Fluorimétrie - IUT Annecy

2- Intensité de fluorescenceL’intensité de fluorescence dépend de nombreux paramètres :- la probabilité de transition du niveau fondamental vers unniveau excité sous l’effet du rayonnement ;- la probabilité de retour au fondamental par un processusqui inclut une étape de fluorescence ;- l’absorption du rayonnement d’excitation ;- l’absorption du rayonnement de fluorescence par l’espèceémettrice en raison du recouvrement partiel des spectresd’émission et d’absorption (quenching couleur) ;- le transfert d’énergie d’espèces excitées vers d’autresmolécules ou ions (quenching chimique).On définit le rendement de fluorescence :φ =fnombre de photons émisnombre de photons absorbésIf=IaDonc :If⎛ I= φ I = φ0 0 ⎜1 f a f t f −⎝ I0( − ) =tI I φ I⎞⎟ ⎠En supposant que la loi de Beer-Lambert s’applique pour lerayonnement et l’échantillon considérés :f−A( 1−)I f= φ I 100où A est l’absorbance. On peut écrire la puissance de 10 demanière différente et effectuer un développement en série :10−A= exp( − A ln10 )= 1−A ln10 +2( A ln10 ) ( A ln10 )2!−3!3+ ...Mesures Physiques Annecy – MPh2 SE3 ME3 – 2011 – Philippe GalezTechniques spectroscopiques d’analyse / Fluorimétrie6