Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® - Millipore

Guia do utilizador
Dispositivos de filtração
centrífuga Centriprep®
Dispositivos Centriprep® 10K e 30K para diagnóstico in vitro
Dispositivos Centriprep® 3K e 50K apenas para fins de investigação;
não estão indicados para procedimentos de diagnóstico
Português
Introdução
Os dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® são dispositivos de ultrafiltração descartáveis
utilizados para purificar, concentrar, dessalinizar e filtrar amostras biológicas com 2 a 15 ml de volume.
Estes dispositivos de ultrafiltração prontos a usar foram concebidos para utilização na maior parte das
centrifugadoras com capacidade para tubos de 50 ml. São fáceis de utilizar e oferecem um elevado débito.
O dispositivo Centriprep® consiste num recipiente de amostra com uma tampa twist-lock, um colector
de filtrado que contém uma membrana de celulose regenerada Ultracel® de baixa adsorção e uma tampa
hermética para isolamento das amostras.
O design do dispositivo Centriprep® torna possível que a filtração e a sedimentação de partículas finas ocorram
ao mesmo tempo sem obstruir a membrana. Utilizando um dispositivo Centriprep® 50K, uma amostra de 15 ml
pode ser concentrada até 0,6 ml em apenas 20 minutos, demorando a concentração de volumes inferiores
ainda menos tempo. Os factores de concentração elevada são conseguidos devido à baixa adsortividade
da membrana, sendo habitual uma recuperação superior a 90% dos solutos macromoleculares retidos. Um
“deadstop” (ponto morto) integrado fornece um volume final de amostra concentrada de 0,5–0,6 ml.
Vantagens do produto
Com amostras biológicas, os dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® são muito vantajosos em relação a
técnicas de concentração como precipitação química, evaporação, liofilização e diálise. O tempo de preparação
é mínimo e o dispositivo é simplesmente centrifugado até que se obtenha a concentração desejada. O processo
de filtração é suave, evitando potenciais problemas, tais como a desnaturação das amostras e a concentração
de sais do tampão. Como a concentração e a dessalinização ocorrem em simultâneo dentro do dispositivo
Centriprep®, eliminam-se as perdas de amostra devido a transferência de material. O design é ideal para soluções
que contenham partículas finas, uma vez que a filtração ocorre no sentido oposto ao da sedimentação, reduzindo
a obstrução da membrana. O design “tudo em um” do dispositivo Centriprep® fornece igualmente segurança
adicional ao trabalhar com amostras perigosas. Como todos os materiais estão contidos dentro do dispositivo, a
exposição do operador a perigos biológicos é minimizada.
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
1

Aplicação
ADVERTÊNCIA: Os dispositivos Centriprep® 10K e 30K destinam-se ao diagnóstico in vitro. Os
dispositivos Centriprep® 3K e 50K destinam-se apenas a fins de investigação; NÃO se
destinam a procedimentos de diagnóstico.
Aplicações em investigação: Os dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® 3K podem ser utilizados
para concentrar e dessalinizar oligonucleótidos, péptidos, factores do crescimento e proteínas pequenas.
As aplicações para os dispositivos Centriprep® 10K, 30K e 50K incluem a concentração e dessalinização
de produtos de eluição de colunas e de fracções de gradientes com proteínas, enzimas e anticorpos; a
recuperação de biomoléculas a partir de sobrenadantes de culturas de células, lisados, extractos ou outras
amostras biológicas; a purificação de componentes de baixo peso molecular (por exemplo, aminoácidos e
antibióticos) de líquidos fisiológicos, meios de cultura de células ou caldos de fermentação.
Utilização em diagnóstico in vitro: Os dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® 10K e 30K podem
ser utilizados para concentrar macromoléculas em soro, urina, líquido cefalorraquidiano e outros líquidos
corporais antes de estes serem analisados. Todos os outros dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
destinam-se apenas a fins de investigação e não a procedimentos de diagnóstico.
Limites de peso molecular nominal
A linha de produtos Centriprep® inclui dispositivos com os seguintes limites de peso molecular nominal
(NMWL):
● Dispositivo Centriprep® 3K — 3000 NMWL (suporte de membrana amarelo)
● Dispositivo Centriprep® 10K — 10 000 NMWL (suporte de membrana verde)
● Dispositivo Centriprep® 30K — 30 000 NMWL (suporte de membrana transparente)
● Dispositivo Centriprep® 50K — 50 000 NMWL (suporte de membrana cor-de-rosa)
Componentes do dispositivo Centriprep®
Tampa hermética
Tampa Twist-Lock
Sulco de ventilação
Rebordo do colector de filtrado
Colector de filtrado
Suporte de membrana
Recipiente de amostra
Linha de enchimento
2 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Controlo de polarização
Equipamento necessário
Os dispositivos Centriprep® podem ser centrifugados a uma velocidade variável, com um rotor basculante
ou de ângulo fixo e suporte que possa acomodar devidamente tubos de centrifugadora de 50 ml. A
centrifugadora tem de ter capacidade para 500–3000 × g. Consulte uma listagem das centrifugadoras e
rotores compatíveis em www.millipore.com/rotorguide.
Limitações
Força centrífuga
Com os rotores de ângulo fixo, o controlo de polarização pode ser afectado adversamente por forças
centrífugas (g) baixas (abaixo de 2000 × g). Dependendo da composição da amostra e da concentração dos
solutos, o fluxo de filtrado pode ser reduzido. Quando se utiliza qualquer um dos tipos de centrifugadora,
não se deve exceder os limites seguintes, pois uma força centrífuga (g) excessiva pode originar fugas ou
danificar o dispositivo.
Dispositivo Força centrífuga máxima
Centriprep® 3K e 10K 3000 × g
Centriprep® 30K e 50K 1500 × g
Armazenamento e prazo de validade do dispositivo
Para obter os melhores resultados, guarde os dispositivos Centriprep® a uma temperatura de 15–30 °C.
O desempenho pode ser influenciado negativamente se os dispositivos forem guardados a temperaturas
extremas (ou seja, abaixo de 0 °C ou acima de 40 °C). O prazo de validade é de três anos a partir da data de
fabrico. Consulte o prazo de validade no rótulo da embalagem.
Pré-enxaguamento
Filtração
Camada de
polarização
As membranas dos dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® contêm vestígios de glicerina. Caso a
glicerina interfira com a análise, encha o dispositivo com aproximadamente 15 ml de tampão ou água desionizada
e centrifugue até atingir o primeiro ponto de equilíbrio. Decante o filtrado e concentre. Repita as
vezes que forem necessárias até que não se note mais interferência. Depois de húmidas, as membranas têm
de se manter assim para continuarem a ser funcionais.
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
Filtração
Rotor basculante Rotor de ângulo fixo
3

Aspecto da membrana e do dispositivo
● Por vezes, um dispositivo Centriprep® não utilizado pode ter algumas gotas de humidade no colector de
filtrado ou no recipiente de amostra. Esta situação ocorre por condensação da humidade na membrana
e não afecta o desempenho.
● Após a centrifugação, pode permanecer na área entre a membrana e o respectivo suporte do dispositivo
Centriprep® uma pequena quantidade de filtrado (aproximadamente 0,5 ml). É uma situação
normal, que não afecta o funcionamento ou o desempenho do dispositivo.
● A membrana Ultracel® utilizada nos dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® pode parecer
ligeiramente enrugada após a rotação.
Reutilização do dispositivo de filtração centrífuga
Os dispositivos Centriprep® destinam-se a uma única utilização. As tentativas de limpar o dispositivo
podem danificar a superfície da membrana ou o vedante e podem comprometer a integridade da unidade e,
consequentemente, afectar o seu desempenho.
Princípio de funcionamento
Para começar a utilizar, deve-se desapertar a tampa twist-lock do recipiente de amostra e remover o
colector de filtrado. Deve adicionar-se a amostra e, em seguida, voltar a colocar cuidadosamente o colector
de filtrado dentro do recipiente de amostra (deslocando a solução), fechar a tampa e selar o dispositivo.
O dispositivo de filtração centrífuga montado é centrifugado a 1000–3000 × g consoante a membrana
NMWL utilizada.
Ao mergulhar o colector de filtrado na solução de amostra cria-se um ligeiro diferencial de pressão hidrostática
que exerce uma força ascensional sobre a membrana na parte inferior do colector de filtrado. Por si
só, a pressão hidrostática exercida pela solução deslocada é demasiado fraca para produzir ultrafiltração. A
centrifugação aumenta esta pressão, forçando a passagem dos materiais de baixo peso molecular e do solvente
através da membrana para dentro do colector de filtrado. Os solutos com pesos moleculares acima do
NMWL da membrana permanecem no recipiente de amostra e ficam cada vez mais concentrados à medida
que a operação continua. A ultrafiltração ocorre no sentido oposto ao vector de força centrífuga.
O diferencial de pressão criado pelo nível de solução elevado é importante no funcionamento do dispositivo
de filtração centrífuga. Durante a centrifugação, o menisco da solução de amostra desce à medida que o
menisco do filtrado sobe. No processo, o colector de filtrado perde a sua força ascensional e desloca-se
para o fundo do recipiente de amostra, o que maximiza a recolha de filtrado. Acabará por ser atingido um
equilíbrio quando a altura dos meniscos for igual. Nessa altura, a filtração pára, porque a diferença de pressão
hidrostática é agora igual a zero.
Caso seja necessária mais concentração, decante o filtrado antes de centrifugar o dispositivo uma segunda
vez. A decantação reestabelece o diferencial de pressão entre o menisco de amostra e o menisco do filtrado,
permitindo que a filtração seja retomada. A filtração continua até que se atinja um novo ponto de
equilíbrio. É de notar que o diferencial de pressão está sempre a mudar durante o funcionamento, à medida
que os meniscos sobem e descem.
Os dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® foram concebidos para manter débitos elevados através
da minimização da acumulação de solutos na membrana durante o funcionamento. A força centrífuga faz
com que os materiais densos se afastem da membrana e afundem até ao fundo do recipiente de amostras.
Como a membrana Centriprep® “flutua” acima desta camada de polarização, toda a superfície da membrana
é sempre utilizada, e o fluxo de filtrado não é restringido. Isto é particularmente benéfico quando se
trabalha com suspensões, que podem facilmente obstruir ou sujar a membrana.
4 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Como utilizar os dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
Desmonte o dispositivo e
adicione a amostra até à
linha de enchimento.
Volte a montar e
coloque na
centrifugadora.
Centrifugue
para
concentrar
Centrifugue até os
níveis de solução
estarem iguais.
1. Rode a tampa twist-lock do recipiente de amostra no sentido contrário ao dos ponteiros do relógio e,
em seguida, faça deslizar o conjunto de colector de filtrado/tampa para fora e ponha-o de parte.
CUIDADO: Tenha cuidado para não tocar, riscar ou danificar a membrana no fundo do colector de
filtrado durante a desmontagem, o enchimento e a remontagem do dispositivo.
2. Adicione a solução ao recipiente de amostra. A linha lateral do recipiente marca o volume de
enchimento máximo de 15 ml. Não exceda este volume.
NOTA: No caso de soluções com partículas, tais como suspensões celulares, um volume inicial
superior a 5 ml terá como resultado débitos reduzidos. Para obter melhores resultados ao
trabalhar com uma amostra que tenha mais de 10% de sólidos, limite o volume inicial da
amostra a 5 ml ou menos.
3. Encaixe a tampa twist-lock totalmente sobre o rebordo do colector de filtrado. Se necessário, faça
deslizar a tampa para baixo até parar no rebordo.
4. Insira cuidadosamente o colector de filtrado tapado no recipiente de amostra, empurrando suavemente
para baixo para que o colector faça deslocar a solução. Rode a tampa twist-lock no sentido
dos ponteiros do relógio para vedar o recipiente de amostra. Por último, certifique-se de que a tampa
hermética está bem apertada sobre a tampa twist-lock.
5. Insira o dispositivo Centriprep® montado na centrifugadora e contrabalance com um dispositivo
semelhante.
CUIDADO: Inspeccione os rotores basculantes para verificar se o trajecto está livre antes de iniciar a
centrifugação. Qualquer obstrução pode danificar o dispositivo Centriprep® e causar a perda
de amostra. Para ter mais espaço livre, o dispositivo Centriprep® pode ser utilizado em adaptadores
sem almofadas de borracha.
6. Centrifugue o dispositivo Centriprep® na força de centrifugação adequada até que os níveis de líquido
no interior e no exterior do colector de filtrado fiquem equilibrados. Para aplicação em processos de
concentração, consulte as linhas de orientação para conseguir diversos volumes de concentração
descritas na secção “Tempos de concentração para soluções proteicas diluídas”.
7. Se for necessária mais concentração após o equilíbrio, retire o dispositivo da centrifugadora e remova
a tampa hermética. Com o sulco de ventilação virado para cima, decante o filtrado, volte a colocar a
tampa e centrifugue uma segunda vez. Para aplicação em processos de filtração, guarde o filtrado.
8. Após a segunda centrifugação, decante o restante filtrado. Se desejar concentrar ainda mais,
centrifugue novamente o dispositivo; caso contrário, prossiga para o passo 9.
9. Desaperte a tampa twist-lock (rodando-a no sentido contrário ao dos ponteiros do relógio) e remova
o colector de filtrado. Retire a amostra com uma pipeta ou verta o concentrado para um recipiente
adequado.
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
Oriente o sulco de ventilação
para cima e decante o filtrado.
Centrifugue novamente.
Centrifugue
para
concentrar
Desmonte e recupere
o concentrado.
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Tempos de concentração típicos para soluções proteicas diluídas
Volume inicial
Tempo de centrifugação (min)
no dispositivo
e volume de concentrado (ml)
Centriprep® 3K Primeira
Segunda
Terceira
centrifugação centrifugação centrifugação
min ml min ml min ml
5 ml 50 1,2 10 0,8 10 0,5
10 ml 65 2,0 10 1,0 10 0,5
15 ml 95 3,1 35 1,2 10 0,6
Centriprep® 10K Primeira
centrifugação
Segunda
centrifugação
Terceira
centrifugação
min ml min ml min ml
5 ml 15 1,3 10 0,6 N/A
10 ml 30 2,1 10 1,0 5 0,5
15 ml 40 3,2 10 1,2 5 0,5
Centriprep® 30K Primeira
centrifugação
Segunda
centrifugação
Terceira
centrifugação
min ml min ml min ml
5 ml 5 1,3 5 0,8 5 0,5
10 ml 10 2,4 5 1,2 5 0,4
15 ml 15 3,2 10 1,1 5 0,5
Centriprep® 50K Primeira
centrifugação
Segunda
centrifugação
Terceira
centrifugação
min ml min ml min ml
5 ml 5 1,4 5 1,0 5 0,6
10 ml 10 2,2 5 1,1 5 0,6
15 ml 10 3,4 5 1,3 5 0,6
Condições de centrifugação e proteínas utilizadas em estudos do tempo de
concentração
Dispositivo
NMWL 3K 10K 30K 50K
Proteína Citocromo C,
0,25 mg/ml
Albumina sérica
bovina, 1 mg/ml
Albumina sérica
bovina, 1 mg/ml
Albumina sérica
bovina, 1 mg/ml
Força G 3000 × g 3000 × g 1500 × g 1500 × g
Rotor basculante, 25 °C
N/A = não se aplica; a terceira centrifugação é desnecessária
6 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Desempenho
As características dos débitos e de recuperação dos dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® foram
testadas com vários solutos bem conhecidos. Estes resultados, resumidos nas secções seguintes, podem ser
utilizados para calcular o desempenho com outros solutos.
A força centrífuga relativa (RCF) é medida na base do colector de filtrado e calculada da seguinte forma:
RCF = 1,118 × 10 -5 × raio × (RPM) 2
Raio = distância em centímetros, medida desde o centro de rotação até à base do colector de filtrado
RPM = rotações por minuto.
Nota: A RCF e as RPM não são iguais (ou seja, 3000 × g NÃO é equivalente a 3000 RPM). Verifique as
instruções sobre conversão da força g no guia de funcionamento da centrifugadora, ou utilize a
fórmula acima indicada.
Débito
O débito de filtração é afectado por vários parâmetros de funcionamento, incluindo a concentração da
amostra, o volume inicial, a força centrífuga relativa, o tipo de rotor utilizado, o NMWL da membrana e
a temperatura.Na concentração de soluções diluídas, os rotores basculantes e de ângulo fixo produzem
débitos comparáveis.
No caso de soluções que contenham mais de 10% de sólidos, um volume inicial superior a 5 ml resulta
tipicamente em débitos reduzidos. Um volume igual ou inferior a 5 ml produz débitos mais rápidos, porque
este volume limita a quantidade de sólidos que se podem acumular e obstruir a membrana.
Os tempos de centrifugação têm de ser alongados ao trabalhar com temperaturas baixas. A 4 °C, os débitos
são aproximadamente 1,5 vezes mais lentos do que a 25 °C. As soluções viscosas também podem requerer
tempos de centrifugação mais prolongados. Por exemplo, uma solução de BSA de 1 mg/ml em 50% de
glicerina demoraria cinco vezes mais tempo a concentrar do que a proteína idêntica numa solução tampão
aquosa utilizando um dispositivo Centriprep® 10K.
Retenção e recuperação
As membranas hidrófilas anisotrópicas dos dispositivos de filtração centrífuga Centriprep® caracterizam-
se por um limite de peso molecular nominal, ou seja, pela sua capacidade de rejeitar moléculas acima de
um peso molecular especificado.
Como é um parâmetro fácil de trabalhar, o peso molecular é utilizado na classificação da permeabilidade e
da selectividade de membranas com base nos resultados obtidos com proteínas bem caracterizadas.
Contudo, o peso molecular pode não ser válido para todos os solutos. Por exemplo, a capacidade de
retenção pode ser maior para uma molécula globular do que para uma molécula linear com o mesmo peso
molecular nominal. Os efeitos do pH e da força iónica nas dimensões e no comportamento da molécula
numa determinada solução têm também de ser considerados ao avaliar a capacidade de retenção do soluto.
A baixa recuperação do soluto no concentrado pode indicar possíveis perdas de adsorção e/ou passagem de
soluto através da membrana. As perdas por adsorção dependem da concentração do soluto, da natureza do
soluto (hidrófobo ou hidrófilo), da temperatura, do tempo de contacto com as superfícies dos componentes,
da composição das amostras e do pH.
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
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Recuperação de concentrado típica
Soluto e concentração inicial
Peso
molecular
nominal
% de recuperação
de concentrado Centriprep®
3K 10K 30K 50K
IgG Fr. II (1 mg/ml) 156 000 – – – 99
Albumina sérica bovina (1 mg/ml) 67 000 – 97 98 93
Ovalbumina (1 mg/ml) 45 000 – 95 90 –
α-Quimotripsinogénio (1 mg/ml) 25 000 94 93 – –
Citocromo C (0,25 mg/ml) 12 400 96 96 8 4
Vitamina B12 (0,2 mg/ml) 1355 12 – 5 –
Volume inicial de 15 ml, 25 °C, rotor basculante
Resultados baseados nos tempos de centrifugação recomendados indicados na secção "Tempos de
concentração para soluções proteicas diluídas"
Recuperação de proteína típica, dispositivo Centriprep® 30K
Concentração % de recuperação de concentrado ± 1 DP
100 µg/ml 98,2 ± 1,7
1000 µg/ml 96,6 ± 0,2
Volume inicial de 15 ml, 25 °C, rotor basculante, 1500 × g
Albumina sérica bovina, duas centrifugações de 25 minutos
Dessalinização
Para dessalinização ou permuta de solventes, a amostra é concentrada até que o ponto de equilíbrio seja
atingido. O filtrado é eliminado e, em seguida, reconstitui-se a amostra até ao volume original adicionando
um solvente apropriado e agitando no misturador vórtex. A amostra é depois concentrada e reconstituída
uma vez mais. Este processo repete-se até a concentração do microssoluto contaminante estar suficientemente
reduzida.
O seguinte exemplo teórico ilustra o processo de dessalinização de amostras:
Passo do processo
Volume de
amostra
Concentração
proteica
Concentração
de NaCl
Amostra inicial 15 ml 1 mg/ml 500 mM
Centrifugar para concentrar 3 ml 5 mg/ml 500 mM
Reconstituir novamente até
15 ml com NaCl 10 mM
Centrifugar para concentrar/
dessalinizar n.º 1
Reconstituir novamente até
15 ml com NaCl 10 mM
Centrifugar para concentrar/
dessalinizar n.º 2
Reconstituir novamente até
15 ml com NaCl 10 mM
Centrifugar para concentrar/
dessalinizar n.º 3
15 ml 1 mg/ml 108 mM
3 ml 5 mg/ml 108 mM
15 ml 1 mg/ml 29,6 mM
3 ml 5 mg/ml 29,6 mM
15 ml 1 mg/ml 13,9 mM
3 ml 5 mg/ml 13,9 mM
8 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Valores do desempenho
Perfis de filtração típicos para dispositivos Centriprep® utilizando soluções proteicas
diluídas comuns
Dispositivo
Centriprep® 3K
Parâmetros de
funcionamento:
● Força g: 3000 × g
● temperatura: 25 °C
● rotor basculante
● soluto: citocromo C
a 0,25 mg/ml
Volumes iniciais de
5, 10 e 15 ml
Filtrado decantado nos
tempos indicados
Dispositivo
Centriprep® 10K
Parâmetros de
funcionamento:
● Força g: 3000 × g
● temperatura: 25 °C
● rotor basculante
● soluto: albumina sérica
bovina a 1 mg/ml
Volumes iniciais de
5, 10 e 15 ml
Filtrado decantado nos
tempos indicados
Volume de concentrado (ml)
Volume de concentrado (ml)
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
Tempo de centrifugação (min)
Tempo de centrifugação (min)
9

Valores do desempenho, continuação
Dispositivo
Centriprep® 30K
Parâmetros de
funcionamento:
● Força g: 1500 × g
● temperatura: 25 °C
● rotor basculante
● soluto: albumina sérica
bovina a 1 mg/ml
Volumes iniciais de
5, 10 e 15 ml
Filtrado decantado nos
tempos indicados
Dispositivo
Centriprep® 50K
Parâmetros de
funcionamento:
● Força g: 1500 × g
● temperatura: 25 °C
● rotor basculante
● soluto: albumina sérica
bovinaa 1 mg/ml
Volumes iniciais de
5, 10 e 15 ml
Filtrado decantado nos
tempos indicados
Volume de concentrado (ml)
Volume de concentrado (ml)
Tempo de centrifugação (min)
Tempo de centrifugação (min)
10 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Como quantificar recuperações
Calcular a recuperação total, a percentagem de recuperação de concentrado e a percentagem de
recuperação de filtrado utilizando o método seguinte. Este procedimento fornece uma boa aproximação
das recuperações para soluções que tenham concentrações de até, grosso modo, 20 mg/ml.
NOTA: Técnicas de ensaio adequadas incluem espectrofotometria de absorção, o radioimunoensaio, o
índice refractário e a condutividade.
Procedimento de pesagem
A densidade da maior parte das proteínas diluídas é quase igual à densidade da água (ou seja, 1 g/ml).
Utilizando esta propriedade, os volumes de concentrado e filtrado podem ser quantificados por pesagem
e conversão das unidades de gramas para mililitros. Esta técnica é válida apenas para soluções com
concentrações de aproximadamente 20 mg/ml ou menos.
1. Antes da utilização, pese o recipiente de amostra e um tubo de ensaio vazio (capacidade de 15 ml).
2. Encha o recipiente de amostra com solução e volte a pesar.
3. Monte o dispositivo de filtração centrífuga e centrifugue de acordo com as instruções. Decante o filtrado
para o tubo de ensaio pré-pesado. Se desejar mais concentração, centrifugue uma segunda vez
e decante o filtrado para dentro do tubo de ensaio que contém o primeiro filtrado. Volte a pesar o tubo
de ensaio e o(s) filtrado(s).
4. Desmonte o dispositivo e volte a pesar o recipiente de amostra mais o concentrado.
5. Subtraia o peso do tubo de ensaio ou recipiente de amostra vazio para calcular os pesos do material
inicial, do filtrado e do concentrado.
6. Analise o material inicial, o filtrado e o concentrado para determinar a concentração do soluto.
7. Calcule as recuperações com os dados do peso/volume e as concentrações medidas da seguinte forma:
Wc × Cc % de recuperação de concentrado = 100 ×
Wo × Co Wf × Cf % de recuperação de filtrado = 100 ×
Wo × Co % de recuperação total = % de recuperação de concentrado + % recuperação de filtrado
W c = peso total do concentrado antes do ensaio
W o = peso do material inicial original
W f = peso do filtrado
C c
= concentração do concentrado
C o = concentração do material inicial original
C f = concentração do filtrado
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
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Especificações
Capacidade do recipiente de amostra 15 ml
Volume do concentrado final a 25 °C 0,5–0,6 ml
Capacidade do colector de filtrado 12 ml
Força centrífuga relativa máxima
Dispositivo Centriprep® 3K 3000 × g
Dispositivo Centriprep® 10K 3000 × g
Dispositivo Centriprep® 30K 1500 × g
Dispositivo Centriprep® 50K 1500 × g
Área de membrana activa 2,84 cm 2
Volume de retenção (membrana e suporte) 0,5 ml
Dimensões
Diâmetro da tampa Twist-Lock 36,5 mm (a tampa situa-se fora do suporte da centrifugadora)
Diâmetro do recipiente de amostra 28,1 mm
Comprimento 135 mm
Materiais de construção
Membrana Celulose regenerada Ultracel®
Recipiente de amostra Policarbonato
Suporte de membrana Policarbonato
Colector de filtrado Policarbonato
Tampa Twist-Lock Nylon
Tampa hermética Polipropileno
12 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Compatibilidade química
Os dispositivos Centriprep® destinam-se a ser utilizados com líquidos biológicos e soluções aquosas. Antes
de utilizar, verifique a compatibilidade química entre a amostra e o dispositivo. Foi avaliada a compatibilidade
química entre as soluções indicadas na tabela seguinte e os dispositivos Centriprep®.
Ácidos Concentração Concentração
Ácido acético ≤ 80% Ácido nítrico ≤ 10%
Ácido clorídrico ≤ 1,0 N Ácido sulfúrico ≤ 3%
Ácido fórmico ≤ 50% Ácido tricloroacético (TCA) ≤ 10%
Ácido fosfórico ≤ 30% Ácido trifluoroacético (TFA) ≤ 50%
Ácido láctico ≤ 50%
Bases
Hidróxido de amónio ≤ 5% Hidróxido de sódio ≤ 0,1 N
Álcoois
Etanol ≤ 70% Metanol ≤ 60%
Isopropanol ≤ 70% n-butanol ≤ 90%
Detergentes
Detergente Alconox® ≤ 1% Desoxicolato de sódio ≤ 5%
Detergente Lubrol® PX ≤ 0,1% Detergente Tergazyme® ≤ 1%
Surfactante Nonidet P-40 ≤ 2% Surfactante Tween® 20 ≤ 0,1%
Detergente PyroCLEAN 1:10 Surfactante Triton® X-100 ≤ 0,002%
Dodecilssulfato de sódio (SDS) ≤ 2%
Solventes orgânicos
Acetato de etilo não recomendado Dioxano não recomendado
Acetona não recomendado Formaldeído ≤ 5%
Acetonitrilo ≤ 30% Piridina não recomendado
Benzeno não recomendado Tetracloreto de carbono não recomendado
Clorofórmio não recomendado Tetraidrofurano não recomendado
Dimetilformamida ≤ 50% Tolueno não recomendado
Dimetilssulfóxido (DMSO) ≤ 5%
Diversos
Carbonato de sódio ≤ 20% Polietilenoglicol ≤ 10%
Cloridrato de guanidina ≤ 6 M Sulfato de amónio Saturado
Dietilpirocarbonato ≤ 0,2% Tampão fosfato (pH 8,2) ≤ 1 M
Ditiotreitol (DTT) ≤ 0,1 M Tampão Tris (pH 8,2) ≤ 1 M
Fenol ≤ 1% Tiocianato de guanidina ≤ 0,5 M
Glicerina ≤ 70% Tiocianato de sódio ≤ 3 M
Imidazol ≤ 100 mM Ureia ≤ 8 M
Mercaptoetanol ≤ 0,1 M
Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®
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Rotulagem de produto para diagnóstico in vitro
Nesta tabela são definidos os símbolos que se encontram nos rótulos dos dispositivos Centriprep® 10K
e 30K.
Símbolo Definição Símbolo Definição
V
Dispositivo médico para diagnóstico
in vitro N
Data de fabrico
h Número de referência M Fabricante
D Não reutilizar l Limites de temperatura
H Prazo de validade d Produto não-estéril
g Código de lote C
Informações para encomenda do produto
Marcação de conformidade CE
Esta secção contém uma lista dos números de referência dos dispositivos de ultrafiltração Centriprep®.
Consultar a secção Assistência Técnica para obter informações dos contactos. Poderá adquirir estes
produtos on-line em www.millipore.com/products.
Descrição 24/emb 96/emb
Para utilização em diagnóstico in vitro
Dispositivo Centriprep® 10K (10 000 NMWL) 4304 4305
Dispositivo Centriprep® 30K (30 000 NMWL) 4306 4307
Apenas para fins de investigação
Aviso
Dispositivo Centriprep® 3K (3000 NMWL) 4302 4303
Dispositivo Centriprep® 50K (50 000 NMWL) 4310 4311
A informação contida neste documento está sujeita a alteração sem aviso prévio e não deve ser interpretada
como um compromisso por parte da Merck Millipore Ltd. (“Millipore”) ou de uma empresa filial. Nem
a Merck Millipore Ltd. nem nenhuma das suas filiais assume a responsabilidade por quaisquer erros que
possam aparecer neste documento.
Assistência técnica
Para mais informações, contacte os escritórios mais próximos. As informações de contacto a nível mundial
actualizadas estão disponíveis no site da Internet, www.millipore.com/offices. Poderá ainda aceder à
página de assistência técnica em www.millipore.com/techservice.
Garantia normal
A garantia aplicável aos produtos listados nesta publicação pode ser encontrada em
www.millipore.com/terms (nos “Termos e condições de venda” aplicáveis à sua transacção comercial).
14 Dispositivos de filtração centrífuga Centriprep®

Fabricado na Irlanda
Merck Millipore Ltd.
Tullagreen,
Carrigtwohill,
Co. Cork, IRL
O logótipo M é uma marca registada da Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha.
Millipore, Centriprep e Ultracel são marcas registadas da Merck KGaA.
Alconox e Tergazyme são marcas registadas da Alconox, Inc.
Lubrol é uma marca registada da Imperial Chemical Industries PLC.
Nonidet é uma marca registada da Royal Dutch/Shell Group.
PyroCLEAN é uma marca registada da ALerCHECK, Inc.
Triton é uma marca registada da Union Carbide Corp.
Tween é uma marca registada da ICI Americas Inc.
© 2012 EMD Millipore Corporation. Todos os direitos reservados.
PR03522TR, Rev. A, Português, 03/12
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