Sanità animale - IZS della Lombardia e dell'Emilia Romagna

Diagnosi basata sugli anticorpi
La reazione dell’ospite alla tubercolosi è prevalentemente
rappresentata dall’immunità cellulo-mediata,
affiancata, con il progredire della malattia, dalla risposta
anticorpale.
Figura 1. Rappresentazione schematica dello spettro
di risposte del sistema immunitario bovino ai vari test
per TB (adattata da Vordermeier et al., 2004)
La figura 1 rappresenta schematicamente l’evoluzione.
Sulla destra del grafico vi sono gli animali con infezione
avanzata e generalizzata, ma che non rispondono
alla tubercolina a causa di una debole risposta
dell’immunità cellulo-mediata. E’ stato speculato che
questi animali “anergici” sono probabilmente malati
e altamente infettanti e che potrebbero essere la causa
di gravi e persistenti focolai. Un a certa proporzione
di bovini “anergici” può essere rilevata con metodi
sierologici (tipo ELISA). Questi test sono stati sviluppati
nelle ultime due decadi per rilevare la tubercolosi
bovina ed umana, ma generalmente soffrono di
una bassa Se, quando paragonati allo skin test e al γ
IFN, soprattutto quando applicati ad animali ai primi
stadi d’infezione. L’inclusione d’antigeni di M. bovis
più specifici (e.g. MPB70 e MPB83) ha aumentato la
Sp, ma non la Se. Studi recenti hanno mostrato che
la risposta anticorpale contro M. bovis è incrementata
dallo skin test (risposta anamnestica). Questo incremento
è direttamente proporzionale alla gravità della
malattia e alla sua generalizzazione.
In sintesi, i test sierologici che rilevano gli anticorpi
sono relativamente economici e semplici da fare, ma
non offrono, al momento un’alternativa ai test basati
sull’immunità cellulo-mediata.
Essi possono essere considerati come test ancillari per
lo skin e il γ IFN test in bovini negativi appartenenti
ad allevamenti con infezione cronica confermata o in
caso di focolaio.
Altri test diagnostici complementari
La coltura convenzionale rimane il gold standard per
la rilevazione di M. bovis in campioni clinici come i
tessuti, il muco nasale, il sangue. I metodi basati su
L
’OSSERVATORIO
PCR offrono potenziali vantaggi di sensibilità, flessibilità
e rapidità. Le metodiche PCR non hanno però
fino ad ora mostrato d’essere superiori alla coltura di
routine in termini di sensibilità e specificità. Le limitazioni
probabilmente sono legate al basso numero di
bacilli in campioni clinici, all’eliminazione intermittente,
all’estrazione inefficiente del DNA dei micobatteri
o alla presenza d’inibitori di PCR nei campioni.
PCR rimane d’uso limitato nell’identificazione d’infezione
con M. bovis nei campioni clinici, poiché
richiede elevate quantità di bacilli. In breve, anche
se le metodiche PCR beneficiano di una più precoce
identificazione delle specie di micobatteri rispetto
alla coltura, non è realistico considerale ancora una
valida scelta agli strumenti impiegati per la diagnosi
di routine di TB negli animali in vita.
Infine, sono state investigate le potenzialità di sensori
chimici nel diagnosticare l’infezione con M. bovis,
che si basano sulla rilevazione ed analisi di composti
organici volatili in campioni di siero da vitelli infetti,
un approccio conosciuto come “naso elettronico”
(“e-nose”). Nonostante risultati iniziali promettenti
(8 vitelli infettati sperimentalmente discriminati correttamente
da controlli non infetti tre settimane dopo
l’infezione), sono necessari altri studi allargati per
valicare scientificamente questa tecnologia.
Sviluppi futuri
L’uso d’antigeni o peptici sintetici specifici per M.
bovis, in alternativa alla PPD bovina, sono ancora in
corso di valutazione per lo sviluppo di un test intradermico
più specifico.
Le recenti acquisizioni sulle sequenze genomiche di
M. tuberculosis, M. bovis e M. bovis BCG hanno permesso
di eseguire analisi genomiche comparative per
screening immunologici di potenziali antigeni. Diversi
antigeni possono incrementare la sensibilità e
la specificità del γ IFN quando usati in combinazione
con ESAT-6 e CFP-10, anche se più antigeni vanno
valutati per giungere alla sensibilità della tubercolina.
L’uso d’antigeni ESAT-6 e CFP-10 nel test del γ
IFN sono in grado di discriminare gli animali vaccinati
da quelli infetti, ma vi è bisogno di estendere i la
sperimentazione ad un più grande numero di bovini.
In Gran Bretagna si sta acquisendo esperienza circa
l’evidenza di differenze esistenti tra ceppi di M. bovis
(spoligotipi) nella loro capacità di indurre una risposta
cellulo-mediata dell’ospite. Questo fenomeno è già
stato descritto per differenti genotipi di M. tuberculosis.
Il riconoscimento di differenti cloni di M. bovis
consentirà di paragonarli e di identificare differenze
nella virulenza, trasmissibilità e immunogenicità.
Se esiste tale variabilità, la sorveglianza costante dei
tipi molecolari può essere necessaria al fine di mirare
la diagnosi di TB e le misure di controllo concernenti
i ceppi di M. bovis prevalenti a livello locale.
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