Aktualności bioMérieux nr 43 plik do pobrania (format pdf)

More documents

Recommendations

Info

18 kolonii szczepów E. faecalis i E. faecium, u których wykryto metodami odniesienia mechanizmy VanA i VanB. Kolonie E. faecalis wykazywa∏y zabarwienie od zielonego, poprzez turkusowy, a˝ do niebieskiego. Kolonie szczepów E. faecium zabarwione by∏y na kolor fioletowy o ró˝nej intensywnoÊci. Po przed∏u˝eniu czasu inkubacji o kolejne 24 godziny w warunkach j.w. uzyskano wzrost badanych szczepów w postaci du˝ych, intensywnie zabarwionych kolonii. Uzyskany obraz nie stwarza∏ problemów identyfikacyjnych. ● Po 24-godzinnej inkubacji w 37°C w warunkach tlenowych, w przypadku wankomycynowra˝liwych szczepów E. faecalis i E. faecium oraz szczepów nale˝àcych do gatunku E. gallinarum uzyskano delikatny, smu˝àcy wzrost na linii pierwszego posiewu wyraênie ró˝niàcy si´ od wzrostu szczepów wankomycynoopornych. Nie obserwowano wzrostu na ca∏ej powierzchni posiewu. Obraz nie ulega∏ zmianie po kolejnej dobie inkubacji. B. wyniki posiewu badanych szczepów z zastosowaniem etapu namna˝ania ● W posiewie na pod∏o˝e chromID VRE, poprzedzonym etapem namna- ˝ania badanych szczepów E. faecalis, E. faecium oraz E. gallinarum w bulionie mózgowo-sercowym (Brain- Heart broth) w obecnoÊci krà˝ka antybiogramowego z 30 µg wankomycyny, uzyskano wzrost wy∏àcznie wankomycynoopornych szczepów E. faecalis i E. faecium w postaci du- ˝ych intensywnie zabarwionych kolonii pozwalajàcych odró˝niç mi´dzy sobà te dwa gatunki drobnoustroju. ● W miejscu posiewu szczepów E. faecalis i E. faecium wankomycynowra˝liwych i szczepów E. gallinarum nie uzyskano ˝adnego wzrostu. kolonie zabarwione na fioletowo bàdê turkusowo, których izolacja i identyfikacja potwierdzi∏y przynale˝noÊç do rodzaju Enterococcus. Drobnoustroje towarzyszàce rosnà na pod∏o˝u w postaci kolonii bezbarwnych. B. wyniki posiewu wymazów z odbytu z zastosowaniem etapu namna˝ania Po zastosowaniu wczeÊniejszego etapu namna˝ania, na pod∏o˝u chromID VRE uzyskano wzrost mniej liczny ni˝ w przypadku tych samych materia∏ów z posiewu bezpoÊredniego. ObecnoÊç pojedynczych kolonii oraz intensywniejsze zabarwienie u∏atwia∏o interpretacj´ otrzymanego obrazu, kolonie o zabarwieniu fioletowym by∏y du˝e, w odró˝nieniu od kolonii turkusowych, których wzrost okreÊlono jako s∏aby, a intensywnoÊç zabarwienia jako Êrednià. Kolonie o zabarwieniu fioletowym i turkusowym poddawano dalszej identyfikacji: w preparacie mikroskopowym barwionym metodà Grama widoczne by∏y komórki ziarniaków Gram-dodatnich, po uzyskaniu wzrostu na pod∏o˝u agarowym z krwià wykonano identyfikacj´ biochemicznà testem rapid ID 32 Strep. Wyniki identyfikacji wskaza∏y w jednym przypadku Enterococcus faecalis, w pozosta∏ych E. faecium. Otrzymane wyniki by∏y zgodne z uzyskanymi metodami odniesienia. III. Sposób wykonania posiewu na pod∏o˝u chromID VRE Posiew redukcyjny zarówno materia∏ów klinicznych jak i szczepów bakteryjnych pozwoli∏ uzyskaç wzrost pojedynczych kolonii badanych drobnoustrojów, co w po∏àczeniu z zabarwieniem kolonii umo˝liwi∏o wst´pnà interpretacj´ oraz przeprowadzenie dalszych badaƒ diagnostycznych. dzi´ki wytwarzaniu β-galaktozydazy, E. faecalis – kolor niebiesko-zielony dzi´ki wytwarzaniu α-glukozydazy. Przeprowadzona analiza z u˝yciem 70 ró˝nych pod wzgl´dem wra˝liwo- Êci na leki glikopeptydowe i mechanizmów opornoÊci izolatów klinicznych E. faecalis, E. faecium oraz E. gallinarum w pe∏ni potwierdza to stwierdzenie. Pod∏o˝e chromID VRE firmy bioMérieux hamuje wzrost szczepów enterokoków, które nie wykazujà ekspresji nabytej opornoÊci na wankomycyn´, gatunków enterokoków o fenotypie VanC, wi´kszoÊci bakterii Gram-ujemnych i Gram-dodatnich oraz grzybów. Przeprowadzone badania wskazujà na koniecznoÊç wykonywania posiewu badanego materia∏u metodà redukcyjnà oraz stosowanie etapu namna˝ania w bulionie mózgowo-sercowym. Stosowanie tych zaleceƒ umo˝liwia i u∏atwia interpretacj´ wyniku posiewu. Interpretacja wyników posiewu zarówno wyizolowanych izolatów bakteryjnych, jak i materia∏ów klinicznych powinna byç wykonywana przez do- Êwiadczonego mikrobiologa. Wiedza i doÊwiadczenie stanowià gwarancj´ uzyskania wiarygodnego wyniku. Wybiórcze pod∏o˝e chromogenne chromID VRE firmy bioMérieux jest pod∏o˝em przydatnym do wykrywania wankomycynoopornych szczepów E. faecium i E. faecalis u pacjentów z grup ryzyka. Nale˝y pami´taç, ˝e jest to pod∏o˝e do badaƒ przesiewowych i nie zast´puje rutynowych metod oznaczania lekowra˝liwoÊci. II. Wymazy z odbytu od pacjentów oddzia∏u hematologicznego A. wyniki posiewu bezpoÊredniego na pod∏o˝e chromID VRE Po 24-godzinnej inkubacji w 37°C w warunkach tlenowych p∏ytek z bezpoÊrednim posiewem wymazów z odbytu na pod∏o˝e chromID VRE uzyskano wzrost zwartej masy drobnoustrojów charakteryzujàcych si´ ró˝nym wyglàdem kolonii pod wzgl´dem wielkoÊci i zabarwienia. WÊród wyros∏ych kolonii widoczne sà Wnioski Pod∏o˝e chromogenne chromID VRE firmy bioMérieux, dzi´ki zawartoÊci dwóch chromogennych substratów oraz 8 µg/L wankomycyny, pozwala w sposób szybki i wiarygodny wykryç szczepy E. faecalis i E. faecium oporne na wankomycyn´. BezpoÊrednie wykrycie E. faecium i E. faecalis mo˝liwe jest dzi´ki charakterystycznemu zabarwieniu kolonii: E. faecium przyjmuje fioletowy kolor
mikrobiologia Wykrywanie β-laktamaz o rozszerzonym spektrum substratowym (ESBL) wytwarzanych przez E. coli i Klebsiella spp. za pomocą testu potwierdzającego wg CLSI oraz kart AST–N041 systemu VITEK 2 Łukasz Golec, dr Krzysztof Golec Zakład Mikrobiologii Szpital Wojewódzki nr 2 w Rzeszowie Wprowadzenie Beta-laktamazy o rozszerzonym spektrum substratowym (ESBL) sà grupà enzymów majàcych zdolnoÊç hydrolizy nawet trzeciej generacji cefalosporyn. Zaka˝enia wywo∏ane bakteriami posiadajàcymi ten mechanizm opornoÊci w znacznym stopniu ograniczajà opcje terapeutyczne zaka˝eƒ wywo- ∏anych przez te szczepy. Z tego powodu szybkie i dok∏adne wykrywanie bakterii wytwarzajàcych ESBL jest bardzo wa˝ne w rutynowej pracy ka˝dego laboratorium mikrobiologii klinicznej, umo˝liwiajàc nie tylko prawid∏owà terapi´, ale wa˝ne jest równie˝ w zapobieganiu szerzenia si´ tego mechanizmu opornoÊci w Êrodowisku. Cel pracy Celem niniejszej pracy by∏o porównanie wykrywania β-laktamaz o rozszerzonym spektrum substratowym u Escherichia coli i Klebsiella spp. przez system Vitek 2 z zastosowaniem kart AST – N041 w porównaniu z testem potwierdzajàcym wg CLSI (5). Materia∏y i metody Materia∏ badany niniejszej pracy stanowi∏y izolaty bakterii E. coli i Klebsiella spp., uzyskane z materia∏ów klinicznych dostarczanych do Zak∏adu Mikrobiologii Szpitala Wojewódzkiego Nr 2 w Rzeszowie w okresie od 01. marca do 31. lipca 2007 r. Analizie poddano 187 szczepów bakteryjnych, z których 139 pochodzi∏o z materia∏ów od chorych hospitalizowanych i 48 z materia- ∏ów pozaszpitalnych (specjalistyczne przychodnie przyszpitalne, poradnie POZ, laboratoria prywatne) (Ryc. 1.). Identyfikacj´ do gatunku wykonano przy pomocy kart GN systemu VITEK 2, Tab. 1. Rodzaje materia∏ów, z których uzyskano izolaty Rodzaj materia∏u IloÊç izolatów Wymaz z górnych dróg oddechowych (gard∏o, nos) 50 Wymaz z dróg rodnych 44 Wymaz z rany, ropy 42 Mocz 25 Krew, PMR 12 Materia∏y z dolnych dróg oddechowych (plwocina, BAL) 9 ˚ó∏ç 5 natomiast oznaczenie obecnoÊci ESBL z u˝yciem kart AST-N041 tego systemu oraz testem potwierdzajàcym wg CLSI (5). 1. Test potwierdzajàcy wg CLSI Na pod∏o˝e Mueller-Hinton (bioMérieux) nanoszono zawiesin´ badanego szczepu (o g´stoÊci 0,5 McFarlanda). Do oznaczeƒ u˝yto krà˝ków firmy BectonDickinson wysycanych nast´pujàcymi antybiotykami: ● ceftazydym (CAZ – 30 µg), ● ceftazydym + kwas klawulanowy (CAZ/CLA – 30/10 µg), ● cefotaksym (CIX – 30 µg), ● cefotaksym+kwas klawulanowy (CTX/CLA – 30/10 µg). Krà˝ki umieszczano na p∏ytce o Êrednicy 90 mm w maksymalnych odleg∏oÊciach od siebie, pozwalajàcej na dok∏adne zmierzenie stref zahamowania wzrostu. P∏ytki inkubowano przez 18 h w 37°C i mierzono strefy zahamowania wzrostu. Za dodatni wynik testu uznawano taki w którym, strefa zahamowania wzrostu wokó∏ krà˝ka zawierajàcego antybiotyk + inhibitor by∏a wi´ksza lub równa 5mm, w porównaniu za strefà wzrostu wokó∏ krà˝ka z samym antybiotykiem. 2. System VITEK 2 Metoda ta wykorzystuje karty ze studzienkami wype∏nionymi odpowiednimi antybiotykami. Do badaƒ u˝yto kart AST-N041 umo˝liwiajàcych wykrywanie β-laktamaz o rozszerzonym spektrum substratowym. W sk∏ad testu ESBL wchodzi szeÊç studzienek: ● zawierajàce sam cefotaksym (CTX) i ceftazydym (CAZ) w st´˝eniach 0,5 µg /ml oraz cefepim (FEP) w st´˝eniu 1µg/ml, ● oraz studzienki zawierajàce antybiotyk w po∏àczeniu z kwasem klawulanowym (CTX/CAZ+CLA) w st´˝eniu 0,5/4 µg /ml oraz (FEP + CLA) w st´˝eniu 1/10. Badania wykonywano zgodnie z procedurà zalecanà przez producenta. Wynik testu przedstawiany jest jako: ● ESBL „POS” – ESBL dodatni: wysokie prawdopodobieƒstwo, ˝e drobnoustrój wytwarza ESBL. ● ESBL „NEG”- ESBL ujemny: bardzo niskie prawdopodobieƒstwo, ˝e drobnoustrój wytwarza ESBL. Jako szczepów kontrolnych dla wymienionych metod u˝yto szczepów: ● E. coli ATCC 25922, ● E. coli ATCC 35218, ● K. pneumoniae ATCC 700603. Wyniki i ich omówienie WÊród zbadanych 187 szczepów 144 (77%) nale˝a∏o do gatunku E. coli, 36 (19%) Klebsiella pneumoniae, a 7 do gatunku Klebsiella oxytoca, co stanowi∏o niespe∏na 4% wszystkich badanych szczepów (Ryc. 2.). W 48 izolatach wyhodowanych z materia∏ów pozaszpitalnych nie stwierdzono w ˝adnej z metod, szczepów produkujàcych β-laktamazy o rozszerzonym spektrum substratowym. 19
Page 1 and 2: aktualności bioMérieux numer 43 g
Page 3 and 4: 80-lecie Polskiego Towarzystwa Mikr
Page 5 and 6: iologia molekularna Techniki biolog
Page 7 and 8: palca”, wykorzystujà w g∏ówne
Page 9: sekwencji rozdzielajàcej (ang. „
Page 13 and 14: chomych elementów genetycznych tak
Page 15 and 16: powtórzeƒ - MLVA (Multilocus vari
Page 17: ocena produktu Ocena przydatności
Page 21: Ocena kart identyfikacyjnych VITEK
Page 24 and 25: Rys. 2. Raport precyzji i poprawnos
Page 27 and 28: z życia firmy XVI Zjazd Polskiego

Aktualności bioMérieux nr 43 plik do pobrania (format pdf)

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?