'X' ENCON,TRO NACIONAL DE FISICA DA MATERIA CONDENSADA

XX ENFMC - Resumos
diferentes valores de carga positiva. A comparacao das
isotermas de pressao e potencialde superficie entre mo-
nocamadas misturadas e de lipidio puro mostra que a
CPZ deve estar localizada perto da, interface corn a subfase
aquosa. A TFP se localiza na fronteira entre as
cabecas polares e a regiao hidrofobica da monocamada.
0 comportamento do potencial de superficie confirma
esta sugestao. Nenhuma das drogas induz uma perturbacao
no empacotamento das cadeias hidrofObicas
de DPPC na monocamada. Nas concentraCies baixas
(1 — 5%) a TFP induz uma expansao da monocamada
no estagio de formacao da fase !iquida expandida, o
que confirma a sua interacao corn a regiao polar da monocamada
devido a sua intercalacao entre as cabecas.
Acima de 5% o efeito diminue provavelmente devido da
formagio dos agregados da TFP nas concentracoes mais
altas. A localizacao mais profunda da TFP na monocamada
lipidica pode estar correlacionada corn sua maior
eficiencia biologica. FAPESP e CNPq.
Ressonancia Magnetica Nuclear na
determinagAo de estruturas de proteinas:
aplicacao a mutantes de HPr de Staphylococcus
aurcus
CLAUDIA ELISABETH MUNTE, RICHARD CHARLES
GARRATT
Institute de Fisica de Scio Carlos - USP
HANS ROBERT KALBITZER
Max-Planck-Institut far Medizinische Forschung -
Heidelberg
TITO JosBONAGAMBA
Instituto de Fisica de Sao Carlos - USP
O trabalho consiste na determinacao da estrutura tridimensional
da proteina mutante de HPr de Staphylococcus
aureus, H15A, por espectroscopia de NMR bidimensional
de alta resolucao, corn use de espectrometro
de alto campo de NMR (800 MHz).
HPr é urna proteina pequena (9 kDa) sendo fosforilada
no atom° 1\1 6 do residuo His-15. E integrante
do sistema bacterial fosfoenolpiruvato:acricarfosfotransferase
(PTS), o qual transporta diversos
carboidratos para dentro da celula, simultaneamente
fosforilando-os a fim de iniciar seu metabolismo e prevenir
sua saida pelo citoplasma. A proteina HPr liga-se
a enzima I, transferindo-lhe seu grupo fosfato.
Urn grande rnimero de estruturas tri-dimensionais de
HPr ja, foram determinadas. A topologia geral e urn
sanduiche-/3 aberto, composto de tres helices-a e quatro
fitas-/3 anti-paralelas. Muitos detalhes estruturais sco
bem conservados. A regico do centro ativo (residuos 12-
18) parece ter diferencas significativas na comparacco
de todas as estruturas, reforcando a hiplitese de que a
fosforilacio e a desfosforilacao do sitio ativo His-15 é
acompanhada por mudancas conformacionais. Paralelamente,
divergencias nas estruturas por Raios-X e por
NMR levam a suposicao de que as proteina,s assumem
uma variedade de conformacoes, resultando no "congelamento"
de somente uma destas conformacoes (Rains-
X) ou a urn intermediario entre todas elas (NMR). Mutantes
recentes de HPr de Staphylococcus aureus, onde
o sitio ativo His-15 e mutado para Ala-15 ou Asp-
15 (H15A e H15D) mostram urn aumento inesperado
de afinidade para corn a enzima I. A mutante H15A
nao pode ser fosforilada, e a mutante H15D e fosforilada
via carga do residuo Asp, ou seja, por urn caminho
bioquimico totalmente diferente. Uma possivel explicacao
para esse aumento de afinidade seria que essas
mutantes assumem, em sua maioria, uma Unica conformac5,o,
sendo justamente a que se liga it enzima I. A
determinacao estrutural dessas mutantes torna-se, portanto,
de grande interesse.
TRANSNITROSYLATION REACTIONS IN
PROTEINS AND NITRIC OXIDE
TRANSFER BETWEEN S-NITROSYLATED
THIOLS AND HEME GROUPS
KATIA CRISTINA GARCIA, FERNANDA RIBEIRO
BURGEL, SONIA RENAUX WANDERLEY LOURO
PUC-Rio
ELIANE WAJNBERG
CBPF
Nitric oxide is a small free radical that had recently become
one of the more studied molecules. The increasing
interest in NO is due to its expanding range of functions
in humans and other animals. It is endogenously
synthesized and in living systems and often plays a role
as a biological messenger in neurotransmission, blood
pressure control and immunological responses. NO has
a high affinity for ferrous hemeproteins. It also binds
to thiol- containing compounds forming S-nitrosothiols.
Studies of S-nitrosoproteins stability and of transnitrosation
reactions between thiol and heme containing proteins
are important to elucidate NO-associated biological
mechanisms. In this work the uv-visible absorption
properties of S-nitrosylated albumin and cysteine
are used to study both their stability under various pH
conditions and the rates of transnitrosation reactions
between their thiols. S-nitrosothiols possess dual absorption
peaks at 320-360 nm and at 550 nm. Details
of the absorption spectra are different and permit detection
of transnitrosation. Nitrosyl-hemes are paramagnetic
and present well- characterized EPR spectra.
NO donations from S-nitrosylated cysteine and albumin
to heme proteins such as hemoglobin and myoglobin
are studied using electron paramagnetic resonance and
the uv-visible optical absorption of the hemeprotein. It
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