Isolierung und Charakterisierung des porcinen c-Fos ...

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Im Rahmen dieser Arbeit wurde das porcine c-fos Protoonkogen vor dem Hintergrund seiner
ausreichend dokumentierten Rolle als Transkriptionsfaktor bei Zellwachstums- und
Zelldifferenzierungsprozessen, vor allem auch im Rahmen von Muskelzellhypertrophie,
isoliert und in Form der kompletten Sequenzierung und chromosomalen Lokalisierung
charakterisiert. Weiterhin wurde die genetische Variabilität des Genes bei konstitutionell sehr
unterschiedlichen Schweinerassen auf Sequenzebene untersucht. Für einzelne manifest
gewordene Sequenzpolymorphismen wurden PCR/Restriktionssteme zur Typisierung
größeren Tiermaterials entwickelt.
Die Ergebnisse lassen sich folgendermaßen zusammenfassen:
Das c-fos Protoonkogen wurde mittels einer schweinespezifischen Sonde aus einer Lambda-
FixII-Genbank vom Schwein isoliert, in Plasmidvektoren subkloniert, und in einer
Ausdehnung von insgesamt 4200 bp sequenziert ( EMBL Acc.No.AJ132510 ). Auf der Basis
von Homologievergleichen zu anderen Spezies konnte der charakteristische Aufbau des
Genes mit den 4 Exon- und 3 Intronbereichen sowie den funktionell wichtigen Domänen und
Promotorelementen dokumentiert werden.
Das c-fos Gen kodiert für ein 380 Aminosäuren zählendes Protein mit dem charakteristischen
bZIP-Motiv als funktionell wichtigster Bereich.
Die Homologie zum Menschen beträgt für das gesamte Gen 84,8%, im Bereich der
funktionell wichtigen Domäne der basischen Region und des Leucin-Zippers befinden sich
keine Basenaustausche.
Mit Hilfe eines Schweine-Nager-Zellhybridpanels konnte c-fos auf dem ChromosomSSC
7q12-23 oder q26 lokalisiert werden. Durch Synthenievergleiche mit dem Menschen konnte
der wahrscheinliche Lokalisationsort auf SSC 7q23 begrenzt werden.
Die Suche nach Sequenzunterschieden zwischen konstitutionell unterschiedlichen Rassen
erfolgte mittels spezifisch entwickelter PCR-Systeme zur Amplifikation definierter
Sequenzabschnitte mit anschließender Sequenzierung. So konnten für die Rassen Pietrain und