Full text (PDF) - Chemické listy

Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) Amerika 20103. Rudenko N., Golovchenko M., Grubhoffer L.: InsectMol. Biol. 16, 501 (2007).FUNKČNÁ ANALÝZA GÉNU GDX1 KÓDUJÚCEHOHOMOLÓG GENTISÁT 1,2-DIOXYGENÁZYZ KVASINKY Candida parapsilosisMICHAELA JAKÚBKOVÁ a JOZEF NOSEKKatedra biochémie, Prírodovedecká fakulta UniverzityKomenského v Bratislave, Mlynská dolina CH1, 842 15Bratislava 4jakubkova@fns.uniba.skPatogénna kvasinka Candida parapsilosis je unikátnymmodelovým systémom pre štúdium katabolizmu aromatickýchzlúčenín. Na rozdiel od kvasinky Saccharomycescerevisiae ako aj blízko príbuzných druhov rodu Candida(napr. C. albicans) je C. parapsilosis schopná degradovaťderiváty fenolu a kyseliny benzoovej dvomi enzymatickýmidráhami 3 . Prvou je 3-oxoadipátová a druhou gentisátovádráha. Analýza kompletných sekvencií genómov kvasiniekC. albicans, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. tropicalisa Lodderomyces elongisporus odhalila, že väčšina druhovstratila počas evolúcie gény pre komponenty obochenzymatických dráh 1 . V genóme kvasinky C. parapsilosissme však identifikovali otvorený čítací rámec (ORF)CPAG03408. Sekvencia korešpondujúceho proteínovéhoproduktu je homologická so sekvenciami gentisát 1,2-dioxygenázy z rôznych druhov organizmov. Tento enzýmkatalyzuje konverziu gentisátu (2,5-dihydroxybenzoátu) namaleylpyruvát, ktorý je následne sériou reakcií premenenýna fumarát a pyruvát 2 . Gén sme nazvali GDX1 (gentisátdioxygenáza 1).Hlavným cieľom našej práce je funkčná analýza génuGDX1. ORF génu GDX1 sme klonovali do plazmidovéhovektora, ktorý umožňuje jeho kontrolovanú expresiuv bunkách kvasiniek. Priebeh enzymatickej reakcie poindukcii expresie génu sme v bunkách transformantov meralipomocou kyslíkovej elektródy. Naše výsledky naznačujú, žepočas kultivácie buniek C. parapsilosis v médiu s glukózouako jediným zdrojom uhlíka sú gény gentisátovej dráhyreprimované. Zistili sme, že k ich aktivácii dochádza počaskultivácie buniek v prítomnosti niektorých aromatickýchzlúčenín. Reguláciu expresie génu GDX1 sme analyzovali ajprostredníctvom fúzie promótora génu GDX1 s reportérovýmmarkerom LAC4, ktorý kóduje β-galaktozidázu.Vnútrobunkovú lokalizáciu proteínového produktu génuGDX1 sme stanovili pomocou fúzie so zelenýmfluorescenčným proteínom (yEGFP3).Táto práca vznikla s podporou grantu z agentúry VEGA(1/0219/08).LITERATÚRA1. Butler G., Rasmussen M.D., Lin M.F., Santos M.A.S.,Sakthikumar S., et al.: Nature 459, 657 (2009).2. Eppink M.H., Cammaart E., Van Wassenaar D.,Middelhoven W.J., van Berkel W. J.: Eur. J. Biochem.267, 6832 (2000).3. Middelhoven W.J., Coenen A., Kraakman B.,Sollewijn Gelpke M.D.: Antonie Van Leeuwenhoek62, 181 (1992).ASYMETRICKÁ SYNTÉZA AZAHELICENŮANDREJ JANČAŘÍK, IRENA G. STARÁ* a IVOSTARÝ*Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v.v.i.,Flemingovo nám. 2, 166 10 Praha 6jancarik@uochb.cas.czHeliceny jsou inherentně chirální aromatické látky,které obsahují ortho-kondenzovaná benzenová jádra. Ačkolijsou heliceny známé více jak 50 let, jejich efektivní přípravav opticky čisté formě v multigramovém měřítku dosudnebyla uspokojivě vyřešena. Jedním z možných řešení tohotoproblému je diastereoselektivní syntéza opticky čistých látekpodobných helicenům, která využívá chirální stavebníbloky 1 .Klíčovým krokem syntézy je intramolekulární [2+2+2]cyklotrimerizace triynů poskytující aromát s helikálníchiralitou, která je intenzivně studována naší skupinou 1,2 .Jako nejúčinnější se jeví v případě pentacyklickýchazahelicenů reakce katalyzovaná kobaltem za současnéhopůsobení mikrovlnného záření.Podporováno GA AV ČR (reg. č. IAA400550916), MŠMT(Centrum pro biomolekuly a komplexní molekulární systémy,reg. č. LC512) a ÚOCHB AV ČR (tato studie je součástívýzkumného záměru Z4 055 0506).LITERATURA1. Sehnal P., Krausová Z., Teplý F., Stará I. G., Starý I.,Rulíšek L., Šaman D., Císařová I.: J. Org. Chem. 73,2074 (2008).2. Míšek J., Teplý F., Stará I. G., Tichý M., Šaman D.,Císařová I., Vojtíšek P., Starý I.: Angew. Chem. Int. Ed.47, 2074 (2008).370