Histologia-Juqueira e Caerneiro

que produz uma imagem aparentemente tridimensional (Figura 1.3 C). Estas imagens são sempre
vistas em preto, branco e tons de cinza.
Microscopia confocal
Infelizmente a imagem fornecida pelos microscópios não costuma ser composta de um único plano
muito delgado do corte. Geralmente, há superposição de vários planos, os quais aparecem em foco
simultaneamente, causando certo grau de deterioração da imagem. Para resolver esse problema foi
desenvolvido o microscópio confocal, que torna possível focalizar um plano muito delgado do
espécime.
Os fundamentos desse microscópio são:
O espécime é iluminado por um feixe de luz muito estreito
A imagem coletada do espécime deve passar por um orifício muito pequeno.
A consequência desse arranjo é que só a imagem originada do plano focalizado alcança o detector,
enquanto as imagens de planos anteriores e posteriores são bloqueadas (Figura 1.4 ). A luz
proveniente de fora do plano de foco é, em grande parte, eliminada, a definição do objeto focalizado
torna-se melhor e a localização de componentes do espécime pode ser feita com muito mais precisão
que ao microscópio de luz.
Por motivos práticos, o seguinte arranjo é utilizado em muitos microscópios confocais (ver Figura
1.5 ): (1) a iluminação é provida por uma fonte de laser; (2) como esta fornece um ponto de
iluminação muito pequeno, o feixe deve ser varrido sobre o espécime para possibilitar a observação
de uma área maior; (3) o componente do espécime que é de interesse deve ser marcado com uma
molécula fluorescente (isso significa que uma secção rotineira não pode ser estudada); (4) a luz
usada para formar uma imagem é aquela porção que é refletida pelo espécime; (5) a luz refletida é
capturada por um detector, em que o sinal é amplificado eletronicamente para ser visto em um
monitor.
Como somente um plano focal muito delgado é focalizado de cada vez (também chamado de
secção óptica), é possível depois reunir os vários planos de um espécime e reconstruí-los em um
objeto tridimensional. Para realizar todas essas funções , os microscópios confocais dependem de
grande capacidade de computação.
Microscopia de fluorescência
Quando algumas substâncias são irradiadas por luz de um determinado comprimento de onda, elas
emitem luz com um comprimento de onda mais longo. Esse fenômeno é chamado fluorescência. Na
microscopia de fluorescência as secções são iluminadas por uma fonte de luz de mercúrio sob alta