Estudio de los factores mitocondriales y ambientales que - Recercat

• Cálculo de la pérdida en altas frecuencias en ATL
Dado que la pérdida auditiva por ototoxicidad es principalmente en altas frecuencias, se
realizó el mismo procedimiento para el cálculo de la pérdida auditiva pero sólo tomando en
cuenta las frecuencias de 4000 y 8000 Hz.
Se consideró pérdida auditiva significativa a partir de una disminución en el promedio
superior a 10 dB.
• Cálculo de la pérdida auditiva en la AV
Se determinaron los parámetros de la logoaudiometría: UDV (umbral de detección
verbal), UDP (umbral de detección de la palabra) y URV (umbral de recepción verbal) previo al
inicio del tratamiento y al final del mismo. Posteriormente se calculó la pérdida obteniendo la
diferencia entre ambas visitas en estos valores. Se consideró pérdida auditiva significativa a
partir de una disminución en el promedio superior a 5 dB.
• Estudio genético
Método de extracción y análisis del ADN mitocondrial
Extrajimos el ADN mitocondrial de todas las muestras citológicas (recogida celular por
cepillado de la mucosa yugal del paciente), bajo la dirección y supervisión del grupo de
investigación en patología mitocondrial y neuromuscular del Institut de Recerca del Hospital
“Vall d’Hebron”, siguiendo el siguiente protocolo:
• Se coloca la muestra citológica en un tubo de microcentrifugación de 2 ml y se añade
400 µl de PBS a la muestra.
• Se añade a la muestra 20 µl de solución de proteasa QIAGEN y 400 µl de Buffer AL.
• Se incuba a 56ºC durante 10 minutos.
• Se añade a la muestra 400 µl de etanol (96‐100%) y se mezcla.
• Se coloca la mezcla en un tubo de 2 ml y se centrifuga a 6000 x g (8000 rpm) durante 1
minuto.