Enzymy - Ústav lékařské chemie a biochemie

c. Tento postup opakujte pro všechny dvojice hodnot S a jim odpovídajících naměřenýchhodnot v. Získáte n přímek pro n dvojic hodnot.d. Pokud by naměřené hodnoty přesně odpovídaly rovnici rovnoosé hyperboly, všechnypřímky by se protnuly v jednom bodě, jehož souřadnice y je V a souřadnice x je K m .e. Protože měření jsou zatížena experimentální chybou, v praxi se setkáváme většinou sesituací, kdy se přímky protnou ve více průsečících. Souřadnice y těchto průsečíků jsou V asouřadnice x K m .Tyto hodnoty seřadíme podle velikosti a určíme medián.C. Výpočet K m z naměřených hodnot.Vytvořte sadu dvojic hodnot s seřazených podle velikosti a jim odpovídajících hodnot v :S 1 v 1S 2 v 2S 3 v 3S 4 v 4S 5 v 5Pro každý pár z možných dvojic můžete vypočítat K m i V podle rovnic pro rovnoosouhyperbolu, uvedených v teoretickém úvodu.v2 - v1 S2 - S1Km= S1S2 V = v1v2Sv2 1-Sv1 2Sv2 1-Sv1 2Vypočtěte K m pro všechny možné páry dvojic a pak se určete jejich medián.pozn.Medián (označován Me nebo ) je hodnota, jež dělí řadu čísel podle velikosti seřazených hodnot nadvě stejně početné poloviny. Při lichém počtu hodnot se určí medián jako hodnota, která má nad seboui pod sebou stejný počet měrných hodnot. Při sudém počtu hodnot je medián aritmetickým průměremdvou středních hodnot, tj. nejnižší hodnoty horní poloviny a nejvyšší hodnoty dolní poloviny hodnotuspořádaných podle velikosti.5. Důkaz peroxidasy benzidinovou reakcíPrincip:Peroxid vodíku při oxidačních pochodech v buňce je rozkládán enzymy zvanýmiperoxidasy a katalasy. Patří do skupiny heminových enzymů (hemoproteinů). Průběh reakceje u obou enzymů rozdílný. Peroxidasy katalyzují oxidaci substrátu účinkem peroxidu vodíkuza vzniku vody (viz teoretický úvod). Peroxidasy (EC 1.11.1.7) jsou obsaženy v rostlinných iživočišných organismech. Katalasa (EC 1.11.1.6) jednak rozkládá peroxid vodíku na vodu amolekulární kyslík, jednak má peroxidasový účinek. Vyskytuje se ve větším nebo menšímmnožství ve všech tkáních (v tzv. peroxisomech) a v tekutinách organismu. Význam tkvíhlavně v rozkladu H 2 O 2 škodlivého pro organismus. V tomto cvičení bude prokazovánaperoxidasová reakce kvalitativně oxidací derivátu benzidinu na modré barvivo. (Dříve sepoužívalo k těmto důkazům benzidinu – 4,4´-diaminobifenylu , který je však kancerogenní.)Derivát benzidinu (tetramethylbenzidin nebo o-tolidin) se působením peroxidasy aperoxidu vodíku oxiduje na barevný oxidovaný produkt.H 2 NNH 2+ H 2 O 2PODHNNHC H 3CH 3H 3 CCH 3o-tolidin8