validar

VALIDACIÓN DE MÉTODOSMICROBIOLÓGICOS Y BIOLÓGICOSReferencia USP 29,Farmacopea MexicanaValidación de métodos analíticos AEFI1de 21

Ensayos biológicosLos métodos biológicos se empleanpara determinar la potencia o elcontenido de ciertas elementos que nopueden ser ensayados por otrosmétodos químicos o físicos2de 21

El principio de un ensayobiológicoEs la comparación de la respuesta de lasustancia patrón (o de referencia) deconcentración conocida con la delproducto a ensayar, con una probabilidaddeterminadaLos ensayos biológicos como su nombre loindica, utilizan materia viva (animales, células,microorganismos entre otros)3de 21

Ensayos biológicosSe dividen en ensayos cualitativos y cuantitativosEnsayos cualitativosEn los cualitativos se identificauna sustancia por algunareacción característicaproducida en una especieparticular de entidad biológicaBBL4de 21

Ensayos biológicosEnsayos cuantitativosLos ensayos cuantitativos,permiten determinar la potenciao concentración de un activo enla muestraValoración por cilindro- placa o en placa : DifusiónValoración turbidimétrica5de 21

Ensayos biológicos• Pueden ser difíciles de "validar"• "Validez" se hace prácticamentecaso por caso•Lo recomendables es: Cumplirestrictamente las monografías de losEnsayos biológicos en las farmacopeas6de 21

• Validamos todoslos métodosmicrobiológicos?7de 21

Requieren validación• Ensayos de límites microbianos• Recuento microbiano• Ensayo de esterilidad• Ensayo de eficacia de preservativo• Programa de control de ambiente• Ensayos biológicos8de 21

Validación deensayos microbiológicosEs virtualmente imposible validarcompletamente los procedimientosde ensayo para cada microorganismo9de 21

LA VALIDACIÓN DEL MÉTODODEBE DEMOSTRAR:• Que cualquier sustancia inhibitoria presenteen la muestra ha sido neutralizada/inactivadao diluida a niveles por debajo del nivelinhibidor.• La capacidad de los medios para promover elcrecimiento de los microorganismos quepuede afectarse por el proceso de preparacióndel medio, por los procesos de esterilización yde almacenamiento, entre otros.10 de 21

Actividades preliminares:•Neutralizar/inactivar o diluir lassustancias inhibidoras.• Enfrentamiento periódico de losmedios.• Tener los métodos normalizados• Tener los Equipos de medicióncalibrados.11 de 21

Parámetros que deben incluirse• Temperatura y tiempo de incubación• Todos los microorganismos no pueden crecer enlos medios• Variaciones en los medios puede afectar larecuperación• Desinfectantes o preservativos inhibidores• Muestra• procedimientos• manejo, almacenamiento, transporte12 de 21

Parámetros que deben incluirse• Métodos• incorporación en placa /diseminación en placa• filtración por membrana• Número más probable• Tamaño de la muestraBBL• Dilución de ensayo13 de 21

Parámetros que deben incluirse• Condiciones de lafiltración pormembrana• Condiciones deincubación• Criterios deaceptación14 de 21

Parámetros que deben incluirse• Microorganismos deenfrentamiento para la validaciónLos recomendados por las farmacopeas.Staphylococcus aureusBacillus subtilisEscherichia coliCandida albicansAspergillus niger• Tamaño del inóculo• 10 –100 ufc totales inoculadas en de0.1ml a 100mL de la solución de ensayo.Los microorganismosdeben serenfrentados porseparado y nomezclados en unensayo15 de 21

Requerimientos de la validación deensayos de esterilidad• pH, promoción del crecimiento yesterilidad de los medios• Ensayo de la ESTÁSIS (comprobacióndel medio• Control ambiental• Controles negativos• Microorganismos de enfrentamientosegún USP16 de 21

Unidades y estándares dereferencia• La potencia de los antibióticos estáespecificada en Unidades o µg deactividad.• La preparación de los estándares sepuede en algunos casos con anticipacióncomo una solución madre y lasdiluciones el día de la ejecución delensayo.17 de 21

Pruebas de aptitud de losmedios• Prueba de promoción decrecimiento• Estabilidad de los mediospreparados.Deben cumplir• Para un mes de almacenamiento, enenvase cerrado, verificar cada 2semanas• Para un año de almacenamiento, enenvase impermeable y bien cerrado,verificada cada 3 meses.18 de 21

Reporte de Validación Objetivo y alcance del método, aplicabilidad Tipo de analito y la matriz sobre laque se hizo la validación, Detalles del analito, reactivos, estándaresde referencia y control y estabilidad de lasmuestras preparadas. Procedimiento para la verificaciónde la calidad de los estándares yreactivos químicos usados Condiciones de seguridad19 de 21

Reporte de ValidaciónParámetros del métodoParámetros críticos establecidos através del test de robustezListado de equipos, funcionamiento,condiciones de desempeño. IQ,OQ,PQ Detalle de las condiciones y cómo fue realizado elproceso, incluyendo la preparación de la muestraTratatamiento estadístico y cálculosrealizados11Procedimientos de control rutinario20 de 21

Reporte de Validación1412Registros como cromatogramas,espectros y curvas de calibración13test de aceptación de las variablesResultados de la incertidumbre dela medición16Criterios para revalidaciónPersona que desarrolló y validó elmétodo inicialmente1715Resumen y conclusiones21 de 21