Juin 2003

1 Identifier le site catalytique de l'enzyme de Pois 1 pt2 En vous basant sur la comparaison de séquence et lescaractéristiques physiques de la protéine, localiser le peptide detransit chez le pois en détaillant:- le nombre d'acides aminés- la composition en acides aminés- le site de clivage proposéComparez les séquences des peptides transit. Tirez en desconclusions sur la nature des ces séquencesJustifiez vos conclusions6 pIs3 On veut produire dans E coli la préprotéine et la protéinemature en intégrant dans un plasmide de type pET le cDNA codantpour la Trx f dans les sites Neo! (CCATgg) et BamH! (ggATCC)Proposez deux couples d'oligonucléotides permettant d'effectuer cesconstructions6 pIs4 Dans la protéine mature on désire éliminer la cystéinesurnuméraire n'appartenant pas au site actif. Détaillez la stratégie àadopter et décrivez les oligonucléotides nécessaires5 pIS5 Proposez un schéma expliquant les mécanimes d'intégrationdes préprotéines dans les chloroplastes2 pIs6 Question bonus: les programmes de prédiction de séquenceindiquent que la préthiorédoxine f a la même probabilité d'êtreintégrée dans la mitochondrie que dans le chloroplaste. Discutezcette prédiction2 pIs