Recomendaciones para la determinación de biomarcadores en el ...

Documento descargado de http://www.elsevier.es el 27/01/2013. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato.Recomendaciones para la determinación de biomarcadores en el carcinoma de pulmón no microcítico avanzado 23• Incluir un control positivo con ADN, que habitualmente sesuministra junto con el reactivo comercial, y un controlnegativo o reacción sin ADN en cada análisis.Translocación de ALKEn nuestro entorno, la única opción analítica realista paradeterminar la translocación de ALK es mediante FISH. Suprotocolo no difiere en lo esencial del empleado para el estudiode otros genes. Solo los laboratorios que tengan más de100 pruebas FISH al año deberían acometer la implementaciónde esta técnica, según los resultados obtenidos frentea centros de referencia. Actualmente existen dos sondas enel mercado que pueden proporcionar resultados valorables,si bien tienen una aproximación diferente, ya que se tratade sondas de rotura o break-apart (Vysis) y sondas de fusión(Kreatech).Fase post-analíticaMutaciones de EGFRPCR y secuenciación directa. Se recomienda utilizar programasinformáticos específicos que permitan comparar lasecuencia o electroferograma obtenido con la secuencia deEGFR no mutado. Una muestra debe considerarse positivacuando la mutación está presente en, al menos, dos secuenciasdiferentes (una forward y otra reverse) obtenidas de dosproductos de PCR independientes. La persona que interpretelas secuencias deberá tener una experiencia contrastada.PCR en tiempo real. El análisis es, en principio, cerrado yno se deberían interpretar casos cuyos controles no ofrezcanel resultado esperado, por coherentes que éstos resulten.Translocación de ALKPara su interpretación, se deberá tener en cuenta el diseñode la sonda, ya que en general se producen imágenes deseparación, así como la información predictiva, ya que lapérdida de señales también puede ser un marcador de respuesta.La persona que interprete las imágenes deberá teneruna experiencia contrastada.Control de calidad externoIndependientemente de la participación en un control decalidad externo, todos los laboratorios que utilicen estastecnologías deben validar, como medida de control, tantosu especificidad y su sensibilidad analíticas, como su valorpredictivo. La SEAP está evaluando la incorporación de otrosmarcadores, como BRAF o PI3 K, al control de garantía decalidad.Mutaciones de EGFREn el año 2010, la SEAP ha puesto en marcha un Programade Control de Calidad de mutaciones de EGFR 37 cuyas característicasprincipales se exponen a continuación.El programa se ha diseñado para evaluar las distintasetapas, incluidas las fases pre-analítica y post-analítica ode interpretación de resultados. El laboratorio organizadorselecciona una serie de casos mutados y no mutadospara EGFR, que son remitidos a los laboratorios participantesen forma de secciones sin teñir, de tejido fijado enformol e incluido en parafina. Cada porta está claramenteidentificado con el número correspondiente a la muestra yel número correspondiente a la sección. Cada laboratorioparticipante utilizará los protocolos que emplee de formarutinaria en la práctica clínica. Con el fin de valorar el porcentajede celularidad tumoral de las muestras remitidas,es imprescindible teñir con hematoxilina-eosina (H-E) unade las secciones remitidas para que pueda ser revisada.El envío de resultados debe realizarse de forma anónima.El número identificador de cada laboratorio participanteaparece en la caja de preparaciones. Así, en un plazo de14 días los laboratorios participantes deben remitir al organizadorpor vía electrónica lo siguiente:• Formulario con la información solicitada relativa a las distintasetapas del análisis de mutaciones del gen EGFR.• Informe con los resultados del análisis para cada muestra,tomando como modelo el informe que, de forma habitual,se remite al médico que solicita la determinaciónde mutaciones.• Resultados analíticos sin interpretar, en los que se basa elgenotipo establecido para cada una de las cuatro muestrasremitidas. Por ejemplo, electroferogramas en el casode realizar el análisis mediante secuenciación directa delproducto de PCR o un archivo con los valores Ct en elcaso de realizar el análisis mediante PCR cuantitativa entiempo real.Los resultados son evaluados y discutidos por un grupode trabajo. En todo momento se debe mantener el anonimatode los participantes. Cada laboratorio participanterecibe un informe personal y otro general con los resultadosobtenidos.Translocación de ALKHasta el momento no existe en el mundo un control decalidad externo para esta determinación. No obstante, ennuestra opinión, a nivel operativo se debería seguir unmodelo similar al que se sigue con la hibridación de HER-2 en los programas de control de calidad que se realizan enEspaña, en el Reino Unido y en los países nórdicos.Aspectos comunesFlujo de trabajo y unificación de criteriosLugar para realizar las determinacionesLas determinaciones pueden realizarse en el propio centroasistencial o en un centro de referencia. Si la técnica se realizaen el propio centro asistencial, el laboratorio deberá: a)haber efectuado antes un programa de formación y aprendizajede las técnicas que sea adecuado; b) estar dotado delos medios técnicos necesarios; c) tener criterios suficientespara la interpretación correcta de los resultados obtenidos,y d) disponer de un control periódico de calidad para asegurarla correcta ejecución.Si la técnica se realiza en un centro de ceferencia, el Serviciode Anatomía Patológica del centro asistencial deberápreparar la muestra de biopsia o citología para su envío,siguiendo los criterios unificados de procesamiento de muestrasque existen. Con el fin de garantizar que el tiempode proceso no exceda los 7-10 días, se deberán ajustar los