
identification des épitopes T responsables
de ces effets secondaires;
2) élimination de ces risques via la modification
des épitopes par ingénierie moléculaire.
> CONTACT :
bernard.maillere@cea.fr
www-dsv.cea.fr/ibitecs/80
CEA Saclay
sérologique multiparamétrique
par syndrome » qui intègre en
une seule analyse l’ensemble des
marqueurs pertinents. La mise en
forme de ces antigènes sous
forme de trousses multiparamétriques
a conduit AbAg à
mettre en place une collaboration
avec le Laboratoire biopuces
(Institut de recherches en technologies
et sciences du vivant, CEA
Grenoble) qui avait développé un
support analytique particulièrement
adapté aux analyses multiparamétriques
en parallèle –
« CAPUCINE ». Il s’agit en fait
d’une puce de conception totalement
nouvelle par son format de
type capillaire. En partie validée
pour la détection d’ADN, il fallait
s’assurer de son applicabilité à la
détection de protéines. Cette faisabilité
technique – sur la base de
sondes antigéniques et de sérum
fournis par AbAg — a été l’objet
d’une première collaboration en
La première étape repose sur les outils
et compétences développés par le laboratoire
CEA. La technologie HLA express a pour but
d’évaluer la capacité de liaison des peptides
aux molécules HLA II, qui sont les molécules
qui présentent les épitopes T aux lymphocytes T.
À cette fin, le CEA a développé une banque
de molécules HLA II purifiées qui comportent
les principaux variants de la population
européenne ainsi que des peptides de référence
spécifiques pour chacun de ces variants. Ces
outils permettent de réaliser des tests de liaison
compétitifs entre les peptides issus de la protéine
étudiée et les peptides de référence pour les
protéines HLA II. Les techniques cellulaires
du laboratoire permettent d’évaluer la capacité
des peptides et des protéines à induire une
réponse des lymphocytes T in vitro à partir
de prélèvements sanguins effectués chez
des individus qui n’ont jamais
été en contact avec l’antigène.
L’ensemble de ces technologies
fournit des informations
pertinentes sur l’immunogénicité
des protéines dès les premières
phases de développement et avant de les
tester sur des individus.
La seconde étape est l’ingénierie moléculaire
visant à modifier les épitopes T de la protéine
analysée lors de l’étape précédente. Elle est
réalisée par Proteus, société leader dans le
domaine de la biotechnologie et spécialisée
dans la découverte, l’ingénierie et
le développement de nouvelles protéines
et procédés biotechnologiques.
Cancer Immunol Immunother (2007) 56:807-818.
Eur J Immunol (2007) 37: 1513-1523.
J Immunol (2006) 177: 2717-2727.
J Immunol (2006) 176: 5401-5408.
2003. Une étude comparative avec
la technique de référence ELISA
en microplaque a permis de mettre
en évidence les performances
supérieures de « CAPUCINE » en
termes de sensibilité. À la faveur
du renouvellement du contrat de
collaboration et de la mise à
disposition d’un ingénieur d’AbAg
au Laboratoire biopuces pendant
quelques mois, les caractéristiques
techniques de la puce et
de l’instrumentation nécessaire à
sa fabrication et à son usage ont
été spécifiées. Enfin, une thèse
en cotutelle sur
contrat CIFRE a
été initiée ; elle
permet de maintenir
le lien de la
collaboration tout
> CONTACT :
CEA Grenoble
francois.chatelain@cea.fr
www-dsv.cea.fr/biopuces
en assurant le transfert technologique,
en temps réel, du laboratoire
vers la société. Aujourd’hui,
AbAg conçoit et développe une
instrumentation dédiée pour la
fabrication des capillaires fonctionnalisés
et un lecteur destiné
à ses clients pour le diagnostic.
Un accord de licence d’exploitation
est en cours de finalisation
avec le CEA. Il est prévu d’introduire
les premiers produits sur le
marché courant 2009. Le premier
sera une trousse de diagnostic et
suivi des infections articulaires
sur prothèse, le second concernera
le diagnostic des infections
respiratoires basses.
1. AbAg a réalisé deux tours de
financement en 2003 et 2006 totalisant
8M€ et a racheté, pour préparer la mise
sur le marché de ses produits, la société
de distribution INGEN en juillet 2006.
Le groupe ainsi constitué est installé
à Chilly-Mazarin (Essonne) depuis le
1 er avril 2007. Il emploie 56 personnes,
dont 16 en R&D. Son chiffre d’affaire prévisionnel
en 2007 est de 13,5 M€ et un
résultat équilibré est escompté.
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Bio-notes
8
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consultez le serveur
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des sciences
du vivant :
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à la revue CEA Bio,
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CEA Bio
Journal trimestriel
Directeur de la publication :
P r André Syrota
Rédactrice en chef :
Cathy Chapel
Tél. : 01 46 54 98 58
Fax : 01 46 54 87 82
e-mail : cathy.chapel@cea.fr
Ont participé à ce numéro :
Emmanuelle Kempf, Romain
Marlange, Jean-Paul Morlier,
Nathalie Manaud, Christian Vincent
Illustration de la page 1:
CEA, Spécifique, DR.
Version électronique:
Pascal Martinez
Conception et réalisation :
Spécifique
CEA – Octobre 2007
ISSN 0982-3247
LA DSV SE LIVRE
>
Le livre Chemogénomique,
des petites molécules pour explorer
le vivant aux éditions EDP Science
est une introduction à la
chemogénomique à l’usage
des biologistes, chimistes et
informaticiens. Les meilleurs
spécialistes français de cette jeune
discipline y ont contribué sous forme
de chapitres pédagogiques. L’ouvrage
est rédigé sous la direction de trois
chercheurs de l’iRTSV et implique
plusieurs ingénieurs et chercheurs
du CEA. Résolument
pluridisciplinaire, il est le premier du
domaine en langue française.
Contacts :
eric.marechal@cea.fr
laurence.lafanechere@cea.fr
sylvaine.roy@cea.fr
>
Mini-guide à l’usage des chercheurs
La cellule valorisation a édité un mini-guide à
l’usage des chercheurs. Il présente de manière
claire et concise les démarches à suivre pour
déposer une demande de brevet, obtenir ou faire
valider un accord de transfert de matériel (MTA)
ou de confidentialité, ou encore contractualiser
un projet de collaboration.
Contact : romain.marlange@cea.fr
>
>
Les neurones de la lecture
Stanislas Dehaene (Neurospin,
I2BM, Saclay), spécialiste de
la psychologie et de l’imagerie
cérébrale, apporte l’éclairage
des avancées les plus récente
des neurosciences dans son dernier
ouvrage, préfacé par J.-P. Changeux,
aux Éditions Odile Jacob.
Contact : sdehaene@cea.fr
DERNIÈRE MINUTE
Dans le cadre de la
réorganisation de la valorisation
de DSV, deux instituts ont choisi
de se doter d’un comité
de valorisation qui travaillera
en concertation étroite avec la
cellule de valorisation de DSV.
Il s’agit de l’IBS et de l’IBEB
avec, comme membres du comité,
Eva Pebay-Peyroula, Hugues
Lortat-Jacob et Thierry Vernet
pour le premier, et Thierry Heulin,
Gilles Pelletier et Éric Quemeneur
pour le second.
SÉMINAIRE
>
Journées de sensibilisation
à la protection industrielle
La direction de la valorisation DRT
organise à l’INSTN (Saclay), en concertation
avec les pôles du CEA dont DSV, un
séminaire de sensibilisation (« Intégrer
la propriété intellectuelle dans son
activité professionnelle »). Ce séminaire
est ouvert à tous. Pour vous inscrire,
adressez-vous à votre responsable
de formation. La prochaine session aura
lieu les 26/27 novembre 2007.
INTERNET
>
Les technologies licenciables
de DSV sur le web
Les brevets DSV pouvant faire l’objet
d’une licence sont consultables à l’adresse
www-dsv.cea.fr. Les industriels peuvent
effectuer des recherches par mots-clés et/ou
par catégories. DSV affiche également ses
technologies licenciables sur les portails
nationaux FTT (réseau Curie) et Oséo
qui viennent d’être lancés.
http://www.F2T.FR
http://technologie.oseo.fr
>
Outils pour la valorisation
sur l’Intranet DSV
L’Intranet DSV (rubrique « Valorisation
industrielle ») propose aux chercheurs des outils
en ligne simples d’utilisation: téléchargement
d’un mémoire technique pour déposer
une demande de brevet, téléchargement
de contrats de transfert de matériel (MTA) ou
de confidentialité, téléchargement d’une fiche
permettant d’initier la préparation d’un contrat de
collaboration, etc. Y sont également présentées
des informations générales sur la protection
industrielle et le transfert de technologies.
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