Aminosäureanalyse und N-terminale ... - funnycreature.de

Versuch Nummer G-04 04 BC-Grundpraktikum
Die Rf-Werte geben das Verhältnis der zurückgelegten Strecke von Substanz zur
Laufmittelfront. an. Sie sind neben den Spots angegeben. Ein Rf-Wert von null
bedeutet keine Wanderung, einer von eins, daß die Substanz die gesamte Strecke
mitgelaufen ist.
1. Hydrolyse
N
2. Aminierung
N
N
SO 2 Cl
SO 2 Cl
SO 2 Cl
+ O
H 2
+ NH 3
N
H 2
+ R N
H
O
HCl
HCl
3. Dansylierung einer aminhaltigen Lysin-Seitenkette
O
- 5 -
R'
Peptid mit
Lysin-Seitenkette
Abb. I-4: Nebenreaktionen bei der Dansylierung
II. Aminosäuretrennung
N
N
O
HCl
O
S O
OH
S O
NH 2
N
O
S O
NH
R N
H
O
a) Theoretische Grundlagen
Eine wichtige Methode zu Trennung von Aminosäuren ist die Ionenaustausch-
Chromatographie. Grundlage dieser Methode ist die unterschiedliche Affinität der
unterschiedlich geladenen AS bei verschiedenen pH-Werten. Handelt es sich bspw.
um einen Kationenaustauscher, so werden positiv geladene Teilchen (wie AS) länger
festgehalten als neutrale oder negativ geladene. Als Kriterium berechnet man die
Ladung nach der HENDERSON-HASSELBALCH-Gleichung für Puffersysteme:
[ A ]
lg
[ HA]
−
pH = pK +
Hierbei ist [A-] die Konzentration der Base, [HA] die der Säure. Ein konkretes Beispiel
ist unter e) Seite 7 vorgerechnet.
O
R'