Inducción de muestras de esputo para el estudio citológico y de ...

Inducción de muestras de esputo para el estudio citológico y de químicos
presentes en la fase fluida (III):
Perspectivas de investigación en la técnica del esputo inducido. El estudio
de muestras mediante citometría de flujo
S. Quirce Gancedo 1 , J. Villarubia 2 , A. Pacheco 3
ESTUDIO DE MUESTRAS DE ESPUTO
INDUCIDO Y MARCADORES
MOLECULARES
Las técnicas inmunohistoquímicas constituyen
un método versátil y adecuado para detectar antígenos
y marcadores celulares que sólo recientemente
se han aplicado al estudio del esputo. Tras
la dispersión del esputo con DTT pueden obtenerse
muestras (“cytospins”) aptas para su procesamiento
y marcaje con técnicas inmunocitoquímicas
que permiten la detección de ciertos antígenos
celulares. Girgis-Gabardo et al 1 han utilizado esta
técnica para detectar la proteína EG-2+ (producto
de conversión de la ECP) en eosinófilos así como
la proteína GM-CSF en macrófagos y eosinófilos
del esputo.
El sobrenadante del esputo puede ser procesado
para medir marcadores moleculares que reflejan
determinados aspectos de la inflamación de las
vías respiratorias 2 , incluyendo reclutamiento y
activación eosinofílica (ECP, MPO, EDN, BPM),
activación de mastocitos (triptasa, histamina), producción
de citocinas (ej. IL-5), y permeabilidad
microvascular (albúmina, fibrinógeno). En la
tabla I se muestran los principales marcadores de
inflamación que pueden medirse en la fase líquida
del esputo 2 . No obstante, el número de marcado-
Rev. Esp. Alergol Inmunol Clín, Octubre 1998 Vol. 13, Núm. 5, pp. 261-265
261
Artículo Especial
1 Servicio de Alergia. Fundación Jiménez Díaz. Madrid. 2 Servicio de Hematología. Hospital Ramón y Cajal. Madrid.
3 Servicio de Neumología. Hospital Ramón y Cajal. Madrid.
res solubles estudiados en el esputo va aumentando
rápidamente, habiéndose ampliado recientemente
a moléculas de adhesión (ICAM-1), RAN-
TES, IgA, y determinación de actividad
quimiotáctica para eosinófilos 3 . Un problema añadido
en la determinación de estos marcadores es
la técnica empleada en el procesamiento del esputo,
bien seleccionando los tapones o grumos
mucosos del esputo o bien procesando toda la
expectoración de esputo y saliva. En este último
caso el inconveniente fundamental es que el esputo
se diluye con la saliva y el factor de esta dilución
es muy difícil de determinar. En un estudio
reciente se ha observado que la concentración de
ECP es 5-6 veces mayor en las porciones seleccionadas
del esputo que en la fracción residual 4 ,
indicando el importante factor diluyente de la saliva.
También se ha descrito que los niveles de ECP
y otros marcadores de la inflamación son considerablemente
mayores en el esputo que en el fluido
del LBA 5 .
Las concentraciones de ECP, triptasa, fibrinógeno
y albúmina son mayores en el esputo de
pacientes asmáticos que en controles sanos y las
determinaciones de las mismas son reproducibles
2 . Como era previsible, se ha encontrado una
buena correlación entre la ECP y la triptasa con el
recuento diferencial de eosinófilos y células meta-
Miembros del Comité de Estudio del Asma SEAIC: Dr. Miguel Hinojosa Macías (Coordinador), Dr. José Mª. Olaguibel Rivera
(Coordinador), Dra. Pilar Barranco Sanz, Dra. Teresa Carrillo Díaz, Dr. Carlos Colás Sanz, Dra. Valentina Gutiérrez Vall de Cabres,
Dr. Belen de la Hoz Caballer, Dr. Marcel Ibero Iborra, Dr. Santiago Quirce Gancedo, Dra. Mª Ángeles Rico Díaz, Dr. Carlos Senent
Sánchez (Secretario), Dr. José Mª Vega Chicote.