Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) Amerika 2010vytipování dalších potenciálních genů či deregulacívýznamných pro vznik a vývoj PV.Mononukleární buňky (MNC) izolované z periferníkrve 12 PV pacientů a 5 zdravých dárců jsme pomocí 21denní in vitro kultury v trifázovém tekutém mediu 1diferenciovali do erytroidní linie. Ve vzorcích napříčkultivací (den 1, 7, 14, 21) jsme pomocí BeadChip Illuminatechnologie sledovali genovou expresi a získaná datastatisticky analyzovali v programu R 2 . Výsledky jsme ověřilipomocí RT-PCR v reálném čase na rozšířeném souboruvzorků.Použitá in vitro metoda umožnila selekci homogenníchpopulací jednotlivých stádií erytroidních progenitorů z velmiheterogenní populace, jakou tvoří krevní MNC. Pomocíkomparativních analýz jsme vytipovali skupinu kandidátníchgenů asociovaných s PV a deregulovaných v jednotlivýchstádiích erytroidní expanze. Výsledky jsme dále korelovalis expresním profilem miRNA 3 popsaném na souboruerytroidních progenitorů získaných za stejných podmínek.Ačkoliv existuje řada komerčně dostupných programůpro předpověď potenciálních cílů jednotlivých miRNA,v některých případech vedou počítačové analýzy k výběrubiologicky nerelevantních dat. Korelace expresních profilůmiRNA a mRNA je tedy důležitá pro objasnění funkcíjednotlivých miRNA. V našem případě nabízí současnéstudium expresních profilů miRNA a mRNA na stejnýchvzorcích erytroidních progenitorů možnost detailnějšíhopoznání molekulární podstaty a patologie polycythemia vera.Tato práce vznikla za podpory grantu GAUK 200095.LITERATURA1. Gaikwad A., Nussenzveig R., Prchal J.T.: Exp. Hematol35, 587 (2007).2. Otahalova E., Bruchova H., Necas E., Prchal J.T.: Vnitr.Lek. 54, P61 (2008).3. Bruchova H., Yoon D., Agarwal A.M., Mendell J.,Prchal J.T.: Exp. Hematol. 35, 1657 (2007).PLODY Lonicera caerulea L.: OD FYTOCHEMIE POAPLIKACIIRENA PALÍKOVÁ a *, KATEŘINA VALENTOVÁ a ,JAN ROHEL b , SIMONA KAPRÁLOVÁ b , VILÍMŠIMÁNEK a a JITKA ULRICHOVÁ aa Ústav lékařské chemie a biochemie, Hněvotínská 3, 775 15Olomouc; b Klinika zubního lékařství, Palackého 12, 772 00Olomouci.palikova@gmail.comLonicera caerulea L. (zimolez modrý) je původnímkeřem severní polokoule. Plody jsou bohatým zdrojemanthokyaninových barviv. V tradičním léčitelství Ruskaa Číny se proto využívají pro své protizánětlivé a chemopreventivníúčinky 1 . Cílem naší práce bylo analyzovat složkyplodu zimolezu modrého, připravit frakci bohatou nabiologicky aktivní látky a dokázat její příznivé účinky invitro i in vivo.V plodech zimolezu modrého byla potvrzenapřítomnost velkého množství fenolových látek, předevšímanthokyaninů (kyanidin-3-glukosid), které jsme pro studiumbiologické aktivity zkoncentrovali do fenolové frakce (FF;80 % anthokyaninů). Na subbuněčných modelechvykazovala FF redukční kapacitu, inhibovala radikálovépoškození potkaních mikrosomálních membrán vyvolanéterc-butylhydroperoxidem (tBH) i oxidaci lidskýchlipoproteinů o nízké hustotě (LDL) indukovanou mědí 2 .V koncentraci 1000 µg·ml -1 vykazovala cytoprotektivníúčinek na primární kultury potkaních hepatocytů a lidskýchendotelových buněk (HUVEC) po intoxikaci tBH(0,5 mmol·l -1 ; 1,5h), v koncentraci 0,1 µg·ml -1 na HUVECpo poškození oxidovanými LDL (200 µg·ml -1 ; 2h).Protizánětlivé účinky celých plodů L. caerulea L. (10 %)v kombinaci s omega-3 polynenasycenými mastnýmikyselinami (5 %) byly potvrzeny na modelu zánětu tlustéhostřeva vyvolaného dextransulfátem sodným (5 %) u potkanůkmene Wistar. Experiment byl hodnocen histologickouanalýzou tenkého a tlustého střeva a měřením parametrůoxidačního stresu (cyklooxygenasa, myeloperoxidasa,produkty lipoperoxidačního poškození, glutathionreduktasa,glutathiontransferasa).Jednou z možností aplikace FF Lonicera caerulea L.je léčba pacientů s diagnostikovanou gingivitidoua parodontitidou. Frakce v kombinaci s extraktem Macleayacordata ve formě zubního gelu příznivě působila napodpůrné a pojivé tkáně zubu, zabraňovala adherenci gramnegativníchbakterií, hlavní příčiny vzniku parodontálníhoonemocnění.Tato práce vznikla za podpory grantu MŠMT ČR6198959216 a FT-TA3/024.LITERATURA1. Heinrich J., Švarcová I., Valentová K.: Chem. Listy102, 245 (2008).2. Palíková I., Heinrich J., Bednář P., Marhol P., Křen V.,Cvak L., Valentová K., Růžička F., Holá V., Kolář M.,Šimánek V., Ulrichová J.: J. Agric. Food Chem. 56,11883 (2008).NEGATIVNÍ VLIV RETROTRANSPOSONU LINE-1NA LIDSKÝ GENOM: NOVÁ MOLEKULÁRNÍPŘÍČINA VZNIKU β-TALASÉMIELUCIE PITERKOVÁ, JANA KUČEROVÁ aVLADIMÍR DIVOKÝÚstav biologie, Lékařská fakulta, Univerzita Palackého,Hněvotínská 3, 775 15 Olomouclucie.piterkova@upol.czLidský genom obsahuje více než 500 000 kopií LINE-1retrotransposonu (long interspread nuclear element, LINE-1,zkráceně L1), které představují zhruba 17 % jeho obsahu. L1element se tak stal, co do počtu, nejúspěšnější sekvencív rámci lidské evoluce. Retrotransposičně aktivních je vsoučasné době pouze 100 kopií, které svou insercí mohou378
Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) Amerika 2010kvantitativně a kvalitativně ovlivnit expresi mnoha genů.Většina de novo L1 insercí nemá vliv na lidský organismus,nicméně mohou se projevit i jako negativní mutageny a státse tak příčinou řady lidských onemocnění 1 .Inserce funkčního retrotransposonu L1 (6 kb, GenBank:AF149422) do druhého intronu β-globinového genu je úplněnovou etiologií β-talasémie u matky a dcery z ČR. β-talasémie jsou vrozené chronické anémie, vznikající vdůsledku snížení, nebo absence syntézy β-globinovéhopolypeptidového řetězce.Spojením L1 + EBV transformovaných lymfocytůs myšími erytroleukemickými buňkami (MEL) jsme vytvořilibuněčnou linii, která nám umožnila charakterizovat vlivpřítomnosti L1 elementu na funkci β-globinového genu upostižených jedinců. Insercí L1 elementu do β-globinovéhogenu poklesla hladina mRNA u mutované alely na 10 – 15%. Majoritní podíl připadá na správně sestřiženou formumRNA, minoritní pak na 3 aberantní varianty. Zjistili jsme,že aberantní varianty jsou eliminovány mechanismemdegradace defektních mRNA (nonsense mediated decay); přizablokování této dráhy se jejich exprese 2x zvýší. Dále jsmedokázali, že regulační enhancerová oblast na 3' konci β-globinového genu u mutované alely je methylovaná, narozdílod kontroly. Po odstranění methylace zůstává však expresenezměněna, z čehož usuzujeme, že methylace enhancerovéoblasti není primární příčinou poklesu hladiny β-globinovémRNA, ale jen sekundárním jevem souvisejícím s dislokacípromotoru a enhanceru. L1 element také ovlivňuje míruaktivity z β-globinového promotu, která byla u mutovanéalely snížena o 30 %.Molekulárních mechanismů, kterými L1 elementmoduluje expresi lidských genů, bylo popsáno několik 2 .V současné době však není jasné, které z nich a jakýmzpůsobem přispívají k výslednému patologickému fenotypu.Jejich odhalení je důležité pro pochopení skutečnéhoevolučního významu retrotransposonů a jejich funkce.Tato práce byla podpořena granty MZ ČR NS9935-3a MŠMT 6198959205.LITERATURA1. Belancio P., Deininger P.: Genome Res. 18, 3 (2008).2. Han J.S., Szak S.T., Boeke J.D.: Nature 429, 6989(2004).VLIV OXIDU DUSNATÉHO NA PRODUKCI HEATSHOCK PROTEINŮJANA PITERKOVÁ a , LENKA LUHOVÁ a , MAREKPETŘIVALSKÝ a,* , ZUZANA MATULKOVÁ a aBARBORA MIESLEROVÁ ba Katedra biochemie, b Katedra botaniky, PřF, UniverzitaPalackého, Šlechtitelů 11, 783 71 Olomouc,marek.petrivalsky@upol.czNa rostliny působí řada abiotických a biotickýchstresových faktorů, jako je vysoká a nízká teplota, těžkékovy, UV záření nebo útok patogenů 1,2 . Vystavení těmtostresovým podmínkám vede k tvorbě reaktivních foremkyslíku (ROS) a dusíku (RNS), k nimž patří zejména oxiddusnatý (NO) a peroxid vodíku (H 2 O 2 ) 1 . Teplotní stres spolus dalšími stresy způsobuje denaturaci nebo agregaci proteinůvedoucí až k buněčné smrti. Heat shock proteiny (Hsp),jejichž zvýšená produkce je charakteristická pro teplotněstresované organismy, působí v regulaci membránovéfluidity a homeostáze proteinů a v ochraně před buněčnousmrtí 3 . Prezentovaná práce je zaměřena na stanovení expreseHsp70 proteinů u dvou genotypů Lycopersicon spp. vlivempůsobení teplotního stresu, patogeneze (Oidiumneolycopersici) a kombinace těchto stresových faktorů, dálebyl studován vliv modulátorů koncentrace ROS a RNS. Mezitestované látky modulující koncentraci ROS a RNS patřídonor NO (GSNO), lapač NO (PTIO) a inhibitor NADPHoxidasy (DPI). V rámci dané studie byl porovnán vlivteplotního a chladového stresu na produkci Hsp70 proteinůu dvou genotypů Lycopersicon spp. realizovaný na intaktníchrostlinách a na listových discích. Chladový stres nemělvýrazný vliv na produkci Hsp70 proteinů na rozdíl odteplotního stresu. V případě listových disků byl detekovánnárůst produkce Hsp70 proteinů jako důsledekmechanického poškození rostlinného pletiva. Následujícíexperimenty byly realizovány na listových discíchvystavených teplotnímu stresu v prostředí modulátorůkoncentrace ROS a RNS. Metodou Western blot bylprokázán vliv abiotického stresu, biotického stresu a jejichkombinace a regulační vliv koncentrace ROS a RNS naexpresi Hsp70 proteinů. Během experimentu bylydetegovány dva proteiny Hsp70 rodiny lišící se molekulovouhmotností, a to teplotně-inducibilní protein Hsp72a konstitutivně exprimovaný protein Hsp75. Vlivempatogeneze nebo působením modulátorů koncentrace ROSa RNS docházelo ke zvýšení exprese Hsp75 proteinu. Bylataké nalezena korelace mezi ROS a RNS a expresí Hsp70proteinu.Tato práce vznikla za podpory výzkumného záměru MSM6198959215 a grantu GAČR 522/08/H003.LITERATURA1. Pastori G. M., Foyer C. H.: Plant Physiol. 129, 460(2002).2. Smirnoff N.: Curr. Opin. Biotechnol. 9, 214 (1998).3. Parsell D. A., Lindquist S.: Annu. Rev. Genet. 27, 437(1993).TRANSKRIPČNÍ REGULACE CHAPERONOVÉHOSYSTÉMU HSP70 A HSP90 V NÁDOROVÉ BUŇCEEVA RŮČKOVÁ, PETR MÜLLER a BOŘIVOJVOJTĚSEKMasarykův onkologický ústav, Žlutý kopec 7, 656 53 Brnoruckova@mou.czMolekulární chaperony se podílejí na vytváření správnékonformace polypeptidových řetězců po translaci, zabraňujíjejich agregaci, umožňují proteinům vykonávat biologické379
- Page 1 and 2: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 5 and 6: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 7 and 8: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 9 and 10: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 11 and 12: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 13 and 14: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 15 and 16: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 17: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 21 and 22: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 23 and 24: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 25 and 26: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 27 and 28: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 29 and 30: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 31 and 32: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A
- Page 33: Chem. Listy 104, 361‒393 (2010) A