ฤทธิ์กันเสียของฝาง(Caesalpinia sappan L.) - Faculty of Pharmacy ...

45 องศาเซลเซียส นําอาหารเลี้ยงเชื้อไปเทลง plate ที่ผานการทําใหปราศจากเชื้อโดยใชautoclave ที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส ความดัน 15 ปอนด 15 นาที ใหมีปริมาตรอาหารเลี้ยงเชื้อในแตละ plate ประมาณ 15-20 มิลลิลิตร โดยเทภายในตู Laminar air flow เพื่อปองกันการปนเปอน1.4 วิธีการเตรียม Sabouraud Dextrose Broth (SDB)การเตรียม เตรียมตามวิธีที่ระบุบนฉลากดังนี้ ชั่งอาหารเลี้ยงเชื้อหนัก 30 กรัม ตอน้ํากลั่น 1 ลิตร เขยาจนอาหารเลี้ยงเชื้อใส จากนั้นตวงอาหารเลี้ยงเชื้อที่ไดใสหลอดที่มีฝาจุกเกลียวหลอดละ 9 มิลลิลิตร จากนั้นนําไปทําใหปราศจากเชื้อโดยใช autoclave ที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส ความดัน 15 ปอนด 15 นาที1.5 วิธีการเตรียม McFarLand No. 0.5เตรียมโดยการผสม 0.048 M ของ BaCl 2 (1.75 % w/v ของ BaSo 4 .H 2 O) 0.5มิลลิลิตร กับ 0.36 N H 2 SO 4 1% v/v ปริมาณ 99.5 มิลลิลิตร2. การเตรียมเชื้อที่ใชทดสอบBacteria : S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 25922, S. typhimuriumATCC 13311 เตรียมโดย subculture เชื้อลงใน TSA ที่เตรียมไว โดยแยก 1 plate : เชื้อ 1 ชนิดนําไปบมที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 24 ชั่วโมง หลังจากนั้นนํา loop ที่ sterile เขี่ยเชื้อจากplate มาใสใน MHB ที่เตรียมไวจากขอ 1.2 แลวนําไปบมที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 24ชั่วโมง เพื่อใหได stock solution ของเชื้อทั้ง 3 ชนิดFungi : C. albicans ATCC 10231 เตรียมโดย subculture C. albicans ลงใน SDA ที่เตรียมไวนําไปบมที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 48 ชั่วโมง หลังจากนั้นนํา loop ที่sterile เขี่ยเชื้อจาก plate มาใสใน SDB ที่เตรียมไวจากขอ 1.4 แลวนําไปบมที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส นาน 48 ชั่วโมง เพื่อใหได stock solution ของ C. albicans3. การหาคา Minimal Inhibitory Concentration ของสารสกัดสมุนไพร:ฝางโดยวิธี Microdilution broth method3.1 เพาะเชื้อ S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 25922 Salmonellatyphimurium ATCC 13311 ลงบน TSA และ Candida albicans ATCC 10231 บน SDAเพื่อใหได colony เดี่ยว3.2 นําเชื้อที่ไดมาปรับความขุนใหได 0.5 Mcfarland โดยวัดคาดูดกลืนแสงที่625 นาโนเมตร ใหมีคาอยูระหวาง 0.08-0.118