Ergebnisse und Diskussion 102 Untersuchung und ... - tuprints

Ergebnisse und Diskussion
nachzuweisen. Alle Ansätze wurden erst mit Proteinase K verdaut und dann
eine DHBV-DNA-spezifische PCR durchgeführt.
Abb. 3.4.8 Zerstörung der TLMs beeinflusst weder Bindung noch Internalisierung der
viralen Partikel.
Mit den rekombinanten Viren wurde ein Bindungs- und Internalisierungsassay
durchgeführt. Anschließend wurden die Zellen geerntet, mit Proteinase K
verdaut und eine PCR durchgeführt.
Dieser Assay zeigte, dass ähnliche Mengen Virus-DNA-haltiger Partikel nach
Inokulation mit wt-DHBV oder den Mutanten an die Zellmembran binden (Abb.
3.4.8, Spuren 1 bis 4, oben). Darüber hinaus zeigte eine Analyse der
intrazellulären viralen DNA 3 h nach Beginn des Viruseintritts in die Zellen nur
leichte Unterschiede zwischen wt-Virus und den TLM-Mutanten (Abb. 3.4.8,
Spuren 1 bis 4, unten). DHBV-D1/2 schien etwas weniger aufgenommen zu
werden als das wt-Virus und DHBV-D2; dieser leichte Unterschied würde
jedoch nicht den drastischen Infektiositätsverlust dieser Mutante erklären.
Die Daten weisen darauf hin, dass der Verlust der Infektiosität nach
Inaktivierung der TLMs weder auf eine verminderte Bindung noch auf eine
Beeinträchtigung der sehr frühen Infektionsschritte zurückzuführen ist. Der
Infektiositätsverlust der TLM-defizienten Viren muss damit auf die Inaktivierung
eines Schrittes nach Bindung und Internalisierung zurückzuführen sein.
107