Gebrauchsfertiger Bond -PrimärantikörperCD10 (56C6)Bestellnr.: PA0270VerwendungszweckDieses Reagenz ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.Der monoklonale Antikörper CD10 (56C6) ist zur qualitativen lichtmikroskopischen Bestimmung von humanen CD10-Molekülen informalinfixiertem, paraffineingebettetem Gewebe durch immunhistochemische Färbung mit dem automatisierten BOND-System(bestehend aus dem <strong>Leica</strong> BOND-MAX-System und dem <strong>Leica</strong> BOND-III-System) vorgesehen.Die klinische Auswertung der An- oder Abwesenheit einer Färbung sollte durch morphologische Untersuchungen und geeigneteKontrollen ergänzt werden und sollte im Zusammenhang mit der Krankengeschichte eines Patienten und anderen diagnostischen Testsvon einem qualifizierten Pathologen vorgenommen werden.Zusammenfassung und ErläuterungImmunhistochemische Methoden können dazu verwendet werden, die Anwesenheit von Antigenen in Geweben und Zellen zudemonstrieren (sehen Sie dazu “Das Arbeiten mit BOND-Reagenzien” in Ihrem BOND-Benutzerhandbuch). Der Primärantikörper CD10(56C6) ist ein gebrauchsfertiges Produkt, das speziell für den Gebrauch mit dem Bond Polymer Refine Detection optimiert wurde.Der Nachweis des humanen CD10-Moleküls erfolgt zuerst durch Bindung von CD10 (56C6) an den Schnitt und die anschließendeDarstellung dieser Bindung mithilfe der im Detektionssystem enthaltenen Reagenzien. Die Verwendung dieser Produkte in Kombinationmit dem automatisierten BOND-system (bestehend aus dem <strong>Leica</strong> BOND-MAX-System und dem <strong>Leica</strong> BOND-III-System) reduziert dieWahrscheinlichkeit von menschlichem Versagen sowie die inhärente Variabilität, die aus der Verdünnung der einzelnen Reagenzien, dermanuellen Pipettierung und der Anwendung der Reagenzien resultieren.Mitgelieferte ReagenzienCD10 (56C6) ist ein monoklonaler Maus-anti-Human Antikörper, der aus Zellkulturüberstand hergestellt wurde, in Tris-gepufferterSalzlösung mit einem Trägerprotein geliefert wird und 0,35 % ProClin 950 als Konservierungsmittel enthält.Gesamtvolumen = 7 ml.Klon56C6ImmunogenProkaryotisches rekombinantes Fusionsprotein, das der externen Domäne des humanen CD10-Glykoproteins entspricht.SpezifitätHumanes CD10-Molekül, auch als häufiges, akut-lymphozytäres Leukämie-Antigen (CALLA) bekannt.Ig-KlasseIgG1GesamtproteinkonzentrationCa.10 mg/ml.AntikörperkonzentrationGrößer oder gleich 1 mg/l, bestimmt mit ELISA.Verdünnung und MischungDer primäre Antikörper CD10 (56C6) weist eine optimale Verdünnung für die Verwendung mit dem BOND-system (bestehend aus dem<strong>Leica</strong> BOND-MAX-System und dem <strong>Leica</strong> BOND-III-System) auf. Rekonstitution, Mischen, Verdünnen oder Titrieren dieses Reagenzesist nicht erforderlich.Erforderliche, Aber Nicht Mitgelieferte MaterialienIn Ihrer BOND-Benutzerdokumentation finden Sie unter “Verwendung von BOND-Reagenzien” eine vollständige Liste der Materialien,die für die Probenvorbereitung und die immunhistochemische Färbung mit dem BOND-system (bestehend aus dem <strong>Leica</strong> BOND-MAX-System und dem <strong>Leica</strong> BOND-III-System) benötigt werden.Lagerung und StabilitätBei 2–8 °C lagern. Nach Ablauf des auf dem Behälteretikett angegebenen Verfallsdatums nicht mehr verwenden.Zeichen, die auf eine Kontamination und/oder Instabilität von CD10 (56C6) hinweisen, sind eine Trübung der Lösung,Geruchsentwicklung, und das Vorhandensein von Präzipitat.Unmittelbar nach Gebrauch wieder bei 2–8 °C aufbewahren.Andere als die oben angegebenen Lagerungsbedingungen müssen vom Anwender selbst getestet werden 1 .Vorsichtsmaßnahmen• Dieses Produkt ist für die In-vitro-Diagnostik bestimmt.• Die Konzentration von ProClin 950 beträgt 0,35 %. Es enthält 2-Methyl-4-isothiazolin-3-on als aktiven Bestandteil und kannReizungen der Haut, Augen, Schleimhäute und oberen Atemwege verursachen. Tragen Sie beim Umgang mit ReagenzienEinweghandschuhe.PA0270Page 11
• Ein Exemplar des Sicherheitsdatenblattes erhalten Sie von Ihrer örtlichen Vertriebsfirma, von der Regionalniederlassung von <strong>Leica</strong><strong>Biosystems</strong> oder über die Webseite von <strong>Leica</strong> <strong>Biosystems</strong> unter www.<strong>Leica</strong><strong>Biosystems</strong>.com• Behandeln Sie Präparate vor und nach der Fixierung sowie sämtliche damit in Berührung kommenden Materialien so, als ob sieInfektionen übertragen könnten und entsorgen Sie sie unter Beachtung der entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen 2 . Pipettieren SieReagenzien niemals mit dem Mund und vermeiden Sie den Kontakt von Haut oder Schleimhäuten mit Reagenzien oder Präparaten.Falls Reagenzien oder Präparate mit empfindlichen Bereichen in Kontakt kommen, spülen Sie diese mit reichlich Wasser. Holen Sieanschließend ärztlichen Rat ein.• Beachten Sie bei der Entsorgung potentiell toxischer Bestandteile die behördlichen und örtlichen Vorschriften.• Mikrobielle Kontaminationen sollten minimiert werden, da es sonst zu einer Zunahme unspezifischer Färbungen kommen kann.• Die Verwendung anderer als die angegebenen Retrievals, Inkubationszeiten oder Temperaturen kann zu fehlerhaften Ergebnissenführen. Diesbezügliche Änderungen müssen vom Anwender selbst getestet werden.GebrauchsanleitungDer primäre Antikörper CD10 (56C6) wurde für die Verwendung in dem automatisierten BOND-system (bestehend aus dem <strong>Leica</strong>BOND-MAX-System und dem <strong>Leica</strong> BOND-III-System) in Kombination mit Bond Polymer Refine Detection entwickelt. Das empfohleneFärbeverfahren für den Primärantikörper CD10 (56C6) ist das IHC Protocol F. Das hitzeinduzierte Epitop-Retrieval wird unterVerwendung der Bond Epitope Retrieval Solution 2 für 20 Minuten empfohlen.Erwartete ErgebnisseNormale GewebeKlon 56C6 entdeckt das CD10-Antigen auf der Oberfläche normaler früher Vorläuferzellen, auf unreifen B-Zellen im Knochenmarkund B-Zellen des Keimzentrums in Lymphgewebe. Außerdem kommt CD10 auch auf verschiedenen nicht-lymphatischen Zellen undGeweben vor, z. B. Myoepithelzellen der Brust, Gallenkanälchen oder Fibroblasten. Eine besonders hohe Expression ist auf demBürstensaum des Epithelgewebes in Niere und Darm zu verzeichnen. (Anzahl der insgesamt untersuchten Normalgewebeproben = 85).TumorgewebeKlon 56C6 führte zu einer Färbung von 26/116 diffusen, großen B-Zell-Lymphomen, 10/15 follikulären Lymphomen, 1/12 chronischlymphozytären Lymphomen, 1/1 akut-lymphoblastischen B-Zell-Lymphom, 2/2 Seminomen, 2/2 Adenokarzinomen des Colons,1/2 Adenokarzinomen des Rektums, 1/2 Nierenzellkarzinomen, 1/1 Plexus-choroideus-Papillom, 1/1 Plattenepithelkarzinom desKehlkopfes, 1/1 Fibromatose der Weichteile, 1/1 nicht-kleinzelligen Lungenkarzinom, 1/1 metastatischen Leberkarzinom und 1/1Dermatofibrosarkom. Bei Morbus Hodgkin (0/27), Mantelzell-Lymphomen (0/7), anaplastischen großzelligen T-Zell-Lymphomen(0/7), angioimmunoblastischen T-Zell-Lymphomen (0/4), T/NK-Zell-Lymphomen (0/3), diffusen T-Zell-Lymphomen (0/2), einem akutlymphoblastischenPrimitiv-B/T-Zell-Lymphom (0/1), einem peripheren T-Zell-Lymphom (0/1), einem T-Zell-Lymphom (0/1), einemRandzonenlymphom (0/1), Ovarialtumoren (0/4), Tumoren von Schilddrüse (0/4), Gebärmutterhals (0/2), Plattenepithelkarzinomen derZunge (0/2), Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus (0/2), infiltrierenden duktalen Karzinomen der Brust (0/2), Adenokarzinomendes Magens (0/2), metastatischen Karzinomen unbekannten Ursprungs (0/2), hepatozellulären Leberkarzinomen (0/2), einemCholangiokarzinom der Leber (0/1), einem anaplastischen Astrozytom des Gehirns (0/1), einem atypischen Thymuskarzinoid (0/1),einem Weichteil-Ganglioneurom (0/1), einem Adenokarzinom der Lunge (0/1), einem Plattenepithelkarzinom der Lunge (0/1), einemgroßzelligen Lungenkarzinom (0/1) bzw. einem Plattenepithelkarzinom der Haut (0/1) wurde keine Färbung nachgewiesen. (Anzahl derinsgesamt untersuchten pathologischen Gewebeproben = 242).CD10 (56C6) wird für die Verwendung im Rahmen eines Antikörper-Panels zum Nachweis von Lymphomen empfohlen.Produktspezifische EinschränkungenCD10 (56C6) wurde von <strong>Leica</strong> <strong>Biosystems</strong> zur Verwendung mit dem Bond Polymer Refine Detection und BOND-Zusatzreagenzienoptimiert. Anwender, die andere als die empfohlenen Testverfahren verwenden, müssen unter diesen Umständen die Verantwortungfür die Auswertung der Patientenergebnisse übernehmen. Die Verfahrenszeiten können aufgrund von Unterschieden in derGewebefixierung und der Wirksamkeit der Antigenverstärkung variieren und müssen empirisch bestimmt werden. Bei der Optimierungder Retrieval-Bedingungen und Verfahrenszeiten sollten negative Reagenzkontrollen verwendet werden.FehlersucheMaßnahmen zur Abhilfe beim Auftreten von Fehlern finden Sie in Referenz 3.vFalls Sie ungewöhnliche Färbeergebnisse beobachten, wenden Sie sich an Ihre örtliche Vertriebsfirma oder an dieRegionalniederlassung von <strong>Leica</strong> <strong>Biosystems</strong>.Weitere <strong>Info</strong>rmationenWeitere <strong>Info</strong>rmationen zur Immunfärbung mit BOND-Reagenzien finden Sie in den Abschnitten Grundlegende Vorgehensweise,Erforderliches Material, Probenvorbereitung, Qualitätskontrolle, Assay-Verifizierung, Deutung der Färbung, Schlüssel der Symbole aufden Etiketten und Allgemeine Einschränkungen in “Das Arbeiten mit BOND-Reagenzien” in Ihrem BOND-Benutzerhandbuch.Bibliografie1. Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988, Final Rule 57 FR 7163 February 28, 1992.2. Villanova PA. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Protection of laboratory workers from infectiousdiseases transmitted by blood and tissue; proposed guideline. 1991; 7(9). Order code M29-P.3. Bancroft JD and Stevens A. Theory and Practice of Histological Techniques. 4th Edition. Churchill Livingstone, New York. 1996.4. Ordi J, Romagosa C, Tavassoli FA et al. CD10 expression in epithelial tissues and tumours of the gynecologic tract: a useful markerin diagnosis of mesonephric, trophoblastic and clear cell tumors. American Journal of Surgical Pathology 2003 27(2), 178–186.5. Kristiansen G, Schluns K, Yongwei Y et al. CD10 expression in non-small cell lung cancer. Annals of Cellular Pathology 2002 24(1),41–46.6. Sumathi V P and McCluggage WG. CD10 is useful in demonstrating endometrial stroma at ectopic sites and in confirming diagnosisof endometriosis. Journal of Clinical Pathology 2002 55, 391–392.7. Dunphy CH, Polsky JM, Lance Evans H et al. Paraffin immunoreactivity of CD10, CDw75 and Bcl-6 in follicle center cell lymphoma.Leukaemia and Lymphoma 2001 41(5–6), 585–592.PA0270Page 12
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