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3. Materiales y métodosa. MaterialesParcelas. Se elegirán parcelas <strong>en</strong> las D<strong>en</strong>ominacionesde Orig<strong>en</strong> <strong>en</strong> función dela variedad y la edadPlanta jov<strong>en</strong>. Plantas jóv<strong>en</strong>es de vidproced<strong>en</strong>te de distintos viveros. Ademásse utilizarán como control otras plantas(chopos, pinos y alm<strong>en</strong>dros).Hongos. Se utilizarán hongos patóg<strong>en</strong>osproced<strong>en</strong>tes del material vegetal,aislados e id<strong>en</strong>tificados <strong>en</strong> el laboratorio,así como hongos de refer<strong>en</strong>cia.Fungicidas. Se estudiarán fungicidas disponibles<strong>en</strong> el mercado: fusilazol-carb<strong>en</strong>dazimay quinosol. Estos dos fungicidassistémicos, con difer<strong>en</strong>tes mecanismos deacción y propiedades sinérgicas se aplicaránde forma prev<strong>en</strong>tiva y curativa.b. MétodosParcelas.Prospecciones de campoy recogida de material— Marcaje de parcelas <strong>en</strong> bloques de450 cepas distribuidas <strong>en</strong> 10 filas.— Época de prospección. En el caso deyesca <strong>en</strong> los meses de verano, cuandose alcanc<strong>en</strong> las máximas temperaturas.En el caso de Eutipiosis, <strong>en</strong> losestados f<strong>en</strong>ológicos de la vid F y/o G.— Anotación de cepas que manifiest<strong>en</strong>los síntomas de estas <strong>en</strong>fermedades.En cada cepa afectada de yesca seevaluará la int<strong>en</strong>sidad del ataque,además de la proporción de la superficiefoliar y de racimos afectados. Enlas que pres<strong>en</strong>t<strong>en</strong> síntomas de Eutipiosisse anotará el número de brazosafectados y el número total <strong>en</strong> lacepa, así como la int<strong>en</strong>sidad. Se recogeránmuestras si se considera oportunopara su análisis <strong>en</strong> laboratorio.— Los datos obt<strong>en</strong>idos se compararáncon los resultados de años anteriorescon el fin de determinar la evoluciónde estas patologías.Hongos e inoculación— Se aislaran los hongos a partir deplantas con síntomas de decaimi<strong>en</strong>tode la vid y se id<strong>en</strong>tificaran sigui<strong>en</strong>dola metodología clásica que consiste<strong>en</strong> aislar e id<strong>en</strong>tificar los hongospor su caracteres morfológicos y conmetodológicas moleculares. Esto implicaponer a crecer astillas de vidcon síntomas de Eutipiosis, Yesca y/o<strong>en</strong>fermedad de Petri <strong>en</strong> medio decultivo (MEA). Los crecimi<strong>en</strong>tos se repican<strong>en</strong> otro medio de cultivo: PDA.En este medio los hongos suel<strong>en</strong> t<strong>en</strong>eruna coloración y textura que sirv<strong>en</strong>para ori<strong>en</strong>tar su id<strong>en</strong>tificación. Laid<strong>en</strong>tificación se basa <strong>en</strong> el aspectode las esporas, de las células conidióg<strong>en</strong>asy <strong>en</strong> m<strong>en</strong>or medida de los micelios,característicos de un géneroy/o una especie. La observación deestas estructuras se realiza por microscopiaóptica tras una tinción. Lasdeterminaciones moleculares se realizaráncon los cebadores descritos69
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