EvaluaciÃ³n del potencial probiÃ³tico de bacterias Ã¡cido lÃ¡cticas para ...

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C. Cueto y S. Aragón / Scientia Agropecuaria 1(2012) 45 - 50Del análisis de resistencia a pH 2.0 y toleranciaa sales biliares 0.3%, condicionesque afectan la supervivencia bacterianadurante su paso a través de un modelo invitro del tracto gastrointestinal durante las2 h que tarda la comida en atravesar elsistema (Urbanska et al., 2007), se observóque el 48.6% de las cepas estudiadasfueron capaces de sobrevivir a las condicionespropuestas por el estudio.De las cepas seleccionadas como microorganismoscon potencial probiótico, la cepaK72 fue la que presentó mayor toleranciaante las condiciones de pH 2.0 y salesbiliares 0.3%, disminuyendo en promedio2.1±0.2 unidades logarítmicas y la cepaque presentó menor tolerancia fue K11disminuyendo en promedio 4.9±0.2unidades logarítmicas. Los resultadospresentados en la Tabla 1 son consistentescon los reportados por (Vizoso et al.,2006), quienes evalúan el comportamientode las cepas de Lactobacillus aisladas deheces fecales en niños y en productoslácteos fermentados típicos de Kenia,observando una disminución entre 2 y 3unidades logarítmicas.Resistencia a antibióticos de importanciaepidemiológicaSe seleccionaron las 26 cepas que toleraronsimultáneamente las condiciones de pH 2.0y 0.3% de sales biliares para realizar elanálisis de resistencia a antibióticos ycinco cepas fueron sensibles antevancomicina y cefoxitín. Estas seidentificaron molecularmente medianteanálisis bioinformático; se obtuvieronsecuencias en promedio de 773.8± 36.6 pbde los amplímeros de la región 16S RNA.La totalidad de las cepas evaluadaspresentó homología del 87.3±3.3% frente aLactobacillus fermentum.La resistencia ante los antibióticos es uncreciente problema por ser fácilmentetransferible entre microorganismos.Hummel et al. (2007) reportan que laresistencia a cefoxitin genera mutacionespuntuales que confieren resistenciaadicional a las quinolonas obligando a loshospederos, el consumo de antibióticosnefrotóxicos. También importa prevenir lageneración de Enterococcus vancomicinaresistentes, agentes de infeccionesnosocomiales, quienes adquieren la resistenciapor mecanismos de trasferenciahorizontal y cuyas patologías adyacentesson de mal pronóstico clínico (Ray et al.,2003), razón por la cual, las cepas quemanifestaron resistencia a los antibióticosfueron excluidas del estudio.Actividad de la enzima BSHLas cepas 1_1, K72 y el control L.fermentum ATCC 9338 no mostraronactividad de la enzima BSH, probablementepresenta actividad frente a otrossustratos como taurodeoxicolato de sodio ono poseen el gen, el cual se trasfiere deforma horizontal entre cepas de la mismaespecie (Elkins et al., 2001). La cepa conmayor actividad total y específica fue K75;la cepa control L. acidophilus ATCC 4356,presentó las menores actividades.El análisis estadístico mostró que no haydiferencias estadísticamente significativasentre las muestras al medir las proteínastotales, pero sí existen entre la actividadtotal y la actividad específica halladas,para un α = 0.05 (Tabla 2).Tabla 2Actividad enzimática BSH.aCepaActividadtotal(U mL -1 )Actividadespecífica(U mg -1 )1_1 N/A N/AaK11 1.08±0.13a1.41±0.01K72 N/A N/AaK73 1.73±0.22aK75 2.02±0.06L. fermentumN/AATCC 9338L. acidophilusaATCC 4356 1.02±0.09a3.20±0.10a3.5±0.10N/Aa1.54±0.14Los valores con la misma letra no presentandiferencias estadísticamente significativas paraα=0.05.-48-
C. Cueto y S. Aragón / Scientia Agropecuaria 1(2012) 45 - 50Las sales biliares son uno de losprincipales compuestos de la bilis y elproducto final de la degradación delcolesterol. Durante su tránsito por elintestino, entre el 5 y 10% de las salesbiliares son desconjugadas por la acción dela enzima BSH, producida intracelularmentepor los microorganismos pertenecientesa la flora intestinal, el ser humanono es capaz de producir la enzima (Jeun etal., 2010). Al existir mayor cantidad demicroorganismos productores de la enzimaBSH, como las cepas estudiadas, habrámayor influencia sobre el metabolismo delcolesterol y posterior reducción decolesterol sérico (Huang et al., 2011).Los resultados obtenidos son comparablesa los reportados por Liong y Shah (2005),obteniendo actividades enzimáticas superioresal comparar los valores de la cepacontrol L. acidophilus ATCC 4356, quemostró ser la de menor actividadenzimática, 0.45±0.22 U mL -1 ; en esteestudio se observó la misma cepa conactividad de 1.02±0.09 U mL -1 ; esto puededeberse a las modificaciones realizadas a latécnica para medición de aminoácidos.Adsorción de colesterolLas cinco cepas presentaron la capacidadde adsorber el colesterol en diferentesproporciones, siendo concordante con elanálisis estadístico que mostró diferenciasestadísticamente significativas entre lasmuestras con un α=0.05. La cepa queadsorbió en mayor porcentaje el colesterol(70µg.mL -1 ) presente en el medio decultivo fue K73 y la de menor capacidadde adsorción fue K75. La totalidad de lascepas evaluadas adsorbieron el colesterolen diferentes proporciones: la K73removiendo un 53.06±2.69 µg.mL -1 delmedio de cultivo y la de menor capacidadfue K75 removiendo 7.23± 2.69 µg.mL -1 .Los resultados muestran que no existerelación entre la actividad enzimática y lacapacidad de adsorber el colesterol entrelas cepas estudiadas. La capacidad deadsorber el colesterol es un proceso físicoy se ve limitado por las necesidades defortalecimiento de la membrana dadas porla adversidad del medio (Kimoto et al.,2002), razón por la cual se hace mayorénfasis en este estudio a la producciónenzimática; aun así, microorganismos conambas capacidades tendrían un mayorefecto sobre los niveles de colesterol delhospedero, puesto que se vería tratado pordos mecanismos complementarios.4. ConclusionesEl estudio mostró que la cepa con mayorpotencial hipocolesterolémico y con máscaracterísticas probióticas, aisladas a partirde suero costeño colombiano, fue K73.Éste resultado constituye una alternativapara personas que presentando nivelesaltos de colesterol sérico se encuentran enriesgo de desarrollar enfermedades cardiovasculares.Referencias bibliográficasBao, Y; Zhang, Y; Liu, Y; Wang, S; Dong, X; Wang, Y;Zhang, H. 2010. Screening of potential probioticproperties of Lactobacillus fermentum isolated fromtraditional dairy products. Food Control 21(5): 695-701.Belviso, S.; Giordano, M.; Dolci, P.; Zeppa, G. 2009. Invitro cholesterol-lowering activity of Lactobacillusplantarum and Lactobacillus paracasei strains isolatedfrom the Italian Castelmagno PDO cheese. DairyScience Technology 89(2): 169-176.Cueto, C.; García, D.: Garcés, F.; Cruz, J. 2007.Preliminary studies on the microbiologicalcharacterization of lactic acid bacteria in Suerocosteño, a Colombian traditional fermented milkproduct. Revista latinoamericana de microbiología 49:11-17.Elkins, C. A.; Moser, S. A.; Savage, D.C. 2001. Genesencoding bile salt hydrolases and conjugated bile salttransporters in Lactobacillus johnsonii 100-100 andother Lactobacillus species. Microbiology 147(12):3403-3412.Gardiner, G. E.; Heinemann, C.; Bruce, A. W.; Beuerman,D.; Reid, G. 2002. Persistence of Lactobacillusfermentum RC-14 and Lactobacillus rhamnosus GR-1but not L. rhamnosus GG in the human vagina asdemonstrated by randomly amplified polymorphicDNA. Clinical and Vaccine Immunology 9(1): 92-96.Guo, X. H.; Kim, J. M.; Nam, H. M.; Park, S.Y. 2010.Screening lactic acid bacteria from swine origins formultistrain probiotics based on in vitro functionalproperties. Anaerobe 16(4): 321-326.-49-
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