Inducción de muestras de esputo para el estudio citológico y de ...

Núm. 5 Inducción de muestras de esputo para el estudio citológico (II) 257
Material necesario
1. Capilares de Pasteur
2. Citómetros de Neubauer y cubreobjetos adecuados.
3. Microscopio con objetivos 10, 40 y 100 X.
(Olimpus CHS 213E o similar).
4. Salino tamponado con fosfato (PBS).
5. Pipetas de 2 y 5 ml. Aspirador.
6. Citocentrífuga del tipo Shandon III (Shandon
Scientific, Sewickley. EE.UU.).
7. Copas, portas, papel secante, cubres y otros
fungibles necesarios para el uso de la citocentrífuga.
8. Soluciones I, II y Reveladora del tricrómico
rápido (Diff-Quick, DADE Diagnostika, Unterschleissheim.
Alemania).
9. Resina acrílica (Diatex. Cornwell Corp.
Riverdale. EE.UU.).
10. (Opcional). Contador de células.
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MODELO DE FORMULARIO DE
RECOGIDA DE DATOS
PACIENTE.......................HC............ FECHA............................
HORA RECOGIDA....................REGISTRO A.P........................
INSPECCIÓN:
COLOR incolor blanco amarillo verdoso
CONTAMINACIÓN SALIVAR menor mayor
RECUENTO TOTAL DE CÉLULAS (RTC)
Volumen de esputo a procesar (A)....................................... ..ml
Peso del mismo.................................................................... .mg
Volumen de la suspensión tras filtración (B)....................... .ml
RTC de la suspensión (C).............................................x 103 c/µl
Número absoluto de células recuperadas (D) = B x C.. .x 103 c
RTC por volumen de esputo (D/A)........................... .x 103 c/µl
RECUENTO DIFERENCIAL DE CÉLULAS (RDC)
NEUTRÓFILOS.................................. %
EOSINÓFILOS.................................... %
MACRÓFAGOS................................. %
LINFOCITOS..................................... %
C.EPIT. BRONQUIAL......................... %
C. METACROMÁTICAS…………… %
C. INDETERMINADAS...................... %
Procedimiento por pasos
1. Por medio de un capilar de Pasteur llenar la
cámara del citómetro de Neubauer con la suspensión
filtrada de células. Realizar el recuento total
de células de la suspensión por ml (“C”).
2. Calcular el número absoluto de células recuperadas
(“B”x “C”) y registrarlo (“D”).
3. Obtener el recuento total de células como el
número de células recuperadas por unidad de
volumen de esputo (“D”/“A”).
4. Ajustar la suspensión celular con PBS a una
concentración aproximada de 1.0 x 10 3 celulas/µl.
5. Preparar dos extensiones añadiendo 3 gotas
(75 µl) de la muestra a sendas copas de la citocentrífuga.
Centrifugar a 450 rpm durante 6 minutos.
6. Centrifugar la parte restante de la suspensión
celular a 4000 rpm durante 10 minutos y reservar
el sobrenadante que se almacenará a –80°C.
7. Secar al aire los citocentrifugados, fijar con
metanol y teñir con Diff Quick.
8. Realizar un recuento diferencial de 400 células
no escamosas. Diferenciar las células como neutrófilos,
eosinófilos, macrófagos, linfocitos, células del
epitelio bronquial e indeterminadas. No se consideran
los fragmentos subcelulares. El recuento de células
metacromáticas debe realizarse sobre 1.500 células
no escamosas. Registrar el la hoja de recuento.
9. Hacer un segundo recuento diferencial de
células no escamosas.
Para facilitar la implantación de la técnica
reproducimos un formulario de recogida de los
datos para la fase de inducción de la muestra de
esputo y para la fase de procesado de la misma.
En las figuras 1 y 2 se representan en forma
esquemática ambos procesos.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Gibson PG, Girgis-Gabardo A, Morris MM, Mattoli
S, Kay JM, Dolovich J, et al. Cellular characteristics
of sputum from patients with asthma and
chronic bronchitis. Thorax 1989; 44: 689-692.
2. Pin I, Gibson PG, Kolendowicz R, Girgis-Gabardo
A, Demburg JA, Hargreave FE, et al. Use of
induced sputum cell counts to investigate airway
inflammation in asthma. Thorax 1992; 47: 25-29.
3. Popov T, Gottschalk R, Kolendowicz R, Dolovich
J, Powers P, Hargreave FE. The development of a
cell dispersion method of sputum examination. Clin
Exp Allergy 1994; 24: 778-783.