POTENSI BAKTERI Micrococcus sp. L II 61 SEBAGAI AGEN ...

penggunaan mikroba dalam aplikasi bioteknologi untuk menggantikan surfaktan kimia
namun memiliki fungsi yang sama mulai dimanfaatkan. Keberadaan mikroba ini dikaitkan
dengan keberadaan enzim lipase yang dapat menghidrolisis minyak yang tidak larut dalam air
menjadi produk yang larut dalam air serta keberadaan biosurfaktan yang dapat menurunkan
tegangan permukaan dan tegangan interfasial pada ruang antara air dan minyak serta material
non polar dengan cara berakumulasi pada interfasial dari cairan yang tidak dapat saling larut.
Berdasarkan penelitian eksplorasi bakteri proteolitik dan lipolitik dari limbah rumah
potong hewan oleh Fatimah dan Nurhariyati (2011) dihasilkan bakteri-bakteri penghasil
enzim protease dan lipase. Salah satu isolat yang didapatkan adalah Micrococcus sp. L II 61.
Isolat Micrococcus sp. L II 61 memiliki indeks lipolitik tertinggi sehingga potensial
dilakukan uji potensinya dalam melarutkan lumpur minyak.
Berdasarkan latar belakang di atas, perlu dilakukan pengukuran tentang aktivitas
lipolitik crude enzyme lipase dan keberadaan biosurfaktan dalam supernatan kultur
Micrococcus sp. L II 61 dan potensinya dalam melarutkan lumpur minyak secara laboratoris,
yaitu dengan menggunakan metode filtrasi untuk mengetahui pengaruh perlakuan terhadap
kelarutan lumpur minyak. Hasil persentase kelarutan lumpur minyak oleh crude enzyme
lipase Micrococcus sp. L II 61 tersebut dapat dijadikan acuan sebagai upaya pembersihan dan
pengangkatan lumpur minyak dari dasar tangki-tangki penyimpanan minyak yang berbasis
ramah lingkungan.
BAHAN DAN CARA KERJA
Bahan penelitian yang digunakan meliputi isolat Micrococcus sp. L II 61, lumpur
minyak, Bushnell-Haas mineral salts medium, p-NPP, Na 2 CO 3, Nutrient Broth (NB), minyak
goreng, solar, dan akuades.
Pertumbuhan Micrococcus sp. L II 61
Botol kultur ukuran 100 mL diisi dengan 50 mL Bushnell-Haas mineral salts medium
dan diinokulasikan 5% (v/v) kultur Micrococcus sp. L II 61. Aktivitas enzim ditentukan
menggunakan metode spektrofotometrik dengan substrat p-nitrofenil palmitat (p-NPP)
selama 48 jam dengan rentang waktu pengamatan 4 jam. Eppendorf diisi 700 µL larutan p-
NPP 0,503 mM dalam buffer fosfat pH 7 ditambahkan 300 µL supernatan. Kemudian
diinkubasi dalam waterbath pada suhu 37ºC selama 30 menit. Eppendorf diangkat dari
waterbath lalu ditambahkan 100 µL larutan Na 2 CO 3 0,2 M, p-nitrofenol yang terbentuk
ditandai dengan warna kuning, kemudian diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ 410