Mausgenetik - Familie Fensterle im Internet

2. DNA Extraktion, Teil 2
Die Aufreinigung genomischer DNA wird entsprechend dem Qiagen Protokoll fortgeführt,
der RNAse Verdau ist nicht notwendig. Schwanzbiopsien wurden vorgenommen und die
Proben über Nacht in Proteinase K-Puffer verdaut.
� Der Lyseansatz wird aus dem Heizblock genommen und 15 sec. gevortext.
� 400 µl Puffer AL wird zugegeben und gründlich gevortext (AL - Ethanol Puffer
enthält chaotrope Salze, die die Bindung der DNA an die Silika-Matrix ermöglichen)
� ein DNeasy Säulchen wird in ein 2 ml Sammelröhrchen gesteckt, der komplette
Ansatz wird in das Säulchen gegeben und für 1 min bei 8000 rpm in einer Eppendorf
Tischzentrifuge zentrifugiert
� die Säule wird in ein neues Sammelröhrchen gesteckt und die gebundene DNA wird
durch Zugabe von 500 µl AW1 Puffer (entfernt Proteine und andere
Verunreinigungen) und anschließende Zentrifugation bei 8000 rpm für eine Minute
gewaschen
� die Säule wird in ein neues Sammelröhrchen gesteckt und überschüssiges Salz wird
durch Zugabe von 500 µl AW2 entfernt und die Membran gleichzeitig durch 3 min
Zentrifugation bei 8000 rpm getrocknet
� die Säule wird in ein beschriftetes (Gruppennummer, Datum) 1,5 ml Eppendorf Gefäß
überführt, 200 µl AE werden auf die Membran pipettiert und die DNA wird nach
einminütiger Inkubation bei Raumtemperatur durch einminütige Zentrifugation bei
8000 rpm eluiert.
Die anschließende DNA Quantifizierung und PCR Analyse auf den Transgenstatus erfolgt
durch die Betreuer.
Mausgenetik 2006 S. 8