Genscreen™ ULTRA HIV Ag-Ab - BIO-RAD

Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab
1 placa - 96 tests 72386
5 placas - 480 tests 72388
ESTUCHE DE DETECCIÓN SISTEMÁTICA DEL ANTÍGENO VIH P24
Y DE LOS ANTICUERPOS CONTRA LOS VIH-1 Y VIH-2
EN SUERO/PLASMA HUMANO POR INMUNOANÁLISIS ENZIMÁTICO
IVD
Control de calidad del fabricante
Todos los reactivos fabricados y comercializados lo son bajo un sistema de calidad
completo que se inicia en la recepción de las materias primas y se termina en la
comercialización del producto.
Cada parte se ve sometida a un control de calidad y sólo sale al mercado cuando está
conforme a los criterios de aceptación.
Los registros relacionados con la producción y el control de cada parte individual
permanecen en nuestra empresa.

ÍNDICE
1. USO PROPUESTO
2. VALOR CLÍNICO
3. PRINCIPIO DEL TEST
4. CONTENIDO DEL ESTUCHE
5. PRECAUCIONES
6. INSTRUCCIONES SOBRE SALUD Y SEGURIDAD
7. MATERIAL NECESARIO, PERO NO INCLUIDO
8. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
9. CONDICIONES DE CONSERVACIÓN - PERÍODO DE VALIDEZ
10. OBTENCIÓN Y MANIPULACIÓN DE MUESTRAS
11. PROCEDIMIENTO DEL TEST
12. ADAPTACIONES DEL SISTEMA
13. CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
14. VERIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE LA MUESTRA
Y PIPETEADO DE LOS REACTIVOS
15. RESULTADOS
16. LÍMITES DEL TEST
17. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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1. USO PROPUESTO
El test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab es un estuche de inmunoanálisis enzimático cualitativo para
la detección del antígeno VIH p24 y anticuerpos relacionados con el virus de la immunodeficiencia
humana VIH-1 (grupos M y O) y el VIH-2 en el suero o el plasma humanos. El estuche se puede usar
tanto para la detección sistemática de antígenos como de anticuerpos relacionados con el VIH.
2. VALOR CLÍNICO
El síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es una enfermedad infecciosa inducida por un
virus y caracterizada por una inmunidad fuertemente deprimida.
Se han aislado dos tipos de virus relacionados con el grupo Lentivirus en los linfocitos de pacientes
que sufren de SIDA o de sus prolegómenos. El primero, denominado VIH-1, fue aislado en Francia
y, luego, en los Estados Unidos. El segundo, denominado VIH-2, fue aislado en dos pacientes que
vivían en África y ha demostrado ser el responsable de un nuevo foco de SIDA en el África
occidental.
El conocimiento sobre la variabilidad genética de las cepas de virus VIH se adquirió mediante la
secuenciación de los genes GAG, POL y ENV de las cepas representativas de cada subtipo. Los
virus VIH-1 se dividen en 2 grupos : el grupo M, que incluye 9 subtipos (de A a I) y el grupo O. El
virus VIH-2 incluye 5 subtipos. La distribución geográfica de los diferentes subtipos está ya bastante
bien definida. Algunas variantes del VIH-1 sólo tienen un 70 % de homología por los genes GAG y
POL en las principales cepas clínicas y sólo un 50% por el gen ENV; estas diferencias pueden
explicar el fracaso del diagnóstico de la infección en algunos pacientes.
Las diversas cepas clínicas del VIH-2 comparten antígenos comunes con el virus VIS de los simios
en todas las proteínas (proteínas de envoltura y proteínas del centro vírico : heterología = el 30%),
pero exhiben menos del 40% de homología con las proteínas de envoltura del VIH-1.
Los antígenos y los anticuerpos relacionados con el VIH aparecen y son detectables en las diferentes
etapas de la seroconversión y de la infección. El Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab permite la
detección simultánea de anticuerpos y antígenos anti-VIH-1 (grupos M y O) y anti-VIH-2 (véase
también el apartado 16 : LÍMITES DEL TEST).
3. PRINCIPIO DEL TEST
El test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab es un inmunoanálisis enzimático basado en el principio de la
técnica de intercalado para la detección del antígeno del VIH y de varios anticuerpos asociados con
el VIH-1 y el VIH-2 en el suero o el plasma humanos.
La fase sólida está recubierta de :
• anticuerpos monoclonales contra el antígeno VIH-1 p24.
• antígenos purificados : proteína biotecnológica gp160, un péptido sintético, totalmente artificial, que
imita a un epítopo específico del VIH-1 del grupo O (es decir, un virus codificado, pero inexistente) y
un péptido que imita el epítopo inmunodominante de la proteína de envoltura del VIH-2.
Los conjugados se basan en el uso de :
• anticuerpos policlonales biotinilados contra el Ag VIH (conjugado 1).
• Estreptavidina y antígenos VIH – conjugado de peroxidasa (péptidos gp41 y gp36, que imitan los
epítopos inmunodominantes de las glucoproteínas de envoltura del VIH-1 y del VIH-2, y el mismo
péptido sintético, totalmente artificial, que imita el epítopo del VIH-1 del grupo O específico usado
para la fase sólida) (2 conjugados).
El procedimiento del ensayo incluye los siguientes pasos de la reacción :
1. El conjugado 1 (anticuerpo policlonal biotinilado contra el Ag VIH-1 p24) se añade en los pocillos
de la microplaca.
2. Las muestras de suero que se han de analizar y los controles se pipetean en los pocillos.
• Los anticuerpos del VIH, si están presentes, se ligan con el anticuerpo monoclonal fijado a la fase
sólida y al conjugado 1.
• Los anticuerpos de los VIH-1 y VIH-2, si están presentes, se ligan a los antígenos inmovilizados
en la fase sólida.
• La deposición del conjugado 1 y de la muestra se valida mediante un cambio en el color, desde
amarillo verdoso a azul.
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3. Tras la incubación a 37°C y el lavado, se añade el conjugado 2 :
• La estreptavidina reacciona con los complejos biotinilados Ab-Ag-Ab.
• La peroxidasa marcada, los antígenos VIH-1 y VIH-2 purificados se fijan a su vez a los
anticuerpos IgG, IgM o IgA capturados en la fase sólida.
4. Después de la incubación a 18 - 30°C, la fracción libre del conjugado 2 se elimina mediante
lavado. Tras la incubación, en presencia del sustrato a temperatura ambiente (18 - 30°C), se
muestra la presencia del complejo conjugado por un cambio de color.
5. Se detiene la reacción y se leen las absorbencias por medio de un espectrofotómetro a 450/620-
700 nm.
La absorbencia obtenida en una muestra determina la presencia o la ausencia de Ag VIH o de
anticuerpos contra el VIH-1 o el VIH-2.
4. CONTENIDO DEL ESTUCHE
Todos los reactivos son exclusivamente para uso diagnóstico in vitro.
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ETIQUETA NATURALEZA DE LOS REACTIVOS PRESENTACIÓN
72386 72388
R1 Microplaca 12 tiras de 8 pocillos recubiertas 1 placa 5 placas
con anticuerpos monoclonales contra p24 VIH-1 (ratón)
y antígenos purificados VIH-1 y VIH-2
R2 Solución de lavado concentrada (20X) 1 frasco 1frasco
Tampón Tris-NaCl pH 7,4 (70 ml) (235 ml)
Conservante : ProClin 300 0,04%
R3 Control negativo 1 frasco 1 frasco
Plasma humano inactivado al calor negativo frente (2,5 ml) (2.5 ml)
al antígeno HBs, al antígeno VIH, a los anticuerpos
anti-VIH-1, anti-VIH-2 y anti-VHC
Conservante : Azida sódica < 0,1 %
R4 Control positivo Ab VIH 1 frasco 1 frasco
plasma humano inactivado al calor positivo frente al (1 ml) (1 ml)
antígeno HBs, al antígeno VIH, a los anticuerpos anti-VIH-1,
anti-VIH-2 y anti-VHC, en diluyente sintético
Conservante : ProClin 300 < 0.1%
R5 Control positivo Ag VIH 1 frasco 1 frasco
Diluyente sintético que contiene antígeno VIH-1 purificado (1 ml) (1 ml)
inactivado en presencia de un agente disociante.
Conservante : ProClin 300 < 0,1 %
R6 Conjugado 1 1 frasco 2 frascos
Anticuerpos policlonales biotinilados frente al p24 VIH 1 (10 ml) (2 x 10 ml)
(carnero) Coloración amarilloverdosa
Conservante : ProClin 300 0,5 %
R7a Conjugado 2 1 frasco 2 frascos
Peroxidasa liofilizada etiquetada estreptavidina csp csp
y antígenos purificados VIH 1 y VIH 2 (12,5 ml) (2 x 30 ml)
R7b Diluyente del conjugado 2 1 frasco 2 frascos
Solución de leche desnatada coloreada de rojo (12.5 ml) (2 x 30 ml)
Conservante : ProClin 300 0,5 %
R8 Tampón sustrato de peroxidasa 1 frasco 2 frascos
Citrato sódico y solución de acetato de sodio pH 4,0 (60 ml) (2 x 60 ml)
que contiene H2O2 (0,015 %) y DMSO (4 %)
R9 Cromógeno 1 frasco 2 frascos
Solución que contiene tetrametil benzidina (TMB) (5 ml) (2 x 5 ml)
R10 Solución de detención 1 frasco 3 frascos
Solución de ácido sulfúrico 1N (28 ml) (3 x 28 ml)

5. PRECAUCIONES
La fiabilidad de los resultados depende de la correcta puesta en práctica de las siguientes «Buenas
prácticas de laboratorio»:
El nombre del test, así como su número de identificación específico se indican en la caja de cada
microplaca. Este número de identificación específico figura igualmente en cada tira.
Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab : Número específico de identificación = 53
Esta identificación se tiene que verificar antes de cada uso. Las tiras que no tengan el número de
test o que sea diferente al del test realizado, no se deben utilizar.
• No se utilizarán reactivos caducados.
• No se mezclarán los reactivos de lotes diferentes dentro de un test.
OBSERVACIÓN : Para la solución de lavado (R2, identificación en la etiqueta : 20X color verde),
tampón sustrato de peroxidasa (R8, etiqueta de identificación : tampón TMB buf., color azul),
chromogen (R9, etiqueta la identificación : TMB 11X color púrpura) y la solución de detención (R10,
etiqueta de identificación : 1N color rojo), es posible usar otros lotes distintos de los del estuche, a
condición de que dentro de un mismo test se use el mismo lote. Estos reactivos se pueden usar con
otros productos Bio-Rad. Además, la solución de lavado (R2, identificación en la etiqueta : 20X color
verde) se puede mezclar con las otras 2 soluciones de lavado incluidas en los distintos kits de
reactivos de Bio-Rad (R2, identificaciones en la etiqueta: 10X color azul o 10X color naranja) cuando
se reconstituyen debidamente, siempre que se use sólo una mezcla en cada tanda de pruebas.
Póngase en contacto con nuestro servicio técnico para una información detallada.
• Antes del uso, es necesario esperar 30 minutos para que los reactivos se estabilicen a temperatura
ambiente.
• Se reconstituyen con cuidado los reactivos, evitando cualquier contaminación.
• No se lleva a cabo el test en presencia de vapores reactivos (vapores ácidos, alcalinos, de
aldehído) o de polvo, que podrían cambiar la actividad enzimática de los conjugados.
• Se lavará a fondo todo el material de vidrio con agua desionizada y se secará o, de manera
preferente, se usará material desechable.
• No se permitirá que seque la microplaca entre el final de la operación de lavado y la distribución
del reactivo.
• El tiempo de espera entre la distribución del conjugado 1 y las muestras no tiene que exceder los
10 minutos.
• La reacción enzimática es muy sensible a los iones metálicos. Por consiguiente, no permita que
ningún elemento metálico entre en contacto con las diversas soluciones conjugadas o sustratos.
• La solución de desarrollo (tampón sustrato + chromogen) debe ser de color rosado. La
modificación de este color rosado a los pocos minutos de la reconstitución indica que el reactivo
no se puede usar y se debe sustituir. La preparación de la solución de desarrollo se puede hacer
en una batea desechable de plástico o en un recipiente de cristal previamente lavado con 1N ClH,
aclarado a fondo con agua destilada y secado. Este reactivo se debe conservar en la oscuridad.
• Use un nuevo puntero de distribución para cada muestra.
• Un lavado a fondo es un paso crítico en este procedimiento : respete el número recomendado de
ciclos de lavado y asegúrese de que todos los pocillos están completamente llenos y luego
completamente vacíos. El lavado incorrecto puede dar lugar a resultados inexactos.
• No use nunca el mismo recipiente para distribuir el conjugado y la solución de desarrollo.
• Compruebe las pipetas y el resto del material para la exactitud y la corrección de la operación.
• No altere el procedimiento del test.
6. INSTRUCCIONES SOBRE SALUD Y SEGURIDAD
• Todos los reactivos incluidos en el estuche están destinados para “uso diagnóstico in vitro” y para
uso profesional.
• Esta prueba la tiene que hacer sólo gente qualificada y con costumbre de trabajar en laboratorios con
riesgos potenciales. La gente tiene que llevar unas protecciones correctas inclusive una bata, unas
gafas y guantes desechables (se recomienda usar guantes sintéticos que no sean de latex). y
manipular tanto los reactivos como las muestras de los pacientes respectando las prácticas correctas
de laboratorio. La gente tiene que lavarse las manos justo despúes de llevar a cabo la prueba.
• No se pipeteará con la boca.
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• El material de origen humano usado en la preparación del control negativo (R3) ha sido probado y
encontrado no reactivo para el antígeno de superficie de la hepatitis B (Ag HBs), el antígeno VIH,
los anticuerpos contra la hepatitis C y los anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH-1 y VIH-2).
• El material de origen humano usado en la preparación del control positivo (R4) de los anticuerpos
VIH-1 ha sido probado y encontrado no reactivo para el antígeno de superficie de la hepatitis B
(Ag HBs) y los anticuerpos contra la hepatitis C.
• El control positivo (R5) del Ag VIH ha sido inactivado con un agente caotrópico.
• Dado que ningún test conocido puede ofrecer una seguridad absoluta de la ausencia de agentes
infecciosos, la manipulación de reactivos y muestras de pacientes se deberá llevar a cabo como
si pudiesen transmitir una enfermedad infecciosa.
• Cualquier material directamente en contacto con muestras y reactivos, así como las soluciones de
lavado, se deberán considerar como productos contaminados y se tratarán como tales.
• Se evitará derramar muestras o soluciones que contengan muestras.
• El material vertido se aclarará con lejía diluida al 10%. Si el fluido contaminante es un ácido, se
deberá primeramente neutralizar con bicarbonato de sodio y luego secar con papel secante.
El material usado para la limpieza será desechado en un contenedor de residuos contaminados.
• Las muestras y los reactivos de origen humano, así como el material y los productos
contaminados, se desecharán después de la descontaminación :
- Bien por inmersión en lejía a una concentración final del 5 % de hipocloruro de sodio (1 volumen
de lejía para 10 volúmenes de fluido contaminado o agua) durante 30 minutos.
- o por autoclave a 121°C durante un mínimo de 2 horas. El autoclave es el mejor método para
inactivar el VIH y los virus VHB.
- NO INTRODUZCA EN EL AUTOCLAVE SOLUCIONES QUE CONTENGAN HIPOCLORURO DE SODIO.
• No olvide neutralizar o introducir en el autoclave las soluciones o desechos de lavado o cualquier
fluido que contenga muestras biológicas antes de desecharlos en el fregadero.
• Algunos reactivos contienen ProClin 300 (0,04%, 0,1% y/o 0,5%).
Xi : Irritante
R43 : puede causar una sensibilización al contacto con la piel.
S28-37 : Si se produce un contacto con la piel, lávese de inmediato con agua y
jabónabundantes. Utilice guantes adecuados.
• La Hoja de Datos de Seguridad está disponible mediante solicitud.
• Los productos químicos se manipularán y eliminarán conforme a las «Buenas prácticas de laboratorio».
• Evite cualquier contacto del tampón sustrato, el chromogen y la solución de detención con la piel
y las mucosas (peligro de toxicidad, irritación o quemadura).
• Algunos reactivos contienen azida de sodio como conservante. La azida de sodio puede
reaccionar con las tuberías del laboratorio para formar azidas de cobre o plomo. Tales azidas son
explosivas. Para prevenir la acumulación de azida, deje correr una gran cantidad de agua si las
soluciones que contienen azida se eliminan por el fregadero después de su inactivación.
7. MATERIAL NECESARIO, PERO NO INCLUIDO
• Agua destilada.
• Hipocloruro de sodio (lejía casera) y bicarbonato de sodio.
• Pipetas o multipipetas automáticas o semiautomáticas, ajustables o predeterminadas para medir
y distribuir 25 μl, 75 μl, 80 μl y 100 μl.
• Matraces graduados de una capacidad de 25 ml, 100 ml y 1000 ml.
• Contenedor para deshechos peligrosos desde el punto de vista biológico.
• Baño de agua o incubadora equivalente de microplaca, fijado termostáticamente a 37°C ± 1°C (*).
• Lavador de microplaca semiautomático o automático (*).
• Lector de microplaca equipado con filtros de 450 nm, 490 nm y 620-700 nm (*).
• Papel secante.
(*) Para una información detallada sobre el equipamento recomendado, consulte con nuestro
departamento técnico.
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8. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
NOTA : permita que los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos (18 - 30°C).
1) Reactivos listos para su uso
Reactivo 1 (R1) : Microplaca
Cada soporte marco que contiene 12 tiras está incluido en una bolsa aluminio sellada. Abrir la bolsa
con unas tijeras o un escalpelo de 0,5 a 1 cm por encima del la soldadura. Sacar el marco y volver
a introducir inmediatamente en la bolsa las tiras no utilizadas. Cerrar la bolsa cuidadosamente y
volver a guardarla a +2-8°C.
Reactivo 3 (R3) : Control negativo
Reactivo 4 (R4) : Control positivo Ab VIH
Reactivo 5 (R5) : Control positivo Ag VIH
Reactivo 6 (R6) : Conjugado 1
Reactivo 10 (R10) : Solución de detención
2) Reactivo para reconstituir
Solución de lavado (concentrado 20X) : Reactivo 2 (R2)
Diluya al 1:20 en agua destilada para obtener una solución de lavado lista para su uso. Prepare
800 ml para una placa de 12 tiras.
Solución de trabajo del conjugado 2 : Reactivo 7a (R7a) + Reactivo 7b (R7b)
Agite con suma delicadeza el vial del conjugado liofilizado 2 (R7a) sobre la mesa de trabajo para
eliminar cualquier sustancia del tapón de caucho. Con cuidado quite el tapón y vierta el contenido
del vial diluyente del conjugado (R7b) en el vial de conjugado liofilizado (R7a). Ponga de nuevo el
tapón y deje que se asiente durante 10 minutos, mientras que, con cuidado, lo agita y lo invierte de
vez en cuando para facilitar la disolución.
Solución de desarrollo enzimático : Reactivo 8 (R8) + Reactivo 9 (R9)
Diluya al 1:11 el chromogen (R9) en el tampón sustrato (R8) (ejemplo : 1 ml de reactivo R9 + 10 ml
de reactivo R8). La estabilidad dura 6 horas en la oscuridad una vez preparada.
9. CONDICIONES DE CONSERVACIÓN – PERIODO DE VALIDEZ
El estuche se debe conservar a + 2-8°C. Cuando se conserva a esta temperatura, cada reactivo
incluido en el Genscreen ULTRA HIV Ag-Ab se puede usar hasta la fecha de caducidad
mencionada en el envase (excepto en el caso de instrucciones específicas).
R1 : Una vez abierta la bolsa sellada al vacío, las tiras de micropocillos almacenadas a +2-8°C en la
bolsa cuidadosamente sellada se pueden usar durante 1 mes.
R2 : La solución de lavado diluida se puede conservar a temperatura ambiente (2-30°C) durante
2 semanas.
La solución de lavado concentrada (R2) se puede conservar a +2- 30°C.
R7a + b : R7a + b : Los reactivos almacenados a +2-8°C se pueden usar durante 4 semanas después
de la reconstitución de los viales. El conjugado congelado reconstituido (R7 a+b) se puede usar
hasta la fecha de caducidad que se indica en el kit y se puede congelar y descongelar 11 veces.
R8 + R9 : Después de su reconstitución, el reactivo almacenado en la oscuridad se puede usar
durante 6 horas a temperatura ambiente (18-30°C).
10. OBTENCIÓN Y MANIPULACIÓN DE MUESTRAS
Obtenga una muestra de sangre según las prácticas habituales. El test se debería llevar a cabo en
suero no diluido o en plasma (obtenido con EDTA, heparina, citrato, anticoagulantes a base de ACD).
Separe cuanto antes el suero o el plasma del coágulo o de los hematíes para evitar cualquier
hemólisis. Una hemólisis importante puede afectar el resultado del test. Las muestras con partículas
observables se deben clarificar mediante centrifugado antes del test. Las partículas o los agregados
de fibrina en suspensión pueden dar resultados falsamente positivos.
No caliente las muestras.
Las muestras pueden conservarse a + 2-8°C si la detección sistemática se lleva a cabo dentro de
un plazo de 7 días o se pueden congelar a - 20°C durante varios meses. El plasma se debe
descongelar rápidamente calentándolo durante unos minutos en un baño de agua a 40°C (para evitar
la precipitación de fibrina). No repita más de 3 ciclos de congelado/descongelado. Si las muestras
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se deben transportar, es necesario embalarlas conforme a las regulaciones en vigor en lo relativo al
transporte de agentes etiológicos.
NO USE SUERO O PLASMA CONTAMINADO, HIPERLIPIDÉMICO O HIPERHEMOLIZADO.
OBSERVACIÓN : Las muestras que contengan hasta 90 g/l de albúmina, 200 mg/l de bilirrubina,
50 μg/l de biotina; las muestras lipidémicas que contengan hasta el equivalente de 36 g/l de
triglicéridos y las muestras hemolizadas que contengan hasta 10 g/l de hemoglobina no afectan los
resultados.
11. PROCEDIMIENTO DEL TEST
Siga estrictamente el procedimiento propuesto.
Use los controles negativos (R3), VIH-1 Ab positivo (R4) y Ag VIH positivo (R5) para cada serie de
determinaciones para validar los resultados del test.
Siga las siguientes «Buenas prácticas de laboratorio»:
1. Establezca con cuidado la distribución de las muestras y el plan de identificación.
2. Prepare la solución de lavado diluida (siga el apartado 8).
3. Prepare la solución de trabajo del conjugado 2 (siga el apartado 8).
4. Saque la bandeja y las tiras (R1) de la bolsa protectora.
5. Aplique directamente, sin lavado previo de la placa y de forma sucesiva (distribución sugerida de
la placa) :
5.1 25 μl de conjugado 1 (R6) en cada pocillo
5.2 75 μl de control positivo Ag VIH (R5) en el pocillo A1
75 μl de control positivo Ab VIH (R4) en el pocillo B1,
75 μl de control negativo (R3) en los pocillos C1, D1 y E1
75 μl de muestra 1 en el pocillo F1
75 μl de muestra 2 en el pocillo G1, etc....
Homogeneice la mezcla mediante un mínimo de 3 aspiraciones con una pipeta de 75 μl agitando la
microplaca después del paso del pipeteado.
En función del sistema utilizado, se puede modificar la posición o el orden de distribución de los
controles.
N.B.: La distribución de la muestra del conjugado 1 se puede controlar visualmente en este paso
de la manipulación : después de añadir la muestra, el conjugado 1 se vuelve de un color entre
amarillo verdoso y azul (véase la el apartado 14 para la verificación automática : VERIFICACIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA DE LA MUESTRA Y PIPETEADO DE LOS REACTIVOS).
6. Siempre que sea posible, cubra la microplaca con película adhesiva. Apriete firmemente por todas
partes de la placa para asegurar un buen precintado.
7. Incube la microplaca en un baño de agua controlado por termostato o incubadora de microplaca
a 37°C ± 1°C durante 1 hora ± 4 minutos.
8. Quite la película adhesiva. Aspire el contenido de todos los pocillos en un contenedor para
productos biológicamente peligrosos (que contenga hipocloruro de sodio). Agregue en cada
pocillo un mínimo de 0,370 ml de solución de lavado. Deje que empape al menos 30 segundos.
Aspire de nuevo. Repita este procedimiento un mínimo de dos veces (en total, un mínimo de tres
lavados). El volumen residual debe ser inferior a 10 μl (si es preciso, seque la placa agitándola de
arriba abajo en papel secante). Si se usa un lavador automático, siga el mismo procedimiento
(véase el apartado 12 : ADAPTACIONES DEL SISTEMA).
9. Distribuya rápidamente 100 μl de la solución del conjugado 2 (R7a + R7b) en todos los pocillos.
El conjugado se debe agitar antes de su uso.
N.B.: La distribución del conjugado 2, que es de color rojo, se puede controlar visualmente en este
paso de la manipulación. (Véase el apartado 14 para la verificación automática : VERIFICACIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA DE LA MUESTRA Y PIPETEADO DE LOS REACTIVOS)
10.Siempre que sea posible, cubra la placa con una nueva película adhesiva e incube durante
30 minutos ± 4 minutos a temperatura ambiente (18 - 30°C).
11.Quite la película adhesiva, vacíe todos los pocillos por aspiración y lave un mínimo de 5 veces
como se ha descrito más arriba. El volumen residual debe ser inferior a 10 μl (si es necesario,
seque las tiras agitándolas de arriba abajo sobre papel secante).
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12.Distribuya rápidamente en cada pocillo 80 μl de la solución sustrato (R8 + R9) recién preparada
antes de su uso. Permita que la reacción se desarrolle en la oscuridad durante 30 ± 4 minutos a
temperatura ambiente (18 - 30°C). No use la película adhesiva durante esta incubación.
N.B.: La distribución de la solución de desarrollo, que es de color rosado, se puede controlar
visualmente en este paso de la manipulación : hay una clara diferencia de coloración entre el
pocillo vacío y el que contiene la solución de sustrato rosada. (Véase el apartado 14 para la
verificación automática : VERIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE LA MUESTRA Y
PIPETEADO DE LOS REACTIVOS)
13.Agregue 100 μl de la solución de detención (R10) usando la misma secuencia y tasa de
distribución en que en la solución sustrato.
N.B.: la distribución de la solución de detención, que no es coloreada, se puede controlar
visualmente en este paso de la manipulación. Después de la adición de la solución de detención
la coloración rosada del sustrato desaparece (en las muestras negativas) o se vuelve de un color
entre azul y amarillo (para las muestras positivas).
14.Limpie con cuidado el fondo de la placa. Al menos 2 minutos después de la adición de la solución de
detención y antes de que pasen 30 minutos tras la detención de la reacción, lea la densidad óptica (DO)
a 450/620-700 nm utilizando un lector de placa antes de que pasen 30 minutos tras la detención
de la reacción (las tiras siempre se deben mantener lejos de la luz antes de la lectura).
15.Compruebe la similitud entre las lecturas espectrofotométricas y visuales frente a la distribución
de la placa y de las muestras y los planes de identificación.
12. ADAPTACIÓN DEL SISTEMA
LAVADO : Siga cuidadosamente los procedimientos de lavado descritos para obtener el mejor
resultado del test.
13. CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
La presencia o la ausencia de antígenos detectables contra el VIH o anticuerpos contra el VIH-1 o el
VIH-2 se determinan comparando la absorbencia medida de cada muestra con respecto al valor
discriminatorio preestablecido.
1) Cálculo de la absorbencia media del control negativo (DOR3) [DO = densidad óptica]
DO (C1) + DO (D1) + DO (E1)
DO R3 =
3
2) Cálculo del valor discriminatorio (VD)
El valor discriminatorio se obtiene con la fórmula siguiente :
VS = DO R3 + 0.200
3) Validación del test
La absorbencia de cada control negativo (R3) debería ser inferior a 0,170 : DO R3 < 0,170.
Si un control negativo no respeta esta norma, deséchelo y calcule de nuevo la media utilizando los
dos valores restantes. Sólo se puede eliminar un valor de esta manera.
La media de la absorbencia de los controles negativos (R3) debería ser inferior a 0,150 : DO R3 < 0,150.
La absorbencia del control positivo de Ab VIH (R4) debería ser superior a 0,9 : DO R4 > 0,9.
La absorbencia de Ag VIH el control positivo (R5) debería ser superior a 0,9 : DO R5 > 0,9.
4) Interpretación de los resultados
Las muestras con valores de absorbencia inferiores al valor discriminatorio se consideran negativas
con el test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab.
No obstante, los resultados justo inferiores al valor discriminatorio (C.O - 10 % < DO < C.O) se
deberían interpretar con precaución (es aconsejable repetir el test en las muestras correspondientes
cuando los sistemas y procedimientos del laboratorio lo permitan).
Las muestras con valores de absorbencia iguales o superiores al valor discriminatorio se consideran
inicialmente positivas con el test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab. Se debería repetir el test antes de
la interpretación final.
Si después del nuevo test de una muestra, los valores de absorbencia de los 2 duplicados son
menores que el valor discriminatorio, el resultado inicial no es repetible y la muestra se considera
negativa con el test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab.
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Las reacciones no repetibles a menudo se deben a :
• lavado inadecuado de la microplaca;
• contaminación de muestras negativas por suero o plasma con un elevado contenido de anticuerpos;
• contaminación de la solución sustrato con agentes oxidantes (lejía, iones metálicos, etc...);
• contaminación de la solución de detención.
Si después de un nuevo test la absorbencia de uno de los duplicados es igual o mayor que el valor
discriminatorio, el resultado inicial es repetible y la muestra se considera positiva con el test
Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab, sujeta a las limitaciones del procedimiento descrito más abajo.
14. VERIFICACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE LA MUESTRA Y PIPETEADO
DE LOS REACTIVOS
Verificación por pipeteado de la muestra y del conjugado 1
Después de la distribución del conjugado 1 (R6) y de las muestras, es posible verificar la presencia
simultánea del conjugado 1 y de las muestras que se han de someter al test en pocillos mediante
una lectura espectrofotométrica a 620 nm : la densidad óptica de un pocillo que contiene el
conjugado 1 y la muestra es superior a 0,600 (una DO inferior indica una pobre distribución del
conjugado 1 o de la muestra).
Verificación por pipeteado de la muestra y del conjugado 2
Después de la distribución del conjugado (R7a + R7b) es posible verificar su presencia mediante una
lectura espectrofotométrica a 450 / 620 nm : la densidad óptica de un pocillo que contiene el
conjugado 2 es superior a 0,100 (una DO inferior indica una pobre distribución del conjugado 2).
Verificación por pipeteado de la solución de desarrollo
Es posible verificar la presencia de una solución de desarrollo rosada en el pocillo mediante una
lectura automática a 490 nm : un pocillo con la solución de desarrollo debe tener una densidad
óptica superior a 0,100 (una DO inferior indica una pobre distribución de la solución de desarrollo).
15. RESULTADOS
Los resultados del test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab han sido determinados mediante tests de
muestras sanguíneas de donantes al azar, de pacientes con infección por VIH y de paneles
comerciales de seroconversión. Además, el límite de sensibilidad del Ag VIH ha sido probado por
medio del estándar francés AFSSAPS.
Otros pacientes con enfermedades no relacionadas con la infección por el VIH también fueron
sometidos al test.
Especificidad
La especificidad ha sido evaluada sometiendo al test a :
1. 6038 donantes de sangre tomados al azar en 3 sitios diferentes. La especificidad de los donantes
de la sangre arbitrarios fue del 99,95% (6035 muestras negativas / 6038 muestras sometidas a
test) con 3 muestras reactivas repetidas que dieron negativo al VIH la segunda vez mediante
inmunotransferencia y test del Ag p24 VIH.
2. 409 muestras clínicas en 2 laboratorios clínicos hospitalarios, 14 muestras fueron inicialmente
reactivas y 12 de ellas fueron asimismo reactivas una segunda vez (positiva en un segundo test) :
11 fueron confirmadas por inmunotransferencia VIH, 1 no fue confirmada y se consideró como
falso positivo. La especificidad de esta población es del 99,75% (397/398).
3. 313 pacientes con distintas patologías o un estado no vinculado con el VIH (mujeres embarazadas, factor
reumatoide, enfermedad autoinmune (lupus eritematoso diseminado), cirrosis, insuficiencia renal crónica,
diálisis, Ig anti-ratón u otras infecciones virales o bacterianas (hepatitis A, B, C, rubeola, toxoplasmosis,
parotiditis, sarampión, VCM, VHS, VEB, VVZ, HTLVI, paludismo, pacientes vacunados contra la gripe).
La especificidad fue del 98,72% (309/313) con 4 reacciones no específicas y no significativas.
Sensibilidad
La sensibilidad ha sido evaluada mediante un test de muestras positivas al Ab VIH, muestras de pacientes
con infección aguda y de paneles comerciales de seroconversión y muestras de Ag VIH (puro o diluido).
1) Confirmación de muestras positivas al Ab VIH
Se sometieron al test 744 muestras positivas de un seguimiento de 2 pacientes infectados por VIH-1
y VIH. Este estudio mostró una sensibilidad del 100 %.
26

Tipos Número Número Sensibilidad
de muestras de muestras reactivas
A, B, C 200 200 100%
(clasificación CDC)
VIH-1 WB con características completas
o con bandas ligeras anti-gag Ab 200 200 100%
VIH 1
grupo M
(18A, 71B, 23C, 9D, 12 E, 4 F) 118 118 100%
Grupo O 22 22 100%
Grupo N 1 1 100%
Panel BBI PRZ 204 7 7 100%
VIH 2 VIH-2 WB con características 196 196 100%
completas
25 muestras adicionales positivas y recien colectadas (con menos de 1 dia) fueron analizadas y
todas resultaron positivas.
2) Muestras de pacientes con infección aguda y de paneles comerciales de seroconversión
• 81 muestras obtenidas de pacientes con infección aguda o recientemente infectados por el VIH-
1 (35 muestras de 28 pacientes con características de seroconversión por inmunotransferencia y
46 muestras de seroconversión reciente) fueron positivos con el test Genscreen ULTRA VIH
Ag-Ab.
• 20 muestras obtenidas en el momento de la seroconversión (muestras de seroconversión muy
temprana con características negativas por inmunotransferencia o con una banda muy ligera para
el p24 o el gp160 mediante inmunotransferencia VIH) : 19 de ellas fueron positivas.
• Un total de 90 bien paneles comerciales documentados de seroconversion VIH fueron asimismo
estudiados y comparados con tests EIA disponibles comercialmente. De ellos se compararon los
resultados de 85 paneles con un test Ag-Ab marcado CE : Genscreen PLUS VIH Ag-Ab.
Resultados del Detección Detección Detección
Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab más precoz equivalente más tardía
comparados con los del (al menos una muestra (la misma muestra
Genscreen PLUS VIH Ag-Ab suplementaria reconocida
detectada)
como positiva)
Número de seroconversiones 44 41 0
Como minimo 170 muestras con seroconversion temprana se analizaron con el Genscreen
ULTRA VIH Ag-Ab.
3) Muestras de Ag VIH
Sensibilidad analítica : el límite de sensibilidad del test calculado por interpolación de la curva
obtenida mediante el test de las diluciones del estándar AFSSAPS (concentración inicial de
100 pg/ml) fue de < 25 pg/ml.
Durante las evaluaciones externas, el límite de detección fue establecido en 13,6 pg/ml por la
regresión de la amplitud estándar del panel “Ag VIH SFTS 1998” (panel Ag VIH de la Sociedad
Francesa de Transfusión Sanguínea).
El limite de detección del antigeno P24 del primer panel internacional del WHO NIBSC codigo 90/636
ha sido valorado inferior a 2 IU/ml y calculado a 0,85 UI/ml con un intervalo de confianza de 95%
[0,73 – 1,01 IU/ml] con 4 lotes durante un estudio interno.
Sensibilidad en muestras positivas al Ag VIH : se sometieron a test 56 muestras: 53 muestras que
contenían al menos 25 pg/ml de Ag VIH fueron positivas y 3 muestras con 13, 16 y 19 pg/ml,
respectivamente, de Ag VIH mostraron tasas (Densidad Óptica / Valor discriminatorio) entre 0,9 y 1,00.
27

Sensibilidad en el sobrenadante de células de cultivo : se sometieron a test 83 sobrenadantes de los
siguientes genotipos: 76 muestras de VIH-1 del grupo M (16 A, 16 B, 11 C, 7os, 13 E, 4 F, 4 G, 3 H,
2 J), 4 muestras de VIH-1 del grupo O, 1 muestra de VIH-1 del grupo N y 2 muestras de VIH 2. Todas
las muestras de VIH-1 fueron reactivas, excepto una muestra del grupo O con una concentración de
29 pg/ml de Ag VIH, que mostró una proporción (Densidad Óptica / Valor discriminatorio) de 0,60.
Reproductibilidad del test
La reproductibilidad del test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab fue determinada mediante el análisis de
10 muestras : 1 muestra negativa, 3 muestras positivas al VIH 1, 3 muestras positivas al VIH 2 y 3
positivas al antígeno.
La reproductibilidad en el interior del ensayo fue evaluada mediante el test de estas 10 muestras
30 veces seguidas. La reproductibilidad del ensayo fue evaluada mediante el test de estas
10 muestras por duplicado durante 20 días en 2 series independientes cada día. Los resultados se
muestran en las tablas siguientes :
Tabla 1 : Reproductibilidad dentro del test
Muestras Tasa media Desviación % del coeficiente
estándar de variación
Negativo 0,28 0,02 5,37
Positivo débil 1,62 0,07 4,32
VIH 1 Positivo medio 2,98 0,13 4,33
Positivo fuerte 5,37 0,18 3,32
Positivo débil 2,5 0,18 7,20
VIH 2 Positivo medio 5,35 0,45 8,48
Positivo fuerte 11,19 0,58 5,21
Positivo débil 1,58 0,06 3,64
Ag VIH Positivo medio 4,19 0,17 4,13
Positivo fuerte 9,21 0,34 3,65
Tabla 2 : Reproductibilidad entre los tests
Muestras Tasa media Desviación % del coeficiente
estándar de variación
Negativo 0,28 0,04 15,84
Positivo débil 1,05 0,10 9,44
VIH 1 Positivo medio 2,7 0,22 8,10
Positivo fuerte 4,96 0,41 8,37
Positivo débil 1,91 0,41 21,15
VIH 2 Positivo medio 4,45 0,64 14,29
Positivo fuerte 10,93 0,62 5,81
Positivo débil 1,29 0,08 6,48
Ag VIH Positivo medio 3,48 0,17 4,99
Positivo fuerte 8,91 1,11 12,48
28

16. LÍMITES DEL TEST
Un valor muy bajo de antígenos o anticuerpos VIH no se puede detectar durante la primera etapa de
la infección y, por consiguiente, un resultado negativo indica que la muestra sometida a test no
contiene antígenos VIH o anticuerpos anti-VIH perceptibles con el test Genscreen ULTRA VIH Ag-
Ab Sin embargo, dicho resultado no excluye la posibilidad de exposición a una infección por
VIH 1 / VIH 2.
La variabilidad del VIH-1 (grupo M y grupo O) y del VIH 2 permite la posibilidad de reacciones con
resultados falsos negativos. Ningún test conocido puede ofrecer la seguridad completa de que el
virus VIH está ausente.
Las técnicas ELISA, sumamente sensibles, pueden dar lugar a resultados falsos positivos.
Para verificar la especificidad de la reacción, se debería confirmar cada resultado positivo (conforme
a los criterios de interpretación del test Genscreen ULTRA VIH Ag-Ab) con un método apropiado
(con un test específico del Ag VIH, como el Genetic System HIV Ag EIA, seguido de neutralización
para demostrar la presencia de Ag VIH, o inmunotransferencia para demostrar la presencia de
anticuerpos anti-VIH).
El calentamiento de las muestras puede afectar la calidad de los resultados.
El método espectrofotométrico para verificar la muestra, la deposición del conjugado de la solución
de desarrollo, permite verificar la exactitud del volumen distribuido de muestras y conjugado. Este
método detecta sólo la presencia de muestra y conjugado. La tasa de error con este método está
estrechamente vinculada a la exactitud del sistema utilizado (un coeficiente acumulado de variación
de más del 10% para la distribución y la lectura disminuye considerablemente la calidad de este
paso).
Algunas muestras hiperbilirrubinémicas, hiperlipidémicas o hiperhemolizadas pueden afectar el
método espectrofotométrico a la hora de verificar la deposición del conjugado 1. En estos casos sólo
se puede verificar la presencia de la muestra.
En caso de una eficacia de lavado muy deficiente después de la incubación del conjugado, la
verificación automática del pipeteado de la solución de desarrollo (mediante lectura de la DO de los
pocillos a 490 nm) puede dar lugar a resultados erróneos con una DO superior a 0,100 en ausencia
de la solución de desarrollo. Sin embargo, estos fenómenos no se han observado durante la
evaluación de 939 muestras probadas.
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(GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices)
(FR) - Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro)
(ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro)
(IT) - Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro)
(DE) - CE Konformitätskennzeichnung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika)
(PT) - Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro)
(SE) - CE-märkning (Europeiskt direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in vitro-diagnostik)
(DK) - CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik)
(GR) - CE ( 98/79/CE in vitro )
(PL) - CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów medycznych do badań in vitro)
(LT) - CE ženklas (Europos sąjungos direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos prietaisų)
(HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről)
(EE) - CE märgistus (Euroopa direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta)
(SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre in vitro diagnostické zdravotnícke postupy)
(CZ) - CE značka (Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických prostředcích in vitro)
(NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk)
(RO) - Marca CE (Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro)
(BG) - СЕ маркировка (Европейска директива 98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия)
(GB) - For in vitro diagnostic use
(GB) - Catalogue number
(FR) - Pour diagnostic in vitro
(FR) - Référence catalogue
(ES) - Para diagnóstico in vitro
(ES) - Número de catálogo
(IT) - Per uso diagnostico in vitro
(IT) - Numero di catalogo
(DE) - In-vitro-Diagnostikum
(DE) - Bestellnummer
(PT) - Para uso em diagnóstico in vitro
(PT) - Número de catálogo
(SE) - In vitro-diagnostik
(SE) - Katalognummer
(DK) - In vitro diagnose
(DK) - Katalognummer
(GR) - in vitro
(GR) -
(PL) - Do stosowania in vitro
(PL) - Numer katalogu
(LT) - in vitro diagnostikai
(LT) - Katalogo numeris
(HU) - Csak in vitro diagnosztikai alkalmazásra
(HU) - Cikkszám
(EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks
(EE) - Katalooginumber
(SK) - Na diagnostiku in vitro
(SK) - Katalógové číslo
(CZ) - Pro diagnostiku in vitro
(CZ) - Katalogové číslo
(NO) - Til in vitro-diagnostikk
(NO) - Katalognummer
(RO) - Pentru diagnostic in vitro
(RO) - Număr de catalog
(BG) - За ин витро диагностика
(BG) - Каталожен номер
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(GB) - Authorised Representative
(FR) - Fabricant
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(DE) - Bevollmächtigter
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(DK) - Autoriseret repræsentant
(GR) -
(GR) -
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(NO) - Autorisert representant
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(SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD
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(GR) - YYYY/MM/DD
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(PL) - Data ważności YYYY/MM/DD
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(LT) - Galioja iki YYYY/MM/DD
(HU) - Gyártási szám
(HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN
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(EE) - Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP
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