Évaluation globale de la résistance des bananiers à la fusariose ...
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Gui<strong>de</strong>s techniques INIBAP 7 49<br />
• couper les racines en morceaux <strong>de</strong> 10 cm <strong>de</strong> long et les sécher <strong>à</strong> l’ai<strong>de</strong> d’un mouchoir<br />
<strong>de</strong> cellulose ;<br />
• si l’on a prélevé <strong>la</strong> totalité du système racinaire : déterminer le poids frais total<br />
<strong>de</strong>s racines ;<br />
• couper les racines en morceaux <strong>de</strong> 1 cm ;<br />
• prélever un sous-échantillon <strong>de</strong> 15 g ;<br />
• ajouter 100°C.<br />
2. Extraction <strong>de</strong>s némato<strong>de</strong>s<br />
• p<strong>la</strong>cer les racines dans un mixeur <strong>de</strong> cuisine avec 100 ml d’eau distillée ;<br />
• broyer les racines 3 fois pendant 10 secon<strong>de</strong>s (avec une pause <strong>de</strong> 5 secon<strong>de</strong>s)<br />
;<br />
• verser <strong>la</strong> suspension sur <strong>de</strong>s tamis <strong>de</strong> 250, 106 et 40 µm et rincer les tamis <strong>à</strong> l’eau<br />
du robinet ;<br />
• recueillir les némato<strong>de</strong>s retenus par le tamis <strong>de</strong> 40 µm et les p<strong>la</strong>cer dans un<br />
bécher avec <strong>de</strong> l’eau distillée.<br />
3. Evaluation <strong>de</strong> <strong>la</strong> popu<strong>la</strong>tion <strong>de</strong> némato<strong>de</strong>s<br />
• diluer <strong>la</strong> suspension contenant les némato<strong>de</strong>s dans <strong>de</strong> l’eau dans un tube gradué<br />
<strong>de</strong> façon <strong>à</strong> obtenir un volume <strong>de</strong> 200 ml ;<br />
• <strong>à</strong> l’ai<strong>de</strong> d’une pipette, insuffler <strong>de</strong> l’air dans <strong>la</strong> suspension contenant les némato<strong>de</strong>s<br />
(afin d’homogénéiser <strong>la</strong> suspension) ;<br />
• prélever un sous-échantillon <strong>de</strong> 6 ml (boîte <strong>de</strong> comptage) ou <strong>de</strong> 2 ml (<strong>la</strong>me <strong>de</strong><br />
comptage) ;<br />
• compter les némato<strong>de</strong>s se trouvant dans <strong>la</strong> boîte <strong>de</strong> comptage (stéréomicroscope)<br />
ou sur <strong>la</strong> <strong>la</strong>me <strong>de</strong> comptage (microscope optique) ;<br />
• calculer <strong>la</strong> popu<strong>la</strong>tion finale <strong>de</strong> némato<strong>de</strong>s par unité <strong>de</strong> racine ou par système<br />
racinaire.