Spinozerebelläre Ataxie Typ 17: Suche nach modifizierenden ...
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3 Ergebnisse<br />
3.1 <strong>Suche</strong> <strong>nach</strong> Sequenzvariationen im TBP-Gen<br />
Auf der <strong>Suche</strong> <strong>nach</strong> Sequenzvariationen wurden Exons 1-8 sowie die Promotorregion im<br />
5’ – nicht-translatierten (untranslated region = UTR) Bereich des TBP-Gens untersucht.<br />
In Familie A wurden DNA-Proben von allen acht Mitgliedern getestet, während in<br />
Familie B nur die drei untersucht wurden, die heterozygot eine CAG-Repeat-Expansion<br />
von 44 aufweisen. Die DNA-Proben wurden exonspezifisch mittels der PCR-Technik<br />
amplifiziert, zur Erfolgskontrolle der PCR-Reaktion auf ein 2% Agarosegel aufgetragen.<br />
Beispielhaft ist in Abbildung 3.1.1 ein Gel mit fluoreszierenden Produkt-Banden <strong>nach</strong> der<br />
PCR dargestellt.<br />
586bp<br />
426bp<br />
410bp<br />
343bp<br />
244bp<br />
100bp<br />
L 8 7 6 5 3 K<br />
Abb. 3.1.1<br />
PCR-Produktbanden der Exons 3,5,6, 7 und 8 des TBP-Gens einer Probe auf 2%<br />
Agarosegel<br />
3,5,6,7 und 8 = Exonnummer, K=Konzentration- und Größenstandard, L=Leerkontrolle<br />
Da<strong>nach</strong> folgte die Sequenzierung der amplifizierten DNA-Proben. Die sequenzierten<br />
Genabschnitte wurden mit der Software SeqScape v2.5 ausgewertet und mit der<br />
Wildtypsequenz aus der elektronischen NCBI Datenbank (GenBank reference sequences<br />
NM_003194.3) verglichen. Um das Auffinden und die Beurteilung von Veränderungen in<br />
der Basenabfolge zu vereinfachen und abzusichern, wurden beide DNA-Stränge eines<br />
PCR-Produktes sequenziert.
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