Struktur und biologische Aktivitäten der chitinbindenden Mistellektine

Ergebnisse
Durch die Entfernung störender Begleitkomponenten verkürzen sich außerdem die Spülzeiten
der Chitin-„Beads“-Säule nach dem Auftragen des IEC-Eluats, was zu einer erhöhten cbML-
Ausbeute führt. Weiterhin lässt sich das Affinitätsmaterial mehrfach verwenden (bis zu 15
cbML-Isolierungen aus jeweils 500 g Misteln), während es nach einer, direkt aus dem
Rohextrakt durchgeführten Isolierung der cbMLs, ohne vorheriger Ionenaustauschchromatographie,
aufgrund nicht wieder zu entfernender Verunreinigungen direkt entsorgt
werden muß.
Die weitere Reinigung der noch leicht hellbraunen affinitätsgereinigten und lyophilisierten
chitinbindenden Mistellektine erfolgte über RP HPLC auf einer C4-Säule. Dabei werden oft
auftretende Verunreinigungen durch die Mistellektine vom Typ II RIP und durch die
Viscotoxine endgültig aus der cbML-Fraktion entfernt, da sie unter den eingesetzten
Bedingungen mit höheren Retentionszeiten eluieren (Daten nicht gezeigt). Bei einer TFA-
Konzentration von 0.1% und unter dem in Abschnitt 2.2.4.1 beschriebenen linearen
Acetonitrilgradienten erhielt man drei getrennte Proteinfraktionen (Abb. 4). Die
Hauptfraktion, PIII, wurde nach einer Retentionszeit von ungefähr 22 min eluiert, während
Abb. 4. HPLC-Chromatogramm der cbML-Isoformen, isoliert über Affinitätschromatographie
an Chitin-„Beads“. Es wurden 1 mg in 500 µl 0.1% TFA gelöstes
Proteinlyophilisat aufgetragen. Säule: Parcosil ProRP 300 C4 (5 µm, 160 x 15 mm; Serva,
Heidelberg). Elutionspuffer A: 0.1% TFA in H2O; Elutionspuffer B: 80% CH3CN in A;
Gradient: 20% B für 5 min, dann von 20 auf 35% B in 30 min. Flußrate: 2.0 ml/min.
Detektion: UV bei λ = 214 nm.
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