crip.umontreal.ca - Université de Montréal

1 er Symposium du
Centre de recherche en infectiologie porcine
(CRIP)
FACULTÉ DE MÉDECINE VÉTÉRINAIRE
CAMPUS SAINT-HYACINTHE
28 ET 29 MAI 2007
AMPHITHÉÂTRE 0448-1500, DES VÉTÉRINAIRES

1 er Symposium du Centre de recherche en infectiologie porcine
C’est en avril 2006 que le Centre de recherche en
infectiologie porcine (CRIP) a été créé pour une période initiale
de six ans, en tant que Regroupement stratégique
subventionné par le Fonds québécois de la recherche sur la
nature et les technologies (FQRNT).
La raison d’être de ce centre est de maximiser la plusvalue
des activités de recherche qui contribuent à la lutte
contre les maladies infectieuses porcines. Pour cela, le centre
s’est donné comme ligne directrice de coordonner les actions
de la majorité des expertises du Québec, axées sur cette
thématique et complémentaires. C’est ainsi que le CRIP
regroupe une quarantaine de chercheurs (actuellement
21 membres réguliers, 8 associés et 11 collaborateurs) de
diverses disciplines, provenant d’une dizaine d’universités ou
d’institutions de recherche du Québec.
Ce symposium, qui nous réunit aujourd’hui, se veut un
environnement dynamique propice aux échanges
d’informations entre les membres participants et à
l’établissement et/ou au renforcement de collaborations de
recherches. Il se veut aussi une opportunité de formation des
étudiants, à qui il revient la responsabilité et l’honneur de
présenter, oralement ou par affiche, la grande majorité des
résultats de recherche des membres du CRIP. Que chaque
étudiant participant trouve ici le témoignage de notre fierté et
de nos sincères félicitations!
Un merci tout spécial à nos conférenciers invités, qui ont
bien voulu nous honorer de leur présence et de nous faire part
de leurs travaux de recherche. Enfin, nous remercions le FQRNT,
nos commanditaires, les professeurs, les étudiants, le personnel
de recherche, les personnes impliquées dans l’organisation de
l’évènement et tous les participants qui sont là aujourd’hui.
À tous, bonnes journées au premier symposium du
CRIP!

Table des matières
1. Programme .................................................................................................. 7
2. Conférenciers invités
Dre Nina Baltes ..................................................................................................... 20
Dre Isabelle Oswald ............................................................................................. 29
Dr Michaël Murtaugh ........................................................................................... 41
3. Résumés
3.1 Résumés des présentations orales ....................................................20-79
Session 1 : Famille des Pasteurellaceae
No. 1 — N. Baltes, Conférencière invitee .......................................................... 20
No. 2 — B. Bouchet— M. Jacques et M. Gottschalk ......................................... 21
No. 3 — D.M. Skaf— M. Jacques et J.W. Coulton ............................................. 22
No. 4 — E. Auger— M. Gottschalk et M. Jacques ............................................. 23
No. 5 — M. Ramjeet—M. Gottschalk et M. Jacques ......................................... 24
Session 2: Streptococcus suis
No. 6 — L. Bonifait—M. Gottschalk et D. Grenier .............................................. 25
No. 7 — G. Vanier—D. Grenier et M. Gottschalk ............................................... 26
No. 8 — N. Fittipaldi—J. Harel et M. Gottschalk ................................................ 27
No. 9 — M. Esgleas—J. Harel, J.D. Dubreuil et M. Gottschalk .......................... 28
Session 3: Immunologie, Vaccinologie
No. 10 — I. Oswald, Conférencière invitée ......................................................... 29
No. 11 — J. W. Chung—M. Jacques et J.W. Coulton ......................................... 30
No. 12 — M.C. Dominguez-Punaro—S. Rivest, D. Radzioch et M. Gottschalk. 31
No. 13 — M. Jr. Dubois—J.M. Fairbrother et É. Nadeau ..................................... 32
No. 14 — B. Delisle—J.M. Fairbrother, M.A. Mateescu et É. Nadeau ............... 33
No. 15 — F.R. Okamba—C.A. Gagnon, B. Massie .............................................. 34
Session 4: Salubrité des viandes
No. 16 — M. Guillot—A. Letellier et J. R.E. del Castillo ....................................... 35
No. 17 — U. Desranleau-Dandurand—S. Quessy et A. Letellier ........................ 36
No. 18 — N. Bergeron—A. Letellier, F. Daigle et S. Quessy ................................ 37

Session 5: Virologie
Table des matières (suite)
No. 19 — M. Murtaugh, Conférencier invité ........................................................... 39
No. 20 — N. Music — J. Harel et C.A. Gagnon ..................................................... 41
No. 21 — L. Batista, S. D’Allaire, J. Harel, C. Gagnon et M. Gottschalk ............. 43
No. 22 — L. Batista ..................................................................................................... 44
Session 6: Résistance aux antibiotiques, alternatives
No. 23 — L.-A. Jalbert - A. Letellier, S. Quessy, J. Harel et M. Archambault ..... 46
No. 24 — V. Girard — M. Mourez ............................................................................ 47
No. 25 — R. Béraud — A. Letellier et J. R.E. del Castillo ....................................... 48
Session 7: Escherichia coli
No. 26 — M. Caza — C.M. Dozois ........................................................................... 49
No. 27 — J. Proulx — C.M. Dozois ............................................................................ 50
No. 28 — M. Sabri — C.M. Dozois ............................................................................ 51
No. 29 — R. Graveline — M. Mourez et J. Harel .................................................... 52
No. 30 — M.-È. Charbonneau—M. Mourez ........................................................... 53
No. 31 — C. Gonçalves—J.-L. Schwartz et J.D. Dubreuil ..................................... 54
Session 8 : Épidémiologie, Diagnostic
No. 32 — G. Bruant—R. Brousseau et J. Harel ....................................................... 55
No. 33 — N. Music—J. R.E. del Castillo, J. Harel et C.A. Gagnon ...................... 56
No. 34 — L. Batista, S. D’Allaire et M. Gottschalk .................................................. 57
3.2 Résumés des présentations par affiches ...........................................59-79
Session 1 : Famille des Pasteurellaceae
No. 1 — B. Bouchet — M. Jacques et M. Gottschalk ........................................ 59
No. 2 — J. Gouré — J.W. Coulton et M. Jacques .............................................. 60
No. 3 — V. Deslandes — J. Harel, J.W. Coulton et M. Jacques ....................... 61

Session 2: Streptococcus suis
Table des matières (suite)
No. 4— M. Esgleas—J. Harel, J.D. Dubreuil et M. Gottschalk ........................... 62
No. 5— N. Fittipaldi—J. Harel et M. Gottschalk .................................................. 63
Session 3: Immunologie, vaccinologie
No. 6 — C. Bleau—L. Lamontagne ....................................................................... 64
No. 7 — L. Lamontagne, M.-R. Vancalsteren ..................................................... 65
No. 8 — P. De Koninck—D. Archambault et M. A. Mateescu .......................... 66
No. 9 — R. Therrien—B. Talbot ............................................................................... 67
No. 10 — C. Calinescu—J.M. Fairbrother et M.A. Mateescu .............................. 68
Session 4: Salubrité des viandes
No. 11 — C. Forest—F. Daigle .................................................................................. 69
No. 12 — H. Zouaoui—J. R.E. del Castillo ............................................................... 70
Session 5: Résistance aux antibiotiques et alternatives
No. 13 — J.F. Daudelin—M. Lessard et J.M. Fairbrother ...................................... 71
No. 14 — D. Bernier—A. Letellier et J. R.E. del Castillo ......................................... 72
No. 15 — C.L. Tremblay—A. Letellier, S. Quessy, J. Harel et M. Archambault . 73
Session 6: Escherichia coli
No. 16 — B. Pauchet — J.M. Fairbrother ............................................................... 74
No. 17 — M.G. Lamarche — M. Mourez, J.D. Dubreuil et J. Harel .................... 75
No. 18 — S. Crépin — J. Harel ................................................................................. 76
No. 19 — É. Destables — M. Mourez ...................................................................... 77
No. 20 — C. Gonçalves — M. Mourez, J.D. Dubreuil .......................................... 78
Session 7 : Épidémiologie, diagnostic
No. 21 — L. Batista, S. D’Allaire, C. Gagnon, J. Harel et M. Gottschalk ........... 79
4. Commanditaires ............................................................................. 80
Pages de publicité
Alpharma Animal Health Division ............................................................................ 38
Boehringer Ingelheim................................................................................................. 42
Intervet ......................................................................................................................... 58
Merial Canada Inc..................................................................................................... 40
Schering-Plough ......................................................................................................... 45

LUNDI, LE 28 MAI 2007
Page 7
8 h 30 — 8 h 50 : Mot de bienvenue et présentation du symposium dans le cadre des
activités du CRIP – M. GOTTSCHALK
SESSION 1: FAMILLE DES PASTEURELLACEAE — Président : Mario JACQUES
8 h 50 — 9 h 30
Conférencière invitée : Nina BALTES, Institute for Microbiology, Department of Infectious
Diseases, University of Veterinary Medicine Hannover, Germany
1- Use of an Actinobacillus pleuropneumoniae multiple mutant as a vaccine that allows
differentiation of vaccinated and infected animals
Alexander Maas 1 , Ilse D. Jacobsen 2 , Jochen Meens 1 , Nina Baltes 1 and
Gerald-F. Gerlach 1
1 Institute for Microbiology, Department of Infectious Diseases, University of Veterinary Medicine
Hannover, Germany; 2 Heinz Knöll Institute, Jena, Germany
9 h 30 -9 h 45
2-Implication du LOS de Haemophilus parasuis lors des interactions avec des cellules
porcines de microvaisseaux cérébraux
Bénédicte Bouchet, Ghyslaine Vanier, Mario Jacques, Marcelo Gottschalk
Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), Saint Hyacinthe, QC.
9 h 45 — 10 h
3-Hemoglobin binding protein from Actinobacillus pleuropneumoniae: a novel method
for extraction and isolation
Dora Maria Skaf 1 , Mario Jacques 2 et James W. Coulton 1
1 Departement of Microbiology and Immunology, McGill University, Montréal, Q`; 1 GREMIP,
Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC.
10 h — 10 h 30 Pause café
Salle 0451
10 h 30 — 10 h 45
4- Étude des interactions d'Actinobacillus pleuropneumoniae et d'autres
Pasteurellaceae avec des cellules épithéliales d'origine porcine
Éliane Auger 1 , Mahendrasingh Ramjeet 1 , Irazu Contreras 2 , Martin Olivier 2 ,
Marcelo Gottschalk 1 et Mario Jacques 1
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC.; 2 Departement of
Microbiology and Immunology, McGill University, Montréal, QC

Page 8
10 h 45 — 11 h
5-Truncation of LPS Outer Core Affects Hemolytic and Cytotoxic activities of
A. pleuropneumoniae serotype 1
Mahendrasingh Ramjeet, Marcelo Gottschalk et Mario Jacques
GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC
SESSION 2 : Streptococcus suis — Président : Daniel GRENIER
11 h — 11 h 15
6-Rôle déterminant du fibrinogène dans la formation du biofilm et la résistance aux
antibiotiques chez Streptococcus suis
Laetitia Bonifait 1 , Marie-Claude Jacques 1 , Louis Grignon 1 , Marcelo Gottschalk 2 et
Daniel Grenier 1
1 Groupe de recherche en écologie buccale, Faculté de médecine dentaire, Université Laval;
2 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, FMV, U d M.
11 h 15 - 11 h 30
7-Streptococcus suis induit la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires par des
cellules endothéliales porcines de la barrière hémato-méningée
Ghyslaine Vanier 1 , Marie-Pierre Lecours 1 , Mariela Segura 2 , Daniel Grenier 3 et
Marcelo Gottschalk 1
1 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), Faculté de médecine
vétérinaire, Université de Montréal, Saint-Hyacinthe, QC, ; 2 McGill University, Health Centre
Research Institute, Montréal, QC; 3 Groupe de recherche en écologie buccale, Université Laval,
11 h 30 — 11 h 45
8-L’inactivation du gène pgdA réduit la virulence de Streptococcus suis chez
la souris
Nahuel Fittipaldi 1 , T. Sekizaki 2 , D. Takamatsu 2 , Josée Harel 1 ,
Maria de la Cruz Domínguez-Punaro 1 , et Marcelo Gottschalk 1 .
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC; 2 Research Team for Bacterial/
Parasitic Diseases, National Institute of Animal Health, Tsukuba, Ibaraki, Japan.
11 h 45 — 12 h
9- Identification et caractérisation d’une nouvelle adhésine chez Streptococcus suis
Myriam Esgleas1 , Yuanyi Li1 , Ghyslaine Vanier1 , Mark Hancock2 , Josée Harel1 ,
J. Daniel Dubreuil 1 et Marcelo Gottschalk1 1GREMIP, FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC; 2Sheldon Biotechnology Center, McGill University,
Montréal, QC, Canada.

12 h — 13 h 35 Lunch et Session Posters
Aire de restauration (lunch) et salle 0451 (posters)
SESSION 3 : IMMUNOLOGIE, VACCINOLOGIE — Président : James W. COULTON
13 h 35 — 14 h 15
Conférencière invitée : Isabelle OSWALD, Institut National de la Recherche
Agronomique (INRA), Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie, Toulouse (France).
10-Effets de contaminants alimentaires, les mycotoxines, sur la réponse immunitaire
du porc et leur sensibilité aux infections.
Isabelle P. Oswald, INRA (Institut national de la recherche agronomique),
Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie, Toulouse, France.
14 h 15 — 14 h 30
11-Proteomic analysis of outer membrane proteins of Actinobacillus
pleuropneumoniae : identification of immunogenic candidates for vaccine
development
Jacqueline W. Chung 1 , Christopher Ng-Thow-Hing 1 , Bernard F. Gibbs 2 ,
John H.E. Nash 3 , Mario Jacques 4 , et James W. Coulton 1
1 Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street,
Montreal, QC, Canada; 2 Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street,
Montreal QC, Canada; 3 Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada,
Ottawa, ON, Canada; 4 GREMIP, FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC, Canada;
14 h 30 — 14 h 45
12-Streptococcus suis serotype 2 inflammation and pathology: Recent clues on
the recognizing receptors
Maria de la Cruz Dominguez-Punaro1 , Richard Graveline1 , Mariela Segura2 ,
Serge Rivest3 , Danuta Radzioch2 et Marcelo Gottschalk1 1Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP) and Centre de recherche
en infectiologie porcine, FMV, U d M , Saint-Hyacinthe, QC, Canada; 2Centre for the Study
of Host Resistance, McGill University Health Centre Research Institute, Montréal, QC, Canada;
3 Laboratory of Molecular Endocrinology, Centre hospitalier de l’Université Laval, Québec, QC,
Canada.
14 h 45 — 15 h
Page 9
13-Cinétique de la réponse cytokinaire lors d’infections aux Escherichia coli causant
des lésions de type attachant et effaçant dans un modèle de culture d’iléon (IVOC)
d’origine porcine
Maurice Junior Dubois 1 , John M Fairbrother 1 et Éric Nadeau 1
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC

Page 10
15 h — 15 h 15
14-Détermination de l’effet des adjuvants CpG et de la toxine choléra sur la réponse
immunitaire contre le fimbriae F4 administré oralement chez le porc
Benjamin Delisle 1 , John M. Fairbrother 1 , C. Calinescu 2 , M.A. Mateescu 2 et
Éric Nadeau 1
1 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP); 2 Département de
chimie et biochimie, Université du Québec à Montréal, QC, Canada
15 h 15 — 15 h 30
15- Évaluation de la réponse immunitaire induite chez la souris immunisée avec un
adénovirus recombinant non réplicatif exprimant la portion C-terminale de
l’adhésine P97 de Mycoplasma hyopneumoniae
F. R. Okamba 1 , E. Moreau 1 , K. Cheikh Saad Bouh 1 , Carl A. Gagnon 2 ,
Bernard Massie 3 , and M. Arella 1 .
1 INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, QC, Canada; 2 GREMIP, FMV, U d M, Saint-Hyacinthe,
Québec, Canada; 3 CNRC, Institut de recherche en biotechnologie, Montréal, QC, Canada.
15 h 30 — 16 h Pause café
Salle 0451
SESSION 4 : SALUBRITÉ DES VIANDES — Présidente : Ann LETELLIER
16 h — 16 h 15
16-Accumulation des tétracyclines dans les carcasses de porcs : évaluation par
densitométrie osseuse
Martin Guillot 1 , Kate Alexander 1 , Candido Pomar 2 , Renée Bergeron 3 ,
Ann Letellier 4 , Jérôme R.E. del Castillo 5
1 U d M, Dép.de sciences cliniques, FMV, 2 Centre de recherche et de développement sur le
bovin laitier et le porc, Agriculture et Agro-alimentaire Canada; 3 Université Laval, Dép. des
sciences animales, Faculté des sciences de l'agriculture et l'alimentation.; 4 FMV, Dép. de pathologie
et microbiologie, FMV, U d M; 5 Département de biomédecine vétérinaire, FMV, U d M.
16 h 15 — 16 h 30
17-Effets des promoteurs de croissance Tylosin et Virginiamycine administrés à des
porcs sur la résistance antimicrobienne de Enterococcus sp. et Escherichia
coli provenant de leur flore
Ulysse Desranleau Dandurand 1-2 , Sylvain Quessy 1-2 , Ed Topp, Ann Letellier 1-2
1 Chaire de recherche en salubrité des viandes, GREMIP, FMV, U d M, QC, Canada; 2 Groupe de
recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC,
Canada.

16 h 30 — 16 h 45
Page 11
18- Caractérisation phénotypique et génotypique d’isolats de Salmonella Typhimurium
provenant de porcs sains et malades
Nadia Bergeron 1 , Ann Letellier 1 , France Daigle 2 , Sylvain Quessy 1 .
1 Chaire de recherche en salubrité des viandes, GREMIP, FMV, U d M, QC, Canada.; 2 Dép.de
microbiologie et immunologie, Faculté de médecine, Université de Montréal, QC, Canada.
17 h — Cocktail à l’Hôtel des Seigneurs — Salle « Le Sommet »
18 h — Souper gastronomique à l’Hôtel des Seigneurs — Salle « Le Sommet »
Hôtel des Seigneurs
1200, rue Johnson
Saint-Hyacinthe, QC, J2S 7K7
Tél. (450) 774-3810
Mardi, le 29 mai 2007
SESSION 5 : VIROLOGIE — Président : Carl GAGNON
8 h 20 — 9 h
Conférencier invité : Michael MURTAUGH, University of Minnesota (États-Unis)
19-Host Response to PRRSV Infection
Michael Murtaugh1 , Craig Johnson1 , Josephine Gnandarajah1 , Juan Li1 Wanjin Yu1 , Scott
Dee1 , Patrick Halbur2 , Jeffrey Zimmerman2 , Michael Roof3 1University of Minnesota, St. Paul; 2Iowa State University, Ames; 3Boehringer Ingelheim
Vetmedica, Ames Iowa.
9 h — 9 h 15
20- The emergence of porcine circovirus 2b genotype (PCV-2b) in swine in Canada
Nedzad Music 1 , Donald Tremblay 1-2 , Josée Harel 1, M.-H. Venne, S. M. Elahi et
C. A. Gagnon 1
1Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP); 2 Service de diagnostic;
Faculté de médecine vétérinaire (FMV), Université de Montréal (U de M), Saint-Hyacinthe,
Québec, Canada.

Page 12
9 h 15 — 9 h 30
21- Comparison of serological and virological response of pigs against porcine
reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) with viremic serum or an
inoculum prepared on cell culture
Laura Batista1 , Sylvie D'Allaire1 , Josée Harel1 , C.A. Gagnon1 ,
Marcelo Gottschalk1 1GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire Université de Montréal (U d M), Saint-Hyacinthe, QC,
Canada.
9 h 30 — 9 h 45
22-Evaluation of commercial filters to avoid or reduce reproductive and respiratory
syndrome virus aerosol transmission
Laura Batista 1 , F. Pouliot 2 , R. Mondor 3
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada; 2 Centre de développement
du porc de Québec, Québec, QC, Canada; 3 Noveko, Lachine, Québec, QC, Canada
9 h 45 — 12 h: Pause-café et SESSION POSTERS
Salle 0451
12h00 — 13h00 Lunch
Aire de restauration, 1500 des Vétérinaires.
SESSION 6 : RÉSISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES, ALTERNATIVES
Présidente : Marie ARCHAMBAULT
13 h — 13 h 15
23-Study on bacitracin antimicrobial resistance of Clostridium perfringens and in vitro
evaluation of an alternative to antibiotics
Louis-Alexandre Jalbert 1 , Ann Letellier 1 , Sylvain Quessy 1 , Josée Harel 1 ,
Jean-Pierre Vaillancourt 2 , Martine Boulianne 2 et Marie Archambault 1 .
1 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses porcines (GREMIP), Faculté de médecine
vétérinaire, Université de Montréal; 2 Dép. des sciences cliniques, FMV, U d M.
13 h 15 — 13 h 30
24-Identification d’un inhibiteur peptidique de l’adhésine impliquée dans
l’adhérence diffuse
Victoria Girard, Frédéric Berthiaume, Manuel Campos et Michael Mourez
Chaire de recherche du canada, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal,
Saint-Hyacinthe, Québec, Canada et GREMIP, FMV, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.

13 h 30 — 13 h 45
Page 13
25-Le paradigme de la "fenêtre de sélection des mutants" explique les différences
de sélection de résistances à l'enrofloxacine chez les colibacilles fécaux du porc
Romain Béraud 5 , Dave Bernier 5, Ann Letellier 3-5 , Louis M. Huneault 1 ,
Lucie Dutil 4 , Richard Reid-Smith 4 , Jérôme R.E. del Castillo 2-5
1 U d M, Département de sciences cliniques, FMV; 2 U d M, Département de biomédecine
vétérinaire, FMV; 3 U d M, Département de pathologie et microbiologie, FMV; 4 Agence de
Santé Publique du Canada; 5 GREMIP, FMV, Saint-Hyacinthe, QC
SESSION 7 : Escherichia coli — Président : John M. FAIRBROTHER
13 h 45 — 14 h
26-Importance du transport des salmochélines et de l’entérobactine pour la virulence
d’Escherichia coli pathogène extra-intestinal
Mélissa Caza 1 , Sylvain Milot, François Lépine et Charles M. Dozois
INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, PQ, Canada et Groupe de recherche sur les maladies
infectieuses du porc (GREMIP), FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.
14 h — 14 h 15
27-Rôle du transporteur SitABCD pour la virulence d’Escherichia coli pathogène
extra-intestinal
Julie Proulx, Barbara Augustin, Annie Poirier et Charles M. Dozois
INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, PQ, Canada
14 h 15 — 14 h 30
28-Importance du transporteur de zinc ZnuABCD pour la virulence et la résistance au
stress oxydatif des souches d’Escherichia coli pathogènes extra-intestinales (ExPEC)
Mourad Sabri, Julie Proulx, Sébastien Houle et Charles M. Dozois
INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, PQ, Canada
14 h 30 — 14 h 45
29-Caractérisation du mécanisme moléculaire impliqué dans la variation de Phase de
l’adhésine fimbriaire F1651.
Richard Graveline 1 , Frédéric Berthiaume 1 , Michaël Mourez 1-2 , Christine Martin 3 et
Josée Harel 1
1 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP); 2 Chaire de recherche
du Canada, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC,
Canada; 3 INRA de Clermont-Ferrand-Theix, Laboratoire de microbiologie, France.

Page 14
14 h 45 — 15 h
30- Étude des relations structure-function d’une adhésine impliquée dans l’adhérence
diffuse (AIDA-I) chez Escherichia coli
Marie-Ève Charbonneau et Michaël Mourez
Chaire de recherche du Canada, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal,
Saint-Hyacinthe, QC, Canada et Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc
(GREMIP), FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.
15 h — 15 h 15
31-L’entérotoxine STb d’Escherichia coli perméabilise les vésicules de membrane à
bordure en brosse (VMBBs) des cellules de l’épithélium du jéjunum de porc
Carina Gonçalves 1 , V. Vachon 3 , J.-Louis Schwartz J.-L. 2 et J.D. Dubreuil 1
1 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP); 2 Faculté de médecine,
Dép. Physiologie; 3 Dép. de physique, U d M.
15 h 15 — 15 h 30 Pause-café
Salle 0451
SESSION 8 : ÉPIDÉMIOLOGIE, DIAGNOSTIC — Présidente: Josée HAREL
15 h 30 — 15 h 45
32- Application d'une biopuce à ADN spécifique d'Escherichia coli dans le diagnostic
et l'épidémiologie d'isolats cliniques
Guillaume Bruant 1 , Luke Masson 2 , Roland Brousseau 2 , A. Darfeuille-Michaud 3 , et
Josée Harel 1
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada; 2 Institut de recherche
en biotechnologie (IRB), Montréal, QC, Canada; 3 Université d'Auvergne, Clermont-Ferrand,
France.
15 h 45 — 16 h
33-Mise au point d’un test PCR en temps réel pour la différentiation entre les circovirus
porcin du génogroupe 2a et 2b (CVP-2a et CVP-2b) et utilisation de ce nouveau test
diagnostic dans une étude épidémiologique rétrospective
Nedzad Music 1 , Jérôme del Castillo 1-3 , Josée Harel 1 , Guy Fontaine 2 ,
Donald Tremblay 2 et Carl A. Gagnon 1
1 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP); 2 Service de diagnostic;
FMV, U d M; 3 Dép. de biomédecine, FMV, U d M.

16 h —16 h 15
Page 15
34-Use of serology on colostrum samples for monitoring Actinobacillus
pleuropneumoniae, Mycoplasma hyopneumoniae and porcine reproductive
and respiratory syndrome virus infections in sow herds
Laura Batista 1 , André Broes 2 , Robert Desrosiers 3 , Sonia Lacouture 1 ,Sylvie D’Allaire 1 ,
Marcelo Gottschalk 1
1 GREMIP, FMV, U d M, Saint- Hyacinthe, QC, Canada; 2 Biovet, Saint-Hyacinthe QC, Canada;
3 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Saint- Hyacinthe, QC, Canada
16 h 30
Remise des prix aux étudiants — Amphithéâtre 0448
17 h
Mot de de la fin et prochaine réunion annuelle du CRIP dans le cadre du
Colloque international francophone de microbiologie animale par
Dr Marcelo GOTTSCHALK, Directeur, GREMIP et CRIP

Page 16
SESSION 1 : FAMILLE DES PASTEURELLACEAE
PRÉSENTATIONS PAR AFFICHES
1-Studies of the interactions between Haemophilus parasuis and porcine epithelial
tracheal cells
Bénédicte Bouchet, Ghyslaine Vanier, Mario Jacques, Marcelo Gottschalk
Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), FMV, U d M, Saint-
Hyacinthe, Québec, Canada.
2-Comparative Genomics Profiling of Canadian Isolates of Actinobacillus
pleuropneumoniae
Julien Gouré 1 , Jacqueline W. Chung 3 , John N.E. Nash 2 ,Vincent Deslandes 1 ,
J.W. Coulton 3 et Mario Jacques 1
1 Groupe de recherché sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), FMV, U d M, Saint-
Hyacinthe, Québec, Canada, ; 2 Institute for Biological Sciences, National Research Council of
Canada, Ottawa, Ontario, Canada; 3 Department of Microbiology and Immunology, McGill
University, Montréal, Québec, Canada.
3-Transcriptional profiling in Actinobacillus pleuropneumoniae After co-cultivation and
Adherence to SJPL Cells
Vincent Deslandes 1 , Éliane Auger 1 , John H.E. Nash 2 , Josée Harel 1 , J.W. Coulton 3 et
Mario Jacques 1 .
1Groupe de recherché sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), FMV, U d M,
Saint-Hyacinthe, Québec, Canada, ; 2 Institute for Biological Sciences, National Research
Council of Canada, Ottawa, Ontario, Canada; 3 Department of Microbiology and Immunology,
McGill University, Montréal, Québec, Canada.
SESSION 2 : Streptococcus suis
4-Identification et caractérisation d’une nouvelle adhésine chez Streptococcus suis
Miriam Esgleas 1 , Yuanyi Li 1 , Ghyslaine Vanier 1 , Mark Hancock 2 , Josée Harel, 1
J. Daniel Dubreuil 1 et Marcelo Gottschalk 1 .
1 GREMIP, Département de pathologie et microbiologie, FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC, Canada
; 2 Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street, Montreal QC,
Canada.
5-Inactivation of the dltA gene impairs virulence of Streptococcus suis in the murine
model of infection
Nahuel Fittipaldi 1 , T. Sekizaki 2 , D. Takamatsu 2 , Josée Harel 1 , Maria de la Cruz Domínguez-
Punaro 1 , and Marcelo Gottschalk 1 .
1 GREMIP, FMV, Saint-Hyacinthe, QC; 2 National Institute of Animal Health, Tsukuba, Japan.

AFFICHES (suite)
SESSION 3 : IMMUNOLOGIE, VACCINOLOGIE
Page 17
6-Propriétés antibactériennes et anti-inflammatoires d’oligomères de chitosane
C. Bleau 1R. Savard1 , I. Boucher3 , S. Brunet1 et Lucie Lamontagne1 .
1Dép. Sciences Biologiques, Université du Québec à Montréal et 2DNP Canada Inc. Granby,
QC.
7-Étude des propriétés anti-inflammatoires des exopolysaccharides bactériens
lactiques
Auteurs : Lucie Lamontagne 1 , C. Bleau 1 et Marie-Rose Van Calsteren 2
1 Dép. Sciences Biologiques, Université du Québec à Montréal et 2 Agriculture et Agroalimentaire
Canada, St-Hyacinthe, QC, Canada.
8-Formulation de protéines végétales à des fins vaccinales par voie orale
Patrick De Koninck 1 , Denis Archambault 2 , Fathey Sarhan 2 et
Mircea Alexandre Mateescu 1
1 Université du Québec à Montréal, Département de Chimie; 2 Université du Québec à Montréal,
Département des Sciences Biologiques.
9-La vaccination génétique pour prévenir l’infection par Staphylococcus aureus ;
évaluation de trois nouveaux antigènes bactériens
Roseline Therrien 1 , Pierre Lacassse 2 , et Brian Talbot 1
1 Département de biologie, Université de Sherbrooke; 2 Agriculture et Agroalimentaire Canada.
10-Carboxyméthyl amidon comme excipient pour le transport et la libération des
bactéries d'Escherichia coli et des fimbriae F4 au niveau du tractus gastro-intestinal
C. Calinescu 1 , É. Nadeau 2 , J. Mulhbacher 1 , John M. Fairbrother 2 et
M.A. Mateescu 1
1 Département de Chimie et Centre BioMed, Université du Québec à Montréal, Montréal, QC,
Canada; 2 GREMIP, FMV, U d M.; Canada.
SESSION 4 : SALUBRITÉ DES VIANDES, SANTÉ PUBLIQUE
11- Étude fonctionnelle du fimbriae Saf de Salmonella enterica
C. Forest 1 et France Daigle1 1Département de microbiologie et immunologie, Faculté de médecine, Université de Montréal,
Montréal, QC, Canada.

Page 18
12-Intérêt des polymères à empreintes moléculaires pour le dépistage des résidus
médicamenteux dans les denrées d'origine animale
Hamza Zouaoui 1 , Sonia Lafleur 2 , Jean-Michel Rabanel 1 , Francis Beaudry 3 ,
Bich Van Le Thanh 4 , Daniel Scholl 4 , Akier Assanta Mafu 2 , Patrice Hildgen 1 ,
Jérôme R.E. del Castillo 3
1 Université de Montréal, Faculté de pharmacie; 2 Centre de recherche et développement sur
les aliments, Agriculture et Agro-alimentaire Canada; 3 Université de Montréal, Département
de biomédecine vétérinaire, FMV, U d M; 4 U d M, FMV, Département de pathologie et
microbiologie.
SESSION 5 : RÉSISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES ET ALTERNATIVES.
13- Évaluation de la réponse immunitaire suite à une infection à Escherichia coli
entérotoxinogène chez des porcelets traités avec des probiotiques
Jean-François Daudelin 1 , Martin Lessard 2 , Éric Nadeau 1 ,
F. Beaudoin 2 et John M. Fairbrother 1 .
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC; 2 Agriculture et agroalimentaire
Canada, Sherbrooke (Lennoxville).
14- Pharmacocinétique de l'absorption intestinale de l’amoxicilline orale chez le porc:
étude de stationnarité en rapport à la dose
Dave Bernier 1-5- , Romain Béraud 2-5- , Francis Beaudry 1 , Ann Letellier 3-5 ,
Candido Pomar 4 , Jérôme R.E. del Castillo 1-5
U d M, 1 Dép.de biomédecine vétérinaire, 2 Dép. de sciences cliniques et 3 Dép.de
pathologie et microbiologie, FMV, Ud M; 4 Centre de recherche et de développement sur le bovin
laitier et le porc, Agriculture et Agro-alimentaire Canada; 5 GREMIP, FMV, Saint-Hyacinthe,
QC, Canada.
15-Antimicrobial resistance of porcine Enterococcus faecium and Enterococcus
foaecalis from Quebec.
Cindy-Love Tremblay 1 , Ann Letellier 1 , Sylvain Quessy 1 , Josée Harel1,
D. Daigneault et Marie Archambault 1
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.
SESSION 6 : Escherichia coli
16-Développement d’un modèle de culture de cellules intestinales d’origine porcine
pour l’étude de l’interaction hôte-pathogène lors d’infections par les E. coli de
type attachant-effaçant
Brïte Pauchet, John M. Fairbrother et Éric Nadeau.
Laboratoire E. coli (EcL), FMV, U d M, Saint-Hyacinthe, QC, Canada, GREMIP, Faculté de médecine
vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.

Page 19
17-Membrane Perturbations Occur in Escherichia coli Phosphate Specific Transport (Pst)
Mutant Strains
Martin G. Lamarche 1 , Sang-Hyun Kim, Michaël Mourez 1-2 , Sébastien Crépin 1 ,
Nicolas Bertrand 1 , Russell E. Bishop, J. Daniel Dubreuil 1 et Josée Harel 1
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, 2 Chaire de recherche du Canada.
18-Global Gene Expression Profile in an Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC)
Pst Mutant
Sébastien Crépin, Martin G. Lamarche et Josée Harel
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.
19-Rôle de Paa dans la formation des lésions attachantes et effaçantes chez
Escherichia coli entéropathogènes
Élodie Destable 1 , Sébastien Leclerc 1 , Martin Lamarche 1 , Michael Mourez 1-2 et
Josée Harel 1
1 GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC et Centre de recherche en infectiologie
porcine (CRIP), FMV, U d M; 2 Chaire de recherche du Canada.
20- A surface plasmon resonance study of Escherichia coli STb toxin interaction with
its receptor
Carina Gonçalves1 , Frédéric Berthiaume -2 , Michaël Mourez1-2 et J. Daniel Dubreuil 1
1GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada; 2 Chaire de
recherche du Canada.
SESSION 7 : ÉPIDÉMIOLOGIE, DIAGNOSTIC
21-Comparison of different sampling sites and materials for detection of porcine
reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
Laura Batista1-3 , Sylvie D’Allaire 1-3 , Geneviève Remmers1 , Carl A. Gagnon2-3 ,
Josée Harel 2-3 et M. Gottschalk 2-3
1 U d M, FMV, Dép. des sciences, cliniques; 2 U d M, FMV, Dép. de pathologie et microbiologie; 3
U d M, FMV, 3GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.

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Présentation orale no. 1 — Dre Nina Baltes, Conférencière
Dr. Nina Baltes is an Assistant professor of molecular microbiology, University of
Veterinary Medicine Hannover, Germany. Currently working on autotransporter proteins of
Actinobacillus pleuropneumoniae and virulence factors of Haemophilus parasuis.
Use of an Actinobacillus pleuropneumoniae multiple mutant as a vaccine that allows
differentiation of vaccinated and infected animals
Alexander Maas * , Ilse D. Jacobsen ** Jochen Meens * , Nina Baltes *
and Gerald-F. Gerlach *
* Institute for Microbiology, Department of Infectious Diseases, University of Veterinary Medicine
Hannover, Germany
** Heinz Knöll Institute, Jena, Germany
Actinobacillus (A.) pleuropneumoniae is the causative agent of porcine pleuropneumonia
which leads to high economic losses in the swine industry worldwide. Eradication of the pathogen from
a herd is exceedingly difficult because the most commonly used bacterin vaccines do not provide
extensive cross-serotype protection, nor do they prevent colonization. In addition, the differentiation
between infected and vaccinated animals ("DIVA" concept) is a basic prerequisite for generating and
maintaining specified pathogen-free herds.
Following on the observation that pigs surviving natural infection are at least partially protected
from clinical symptoms upon reinfection with any serotype, we set out to construct an attenuated A.
pleuropneumoniae live vaccine allowing the differentiation of vaccinated from infected animals by
successively deleting virulence-associated genes.
From an A. pleuropneumoniae serotype 2 prototype live negative marker vaccine strain that
contains a deletion in the ApxII toxin gene (W. Tonpitak, N. Baltes, I. Hennig-Pauka, and G.-F. Gerlach,
Infect. Immun. 70:7120-7125, 2002), three genes encoding enzymes involved in anaerobic respiration, as
well as the ferric uptake regulator Fur were deleted, which resulted in a highly attenuated sixfold
mutant. This mutant was still able to colonize the lower respiratory tract and induced an immune
response which was detectable in an ELISA based on a detergent wash extract of membraneassociated
proteins.
Upon a single aerosol application, this mutant provided significant protection from clinical
symptoms upon heterologous infection with an antigenically distinct A. pleuropneumoniae serotype 9
challenge strain, and allowed the serological discrimination between infected and vaccinated groups
using an ELISA based on the ApxII toxin.
Since a practical application system is necessary for a potential future use of the vaccine in the
field, the protective efficacy of the 6-fold mutant upon single intramuscular or intranasal application
were also tested. The vaccine was shown to elicit protective immunity against challenge with A.
pleuropneumoniae serotype 7 through both application routes. While intranasal application caused no
adverse effects and still resulted in a highly protective immune response upon challenge with the
heterologous serotype strain, intramuscular application resulted in clinical symptoms and abscess
formation. Intranasal application may prove to be a suitable route for mass vaccinations of pigs against
A. pleuropneumoniae in the future.

Présentation orale no. 2
Page 21
Implication du LOS d’Haemophilus parasuis lors des interactions avec des cellules endothéliales
porcines de microvaisseaux cérébraux
B. Bouchet, , G. Vanier, M. Jacques, M. Gottschalk
Groupe de Recherche sur les maladies infectieuses du Porc (GREMIP)
Faculté de médecine vétérinaire,
Saint-Hyacinthe, QC
Haemophilus parasuis est un pathogène du porc causant la maladie de Glässer chez
les porcelets. Les animaux infectés présentent des signes cliniques de polysérosite
fibrineuse, de polyarthrite et de méningite. À ce jour, peu de facteurs de virulence ont
été décrits. De plus, la pathogenèse de l’infection causée par ce pathogène est
encore mal connue. Pour accéder au système nerveux central et causer la méningite,
H. parasuis pourrait traverser la barrière hémato-méningée (BHM). En effet, H. parasuis
est capable d’adhérer à et d’envahir des cellules endothéliales porcines de microvaisseaux
cérébraux (PBMEC) provenant de la BHM. Le but de cette étude était (a)
d’évaluer le rôle du lipooligosaccharide (LOS) de H. parasuis dans l’adhésion aux
PBMEC, (b) d’étudier la capacité de H. parasuis à activer les PBMEC, et (c) d’évaluer
le rôle du LOS dans cette activation. Les résultats ont démontré que l’adhésion de
H. parasuis aux PBMEC était en partie médiée par le LOS. En effet, le LOS purifié réduit
significativement l’adhésion du pathogène aux cellules. De plus, nous avons démontré
qu’H. parasuis était capable d’activer les cellules endothéliales, cette activation se
traduisant par la sécrétion d’interleukine-6 et d’interleukine-8. Le LOS de H. parasuis
était responsable d’une faible partie de cette activation. Différentes souches de
champ d’H. parasuis de sérotypes 4 et 5 (les sérotypes les plus prévalents en Amérique
du Nord) ont stimulé les PBMEC à produire ces médiateurs de l’inflammation à des niveaux
similaires. En général, les résultats suggèrent que le LOS de H. parasuis pourrait
jouer un certain rôle dans la pathogenèse de la méningite causée par ce pathogène,
tandis que d’autres composantes bactériennes pourraient également être impliquées
dans ce processus.

Page 22
Présentation orale no. 3
Hemoglobin binding protein from Actinobacillus pleuropneumoniae:
a novel method for extraction and isolation
, Mario Jacques ** , and James W. Coulton *
Dora Maria Skaf * , Mario Jacques ** , and James W. Coulton *
*Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street,
Montreal, QC, Canada H3A 2B4
** Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de
pathologie et microbiologie, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal,
Saint-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6.
Disease accounts for a multimillion dollar annual loss to the Canadian pork
industry. Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) is the etiological agent of a highly
contagious and devastating porcine disease designated pleuropneumonia. Currently
there is no vaccine that is consistently cross protective against all disease-associated
strains of this bacterium. An attractive candidate for cross protective vaccine design
is the conserved 105 kDa outer membrane hemoglobin binding protein (HgbA). HgbA
is expressed by all serotypes of APP, allowing it to overcome bacteriostatic and
bacteriocidal effects of the iron restricted environment in the host and thus
contributing to APP pathogenicity. Deletion of hgbA results in disease attenuation.
The requirement of HgbA for virulence and its exposure to the immune system at the
bacterial cell surface make HgbA an ideal vaccine target. Our objective was to
produce significant quantities of HgbA, purified to homogeneity. Recombinant HgbA
with an appended C-terminal 6xHis tag was over-expressed by IPTG induction of the
pET vector pRSC05 harboured by Escherichia coli BL21(DE3). Following cell lysis, total
membranes were isolated by high speed ultracentrifugation (100 000 x g), and
solubilized with 1% Sarkosyl, 150 mM NaCl, 50 mM Tris pH 7.5 at 4 oC. Sarkosyl-insoluble
fractions were obtained with high speed ultracentrifugation and re-solubilzed in the 1%
Sarkosyl solution at 70 o Disease accounts for a multimillion dollar annual loss to the Canadian pork
industry. Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) is the etiological agent of a highly
contagious and devastating porcine disease designated pleuropneumonia. Currently
there is no vaccine that is consistently cross protective against all disease-associated
strains of this bacterium. An attractive candidate for cross protective vaccine design
is the conserved 105 kDa outer membrane hemoglobin binding protein (HgbA). HgbA
is expressed by all serotypes of APP, allowing it to overcome bacteriostatic and
bacteriocidal effects of the iron restricted environment in the host and thus
contributing to APP pathogenicity. Deletion of hgbA results in disease attenuation.
The requirement of HgbA for virulence and its exposure to the immune system at the
bacterial cell surface make HgbA an ideal vaccine target. Our objective was to
produce significant quantities of HgbA, purified to homogeneity. Recombinant HgbA
with an appended C-terminal 6xHis tag was over-expressed by IPTG induction of the
pET vector pRSC05 harboured by Escherichia coli BL21(DE3). Following cell lysis, total
membranes were isolated by high speed ultracentrifugation (100 000 x g), and
solubilized with 1% Sarkosyl, 150 mM NaCl, 50 mM Tris pH 7.5 at 4
C. Following a third round of ultracentrifugation, HgbA was
markedly enriched in the soluble fraction. Structural integrity of isolated HgbA may be
assessed by its specificity for hemoglobin using a hemoglobin-agarose column. This
extraction protocol produces 5 mg HgbA/ litre of culture at a quality that is near
homogeneity even prior to column purification. Such high quality preparations of
HgbA are advantageous for vaccine studies as well as for structural studies.
oC. Sarkosyl-insoluble
fractions were obtained with high speed ultracentrifugation and re-solubilzed in the 1%
Sarkosyl solution at 70 oC. Following a third round of ultracentrifugation, HgbA was
markedly enriched in the soluble fraction. Structural integrity of isolated HgbA may be
assessed by its specificity for hemoglobin using a hemoglobin-agarose column. This
extraction protocol produces 5 mg HgbA/ litre of culture at a quality that is near
homogeneity even prior to column purification. Such high quality preparations of
HgbA are advantageous for vaccine studies as well as for structural studies.

Présentation orale no. 4
Page 23
Étude des interactions d' Actinobacillus pleuropneumoniae et d'autres
Pasteurellaceae avec des cellules épithéliales d'origine porcine
Eliane Auger*, *, Mahendrasingh Ramjeet*, Irazu Contreras**, Martin Olivier**,
Marcelo Gottschalk* et Mario Jacques*
* GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, St-Hyacinthe, QC
**Departement of Microbiology and Immunology, McGill University, Montréal, QC
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines,
notamment la lignée de cellules de trachée « Newborn Pig Trachea » (NPTr) et la lignée
de cellules de poumon « St. Jude Porcine Lung » (SJPL). Avec l’aide de ce modèle, nous
avons étudié les interactions hôte-pathogène de l’agent étiologique de la pleuropneumonie
porcine, Actinobacillus pleuropneumoniae, ainsi que d’autres Pasteurellaceae
comme Haemophilus parasuis, Actinobacillus suis et Pasteurella multocida. En premier
lieu nous avons examiné les propriétés d’adhérence et d’invasion de ces diverses
bactéries pathogènes du porc. Nous avons ensuite étudié la réponse cellulaire des
lignées épithéliales suite à une infection par A. pleuropneumoniae serotype 1 en évaluant
l’expression de facteurs de transcription, en quantifiant la production de cytokines
ainsi qu’en détectant des indicateurs d’apoptose. Nos résultats indiquent des différences
d’adhérence entre les souches ainsi qu’entre les lignées. La croissance
d’A. pleuropneumoniae sérotype 1 sous conditions restreinte en fer ou en NAD n’a pas
affecté l’adhérence, et ce aux deux lignées. En ce qui concerne l’invasion, la souche
d’A. pleuropneumoniae testée n’envahie pas les cellules dans notre modèle tandis que
les autres espèces de Pasteurellaceae testées ont démontré la capacité d’envahir ces
cellules. La détection de la production de cytokines pro-inflammatoires par les deux
lignées suite à une induction par des cellules A. pleuropneumoniae inactivées a
démontré une augmentation de la production de IL-8 par les cellules NPTr, mais aucune
production d’autres cytokines n’a été détectée pour les deux lignées, ceci malgré une
augmentation de l’expression du facteur de transcription NF-kB. A. pleuropneumoniae a
démontré être hautement cytotoxique mais n’induit pas l’apoptose des cellules épithéliales
SJPL et NPTr. Cette étude a permis d’augmenter notre compréhension de la
pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions
hôte-pathogène durant une infection par A. pleuropneumoniae. En plus, ces résultats
démontrent le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des
interactions hôte-pathogène de micro-organismes pathogènes des voies respiratoires du
porc.

Page 24
Présentation orale no. 5
Truncation of LPS Outer Core Affects Hemolytic and Cytotoxic Activities of
A. pleuropneumoniae serotype 1
Mahendrasingh Ramjeet, Marcelo Gottschalk and Mario Jacques
GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal,
3200 Sicotte, Saint-Hyacinthe, Québec, J2S 7C6 (m.ramjeet@umontreal.ca)
Actinobacillus pleuropneumoniae (App) is an important swine pathogen responsible for
economic losses in the industry, and its virulence is multifactorial. Here we focused our
interest on two main virulence factors, namely the lipopolysaccharides (LPS) and the
secreted hemolytic and cytotoxic RTX toxins (Apx toxins). We have previously
generated rough LPS and core LPS mutants of App serotype 1 by using a mini-Tn10
transposon mutagenesis system. Our previous studies using these LPS mutants has
demonstrated the contribution of the LPS core oligosaccharide in the resistance to
antimicrobial peptides, and the importance of specific regions of the LPS outer core in
the virulence of App. The main objective of this study was to evaluate the effect of LPS
sugar residues truncation on the hemolytic and cytotoxic activities of App serotype 1.
Our results showed that two core LPS mutants are less hemolytic and another core LPS
mutant is less cytotoxic than the wild type parent strain while a rough LPS mutant
exhibited wild type hemolytic and cytotoxic activities. Gene expression analysis of the
genes encoding the structural toxin and the type 1 secretion system of the Apx II toxin
was not affected in all the LPS mutants tested. However, immunoblot analysis of
bacterial culture supernatants and total cell lysates using a monospecific rabbit
polyclonal antibody against Apx II showed that the extracellular concentration of Apx II
was reduced in the two low hemolytic core LPS mutants which still exhibited a normal
intracellular production of the toxin. Finally, immunoprecipitation experiments using a
monoclonal antibody directed against the LPS O-antigen of App serotype 1 revealed a
physical interaction between LPS and the Apx II toxin in bacterial culture supernatants.
Altogether, these results suggest that interactions between Apx toxins and specific
sugar residues of the LPS outer core of App could play a role in the activity, and/or
stability, and/or secretion of the Apx toxins.

Prés entation oral e no. 6
Présentation orale no. 6
Page 25
Rôle déterminant du fibrinogène dans la formation du biofilm et la résistance
aux antibiotiques chez Streptococcus suis
Laetitia Bonifait 1 , Marie-Claude Jacques 1 , Louis Grignon 1 ,
Marcelo Gottschalk 2 et Daniel Grenier 1
1 Groupe de recherche en écologie buccale, Faculté de médecine dentaire,
Université Laval; 2 Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc,
Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal
Streptococcus suis est un important pathogène du porc causant notamment des méningites
et des endocardites. Lors de ces infections, la capacité d’adhérence des bactéries
à diverses surfaces de l’hôte représente une étape critique. Récemment, notre
laboratoire a démontré qu’un nombre limité de souches de S. suis avaient la capacité
de former un biofilm dans un modèle en microplaque. Dans ces structures organisées,
les bactéries peuvent acquérir de nouvelles propriétés comme celles de résister fortement
aux antibiotiques et aux attaques du système immunitaire. Le but de cette étude
était d’évaluer l’effet de diverses protéines de mammifères sur la formation du biofilm
par S. suis. L’ajout de fibrinogène (humain, porcin, bovin) au milieu de culture lors de la
croissance de S. suis a eu pour effet d’induire la formation d’un biofilm chez la majorité
des souches testées. L’intensité du biofilm formé s’est avérée dépendante de la quantité
de fibrinogène ajoutée. Des analyses en microscopie électronique à balayage ont
confirmé la formation du biofilm et révélé un arrangement dense et structuré des cellules
bactériennes. Ce phénomène d’induction du biofilm n’a pu être observé lorsque
d’autres protéines (plasminogène, mucine, albumine, g-globuline) ont été ajoutées au
milieu de culture. S. suis s’est avéré capable de lier à sa surface du fibrinogène marqué
à la fluorescéine, une propriété qui pourrait contribuer à la formation du biofilm.
La croissance de S. suis en présence de fibrinogène permettant la formation d’un
biofilm a eu pour effet d’augmenter significativement sa résistance à la pénicilline,
comparativement à une croissance sous forme planctonique en absence de fibrinogène.
Cette propriété de S. suis à se développer sous forme de biofilm en présence de
fibrinogène pourrait jouer un rôle significatif dans le processus infectieux et la résistance
aux antibiotiques.

Page 26
Présentation orale no. 7
Étude des Streptococcus interactions suis d' Actinobacillus induit la sécrétion pleuropneumoniae de cytokines pro-inflammatoires et d'autres Pasteurellaceae par des
cellules endothéliales avec des cellules porcines épithéliales de la barrière d'origine hémato-méningée
porcine
Eliane Auger*, G. VANIER*,**, Mahendrasingh M.-P. LECOURS*,**, Ramjeet*, M. SEGURA***, Irazu Contreras**, D. GRENIER*,**** Martin et M. Olivier**, GOTTSCHALK*,**.
Marcelo
Gottschalk* et Mario Jacques*
* Centre de recherche en infectiologie porcine (CRIP) ** Groupe de recherche sur les maladies
Infectieuses du porc (GREMIP), Faculté de médecine vétérinaire,
* GREMIP, Université Faculté de de Montréal, médecine Saint-Hyacinthe, vétérinaire, Qc, St-Hyacinthe, J2S 7C6.
QC
**Departement *** McGill of Microbiology University Health and Centre Immunology, Research Institute, McGill Montréal, University, Qc, Montréal, H3G 1A4.
QC
**** Groupe de Recherche en Écologie Buccale, Université Laval, Québec, Qc,G1K 7P4.
Nous En plus avons d’être standardisé considéré un comme modèle un in des vitro pathogènes d’adhérence porcins pour les l’étude plus importants de bactéries au
pathogènes monde, Streptococcus des voies respiratoires suis sérotype du 2 porc est en également utilisant deux un important lignées cellulaires agent zoopathogène
porcines, notamment
(spécialement la lignée en Asie) de cellules causant de majoritairement trachée « Newborn des méningites Pig Trachea et des » (NPTr) chocs et toxiques la lignée chez
de
cellules les personnes de poumon travaillant « St. Jude en contact Porcine étroit Lung avec » (SJPL). les porcs. Avec Les l’aide connaissances de ce modèle, sur les nous facteurs
avons
étudié de virulence les interactions bactériens hôte-pathogène et la pathogenèse de l’agent de l’infection étiologique demeurent de la limités. pleuropneumonie Il a été suggéré
porcine,
que les Actinobacillus souches européennes pleuropneumoniae, produisant la ainsi suilysine que d’autres (hémolysine) Pasteurellaceae seraient plus virulentes comme que
Haemophilus
les souches parasuis, nords-américaines Actinobacillus ne suis la et produisant Pasteurella pas. multocida. Comme c’est En premier le cas lieu pour nous d’autres
avons
examiné bactéries les causant propriétés la méningite, d’adhérence les mécanismes et d’invasion utilisés de ces par diverses ce pathogène bactéries pour pathogènes atteindre le
du
porc. système Nous nerveux avons central ensuite (SNC) étudié sont la réponse peu connus. cellulaire Cependant, des lignées l’inflammation épithéliales du suite SNC à semble
une infection
jouer un par rôle A. pleuropneumoniae important dans la pathogénèse serotype 1 en de évaluant l’infection. l’expression Parmi d’autres de facteurs mécanismes,
de transcription,
S. suis pourrait en quantifiant
traverser la
la production
barrière hémato-méningée de cytokines ainsi
(BHM) qu’en
et détectant
atteindre le des
SNC indicateurs
soit par
l’invasion transcellulaire directe des cellules formant la barrière ou par le passage
d’apoptose. Nos résultats indiquent des différences d’adhérence entre les souches ainsi
paracellulaire de la BHM perméabilisée. En fait, des études effectuées dans notre laboratoire
qu’entre les lignées. La croissance d’ A. pleuropneumoniae sérotype 1 sous conditions res-
ont démontré que S. suis est capable d’adhérer, d’envahir et d’endommager des cellules
treinte
endothéliales
en fer ou
porcines
en NAD
de
n’a
microvaisseaux
pas affecté
cérébraux
l’adhérence,
(PBMEC)
et ce
formant
aux deux
la BHM.
lignées.
En
En
plus
ce
des
qui
endothéliales porcines de microvaisseaux cérébraux (PBMEC) formant la BHM. En plus des
concerne
effets toxiques
l’invasion,
de la
la
suilysine,
souche d’
la
A.
perméabilité
pleuropneumoniae
de la BHM
testée
pourrait
n’envahie
être induite
pas les
par
cellules
effets toxiques de la suilysine, la perméabilité de la BHM pourrait être induite par des
dans
médiateurs notre modèle
de l’inflammation. tandis que
Le les
but autres
de cette espèces
étude de
était Pasteurellaceae
de déterminer testées
si S. suis ont
est démontré
capable
la
d’induire capacité
l’augmentation d’envahir ces
de la cellules.
sécrétion La
de détection
cytokines de
pro-inflammatoires la production de
et de cytokines
chimiokines
proinflammatoires
par les PBMEC. par Les les résultats deux lignées obtenus suite démontrent à une induction que, suite par à des leur cellules stimulation A. pleuropneumo-
avec S. suis
niae vivant, inactivées les PBMEC a sécrètent démontré la une cytokine augmentation pro-inflammatoire de la production IL-6 et la chimiokine de IL-8 par IL-8 les de cellules façon
NPTr, dépendante mais aucune du temps. production Cependant, d’autres même cytokines à des n’a concentrations été détectée élevées, pour les les deux bactéries
lignées,
ceci mortes malgré n'ont une stimulé augmentation que très faiblement de l’expression les PBMEC du à facteur produire de des transcription cytokines. Même NF-kB. si A. l’acide
pleuropneumoniae
lipotéichoique a (LTA) démontré purifié s’est être montré hautement un faible cytotoxique activateur, mais un n’induit extrait pas complet l’apoptose de paroi
des
cellules cellulaire épithéliales a clairement SJPL provoqué et NPTr. la Cette production étude des a permis deux cytokines. d’augmenter Tel qu’attendu, notre compréhension
la capsule
de polysaccharidique la pathogenèse de des S. espèces suis n’a de activé Pasteurellacea que très faiblement testées ainsi les que cellules des interactions à sécréter hôte- des
pathogène cytokines et durant a même une partiellement infection par interféré A. pleuropneumoniae. avec l’activité stimulatoire En plus, de ces la résultats paroi cellulaire.
démontrent
En utilisant le grand différentes potentiel souches de ces produisant lignées pour ou l’étude non la suilysine, de la pathogenèse la suilysine purifiée, et des interactions
un mutant
hôte-pathogène isogénique ne la de produisant micro-organismes pas et du pathogènes cholestérol des (un voies inhibiteur respiratoires de suilysine), du porc. nous avons
démontré que cette toxine est un puissant inducteur de cytokines. Globalement, ces résultats
suggèrent que S. suis, plus particulièrement les souches produisant la suilysine, a la capacité
d’induire la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires par les PBMEC, contribuant ainsi à
l’inflammation locale au SNC et à la pathogénèse de la méningite.

Présentation orale no. 8
Page 27
Étude L’inactivation des interactions du gène d' pgdA Actinobacillus réduit la virulence pleuropneumoniae de Streptococcus et d'autres suis Pasteurellaceae
chez la souris.
avec des cellules épithéliales d'origine porcine
Fittipaldi, N.* T. Sekizaki, ** D. Takamatsu**, J. Harel*,
Eliane Auger*, Mahendrasingh M.C. Dominguez-Punaro Ramjeet*, Irazu *and Contreras**, M. Gottschalk*
Martin Olivier**, Marcelo
Gottschalk* et Mario Jacques*
*Centre de recherche en infectiologie porcine, Faculté de médecine vétérinaire,
* GREMIP, Université Faculté de Montréal, de médecine Saint-Hyacinthe, vétérinaire, QC, St-Hyacinthe, Canada,
QC
**Departement **National of Microbiology Institute and of Animal Immunology, Health, McGill Tsukuba, University, Japan.
Montréal, QC
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, notamment
Streptococcus la lignée de cellules suis est un de pathogène trachée « Newborn majeur du Pig porc Trachea et un » (NPTr) agent et de la zoonose.
lignée de
cellules Chez le de porc poumon et « l’humain St. Jude Porcine il cause, Lung entre » (SJPL). autres Avec maladies, l’aide de ce la modèle, méningite nous et avons la
étudié septicémie. les interactions La pathogénèse hôte-pathogène de l’infection de l’agent à S. étiologique suis demeure de la mal pleuropneumonie connue. En effet,
porcine,
peu Actinobacillus des facteurs de pleuropneumoniae, virulence proposés ainsi se sont que avérés d’autres essentiels Pasteurellaceae pour la virulence comme Hae- de
mophilus cette bactérie. parasuis, Tout Actinobacillus récemment, suis nous et Pasteurella avons montré multocida. que le gène En premier pgdA, lieu codant nous pour
avons
examiné une N-acetylglucosamine les propriétés d’adhérence déacétylase et d’invasion du de ces peptidoglycane diverses bactéries putative pathogènes est
du
porc. préférentiellement Nous avons ensuite exprimé étudié par la réponse S. suis cellulaire lors de ses des interactions lignées épithéliales avec suite les cellules
à une infection
endothéliales par A. pleuropneumoniae de microvaisseaux serotype cérébraux. 1 en évaluant Notre objectif l’expression dans de cette facteurs étude de était
transcription,
d’étudier en davantage quantifiant la production contribution de de cytokines ce gène ainsi dans qu’en la virulence détectant de des S. suis. indicateurs Nous
d’apoptose. avons construit Nos par résultats échange indiquent allélique des différences un mutant d’adhérence ΔpgdA chez entre la souche les souches virulente
ainsi
qu’entre 31533. La les virulence lignées. La de croissance la souche d’ mutante A. pleuropneumoniae résultante a sérotype été évaluée 1 sous en conditions utilisant un
restreinte
modèle en d’infection fer ou en NAD chez n’a la souris. pas affecté Deux groupes l’adhérence, de 15 et souris ce aux CD1 deux chacun lignées. ont été En été ce ino-
qui
concerne culés avec l’invasion, la souche la souche parentale d’ A. pleuropneumoniae (WT) ou la testée souche n’envahie mutante pas les ΔpgdA,
cellules
dans respectivement. notre modèle Les tandis animaux que les du autres groupe espèces WT ont de montre Pasteurellaceae des signes testées clinique ont sévères démontré et
la unemortalité capacité d’envahir élevée (12 ces animaux cellules. La sont détection morts, de dont la 5 production ont présenté de cytokines des signes
proinflammatoires
cliniques caractéristiques par les deux lignées
de la méningite). suite à une induction
En revanche, par des
toutes cellules
les souris A. pleuropneumo-
ayant été
niae
inoculées inactivées
avec a
le démontré
mutant ΔpgdA une augmentation
ont survécu jusqu’à de la production
la fin de l’étude de IL-8
et par
n’ont les cellules
mon-
NPTr,
tré que
mais
des
aucune
signes
production
cliniques mineurs
d’autres
pendant
cytokines
les
n’a
72
été
heures
détectée
qui ont
pour
suivi
les
l’inoculation
deux lignées,
tré que des signes cliniques mineurs pendant les 72 heures qui ont suivi l’inoculation
ceci malgré une augmentation de l’expression du facteur de transcription NF-kB. A. pleu-
expérimentale. Le gène pgdA, de par son rôle putatif dans la modification de la
ropneumoniae a démontré être hautement cytotoxique mais n’induit pas l’apoptose des
paroi bactérienne semble contribuer à la virulence de S. suis.
cellules épithéliales SJPL et NPTr. Cette étude a permis d’augmenter notre compréhension
de la pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôtepathogène
durant une infection par A. pleuropneumoniae. En plus, ces résultats démontrent
le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
hôte-pathogène de micro-organismes pathogènes des voies respiratoires du porc.

Page 28
Présentation orale no. 9
Étude des interactions Identification d' Actinobacillus et caractérisation pleuropneumoniae d’une nouvelle et d'autres adhésine Pasteurellaceae
avec des cellules chez Streptococcus épithéliales d'origine suis porcine
Eliane Auger*, Mahendrasingh Ramjeet*, Irazu Contreras**, Martin Olivier**, Marcelo
*,** , Y. Gottschalk* LI * , G. VANIER*, et Mario M. HANCOCK Jacques* M. *** , J. HAREL* , **
J.D. DUBREUIL
* GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, St-Hyacinthe, QC
**Departement of Microbiology and Immunology, McGill University, Montréal, QC
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, notamment
la lignée de cellules de trachée « Newborn Pig Trachea » (NPTr) et la lignée de
cellules de poumon « St. Jude Porcine Lung » (SJPL). Avec l’aide de ce modèle, nous avons
étudié les interactions hôte-pathogène de l’agent étiologique de la pleuropneumonie porcine,
Actinobacillus pleuropneumoniae, ainsi que d’autres Pasteurellaceae comme Haemophilus
parasuis, Actinobacillus suis et Pasteurella multocida. En premier lieu nous avons
examiné les propriétés d’adhérence et d’invasion de ces diverses bactéries pathogènes du
porc. Nous avons ensuite étudié la réponse cellulaire des lignées épithéliales suite à une infection
par A. pleuropneumoniae serotype 1 en évaluant l’expression de facteurs de transcription,
en quantifiant la production de cytokines ainsi qu’en détectant des indicateurs
d’apoptose. Nos résultats indiquent des différences d’adhérence entre les souches ainsi
qu’entre les lignées. La croissance d’ A. pleuropneumoniae sérotype 1 sous conditions restreinte
en fer ou en NAD n’a pas affecté l’adhérence, et ce aux deux lignées. En ce qui
concerne l’invasion, la souche d’ A. pleuropneumoniae testée n’envahie pas les cellules
dans notre modèle tandis que les autres espèces de Pasteurellaceae testées ont démontré
la capacité d’envahir ces cellules. La détection de la production de cytokines proinflammatoires
par les deux lignées suite à une induction par des cellules A. pleuropneumoniae
inactivées a démontré une augmentation de la production de IL-8 par les cellules
NPTr, mais aucune production d’autres cytokines n’a été détectée pour les deux lignées,
ceci malgré une augmentation de l’expression du facteur de transcription NF-kB. A. pleuropneumoniae
a démontré être hautement cytotoxique mais n’induit pas l’apoptose des
cellules épithéliales SJPL et NPTr. Cette étude a permis d’augmenter notre compréhension
de la pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôtepathogène
durant une infection par A. pleuropneumoniae. En plus, ces résultats démontrent
le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
hôte-pathogène de micro-organismes pathogènes des voies respiratoires du porc.
*,** et M. GOTTSCHALK *,**
* Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc (GREMIP) and ** Centre
de Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP), Faculté de Médecine Vétérinaire, Université
de Montréal, Saint-Hyacinthe, Qc, Canada
*** ESGLEAS M.
Sheldon Biotechnology Center, McGill University, Montréal, Qc, Canada
Streptococcus suis est une importante bactérie pathogène chez le porc causant
principalement la septicémie, la méningite, l'endocardite et l'arthrite.
Des 35 sérotypes connus, le sérotype 2 est le plus fréquemment associé à la maladie.
S. suis est un pathogène extracellulaire qui peut adhérer à certaines composantes
de la matrice extracellulaire tel que la fibronectine (Fn). L'objectif de cette étude
était de caractériser des adhésines de S. suis impliquées dans l'adhérence des bactéries
à la Fn en utilisant la souche fortement virulente SS166 de sérotype 2. Les
protéines liant la Fn ont été purifiées à l’aide d’une colonne d'affinité. Le séquençage
a permis d’identifier une protéine majeure de 52 kDa liant la Fn comme étant
une a-énolase (SsEno). Les énolases bactériennes sont bien connues pour leur capacité
de liaison au plasminogène (Plg). Pour adhérer à des protéines de l’hôte, la SsEno
doit être exprimée à la surface de la bactérie. La présence en surface de cette
protéine a été confirmée par microscopie électronique. L’adhérence de SsEno à la
Fn et au Plg a été corroborée par la technique de Résonance plasmonique de surface.
Des études in vitro d’adhésion et d’invasion de S. suis à des cellules endothéliales
de microvaisseaux cérébraux de porc ont démontré que cette protéine participe
à l’adhésion et l’invasion de S. suis de ces cellules. SsEno s'est aussi avérée fortement
immunogène et des anticorps contre SsEno ont été détectés chez des porcs
convalescents. De plus, des anticorps mono-spécifiques contre cette protéine ont
augmenté l’effet bactéricide de neutrophiles porcins sur S. suis. Ces nouvelles
découvertes semblent indiquer que SsEno pourrait s’avérer un important facteur de
virulence chez S. suis.
*,** , Y. LI * , G. VANIER*, M. HANCOCK M. *** , J. HAREL* , **
J.D. DUBREUIL *,** et M. GOTTSCHALK *,**
* Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc (GREMIP) and ** Centre
de Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP), Faculté de Médecine Vétérinaire, Université
de Montréal, Saint-Hyacinthe, Qc, Canada
*** Sheldon Biotechnology Center, McGill University, Montréal, Qc, Canada
Streptococcus suis est une importante bactérie pathogène chez le porc causant
principalement la septicémie, la méningite, l'endocardite et l'arthrite.
Des 35 sérotypes connus, le sérotype 2 est le plus fréquemment associé à la maladie.
S. suis est un pathogène extracellulaire qui peut adhérer à certaines composantes
de la matrice extracellulaire tel que la fibronectine (Fn). L'objectif de cette étude
était de caractériser des adhésines de S. suis impliquées dans l'adhérence des bactéries
à la Fn en utilisant la souche fortement virulente SS166 de sérotype 2. Les
protéines liant la Fn ont été purifiées à l’aide d’une colonne d'affinité. Le séquençage
a permis d’identifier une protéine majeure de 52 kDa liant la Fn comme étant
une a-énolase (SsEno). Les énolases bactériennes sont bien connues pour leur capacité
de liaison au plasminogène (Plg). Pour adhérer à des protéines de l’hôte, la SsEno
doit être exprimée à la surface de la bactérie. La présence en surface de cette
protéine a été confirmée par microscopie électronique. L’adhérence de SsEno à la
Fn et au Plg a été corroborée par la technique de Résonance plasmonique de surface.
Des études in vitro d’adhésion et d’invasion de S. suis à des cellules endothéliales
de microvaisseaux cérébraux de porc ont démontré que cette protéine participe
à l’adhésion et l’invasion de S. suis de ces cellules. SsEno s'est aussi avérée fortement
immunogène et des anticorps contre SsEno ont été détectés chez des porcs
convalescents. De plus, des anticorps mono-spécifiques contre cette protéine ont
augmenté l’effet bactéricide de neutrophiles porcins sur S. suis. Ces nouvelles
découvertes semblent indiquer que SsEno pourrait s’avérer un important facteur de
virulence chez S. suis.

Page 29
Présentation orale no. 10, Dre Isabelle Oswald, Conférencière
Dr. Isabelle Oswald is currently Director of Research and Senior Investigator at INRA Toulouse
(France). A particular emphasis of her work deals with the influence of diet, especially its
contamination with mycotoxins, on the immune response of piglets and their effect on intestinal
epithelial cells and phagocytes.
Effets de contaminants alimentaires, les mycotoxines, sur la réponse immunitaire
du porc et sa sensibilité aux infections
Isabelle Oswald. INRA UR66, Laboratoire de Pharmacologie-Toxicologie,
180 chemin de Tournefeuille, 31931 Toulouse cedex
Isabelle.Oswald@toulouse.inra.fr
La qualité sanitaire des aliments est une préoccupation majeure partout dans le monde. Dans
ce cadre, il faut se pencher sur la possible contamination de l'alimentation destinée à l'homme ou à
l'animal par des champignons et le risque associé de la présence de mycotoxines. Les mycotoxines sont
des métabolites secondaires produits par les champignons, en particulier ceux des genres Aspergillus,
Fusarium et Penicillium. Les mycotoxines sont des contaminants relativement communs des céréales. En
effet, des enquêtes générales estiment que 25 % des récoltes mondiales sont contaminées par des mycotoxines.
De plus, la majorité des mycotoxines ne sont pas dégradées par la chaleur et restent présentes
même après la disparition des champignons. Les mycotoxines présentent un large spectre d'effets
toxiques. La consommation de faibles quantités de mycotoxines peut altérer les réponses immunitaires.
La sensibilité du système immunitaire à cette immunosuppression provient de la vulnérabilité des cellules
impliquées. En effet, les cellules immunitaires sont en renouvellement continuel et régulent un réseau
complexe de communication entre des composants cellulaires et humoraux. Par son alimentation riche
en céréales, le porc est exposé aux mycotoxines. Nous avons étudié les effets de l'ingestion de deux mycotoxines
sur la réponse immunitaire des porcelets. La fumonisine B1 (FB1) est une mycotoxine susceptible
de contaminer le maïs tandis que le déoxynivalenol (DON) se retrouve à la fois dans les céréales à
paille (blé, orge, seigle) et dans le maïs. L'ingestion de faibles doses de FB1, augmente la colonisation
intestinale chez des porcelets infectés oralement par une souche pathogène opportuniste d'Escherichia
coli. L'épithélium digestif étant la première barrière cellulaire exposée lors d'une ingestion de mycotoxine,
l'effet de la FB1 sur les cellules épithéliales intestinales ont été déterminées. La FB1 provoque (i)
une altération de la fonction barrière de l'épithélium, (ii) une diminution de la production d'IL-8, une cytokine
intervenant dans le recrutement cellulaire ce qui pourrait expliquer la colonisation intestinale accrue
et la translocation bactérienne vers les organes extra-intestinaux. De même, l'ingestion de FB1 diminue
la réponse anticorps lors d'une vaccination. In vitro cette toxine inhibe la prolifération lymphocytaire
et diminue la synthèse d'IL-4, une cytokine impliquée dans la réponse humorale. Les effets du DON sur la
réponse vaccinale du porc ont également été étudiés. Le DON modifie la réponse immunitaire humorale
et cellulaire des porcs. En effet, l'ingestion de toxine affecte de façon biphasique la capacité des
lymphocytes à proliférer lors d'une stimulation antigénique (augmentation précoce et inhibition tardive).
L'ingestion de toxine augmente également la concentration sérique totale et spécifique en immunoglobulines
des classes A et G. Le DON présente également une toxicité intestinale (diminution de la fonction
de barrière via une altération des protéines de jonction serrées) et nous cherchons à corréler cette
observation réalisée in vitro avec des données in vivo.
En conclusion, les mycotoxines peuvent altérer la réponse immunitaire avec pour conséquences
chez le porc une augmentation de la sensibilité aux infections et une modification de la réponse
vaccinale.

Page 30
Présentation orale no. 11
Étude Proteomic des interactions analysis of d' outer Actinobacillus membrane pleuropneumoniae proteins of Actinobacillus et d'autres pleuropneumoniae:
Pasteurellaceae
identification avec of immunogenic des cellules épithéliales candidates d'origine for vaccine porcine development.
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh *, Christopher Ramjeet*, Ng-Thow-Hing Irazu *, Contreras**, Bernard F. Gibbs Martin **, Olivier**, John H.E. Marcelo Nash ***,
Mario Gottschalk* Jacques ****, et Mario James Jacques* W. Coulton *
* Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street,
* GREMIP, Faculté Montreal, de médecine QC, Canada vétérinaire, H3A 2B4
St-Hyacinthe, QC
**Departement ** Sheldon Biotechnology of Microbiology Center, and McGill Immunology, University, 3773 McGill University University, Street, Montréal, Montreal QC,
QC
Canada H3A 3B4
*** Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive,
Nous avons standardisé Ottawa, un modèle ON, in Canada vitro d’adhérence K1A 0R6
pour l’étude de bactéries
pathogènes **** Groupe des de recherche voies respiratoires sur les maladies du porc infectieuses en utilisant du deux porc, lignées Département cellulaires de porcines, pathologie
notamment
et microbiologie, la lignée Faculté de cellules de médecine de trachée vétérinaire, « Newborn Université Pig Trachea de Montréal, » (NPTr) St-Hyacinthe, et la lignée QC,
de
cellules de poumon « St. Jude Porcine Canada Lung » (SJPL). J2S 7C6
Avec l’aide de ce modèle, nous avons
étudié les interactions hôte-pathogène de l’agent étiologique de la pleuropneumonie por-
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae
cine, Actinobacillus pleuropneumoniae, ainsi que d’autres Pasteurellaceae comme Haemophilus
(APP) causes parasuis,
porcine
Actinobacillus suis et Pasteurella multocida. En premier lieu nous avons
examiné pneumonia, les propriétés a highly d’adhérence infectious et respiratory d’invasion de disease ces diverses that bactéries contributes pathogènes to major
du
porc. economic Nous avons losses ensuite in the swine étudié industry. la réponse With cellulaire pressures des to lignées reduce épithéliales the use of suite antibiotics
à une infection
in agricultural par A. pleuropneumoniae livestock, vaccination serotype against 1 en bacterial évaluant l’expression pathogens de has facteurs emerged de as trans- a
cription, safer and en quantifiant more cost-effective la production approach de cytokines for disease ainsi qu’en control. détectant Current des indicateurs vaccines
d’apoptose. against APP Nos provide résultats only indiquent partial protection, des différences have d’adhérence little impact entre on morbidity, les souches or are
ainsi
qu’entre serotype-specific. les lignées. La Therefore croissance an d’ effective A. pleuropneumoniae vaccine offering sérotype cross-protection 1 sous conditions against
restreinte
different en fer serotypes ou en NAD of APP n’a pas is urgently affecté needed. l’adhérence, Outer et ce membrane aux deux lignées. (OM) proteins,
En ce qui
concerne localized l’invasion, at the bacterial la souche cell d’ surface, A. pleuropneumoniae are attractive testée vaccine n’envahie candidates pas les because
cellules
dans they notre are exposed modèle tandis as targets que les to autres the immune espèces system de Pasteurellaceae and play key testées roles ont in infection.
démontré
la Using capacité the genome d’envahir sequence ces cellules. of APP La serotype détection 5b, de we la scanned production in silico de cytokines for proteins
proinflammatoires
predicted to be par localized les deux lignées at the cell suite surface à une induction and constructed par des cellules a consensus A. pleuropneumo-
prediction
niae list of inactivées 93 OM proteins. a démontré We une previously augmentation described de proteomic la production analyses de IL-8 utilizing par les 1D cellules gel
NPTr, electrophoresis, mais aucune followed production by identification d’autres cytokines with n’a LC-MS/MS. été détectée The outcome pour les deux established
lignées,
ceci the malgré first OM une proteome augmentation of APP de grown l’expression under nutrient-rich du facteur de conditions. transcription We NF-kB. identified A. pleu- 47
ropneumoniae OM proteins representing a démontré être 50% hautement of the predicted cytotoxique OM proteome, mais n’induit most pas of l’apoptose which have
des
cellules not been épithéliales characterized. SJPL et NPTr. We Cette now étude describe a permis differences d’augmenter in OM notre protein compréhension profiles
de
between la pathogenèse
APP grown des espèces
under nutrient de Pasteurellacea
rich conditions testées
and ainsi
under que des
nutrient interactions
deprived
hôtepathogène
conditions durant
that resemble une infection
those par
in A.
vivo: pleuropneumoniae.
iron-restriction; growth-factor En plus, ces résultats
nicotinamide
démontrent
adenine
le grand
dinucleotide-restriction.
potentiel de ces lignées
Furthermore,
pour l’étude
we
de la
detected
pathogenèse
immunoreactive
et des interactions
adenine dinucleotide-restriction. Furthermore, we detected immunoreactive OM
hôte-pathogène de micro-organismes pathogènes des voies respiratoires du porc.
proteins by immunoblot analyses of 1D and 2D gels probed with post-convalescent
sera from infected animals. These studies direct our selection of potential vaccine
candidates for APP that are immunogenic and are expressed under conditions that
reflect infection in the porcine host.

Présentation orale no. 12
,
Page 31
Étude des interactions Streptococcus d' Actinobacillus suis serotype pleuropneumoniae 2 inflammation and et d'autres pathology: Pasteurellaceae
avec Recent des cellules clues on épithéliales the recognizing d'origine receptors porcine
DOMINGUEZ-PUNARO, M. C.*, .*, R. GRAVELINE*, M. SEGURA**, S. RIVEST***,
Eliane Auger*, Mahendrasingh D. RADZIOCH** Ramjeet*, et Irazu M. GOTTSCHALK*
Contreras**, Martin Olivier**, Marcelo
Gottschalk* et Mario Jacques*
*Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP) and Centre de recherche en
infectiologie porcine, Faculté de médecine vétérinaire,
* GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, St-Hyacinthe, QC
Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada
**Departement of Microbiology **Centre for and the Immunology, Study of Host Resistance,
McGill University, Montréal, QC
McGill University Health Centre Research Institute, Montréal, QC, Canada
***Laboratory of Molecular Endocrinology,
Nous avons standardisé Centre Hospitalier un modèle de l’Université in vitro Laval, d’adhérence Québec, QC, pour Canada.
l’étude de bactéries
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, notamment
Streptococcus la lignée suis de serotype cellules 2 de is trachée an important « Newborn swine Pig pathogen Trachea » responsible (NPTr) et la for lignée diverse
de
cellules infections, de poumon being meningitis « St. Jude its Porcine most striking Lung » (SJPL). feature. Avec Besides, l’aide it de is ce an modèle, emerging nous agent avons of
étudié zoonosis, les interactions mainly responsible hôte-pathogène for cases de of l’agent meningitis étiologique and toxic-shock de la pleuropneumonie like syndrome por- in
cine, people Actinobacillus working with pleuropneumoniae, pigs or pork-derived ainsi products. que d’autres Research Pasteurellaceae concerning comme the innate
Haemophilus
immune parasuis, response Actinobacillus associated to suis this et pathogen Pasteurella still multocida. represents En a premier challenge, lieu and nous special
avons
examiné attention les has propriétés been paid d’adhérence to the in vitro et expression d’invasion de of pro-inflammatory ces diverses bactéries cytokines pathogènes by human,
du
porc. mouse Nous and avons swine ensuite cells. Unfortunately, étudié la réponse so far, cellulaire few efforts des lignées had been épithéliales made to suite establish à une the
infection
participation par A. pleuropneumoniae of different receptors, serotype such 1 as en CD14 évaluant and l’expression Toll-like receptors de facteurs (TLR), de in trans- the
cription, recognition en quantifiant of S. suis. Therefore, la production we conducted de cytokines in vitro ainsi and qu’en in vivo détectant studies to des evaluate indicateurs the
d’apoptose. involvement Nos TLR2 résultats in the inflammatory indiquent des response différences induced d’adhérence by S. suis. In entre the les first souches set of in ainsi vitro
qu’entre experiments les lignées. with human La croissance monocytes, d’ A. we pleuropneumoniae determined by sérotype means of 1 sous RT-PCR conditions that whole
restreinte
encapsulated en fer ou S. en suis NAD or n’a its pas purified affecté cell l’adhérence, components et up-regulate ce aux deux the lignées. relative En ce mRNA
qui
concerne expression l’invasion, of TLR2 and la souche CD14, but d’ not A. pleuropneumoniae TLR4. Moreover, this testée stimulation n’envahie triggered pas the les cellules release
dans of TNF-α, notre IL-1ß, modèle IL-6 tandis and IL-8, que which les autres was espèces significantly de Pasteurellaceae reduced by antibody-mediated testées ont démontré bloc-
la king capacité of TLR2/CD14 d’envahir but not ces TLR4. cellules. Mouse La macrophages détection de deficient la production in TLR2 also de showed cytokines impaiproinflammatoiresred
cytokine responses par les deux to encapsulated lignées suite à bacteria. une induction Given par that des this cellules response A. was pleuropneumo-
completely
niae abrogated inactivées MyD88-deficient a démontré une macrophages, augmentation other de TLRs la production might also be de involved. IL-8 par les To cellules further
NPTr, evaluate mais in aucune vivo the production role of TLR2 d’autres in S. suis-mediated cytokines n’a local été inflammation détectée pour at les the deux central lignées, ner-
ceci vous malgré system, une an experimental augmentation model de l’expression of meningitis du in facteur CD1 mice de transcription was developed. NF-kB. In A. situ pleuhyropneumoniaebridization combined a démontré with être immunocytochemistry hautement cytotoxique studies mais performed n’induit at pas CNS l’apoptose of infected
des
cellules mice showed épithéliales a significant SJPL et NPTr. increase Cette in the étude transcription a permis d’augmenter of TLR2 at the notre brain compréhension
cortex. This was
de followed la pathogenèse by the expression des espèces of CD14, de Pasteurellacea IL-1β, MCP-1 testées and TNF-α ainsi genes que des from interactions microglial hôte- cells
pathogène and in lesser durant extent une from infection astrocytes. par These A. pleuropneumoniae. signals reached the En choroid plus, ces plexus, résultats corpus démoncaltrentlosum, le grand hippocampus, potentiel thalamus de ces lignées and hypothalamus. pour l’étude de There la pathogenèse was a strong activation et des interactions of NF-κB
hôte-pathogène as indicated by de transcriptional micro-organismes activation pathogènes of IκBα des as voies a reporter respiratoires system du in porc. the structures
already mentioned, but also in blood vessels. Altogether these data indicate the important
role of TLR2 in the initiation of the inflammatory response induced by
S. suis infection, that would lead to a later participation of other molecules associated to
the innate immune response. The better understanding of the events underlying the proinflammatory
response is essential to further characterize the pathogenesis of infection of
S. suis.

Page 32
Présentation orale no. 13
Étude Proteomic des interactions analysis Cinétique of d' outer de Actinobacillus la membrane réponse cytokinaire pleuropneumoniae proteins of lors Actinobacillus d'infection et d'autres aux pleuropneumoniae:
E. Pasteurellaceae
coli
identification causant des avec of lésions immunogenic des cellules de type épithéliales attachant candidates et d'origine for effaçant vaccine porcine dans development.
un modèle
de culture d’iléon (IVOC) d’origine porcine.
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh (1), Christopher Ramjeet*, Ng-Thow-Hing Irazu (1), Bernard Contreras**, F. Gibbs Martin (2), John Olivier**, H.E. Nash Marcelo (3), Mario
Jacques Gottschalk* (4), and et James Mario W. Jacques* Coulton (1)
Dubois Maurice Junior, , John M. Fairbrother et Éric Nadeau
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
(2) Sheldon * GREMIP, Biotechnology Faculté Center, de McGill médecine University, 3773 vétérinaire, University Street, St-Hyacinthe, Montreal QC, Canada QC H3A 3B4
(3) **Departement Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive, Ottawa, ON, Canada K1A 0R6
(4) Groupe Porc de (GREMIP), of Microbiology
recherche sur Faculté les maladies de infectieuses médecine and Immunology,
du porc, vétérinaire, McGill
Département de Université University, Montréal, QC
pathologie et de microbiologie, Montréal,
Faculté de
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
Laboratoire de référence EcL, Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du
St-Hyacinthe, QC, Canada.
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
The Les Gram-negative E. coli induisant bacterial des pathogen lésions Actinobacillus de type attachant pleuropneumoniae et effaçant (APP) (AEEC) causes porcine sont une cause
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, no-
importante d’épidémies de diarrhées à travers le monde. Le groupe des AEEC comprend entamment
pneumonia, la a highly lignée infectious de cellules respiratory de disease trachée that « contributes Newborn to Pig major Trachea economic » (NPTr) losses in et the la swine lignée industry. de
tres autres les E. coli productrices de toxine Shiga, dont le sérotype O157:H7, responsables de
cellules de poumon « St. Jude Porcine Lung » (SJPL). Avec l’aide de ce modèle, nous avons
With zoonoses pressures et to de reduce toxi-infections the use of antibiotics alimentaires in agricultural communément livestock, vaccination appelées against « maladie bacterial pathogens du hambur-
has
étudié les interactions hôte-pathogène de l’agent étiologique de la pleuropneumonie porger
». Les E. coli entéropathogènes font également parti des AEEC et induisent la diarrhée
cine, emerged chez Actinobacillus
les as enfants a safer and dans more pleuropneumoniae,
les cost-effective pays en voie approach de ainsi
développement for que disease d’autres control. et Pasteurellaceae Current chez le vaccines porc durant against comme
la APP période
provide Haemophilus
post-sevrage. parasuis,
Un grand Actinobacillus
nombre d’études suis et Pasteurella
ont permis une multocida.
meilleure En
compréhension premier lieu nous
des méca-
avons
only examiné partial les protection, propriétés have d’adhérence little impact on morbidity, et d’invasion or are de serotype-specific. ces diverses bactéries Therefore an pathogènes effective vaccine
nismes impliqués dans l’infection des AEEC. Cependant, la réponse de l’hôte lors d’infection
du
porc. Nous avons ensuite étudié la réponse cellulaire des lignées épithéliales suite à une in-
offering par ces cross-protection bactéries est against moins different bien serotypes connue. of L’objectif APP is urgently de notre needed. recherche Outer membrane était d’adapter (OM) proteins, la
fection technique par de A. pleuropneumoniae culture d’organe in vitro serotype (IVOC) 1 en d’iléon évaluant de porcelet l’expression nouveau-né de facteurs afin de d’étudier
trans-
localized cription, la cinétique at en the quantifiant bacterial de la réponse cell surface, la production cytokinaire are attractive de l’hôte vaccine cytokines lors candidates d’une ainsi qu’en infection because détectant they aux are AEEC. exposed des Des indicateurs
as modifica-
targets to
d’apoptose. tions dans la Nos dose résultats infectante indiquent et les conditions des différences de culture d’adhérence ont permis entre une longévité les souches des tissus
ainsi
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
qu’entre jusqu’à 12 les heures lignées. post-infection La croissance avec d’ une A. pleuropneumoniae souche AEEC tout en sérotype minimisant 1 sous la dégradation conditions res- des
silico treinte tissus. for proteins Dans en Dans fer ce predicted ou modèle, en NAD to be nous n’a localized pas avons at affecté the observé cell surface l’adhérence, la transcription and constructed et ce par a aux consensus RT-PCR deux prediction lignées. de cytokines list En of ce 93 pro-
qui OM
concerne inflammatoires l’invasion, (IL-1b, la IL-6, souche IL-8 et d’ TNF-a), A. pleuropneumoniae de la réponse TH1 (IL-12p40, testée n’envahie IL-18 et INF-g) pas et les de cellules la ré-
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans ponse notre TH2 (IL-4 modèle et IL-10) tandis à différent que les temps autres post-infection. espèces de Pasteurellaceae Le niveau de transcription testées ont des démontré différen-
LC-MS/MS. la tes capacité cytokines The outcome d’envahir différait established au ces court cellules. du the temps first OM La selon proteome détection la présence of APP de grown la et production l’absence d’infection
under nutrient-rich d’infection de cytokines aux AEEC.
conditions. aux AEEC. pro- We
inflammatoires Nous avons observé par les que deux l’infection lignées suite bactérienne à une induction stimulait la par transcription des cellules de A. toutes pleuropneumo- les cytoki-
identified niaenes examinées inactivées 47 OM proteins à a 4 démontré heures representing post-infection une 50% augmentation of the et que predicted les interleukines de OM la proteome, production 6 et most 10 de sont of IL-8 which les seules par seules have les cytokines
not cellules been
characterized. NPTr, stimulées mais par aucune l’infection We now production tout au describe differences d’autres long de in cytokines l’expérience, OM protein n’a soit profiles été aux between détectée temps APP pour 4, 8 et grown les 12 under deux heures nutrient lignées, post-
rich
ceci infection. malgré Ces une deux augmentation cytokines étaient de l’expression d’ailleurs les du seules facteur stimulées de transcription par l’infection NF-kB. à 8 A. heures
pleu-
conditions post-infection,
ropneumoniae post-infection, and under la transcription
a transcription démontré nutrient deprived des autres
être des hautement autres conditions cytokines that cytotoxique resemble étant those similaires mais in n’induit vivo: ou plus iron-restriction; faible pour
pas faible l’apoptose pour growth-factor les tissus
des
infectés que pour les tissus non-infectés. En plus des IL-6 et 10, d’autres cytokines étaient stimu-
cellules
infectés
épithéliales
que pour les
SJPL
tissus
et
non-infectés.
NPTr. Cette étude
En plus
a
des
permis
IL-6 et
d’augmenter
10, d’autres cytokines
notre compréhension
étaient stimu-
nicotinamide lées par l’infection adenine au dinucleotide-restriction. temps 12 heures. Dans Furthermore, ce modèle, we detected nous avons immunoreactive observée une OM stimulation
proteins by
de la pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôte-
d’IL-8 par les AEEC qu’à 4 heures post-infection. Ces résultats suggèrent une action anti-
immunoblot pathogène analyses durant of 1D une and infection 2D gels probed par A. with pleuropneumoniae. post-convalescent sera En from plus, infected ces animals. résultats These démon- studies
inflammatoire lors des premières phases de l’infection, observée dès 8 heures dans ce modèle,
trent le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
direct médiée our selection par IL-10. of Ceci potential supporte vaccine l’hypothèse candidates for d’une APP balance that are immunogenic pro- et anti-inflammatoire and are expressed suggé-
under
hôte-pathogène
rée récemment pour
de micro-organismes
les AEEC. De plus,
pathogènes
le modèle d’étude
des voies
de l’IVOC
respiratoires
confirme
du
les
porc.
rée récemment pour les AEEC. De plus, le modèle d’étude de l’IVOC confirme les résultats pré-
conditions cédemment that reflect décrits infection dans in notre the porcine laboratoire host. dans un modèle in vivo de porcelet sevré. Pour finir,
nos résultats démontrent le potentiel de l’IVOC pour l’étude de la réponse immunitaire de
l’hôte.

Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 14
Page 33
Étude Proteomic Détermination des interactions analysis de l'effet of d' outer Actinobacillus des membrane adjuvants CpG pleuropneumoniae proteins et toxine of Actinobacillus choléra et d'autres sur la pleuropneumoniae:
réponse Pasteurellaceae immuni-
identification taire contre avec of le immunogenic des fimbriae cellules F4 épithéliales administré candidates d'origine oralement for vaccine porcine chez development.
le porc
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh (1), Christopher Ng-Thow-Hing (1), Bernard F. Gibbs (2), John H.E. Nash (3), Mario
* Delisle, B.* Ramjeet*, J.M. Fairbrother** Irazu Contreras**, C. Calinescu** Martin Olivier**, Marcelo
Jacques Gottschalk* (4), and et James Mario W. Jacques* Coulton (1)
M.A. Mateescu* et É. Nadeau
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
*Laboratoire (2) Sheldon * GREMIP, de Biotechnology référence Faculté Center, EcL, de McGill Groupe médecine University, de 3773 Recherche vétérinaire, University Street, sur St-Hyacinthe, Montreal les Maladies QC, Canada QC Infectieuses
H3A 3B4
(3) **Departement Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive, Ottawa, ON, Canada K1A 0R6
(4) du Groupe Porc de (GREMIP), of Microbiology
recherche sur les Faculté maladies de and
infectieuses médecine Immunology, McGill University, Montréal, QC
du porc, vétérinaire, Département de Université pathologie et microbiologie, de Montréal,
Faculté de
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
St-Hyacinthe, QC, Canada.
** Nous
Dép. avons
chimie standardisé
et biochimie, Université du Québec à Montréal, QC, Canada.
un modèle
Université
in
du
vitro
Québec
d’adhérence
à Montréal,
pour l’étude
QC, Canada.
de bactéries
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, no-
Les infections aux Escherichia coli entérotoxinogène (ETEC) positif au fimbriae F4
tamment pneumonia, la a highly lignée infectious de cellules respiratory de disease trachée that « contributes Newborn to Pig major Trachea economic » (NPTr) losses in et the la swine lignée industry. de
causent notamment chez le porc la diarrhée post-sevrage (DPS), une maladie caractérisée
cellules
With par pressures une de
diarrhée poumon
to reduce aqueuse, « St. Jude
the use of des Porcine
antibiotics pertes in de Lung
agricultural croissance » (SJPL). Avec
livestock, et de l’aide
vaccination la mortalité de ce
against dans modèle,
bacterial les 2 nous
pathogens premières
avons
has
étudié semaines les interactions suivant le sevrage, hôte-pathogène engendrant de des l’agent pertes étiologique économiques de importantes. la pleuropneumonie Le fimbriae
porcine,
emerged F4 est Actinobacillus une as a structure safer and more pleuropneumoniae, protéique cost-effective immunogène approach ainsi for responsable que disease d’autres control. de Pasteurellaceae l'adhésion Current vaccines de la against bactérie comme APP provide aux
Haemophilus
intestins, faisant parasuis, de Actinobacillus lui un bon candidat suis et pour Pasteurella un vaccin multocida. sous-unitaire En oral. premier L’objectif lieu nous de cette
avons
only examiné partial protection, have little impact on morbidity, or are serotype-specific. Therefore an effective vaccine
étude est les d’évaluer propriétés la d’adhérence réponse humorale et d’invasion anti-F4 de stimulée ces diverses par l’administration bactéries pathogènes orale de
du
porc.
offering fimbriae Nous
cross-protection F4 avons supplémentés ensuite étudié
against de different différents la réponse cellulaire des lignées épithéliales suite à une in-
serotypes adjuvants. of APP is Pour urgently ce needed. faire, des Outer porcelets membrane sevrés (OM) et proteins, posifectiontifs
pour par le récepteur A. pleuropneumoniae intestinal spécifique serotype au 1 fimbriae en évaluant F4 ont l’expression été immunisés de facteurs oralement de avec
trans-
localized cription, du fimbriae at en the quantifiant F4 bacterial semi purifiés cell surface, la production uniquement are attractive de ou du vaccine cytokines fimbriae candidates ainsi F4 supplémentés qu’en because détectant they de are la exposed des toxine indicateurs
as choléra
targets to
d’apoptose. complète ou Nos d’un résultats ADN CpG indiquent spécifique des différences à l'espèce porcine d’adhérence (CpG entre D19), les deux souches adjuvants
ainsi
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
qu’entre immunostimulateurs. les lignées. La Chacune croissance des d’ formulations A. pleuropneumoniae vaccinales a sérotype été incorporée 1 sous conditions dans un sysres-
silico treintetème for de proteins en livraison fer predicted ou en macroscopique NAD to be n’a localized pas composées at affecté the cell surface l’adhérence, de carboxyméthyl-amidon and constructed et ce a aux consensus deux (CM-A). prediction lignées. Des list En of porcs
ce 93 qui OM
concerne recevant que l’invasion, que le CM-A la souche uniquement d’ A. ont pleuropneumoniae de plus été utilisés testée comme n’envahie groupe pas contrôle. les cellules Des
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans échantillons notre modèle de sangs tandis et de que fèces les autres ont été espèces récoltés de à Pasteurellaceae différents intervalles testées post-vaccination
ont démontré
LC-MS/MS. la ainsi capacité que des The outcome d’envahir contenus intestinaux established ces cellules. à la nécropsie. the first OM La proteome détection Les réponses of APP de grown la production humorales des under nutrient-rich de IgM cytokines et des IgA
conditions. pro- We
inflammatoires anti-F4 ont été par analysées les deux par lignées ELISA. Nous suite avons à une d’abord induction observé par des une cellules production A. pleuropneumo-
légèrement
identified niae plus inactivées élevé, 47 OM mais proteins a non démontré representing statistiquement une 50% augmentation of significative, the predicted de d’IgM OM la proteome, production sérique anti-F4 most de of IL-8 à which environ par have les 10 not cellules jours
been
après la dernière vaccination pour les groupes vaccinés en comparaison avec le groupe
characterized. NPTr,
après
mais
la dernière
aucune
vaccination
We now production
pour
describe differences d’autres
les groupes
in cytokines
vaccinés
OM protein n’a profiles été
en
between détectée
comparaison
APP pour
avec
grown les under deux
le groupe
nutrient lignées,
non vacciné. La production d'IgA sérique anti-F4 était négligeable dans tous les groupes. rich
ceci
non
malgré
vacciné.
une
La
augmentation
production d'IgA
de
sérique
l’expression
anti-F4
du
était
facteur
négligeable
de transcription
dans tous
NF-kB.
les groupes.
A. pleu-
La moyenne géométrique des titres d'IgM anti-F4 mucosaux des porcs vaccinés avec la for-
conditions La moyenne
ropneumoniae and under géométrique
a démontré nutrient deprived des titres
être hautement conditions d'IgM anti-F4 that cytotoxique resemble mucosaux those des
mais in porcs
n’induit vivo: iron-restriction; vaccinés avec
pas l’apoptose growth-factor la for-
des
mulation comprenant le CpG était près de 2 fois supérieure (P < 0,05) à celui du groupe vac-
cellules épithéliales SJPL et NPTr. Cette étude a permis d’augmenter notre compréhension
nicotinamide ciné avec adenine le fimbriae dinucleotide-restriction. F4 uniquement tandis Furthermore, que la we moyenne detected géométrique immunoreactive des OM titres proteins des
by
de
porcs
la pathogenèse
vaccinés avec
des
la formulation
espèces de
comprenant
Pasteurellacea
la toxine
testées
choléra
ainsi
était
que
environ
des interactions
de 4 fois inféhôte-
porcs vaccinés avec la formulation comprenant la toxine choléra était environ de 4 fois infé-
immunoblot pathogène analyses durant of 1D une and infection 2D gels probed par A. with pleuropneumoniae. post-convalescent sera En from plus, infected ces animals. résultats These démon- studies
rieure (P < 0,001) à celui du groupe vacciné avec du fimbriae F4 uniquement. Tel que obsertrent
le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
direct vé pour our selection le sang, of la potential production vaccine d'IgA candidates mucosaux for APP était that négligeable are immunogenic pour and tous are les expressed groupes.
under
hôte-pathogène En conclusion, le de CpG micro-organismes D19, mais non la pathogènes toxine choléra, des démontre voies respiratoires un effet d’adjuvant du porc. muco-
conditions sal lorsque that reflect administré infection oralement in the porcine chez host. le porc nouvellement sevré. Ainsi, la formulation
vaccinale contenant du fimbriae F4 supplémentés de CpG D19 serait le meilleur candidat
pour stimuler la réponse humorale intestinale anti-F4 chez le porc.

Page 34
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 15
Évaluation de la réponse immunitaire induite chez la souris immunisée avec
un adénovirus recombinant non réplicatif exprimant la portion C-terminale de
l’adhésine P97 de Mycoplasma hyopneumoniae.
F. R. Okamba *, , E. Moreau *, K. Cheikh Saad Bouh *, C. A. Gagnon **,
B. Massie ***, M. Arella*
*INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, Québec, Canada
**GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, Québec,
Canada
***CNRC, Institut de recherche en biotechnologie, Montréal, Québec, Canada.
Mycoplasma hyopneumoniae est l’agent étiologique de la pneumonie enzootique porcine,
une maladie respiratoire chronique responsable de pertes économiques considérables
pour l’industrie porcine. La maladie n’est pas efficacement et entièrement contrôlée par l’administration
d’antibiotiques ni par les vaccins commercialement disponibles. Conséquemment,
il est primordial de développer des stratégies de vaccination beaucoup plus efficaces. Les
adénovirus humain de type 5 recombinants (rAd) ont été démontrés comme étant de très
bons inducteurs de l'immunité humorale et cellulaire face à leur transgène recombinant. De
plus, à plusieurs reprises, il a été démontré que les rAd sont capables d'induire une immunité
protectrice envers différents pathogènes viraux et bactériens et chez divers espèces animales
tel que le porc. Ainsi, nous avons construit un rAd exprimant la portion C-terminale de l’adhésine
P97 (rAdP97c) de la souche M. hyopneumoniae ATCC-25934. Nous avons choisi l’adhésine
P97 car elle est une protéine qui joue un rôle cruciale dans la pathogénicité de M. hyopneumoniae
et dans l'induction d'une immunité protectrice chez le porc. Afin d'évaluer la réponse
immunitaire anti-P97c induite par rAdP97c, des souris BALB/c ont été immunisées par la
voie intramusculaire (i.m.) ou intranasale (i.n.) avec une dose de 5 X 107 Mycoplasma hyopneumoniae est l’agent étiologique de la pneumonie enzootique porcine,
une maladie respiratoire chronique responsable de pertes économiques considérables
pour l’industrie porcine. La maladie n’est pas efficacement et entièrement contrôlée par l’administration
d’antibiotiques ni par les vaccins commercialement disponibles. Conséquemment,
il est primordial de développer des stratégies de vaccination beaucoup plus efficaces. Les
adénovirus humain de type 5 recombinants (rAd) ont été démontrés comme étant de très
bons inducteurs de l'immunité humorale et cellulaire face à leur transgène recombinant. De
plus, à plusieurs reprises, il a été démontré que les rAd sont capables d'induire une immunité
protectrice envers différents pathogènes viraux et bactériens et chez divers espèces animales
tel que le porc. Ainsi, nous avons construit un rAd exprimant la portion C-terminale de l’adhésine
P97 (rAdP97c) de la souche M. hyopneumoniae ATCC-25934. Nous avons choisi l’adhésine
P97 car elle est une protéine qui joue un rôle cruciale dans la pathogénicité de M. hyopneumoniae
et dans l'induction d'une immunité protectrice chez le porc. Afin d'évaluer la réponse
immunitaire anti-P97c induite par rAdP97c, des souris BALB/c ont été immunisées par la
voie intramusculaire (i.m.) ou intranasale (i.n.) avec une dose de 5 X 10 TCID50 de rAdP97c.
Les animaux ont également été inoculés avec une dose de rappel à 30 jours postimmunisation
avec la même quantité de virus. Les souris immunisées ont développés une forte
réponse immunitaire systémique et mucosale en IgG anti-P97c. Une réponse significative
(P

Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 16
Page Page 35
Étude Proteomic des interactions analysis of d' outer Actinobacillus membrane pleuropneumoniae proteins of Actinobacillus et d'autres pleuropneumoniae:
Pasteurellaceae
Accumulation des tétracyclines dans les carcasses de porcs : évaluation par densitométrie osseuse
identification avec of immunogenic des cellules épithéliales candidates d'origine for vaccine porcine development.
Guillot, M.*, *, K. Alexander*, C. Pomar**, R. Bergeron***,
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh (1), Christopher A. Letellier****, Ramjeet*, Ng-Thow-Hing J.R.E. Irazu (1), del Bernard Contreras**, Castillo*****
F. Gibbs Martin (2), John Olivier**, H.E. Nash Marcelo (3), Mario
Jacques (4), and James W. Coulton (1)
*Université de Montréal, département Gottschalk* de sciences et cliniques, Mario faculté Jacques* de médecine vétérinaire ; ** Centre de
recherches et de développement sur le bovin laitier et le porc, Agriculture et Agro-alimentaire Canada ; ***
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
Université Laval, département des sciences animales, faculté des sciences de l'agriculture et l'alimentation ;
(2) Sheldon * GREMIP, Biotechnology Faculté Center, de McGill médecine University, 3773 vétérinaire, University Street, St-Hyacinthe, Montreal QC, Canada QC H3A 3B4
**** Université de Montréal, département de pathologie et microbiologie, faculté de médecine vétérinaire ;
(3) **Departement Institute for Biological of Sciences, Microbiology National Research and Council Immunology, of Canada, 100 McGill Sussex Drive, University, Ottawa, ON, Montréal, Canada K1A QC 0R6
***** Université de Montréal, département de biomédecine vétérinaire, faculté de médecine vétérinaire.
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
Une incidence accrue de carcasses décolorées jaune-verdâtre est notée dans les abattoirs
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
pathogènes canadiens. Ces des carcasses voies respiratoires augmentent du les porc coûts en d’abattage utilisant liés deux au lignées traitement cellulaires de désossage porcines, et quesnotammenttionnent
sur pneumonia, la le a highly lignée risque infectious de résidus cellules pour respiratory de le disease trachée consommateur. that « contributes Newborn Ce problème to Pig major Trachea semble economic » (NPTr) être associé losses in et the la à swine lignée la recru-
industry. de
descence du syndrome de dépérissement post-sevrage. Cette maladie immunosuppressive due au
cellules de poumon « St. Jude Porcine Lung » (SJPL). Avec l’aide de ce modèle, nous avons
With circovirus pressures porcin to reduce de type the use 2, augmente of antibiotics le in risque agricultural d’infections livestock, bactériennes vaccination against secondaires. bacterial Les pathogens traitements
has
étudié les interactions hôte-pathogène de l’agent étiologique de la pleuropneumonie por-
aux tétracyclines (TC) sont désormais plus intenses, de plus longue durée et sur des animaux plus âgés
cine, emerged que d’habitude. Actinobacillus as a safer and La faculté more pleuropneumoniae, cost-effective des TC à former approach ainsi des for chélates que disease d’autres control. avec les Pasteurellaceae Current ions calcium vaccines leur against comme confère APP provide Hae- une
mophilus grande affinité parasuis, pour Actinobacillus le tissu osseux néoformé. suis et Pasteurella La présence de multocida. résidus de En TC premier dans l’os induit lieu induit nous une déco-
avons
only examiné loration partial verdâtre. les protection, propriétés De have plus, d’adhérence little les TC impact modifient on morbidity, et le d’invasion métabolisme or are de serotype-specific. osseux. ces diverses Ces variations bactéries Therefore peuvent an pathogènes effective être suivies
vaccine du
porc. par des Nous techniques avons ensuite d’imagerie étudié telles la que réponse la tomodensitométrie cellulaire des quantitative lignées épithéliales («standard technique suite à une ») et
in-
offering cross-protection against different serotypes of APP is urgently needed. Outer membrane (OM) proteins,
fection l’absorptiométrie par A. pleuropneumoniae biénergétique à rayons serotype X ou DEXA 1 en («standard évaluant pratique l’expression »). Notre de hypothèse facteurs de énonce
trans-
que l’administration de TC via l’aliment conduirait à des modifications de densité et de couleur des os
localized cription, at en the quantifiant bacterial cell surface, la production are attractive de vaccine cytokines candidates ainsi qu’en because détectant they are exposed des indicateurs
as targets to
de porcs, dépendantes du schéma thérapeutique. Les objectifs de cette étude sont (1) évaluer l’effet
d’apoptose. Nos résultats indiquent des différences d’adhérence entre les souches ainsi
the de immune l’âge et system de la and durée play d’administration key roles in infection. de la Using la chlortétracycline the genome sequence (CTC) sur of APP la couleur serotype et 5b, la we densité scanned du
in
qu’entre tissu osseux les des lignées. porcs en La croissance et (2) d’ valider A. pleuropneumoniae une technique d’imagerie sérotype pour 1 sous le suivi conditions non invasif de
res-
silico treinte l’accumulation for proteins en fer predicted ou de en TC dans NAD to be l’os. n’a localized Pour pas cela, at affecté the nous cell surface suivons l’adhérence, and pendant constructed et 21 ce semaines a aux consensus deux des porcs prediction lignées. mâles list En of castrés
ce 93 qui OM
concerne de 3 semaines l’invasion, nourris aléatoirement la souche d’ avec A. pleuropneumoniae un aliment sans antibiotique testée (n=48) n’envahie ou complémenté pas les cellules à 800
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans ppm notre en CTC. modèle Les animaux tandis ont que reçu les la autres CTC pendant espèces 4 de ou Pasteurellaceae 8 semaines à partir testées de 4 ou ont 12 démontré
semaines
LC-MS/MS. la d’âge capacité (n=16 par The outcome d’envahir âge et durée). established ces cellules. Une euthanasie the first OM La proteome détection au 4 semaines of APP de grown la de production 8 porcs traités under nutrient-rich de et de cytokines 8 témoins conditions. pro- est
We
effectuée après un prélèvement sanguin. Des mesures de concentrations plasmatiques en CTC et de
inflammatoires par les deux lignées suite à une induction par des cellules A. pleuropneumo-
marqueurs du métabolisme osseux seront effectuées. Les 3 premières vertèbres lombaires sont préle-
identified niae inactivées 47 OM proteins a démontré representing une 50% augmentation of the predicted de OM la proteome, production most de of IL-8 which par have les not cellules been
vées pour mesurer la densité et la dureté osseuses et évaluer l’intensité de décoloration. Sur les porcs
characterized. NPTr, traités mais pendant aucune We 8 semaines now production describe et leurs differences d’autres témoins in et cytokines OM sur un protein échantillon n’a profiles été de between détectée fin d’étude, APP pour grown la densité les under deux osseuse nutrient lignées, des
rich
ceci deux malgré premières une vertèbres augmentation lombaires de est déterminée l’expression par du DEXA facteur et tomodensitométrie de transcription quantitative. NF-kB. A. pleu- Les
conditions ropneumoniae données and de densité under a démontré nutrient et de dureté deprived être osseuses hautement conditions sont that analysées cytotoxique resemble statistiquement those mais in n’induit vivo: avec iron-restriction; pas un modèle l’apoptose growth-factor
linéaire des à
cellules effets mixtes, épithéliales l’intensité SJPL de et décoloration NPTr. Cette avec étude un modèle a permis linéaire d’augmenter généralisé pour notre données compréhension
ordinales.
nicotinamide Les performances adenine d’estimation dinucleotide-restriction. de la densité Furthermore, par imagerie we sont detected analysées immunoreactive par régression OM linéaire proteins multi-
by
de la pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôteple.
Le seuil α=0,05 est utilisé pour tous les tests. Les deux groupes de traitement démarrant à 4 semai-
immunoblot pathogène analyses durant of 1D une and infection 2D gels probed par A. with pleuropneumoniae. post-convalescent sera En from plus, infected ces animals. résultats These démon- studies
nes d’âge ont été complétés et la décoloration est évidente uniquement chez le groupe traité pentrentdant
le 8 semaines, grand potentiel avec une de prévalence ces lignées de pour 75%. Les l’étude résultats de de la cette pathogenèse étude devraient et des permettre interactions d’i-
direct our selection of potential vaccine candidates for APP that are immunogenic and are expressed under
hôte-pathogène dentifier des conditions de micro-organismes d’administrations de pathogènes CTC où le risque des de voies décoloration respiratoires est maximum. du porc. Cela ai-
conditions dera à adapter that reflect les infection schémas in thérapeutiques the porcine host. en élevage et préserver la qualité sanitaire des carcasses
de porc.

Page 36
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 17
Étude Proteomic des Effets interactions analysis des promoteurs of d' outer Actinobacillus membrane de croissance pleuropneumoniae proteins Tylosin of et Actinobacillus Virginiamycine et d'autres pleuropneumoniae:
administrés Pasteurellaceae
à identification des porcs avec sur of la immunogenic des résistance cellules antimicrobienne épithéliales candidates d'origine for de vaccine Enterococcus porcine development. sp. ett
Escherichia coli provenant de leur flore
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh (1), Christopher Ramjeet*, Ng-Thow-Hing Irazu (1), Bernard Contreras**, F. Gibbs Martin (2), John Olivier**, H.E. Nash Marcelo (3), Mario
Jacques (4), and James W. Coulton (1)
Ulysse Desranleau Dandurand, Gottschalk* Sylvain et Mario Quessy, Jacques* Ed Topp, Ann Letellier
(1) Department of Microbiology Chaire de and recherche Immunology, McGill en salubrité University, 3775 des University viandes, Street, Montreal, GREMIP,
QC, Canada H3A 2B4
Faculté (2) Sheldon * de GREMIP, Biotechnology médecine Faculté Center, vétérinaire, de McGill médecine University, Université 3773 vétérinaire, University de Street, Montréal, St-Hyacinthe, Montreal Québec, QC, Canada QC Canada
H3A 3B4
(3) **Departement Institute for Biological of Sciences, Microbiology National Research and Council Immunology, of Canada, 100 McGill Sussex Drive, University, Ottawa, ON, Montréal, Canada K1A QC 0R6
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
Enterococcus spp. et E. coli sont habituellement reconnus comme de bons microor-
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
ganismes The Gram-negative indicateurs de bacterial la flore pathogen intestinale Actinobacillus des humains pleuropneumoniae ainsi que (APP) des animaux. causes porcine Leur rôle de
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, no-
réservoir potentiel de gènes codant pour des protéines concédant une résistance aux antitamment
pneumonia, la a highly lignée infectious de cellules respiratory de disease trachée that « contributes Newborn to Pig major Trachea economic » (NPTr) losses in et the la swine lignée industry. de
biotiques est également reconnu. Il est donc normal que, lorsque des questions de santé pu-
cellules
With blique pressures reliées de poumon
to reduce à l’utilisation « St. Jude
the use of de antibiotics promoteurs Porcine Lung » (SJPL). Avec l’aide de ce modèle, nous avons
in agricultural de croissance livestock, antimicrobiens vaccination against en bacterial milieu agricole pathogens sur-
has
étudié
gissent, les
ces interactions
deux organismes hôte-pathogène
soient scrutés.
de l’agent étiologique de la pleuropneumonie porcine,
emerged Actinobacillus as a safer and more pleuropneumoniae, cost-effective approach ainsi for que disease d’autres control. Pasteurellaceae Current vaccines against comme APP provide Haemophilus
L’objectif parasuis, de Actinobacillus cette étude était suis et d’évaluer Pasteurella l’impact multocida. de l’utilisation En premier de certains lieu nous promo-
avons
only examiné partial les protection, propriétés have d’adhérence little impact on morbidity, et d’invasion or are de serotype-specific. ces diverses bactéries Therefore an pathogènes effective vaccine
teurs de croissance en élevage porcin sur les profils de résistance antimicrobienne des isolats
du
porc. Nous avons ensuite étudié la réponse cellulaire des lignées épithéliales suite à une in-
offering d’E. Coli cross-protection et d’Enterococcus against different qui y avaient serotypes été of APP prélevés. is urgently Des needed. isolats d’E. Outer coli membrane et d’Enterococcus
(OM) proteins,
fection obtenus par de A. matières pleuropneumoniae fécales de porcs serotype recevant 1 en du évaluant Tylosin (44 l’expression ppm, n = 100) de facteurs et de la de Virginiatrans-
localized cription,mycine at en (22 the quantifiant ppm, bacterial n cell = 100) surface, la production ont are été attractive comparés de vaccine cytokines à des candidates ainsi isolats qu’en because obtenus détectant they d’un are exposed groupe des indicateurs
as contrôle
targets to
d’apoptose. (n=100) nourris Nos avec résultats une moulée indiquent sans des promoteurs différences de croissance, d’adhérence tout entre cela les en condition souches ainsi de
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
qu’entre terrain. La les comparaison lignées. La croissance a été faite d’ entre A. pleuropneumoniae des isolats obtenus durant sérotype la première 1 sous conditions semaine de
res-
silico treinte traitement for proteins en fer et predicted ou des en isolats NAD to be obtenus n’a localized pas durant at affecté the cell la quinzième surface l’adhérence, and constructed semaine. et ce On a aux consensus a deux évalué prediction lignées. la susceptibilité
list En of ce 93 qui OM
concerne des microorganismes l’invasion, la à souche 20 agents d’ A. antimicrobiens pleuropneumoniae en utilisant testée la n’envahie méthode de pas diffusion les cellules en
proteins. disque We retrouvée previously dans described le manuel proteomic de référence analyses utilizing du NCLI.
1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans notre modèle tandis que les autres espèces de Pasteurellaceae testées ont démontré
la capacité d’envahir ces cellules. La détection de la production de cytokines pro-
LC-MS/MS. The outcome established the first OM proteome of APP grown under nutrient-rich conditions. We
inflammatoires Pour les par isolats les deux d’Enterococcus, lignées suite une à une augmentation induction par de des la résistance cellules A. à pleuropneumo-
été observée
identified niae pour inactivées la 47 gentamycine OM proteins a démontré dans representing les une groupes 50% augmentation of nourris the predicted avec de le OM Tylosin. la proteome, production Une diminution most de of IL-8 which de par la have les résistance
not cellules been
characterized. NPTr, fût observée mais aucune pour le We now production Ciprofloxacin describe differences d’autres pour les in cytokines groupes OM protein n’a nourris profiles été avec between détectée du Tylosin APP pour et grown les de under deux la Virginia-
nutrient lignées, rich
ceci
mycine. malgré
Les isolats une augmentation
d’E. coli. ont vu de
leur l’expression
résistance à la Néomycine et à la Kanamycine aug-
du
à la
facteur
Néomycine
de transcription
et à la Kanamycine
NF-kB. A.
augpleumenter
dans les groupes nourris avec du Tylosin. Également, leur résistance à la Céfalotine a
conditions menter dans
ropneumoniae and under les groupes
a démontré nutrient nourris deprived avec
être hautement conditions du Tylosin. that cytotoxique resemble Également, those leur
mais in n’induit vivo: résistance iron-restriction; à la Céfalotine
pas l’apoptose growth-factor a
des
augmenté dans les groupes nourris avec le Tylosin et à la Virginiamycine, tandis que la résis-
cellules épithéliales SJPL et NPTr. Cette étude a permis d’augmenter notre compréhension
nicotinamide tance à l’érythromycine adenine dinucleotide-restriction. diminue dans le groupe Furthermore, nourri we avec detected du Tylosin.
immunoreactive OM proteins by
de la pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôtepathogène
durant une infection par A. pleuropneumoniae. En plus, ces résultats démon-
immunoblot analyses of 1D and 2D gels probed with post-convalescent sera from infected animals. These studies
Ces résultats suggèrent que les profils antimicrobiens d’Enterococcus et de E. coli
trent le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
direct peuvent our selection varier avec of potential l’âge vaccine des porcs candidates et que for les APP pressions that are sélectives immunogenic et/ou and les are profils expressed de résis-
under
hôte-pathogène tances antimicrobiens de micro-organismes peuvent être modifiés pathogènes durant l’administration des voies respiratoires des promoteurs du porc. de crois-
conditions sance.
that reflect infection in the porcine host.

Présentation orale no. 18
Page 37
Étude Proteomic des Caractérisation interactions analysis of phénotypique d' outer Actinobacillus membrane et génotypique pleuropneumoniae proteins of Actinobacillus d’isolats et de d'autres Salmonella pleuropneumoniae:
Pasteurellaceae
identification Typhimurium avec of immunogenic des provenant cellules épithéliales candidates de porcs d'origine sains for vaccine et malades porcine development.
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh (1), Christopher
, Ann Ramjeet*, Ng-Thow-Hing
Letellier Irazu (1), Bernard Contreras**, F. Gibbs Martin (2), John Olivier**, H.E. Nash Marcelo (3), Mario
Jacques Gottschalk* (4), and et James Mario W. Jacques* Coulton (1)
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
(2) Sheldon * GREMIP, Biotechnology Faculté Center, de McGill médecine University, 3773 vétérinaire, University Street, St-Hyacinthe, Montreal QC, Canada QC H3A 3B4
(3) **Departement Institute for Biological of Sciences, Microbiology National Research and Council Immunology, of Canada, 100 McGill Sussex Drive, University, Ottawa, ON, Montréal, Canada K1A QC 0R6
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
* France Daigle ** , Sylvain Quessy *
Nadia Bergeron
Chaire de Recherche en Salubrité des Viandes, GREMIP, Faculté de
Médecine Vétérinaire, Université de Montréal, Québec, Canada
**Département de Microbiologie et Immunologie, Faculté de Médecine,
Université de Montréal, Québec, Canada.
* , Ann Letellier * France Daigle ** , Sylvain Quessy *
Chaire de Recherche en Salubrité des Viandes, GREMIP, Faculté de
Médecine Vétérinaire, Université de Montréal, Québec, Canada
**Département de Microbiologie et Immunologie, Faculté de Médecine,
Université de Montréal, Québec, Canada.
Nous avons standardisé un modèle in vitro d’adhérence pour l’étude de bactéries
Les infections The Gram-negative causées bacterial par pathogen des souches Actinobacillus septicémiques pleuropneumoniae de Salmonella (APP) causes enterica porcine serovar
pathogènes des voies respiratoires du porc en utilisant deux lignées cellulaires porcines, no-
Typhimurium peuvent être associées avec de la mortalité chez des porcs adultes. Certaines
tamment pneumonia, la a highly lignée infectious de cellules respiratory de disease trachée that « contributes Newborn to Pig major Trachea economic » (NPTr) losses in et the la swine lignée industry. de
études ont rapporté que des souches persistent dans différents tissus plusieurs jours suivant une
cellules
With infection.
de
pressures La
poumon
to reduce présence
« St.
the use de
Jude
of ces
Porcine
antibiotics salmonelles
Lung
in agricultural peut
» (SJPL).
alors
Avec
livestock, présenter
l’aide
vaccination un
de
against problème
ce modèle,
bacterial de pathogens salubrité
nous avons
ali- has
étudié
mentaire.
les interactions
Il est donc important
hôte-pathogène
de bien
de
caractériser
l’agent étiologique
ces isolats pour
de la
nous
pleuropneumonie
permettre de comporcine,
emerged prendre Actinobacillus as la a pathogénie safer and more pleuropneumoniae, de cost-effective l’infection approach et ainsi ainsi développer for que disease d’autres control. des mesures Pasteurellaceae Current vaccines de contrôle against comme adéquates.
APP provide Haemophilus
Le but de parasuis, cette étude Actinobacillus était de caractériser, suis et Pasteurella par des multocida. méthodes En phénotypiques premier lieu et nous génotypi- avons
only examiné partial protection, have little impact on morbidity, or are serotype-specific. Therefore an effective vaccine
ques, des les isolats propriétés provenant d’adhérence de porcs et septicémiques d’invasion de (n=33) ces diverses ainsi que bactéries des isolats pathogènes provenant de du
porc.
offering porcs Nous
cross-protection sains avons à l’abattoir ensuite
against (n=33). étudié
different Dans la réponse
serotypes cette of étude, cellulaire
APP is il urgently a été des
needed. déterminé lignées épithéliales
Outer pour membrane chacun suite
(OM) des à une
proteins, isolats infection
étudiés par le type A. pleuropneumoniae phagique, le profil serotype de résistance 1 en évaluant pour 22 l’expression antibiotiques de par facteurs la méthode de trans- de
localized cription, diffusion at en the en quantifiant bacterial disque cell sur surface, la Muller-Hinton production are attractive agar, de vaccine cytokines le profil candidates ainsi génétique qu’en because par détectant they PFGE are exposed (pulsed-field des indicateurs
as targets gel to
d’apoptose. electrophoresis), Nos en résultats utilisant indiquent les enzymes des de différences restriction XbaI d’adhérence et SpeI, et entre finalement les souches le profil plas- ainsi
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
qu’entre midique les à l’aide lignées. du Kit La QIAprep croissance d’ A. pleuropneumoniae sérotype 1 sous conditions res-
silico treinte for proteins en fer predicted ou en NAD to be n’a localized pas at affecté the cell surface l’adhérence, and constructed et ce a aux consensus deux prediction lignées. list En of ce 93 qui OM
concerne l’invasion, la souche d’ A. pleuropneumoniae testée n’envahie pas les cellules
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans notre modèle tandis que les autres espèces de Pasteurellaceae testées ont démontré
LC-MS/MS. la capacité The outcome d’envahir established ces cellules. the first OM La proteome détection of APP de grown la production under nutrient-rich de cytokines conditions. pro- We
inflammatoires par les deux lignées suite à une induction par des cellules A. pleuropneumo-
identified niae inactivées 47 OM proteins a démontré representing une 50% augmentation of the predicted de OM la proteome, production most de of IL-8 which par have les not cellules been
characterized. NPTr, mais aucune We now production describe differences d’autres in cytokines OM protein n’a profiles été between détectée APP pour grown les under deux nutrient lignées, rich
ceci malgré une augmentation de l’expression du facteur de transcription NF-kB. A. pleu-
conditions ropneumoniae and under a démontré nutrient deprived être hautement conditions that cytotoxique resemble those mais in n’induit vivo: iron-restriction; pas l’apoptose growth-factor des
cellules épithéliales SJPL et NPTr. Cette étude a permis d’augmenter notre compréhension
nicotinamide adenine dinucleotide-restriction. Furthermore, we detected immunoreactive OM proteins by
de la pathogenèse des espèces de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôte-
immunoblot pathogène analyses durant of 1D une and infection 2D gels probed par A. with pleuropneumoniae. post-convalescent sera En from plus, infected ces animals. résultats These démon- studies
trent le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
direct our selection of potential vaccine candidates for APP that are immunogenic and are expressed under
hôte-pathogène de micro-organismes pathogènes des voies respiratoires du porc.
conditions that reflect infection in the porcine host.
R Les infections causées par des souches septicémiques de Salmonella enterica serovar
Typhimurium peuvent être associées avec de la mortalité chez des porcs adultes. Certaines
études ont rapporté que des souches persistent dans différents tissus plusieurs jours suivant une
infection. La présence de ces salmonelles peut alors présenter un problème de salubrité alimentaire.
Il est donc important de bien caractériser ces isolats pour nous permettre de comprendre
la pathogénie de l’infection et ainsi développer des mesures de contrôle adéquates.
Le but de cette étude était de caractériser, par des méthodes phénotypiques et génotypiques,
des isolats provenant de porcs septicémiques (n=33) ainsi que des isolats provenant de
porcs sains à l’abattoir (n=33). Dans cette étude, il a été déterminé pour chacun des isolats
étudiés le type phagique, le profil de résistance pour 22 antibiotiques par la méthode de
diffusion en disque sur Muller-Hinton agar, le profil génétique par PFGE (pulsed-field gel
electrophoresis), en utilisant les enzymes de restriction XbaI et SpeI, et finalement le profil plasmidique
à l’aide du Kit QIAprep Spin kit (Qiagen inc, Mississauga, Ontario, Canada). Parmi les
porcs septicémiques, le sérotype Typhimurium est le seul qui a été isolé. Différents types
phagiques ont été identifiés dans les 2 groupes d’isolats. La proportion de DT 104 était semblable
dans les 2 groupes d’isolats. Les différents isolats étaient au moins résistants à 5 antibiotiques
et quelques-uns étaient résistants jusqu’à 10 antibiotiques. Il n’y avait pas de différence
significative entre les 2 groupes d’isolats pour ce qui était du profil de résistance aux antibiotiques.
Un nombre plus élevé de génotypes de PFGE a été observé chez les isolats provenant
des porcs septicémiques. Parmi le type phagique DT 104, plusieurs lignées génétiques ont été
identifiées. L’analyse des profils plasmidiques indiquaient que les isolats de porcs septicémiques
possédaient un nombre plus élevé de plasmides que celles provenant de porcs sains.
Dans cette étude, différentes procédures ont été utilisées pour différencier les isolats de
S. Typhimurium trouvé chez des animaux septicémiques en comparaison à celles présentes
chez des animaux sains. Cependant, comme d’autres auteurs l’ont observé, il y a peu de corrélation
entre les différentes méthodes utilisées. Ces résultats suggèrent que les isolats associés
à des septicémies proviennent de lignées génétiques variées et que la virulence de celles-ci
pourrait être associée à des plasmides de faible poids moléculaire.
RSpin kit (Qiagen inc, Mississauga, Ontario, Canada). Parmi les
porcs septicémiques, le sérotype Typhimurium est le seul qui a été isolé. Différents types
phagiques ont été identifiés dans les 2 groupes d’isolats. La proportion de DT 104 était semblable
dans les 2 groupes d’isolats. Les différents isolats étaient au moins résistants à 5 antibiotiques
et quelques-uns étaient résistants jusqu’à 10 antibiotiques. Il n’y avait pas de différence
significative entre les 2 groupes d’isolats pour ce qui était du profil de résistance aux antibiotiques.
Un nombre plus élevé de génotypes de PFGE a été observé chez les isolats provenant
des porcs septicémiques. Parmi le type phagique DT 104, plusieurs lignées génétiques ont été
identifiées. L’analyse des profils plasmidiques indiquaient que les isolats de porcs septicémiques
possédaient un nombre plus élevé de plasmides que celles provenant de porcs sains.
Dans cette étude, différentes procédures ont été utilisées pour différencier les isolats de
S. Typhimurium trouvé chez des animaux septicémiques en comparaison à celles présentes
chez des animaux sains. Cependant, comme d’autres auteurs l’ont observé, il y a peu de corrélation
entre les différentes méthodes utilisées. Ces résultats suggèrent que les isolats associés
à des septicémies proviennent de lignées génétiques variées et que la virulence de celles-ci
pourrait être associée à des plasmides de faible poids moléculaire.

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Page 39
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 19—Dr Michael P. Murtaugh
Dr. Michael P. Murtaugh is a professor at Dept. Of Veterinary & Biomedical Sciences of
University of Minnesota, Minneapolis, USA. His primary areas of research interest and activity
Étude Proteomic des interactions analysis of d' outer Actinobacillus membrane pleuropneumoniae proteins of Actinobacillus et d'autres pleuropneumoniae:
Pasteurellaceae
are: Molecular mechanisms of mucosal immunity, Anti-viral immune mechanisms, Genetic analysis
of biological
identification
populations
avec of immunogenic des
and
cellules
Protein
épithéliales
engineering
candidates d'origine
and
for
expression.
vaccine porcine development.
lysis of biological populations and Protein engineering and expression.
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung Mahendrasingh (1), Christopher Ng-Thow-Hing (1), Bernard F. Gibbs (2), John H.E. Nash (3), Mario
Jacques Host Ramjeet*,
Response Irazu Contreras**, Martin Olivier**, Marcelo
Gottschalk* (4), and et James to PRRSV Infection
Mario W. Jacques* Coulton Infection (1)
Michael Murtaugh, Craig Johnson, Josephine Gnandarajah, Juan Li,
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
(2) Sheldon * GREMIP, Biotechnology Wanjin Faculté Center, Yu, de McGill Scott médecine University, Dee,University 3773 vétérinaire, University of Minnesota, Street, St-Hyacinthe, Montreal St. Paul
QC, Canada QC H3A 3B4
(3) **Departement Institute for Biological Patrick of Sciences, Microbiology Halbur, National Jeffrey Research and Zimmerman, Council Immunology, of Canada, Iowa 100 State McGill Sussex University, Drive, University, Ottawa, Ames
ON, Montréal, Canada K1A QC 0R6
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
Michael Roof, Boehringer Ingelheim Vetmedica, Ames Iowa
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
PRRSV Nous causes avons an standardisé acute, viremic un modèle infection in of vitro 4 to d’adhérence 6 weeks followed pour by l’étude a persistent de bactéries infection
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
pathogènes lasting for several des voies months. respiratoires Prolonged du infection porc en and utilisant questionable deux lignées vaccine cellulaires efficacy porcines, suggest no- that
tamment pneumonia, the host response la a highly lignée infectious to de PRRSV cellules respiratory is compromised. de disease trachée that « We contributes Newborn and others to Pig major Trachea have economic examined » (NPTr) losses in innate et the la swine lignée and industry. adap-
de
cellules tive responses de poumon of pigs « St. to Jude primary Porcine infection, Lung and » (SJPL). memory Avec responses l’aide de following ce modèle, re-challenge nous avons for
With pressures to reduce the use of antibiotics in agricultural livestock, vaccination against bacterial pathogens has
étudié clues to les the interactions incomplete hôte-pathogène response. The innate, de l’agent antiviral étiologique response is de essentially la pleuropneumonie missing, but resoluporcine,tion
of emerged Actinobacillus infection and as a safer and more pleuropneumoniae, disease outcomes are cost-effective approach ainsi not improved for que disease d’autres by interferon control. Pasteurellaceae alpha treatment. Current vaccines against comme Similar-
APP provide Haemophilusly,
PRRSV-specific parasuis, T Actinobacillus cell responses are suis sporadic et Pasteurella and low, multocida. but depletion En premier of T cells lieu early nous in infection
avons
only examiné
does partial not les protection, affect propriétés
infection have d’adhérence little or disease impact on progression. morbidity, et d’invasion or Antibody are de serotype-specific. ces
and diverses
B-cell bactéries Therefore responses an pathogènes
to effective individual vaccine viral
du
proteins is, in general, typical of serological responses to other antigens, except for a delayed
porc. Nous avons ensuite étudié la réponse cellulaire des lignées épithéliales suite à une in-
offering and relatively cross-protection weak against response different to envelope serotypes glycoprotein of APP is urgently (GP5). needed. A potent Outer anti-PRRSV membrane (OM) memory proteins, resfection
par A. pleuropneumoniae serotype 1 en évaluant l’expression de facteurs de transponse
to recall antigen is present in vitro, due to memory B-cells that are present in secondary
localized cription, at en the quantifiant bacterial cell surface, la production are attractive de vaccine cytokines candidates ainsi qu’en because détectant they are exposed des indicateurs
as targets to
lymphoid organs but not in bone marrow. An anamnestic response to re-challenge, the hall-
d’apoptose. Nos résultats indiquent des différences d’adhérence entre les souches ainsi
the mark immune of immune system and memory, play key is roles absent in infection. in vivo, Using suggesting the genome that sequence protection of APP occurs serotype at 5b, the we level scanned of re-
in
qu’entre
sistance les
of macrophages lignées. La croissance
to infection. d’ A.
Although pleuropneumoniae
neutralizing antibodies sérotype 1
are sous
assumed conditions
to be resim-
silico treinteportant
for proteins en
effectors fer predicted ou en
of NAD
protection, to be n’a localized pas
they at affecté the appear cell surface l’adhérence,
after and viremia constructed et
is ce
resolved a aux consensus deux
and prediction lignées.
are not list En
correlated
of ce 93 qui OM
concerne with protection l’invasion, against la souche re-challenge. d’ A. Viral pleuropneumoniae neutralizing activity testée was n’envahie further examined pas les in cellules a ma-
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans crophage notre culture modèle system tandis to que model les autres PRRSV espèces infection de of pigs. Pasteurellaceae Interestingly, neutralizing testées ont activity démontré was
LC-MS/MS. la not capacité strictly The associated outcome d’envahir established with ces the cellules. the immunoglobulin first OM La proteome détection fraction of APP de grown of la serum. production under Antibody-depleted nutrient-rich de cytokines conditions. serum
pro- We
inflammatoires contained heat-labile par les deux PRRSV-neutralizing lignées suite activity à une induction that was present par des in cellules uninfected A. pleuropneumo-
pigs. A fraction
identified niae inactivées 47 OM proteins a démontré representing une 50% augmentation of the predicted de OM la proteome, production most de of IL-8 which par have les not cellules been
of activity also was specifically present in previously infected pigs and was dependent on the
characterized. NPTr, combined mais aucune presence We now production of describe both antibodies differences d’autres in and cytokines OM non-immunoglobulin protein n’a profiles été between détectée factors. APP pour grown In addition, les under deux nutrient viral lignées, neu-
rich
ceci tralization malgré was une to augmentation some extent strain-specific. de l’expression Affinity du facteur purification de transcription of antibodies NF-kB. specific A. for pleu- the
conditions ropneumoniae ectodomain and under portions a démontré nutrient of GP5 deprived être and hautement M conditions did not that display cytotoxique resemble neutralizing those mais in activity. n’induit vivo: iron-restriction; A pas fragment l’apoptose growth-factor of hapto-
des
cellules globin, épithéliales an acute phase SJPL protein et NPTr. whose Cette concentration étude a permis in blood d’augmenter is increased notre by compréhension
a variety of stress
nicotinamide adenine dinucleotide-restriction. Furthermore, we detected immunoreactive OM proteins by
de conditions, la pathogenèse is specifically des espèces induced de early Pasteurellacea in PRRSV infection testées and ainsi can que neutralizing des interactions viral infection hôteof
of
immunoblot pathogène macrophages analyses durant in of vitro. 1D une and Taken infection 2D together, gels probed par A. these with pleuropneumoniae. post-convalescent observations suggest sera En from that plus, infected there ces animals. résultats may be These novel démon- studies metrentchanisms
le grand controlling potentiel PRRSV de ces infection lignées in pigs. pour PRRSV l’étude infection de la pathogenèse is associated et with des a variety interactions of im-
direct our selection of potential vaccine candidates for APP that are immunogenic and are expressed under
hôte-pathogène munopathologies, de including micro-organismes hypergammaglobulinemia, pathogènes des voies immunosuppression, respiratoires du porc. and increased
production of immunosuppressive cytokines. In our studies, we have been unable to demons-
conditions that reflect infection in the porcine host.
trate direct effects of PRRSV infection on IL-10 levels in the blood of infected pigs, on the immune
response to unrelated antigens administered at the time of PRRSV infection, on the total
or antigen-specific immunoglobulin levels in serum, or on B-cell numbers in lymphoid tissues.
These findings suggest that the appearance of increased disease in swine herds infected with
PRRSV is an indirect effect of viral infection.

Page 40

Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 20
Proteomic analysis of outer membrane proteins of Actinobacillus pleuropneumoniae:
The emergence identification of porcine of immunogenic circovirus candidates 2b genotype for (PCV-2b) vaccine in development.
swine in Canada
Jacqueline W. Chung (1), Christopher Ng-Thow-Hing (1), Bernard F. Gibbs (2), John H.E. Nash (3), Mario
N. Music, , D. Tremblay, Jacques J. Harel, (4), and M.-H. James Venne, W. Coulton S. M. Elahi (1) et C. A. Gagnon
Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP);
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
(2) Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street, Montreal QC, Canada H3A 3B4
(3) Institute for et Biological Service Sciences, de diagnostic; National Research Faculté Council de of Canada, médecine 100 Sussex vétérinaire Drive, Ottawa, (FMV),
ON, Canada K1A 0R6
(4) Groupe Université de recherche de sur Montréal les maladies (U infectieuses de Mtl), du porc, St-Hyacinthe, Département de Québec, pathologie et Canada.
microbiologie, Faculté de
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
Since late 2004, the swine industry in the province of Québec has
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
experienced a significant increase in death rate related to postweaning
multisystemic wasting syndrome (PMWS). To explain this phenomenon, 2 hypotheses
were formulated: 1) the presence of a second pathogen could be exacerbating the
porcine circovirus 2 (PCV-2) infection, or 2) a new and more virulent PCV-2 strain
could be infecting swine. In 2005, 13 PMWS cases were submitted to the Québec
provincial diagnostic laboratory and PCV-2 was the only virus that could be found
constantly by PCR in all 13 samples. The PCR detection results obtained for other
viruses revealed the following: 61.5% were positive for porcine reproductive and
respiratory syndrome virus (PRRSV), 30.8% for swine influenza virus (SIV), 15.4% for
porcine parvovirus (PPV), 69.2% for swine torque teno virus (swTTV), 38.5% for swine
hepatitis E virus (swHEV) and 84.6% for Mycoplasma hyorhinis; transmissible
gastroenteritis virus and porcine respiratory coronavirus (TGEV/PRCV) was not
detected. Sequences of the entire genome revealed that these PCV-2 strains
belonged to a genotype (named PCV-2b) that has never been reported in Canada.
Further sequence analyses on 83 other Canadian PCV-2 positive cases submitted to
the provincial diagnostic laboratory during years 2005 and 2006 showed that 79.5%
of the viral sequences obtained clustered in the PCV-2b genotype. The
appearance of the PCV-2b genotype in Canada may explain the death rate
increase related to PMWS, but this relationship has to be confirmed.
pneumonia, a highly infectious respiratory disease that contributes to major economic losses in the swine industry.
With pressures to reduce the use of antibiotics in agricultural livestock, vaccination against bacterial pathogens has
emerged as a safer and more cost-effective approach for disease control. Current vaccines against APP provide
only partial protection, have little impact on morbidity, or are serotype-specific. Therefore an effective vaccine
offering cross-protection against different serotypes of APP is urgently needed. Outer membrane (OM) proteins,
localized at the bacterial cell surface, are attractive vaccine candidates because they are exposed as targets to
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
silico for proteins predicted to be localized at the cell surface and constructed a consensus prediction list of 93 OM
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
LC-MS/MS. The outcome established the first OM proteome of APP grown under nutrient-rich conditions. We
identified 47 OM proteins representing 50% of the predicted OM proteome, most of which have not been
characterized. We now describe differences in OM protein profiles between APP grown under nutrient rich
conditions and under nutrient deprived conditions that resemble those in vivo: iron-restriction; growth-factor
nicotinamide adenine dinucleotide-restriction. Furthermore, we detected immunoreactive OM proteins by
immunoblot analyses of 1D and 2D gels probed with post-convalescent sera from infected animals. These studies
direct our selection of potential vaccine candidates for APP that are immunogenic and are expressed under
conditions that reflect infection in the porcine host.
Page 41

Page 42

Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 21
Page 43
Proteomic analysis of outer membrane proteins of Actinobacillus pleuropneumoniae:
identification of immunogenic candidates for vaccine development.
Introduction and objectives
Gilt Jacqueline acclimatization W. Chung is one of (1), the Christopher most important Ng-Thow-Hing and effective (1), management Bernard F. Gibbs schemes (2), to John control H.E. PRRSV Nash infection (3), Mario (1).
It is also necessary as a preamble to eradication, and to prevent recirculation of the virus in the sow herd. Procedures
Jacques (4), and James W. Coulton (1)
that expose gilts to the homologous herd strains represent an approach that is being implemented in many countries.
Producers and veterinarians are using different methods to infect gilts during acclimatization (i.e. method to obtain
the virus, (1) Department inoculum of preparation, Microbiology and viral Immunology, dose, and McGill length University, of quarantine) 3775 University (2). The Street, objective Montreal, of QC, this Canada experiment H3A 2B4 was to
(2) Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street, Montreal QC, Canada H3A 3B4
compare the immunological and virological response against PRRSV of pigs inoculated either with viremic serum or
(3) Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive, Ottawa, ON, Canada K1A 0R6
an inoculm prepared from cell culture.
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
Materials and methods médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
Forty five 30kg PRRSV negative barrows were randomly divided into four experimental (n=10) and one control group
(n=5). On day 0, groups 1 to 4 were intranasally inoculated with 102 TCID50, 104 TCID50 from viremic serum, 102 TCID50
and 104 The TCID50 Gram-negative from cell bacterial culture, respectively; pathogen Actinobacillus group 5 was pleuropneumoniae sham inoculated. (APP) On day causes 63 porcine animals received a
secondary homologous challenge with 10
pneumonia, a highly infectious respiratory disease that contributes to major economic losses in the swine industry.
With pressures to reduce the use of antibiotics in agricultural livestock, vaccination against bacterial pathogens has
emerged as a safer and more cost-effective approach for disease control. Current vaccines against APP provide
only partial protection, have little impact on morbidity, or are serotype-specific. Therefore an effective vaccine
offering cross-protection against different serotypes of APP is urgently needed. Outer membrane (OM) proteins,
localized at the bacterial cell surface, are attractive vaccine candidates because they are exposed as targets to
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
silico for proteins predicted to be localized at the cell surface and constructed a consensus prediction list of 93 OM
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
LC-MS/MS. The outcome established the first OM proteome of APP grown under nutrient-rich conditions. We
identified 47 OM proteins representing 50% of the predicted OM proteome, most of which have not been
characterized. We now describe differences in OM protein profiles between APP grown under nutrient rich
conditions and under nutrient deprived conditions that resemble those in vivo: iron-restriction; growth-factor
nicotinamide adenine dinucleotide-restriction. Furthermore, we detected immunoreactive OM proteins by
immunoblot analyses of 1D and 2D gels probed with post-convalescent sera from infected animals. These studies
direct our selection of potential vaccine candidates for APP that are immunogenic and are expressed under
conditions that reflect infection in the porcine host.
4 TCID50 from viremic serum. On day 0,1,2,3,7,14,21,28,49,63,64,65,70 and 77
post inoculation (pi) blood was collected from the jugular vein. Briefly, viremic serum was obtained from blood
samples from viremic animals during a PRRS outbreak in a commercial farm. Serum was harvested by centrifugation,
filtered, and gentamycin was added to prevent growth of bacterial contaminants, finally the serum was diluted with
modified Eagle medium (MEM) to obtain a concentration of 102 and 104 COMPARISON OF SEROLOGICAL AND VIROLOGICAL RESPONSE OF PIGS AGAINST PORCINE REPRODUCTIVE AND
RESPIRATORY SYNDROME VIRUS (PRRSV) WITH VIREMIC SERUM OR AN INOCULM PREPARED ON CELL CULTURE
L. Batista
TCID50 per mL. Inoculum from cell culture
was obtained by inoculating sera in MARC-145 continuous cell lines and porcine alveolar macrophages. After
propagation PRRSV will was tittered and diluted as explained above. Viremic serum and the final inoculum from cell
culture were sent to the diagnostic laboratory of the University of Montreal to confirm freedom of bacterial
contamination by culture and available PCR’s and adventitious viruses by cell culture and available PCR’s were also
performed. Clinical signs (i.e. depression, anorexia, fever and respiratory distress) were observed once a day for the
first 7 days after the primary and secondary challenge; mortality was also recorded throughout the duration of the
experiment. Sera was assessed for viremia by quantitative real timePCR (Tetracore Inc., Rockville, MD), and the
presence of PRRSV antibodies by IDEXX ELISA (IDEXX Laboratories Westbrook, ME).
Results: Percentage of PCR and ELISA positive samples from day 0 to 77 pi are presented in table 1 & 2 respectively.
Table 1. Percentage of PCR positive samples from day 0 to 77 pi
VS= Viremic serum
CC= Cell culture
NC= Negative control
Table 2. Percentage of ELISA positive samples from day 1 to 77 pi.
There was no difference in clinical signs and/or mortality between the different experimental groups.
Discussion and conclusions
As shown in Table 1, group 1 and 2 inoculated with viremic serum did not present 100% viremia until day 3 and 2
respectively. However animals inoculated with cell culture, independently of the viral dose, presented viremia in
100% of the animals after day 1 pi. Nevertheless, all animals were positive to ELISA by day 14. After secondary
homologous challenge on day 63 pi, viremia could no be detected in any of the 4 experimental groups,
independently of the type of inoculum and/or viral dose. This finding corroborated that even if initial viremia pi was
slower in the pigs inoculated with viremic serum, sterilizing immunity against homologous challenge on 63 days pi was
equal amongst the 4 experimental groups. The results of this experiment show that controlled exposure to PRRSV is an
effective and safe tool to generate adequate immunity against homologous challenge. However, caution should be
exercised in order to adequately prepare and assure the safety of the inoculum, and the authors recommend that
this procedure should be supervised and monitored by a consulting veterinarian. Also, it is important to consider the
sanitary status of the country, region, and/or farm were this technique is planned to be put into operation;
particularly attention should focus on the presence of other important viruses such as foot and mouth disease virus,
classical swine fever virus, amongst others that could jeopardize the health of the exposed animals. Further studies
are performed by this group to demonstrate the effectiveness of this technique both to a homologous and/or
heterologous challenge in pregnant animals. Finally, regulatory and ethical considerations should analyzed and
discussed before implementing this technique on a large scale basis.
References: (1) Dee SA. An overview of production system to prepare naïve replacement gilts for impeding PRRSV
challenge: A global perspective. Swine Health Prod 1997; 5: 231-239.. (2) Batista L, Torremorell M, Pijoan C.
Experimental exposure to porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) in gilts during acclimatization.
1
COMPARISON OF SEROLOGICAL AND VIROLOGICAL RESPONSE OF PIGS AGAINST PORCINE REPRODUCTIVE AND
RESPIRATORY SYNDROME VIRUS (PRRSV) WITH VIREMIC SERUM OR AN INOCULM PREPARED ON CELL CULTURE
L. Batista1, S. D'Allaire1, J. Harel1, C. Gagnon 1, M. Gottschalk1 1
Université de Montréal, St. Hyacinthe, Canada

Page 44
Résumés/Abstracts
Prés entation oral e no. 22
Delegates/Participants
Présentation orale no. 22
Evaluation of commercial filters to avoid or reduce reproductive and
respiratory syndrome virus aerosol transmission
1 Batista L. 2 Poulliot F. and 3 Mondor R.
Introduction
For many years the possibility for some swine pathogens to be transmitted between farms by aerosol has
been debated. To reduce the risk of introduction of different pathogens swine producers use biosecurity
methods, such as quarantine and testing of animals before introduction, downtime rules and shower-in/
shower-out protocols for personnel, insect control measures, and vehicle sanitation (1-3). However local
spread of certain pathogens such as porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
between farms still occurs due to aerosol transmission (4-5). Recently there have been several reports in
the literature of the results of the evaluation of different filtration systems to avoid PRRSV transmission (5-7).
The objective of this study was to evaluate the ability of several combinations of a commercial available
filter, a bactericidal/viricidal and a tissue to avoid or reduce aerosol transmission of PRRSV under
experimental conditions.
Materials and Methods
A scale model of a commercial swine finisher facility was built (Fig. 1). The source of PRRSV aerosols were
300mL (total dose 1 X 10 8 TCID50 [median tissue culture infective dose]) of Ingelvac PRRS MLV (Boehringer
Ingelheim Vetmedica, St. Joseph, Missouri, USA) aerosolized in 5 minutes. The study was divided in two
parts: 1. A non animal part to test five different combinations. Briefly, combinations of different layers of a
commercially available filter tissue, a viricidal/ bactericidal (Triclosan®) attached to the filter tissue, and
an extra tissue to prevent the passage of particles were tested. Before and after aerosolization swabs
were collected from the recipient chambers and tested for by quantitative real time polymerase chain
reaction (qRT-PCR). On part two, the two best combinations from part one are being tested by including
a 5kg. PRRSV naïve pig into the reception chamber for an exposure period of 6 hours after the
aerosolization of PRRSV. All the pigs are blood-tested on arrival to the experimental facilities and 7 and 14
days after the exposure period. Blood samples are tested for the presence of PRRSV RNA and PRRSV
antibodies by IDEXX 2XR enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (IDEXX Laboratories, Westbrook,
Maine, USA). Swabs from the recipient chamber are collected before aerosolization and after the
exposure period, and are also tested by qRT-PCR.
Fig. 1 Diagram of the experimental
chambers used in the study

Page 45

Page 46
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 23
Study on bacitracin antimicrobial resistance of Clostridium perfringens and in vitro
Il devrait evaluation y avoir of an alternative la to antibiotics. présentation
Louis-Alexandre Jalbert, Ann Letellier, Sylvain Quessy, Josée Harel, Jean-Pierre Vaillancourt,
Martine Boulianne and Marie Archambault
orale numéro 22 BATISTA: à rece-
Faculté de médecine vétérinaire, Groupe de recherche sur les mala
dies infectieuses du porc (GREMIP), University of Montreal, 3200 Sicotte Street, Saint-Hyacinthe,
voir, vu avec Mme Laurent le mardi
Québec, Canada; 2. *Corresponding author: Tel : 450-773-8521 ext 18679; Fax: 450-778-8108;
15 mai 2007
e-mail: marie.archambault@umontreal.ca
Necrotic enteritis (NE) is a disease affecting poultry everywhere in the world. It is associated
to an overgrowth of Clostridium perfringens in the small intestine. Growth promoters
such as bacitracin are used to prevent NE. However, concerns are raised about a possible
association
between antimicrobial resistance (AMR) and use of antibiotics as growth promoters (GP).
Thus, it is necessary to develop alternatives to GP to prevent and control C. perfringens. Moreover,
most GP used so far for the control of this disease may likely become strictly regulated.
Use of bacteriophages represents a promising alternative to control the intestinal population
of C. perfringens. Recently, phage phi3626 has been isolated from a strain of C. perfringens;
and part of this phage, a hydrolase, has shown efficacy against isolates of C. perfringens.
However, the phage lytic ability is presently unknown. The purpose of this study was to evaluate
bacitracin AMR in C. perfringens isolates recovered from chickens and turkeys and to
assess the in vitro lytic potential of phage phi3626 and phage phi2084 against these isolates.
Phage phi3626 was provided by Dr. Loessner of the Institute of Food Science in Zurich. Phage
phi2084 was isolated from litter provided by a commercial broiler farm. C. perfringens isolates
were recovered from commercial turkey and broiler caecums. They were typed by multiplex
PCR assay to determine the presence of toxin genes cpa, cpb, cpb2, etx, iA and cpe.
All isolates bacitracin MICs were determined by the Etest method. Isolates were also screened
by PCR for the presence of bacitracin resistance gene bcrR. For phage production, the
phages were amplified following a 1/3/5 ratio (phage/propagation strain/TYbroth) and incubated
overnight. Plates showing growth inhibition areas were considered positive. A total of
99 isolates of C. perfringens were recovered (83 from turkeys and 16 from chickens) and typed
by multiplex PCR. Most of the isolates belonged to C. perfringens type A (96 out of 99 isolates).
No enterotoxin gene (cpe) was detected while the gene cpb2 was identified in
11 (11.8%) isolates. The bcrR gene was present in 43% of our isolates and 26% of them showed
high-level bacitracin resistance (MIC >256 g/ml). Phage phi3626 was lytic against 7% of our
C. perfringens isolates (7 isolates) while phage phi2084 was lytic against 21% of the isolates (21
isolates). Our study show, for the first time in Québec, a high level of AMR to bacitracin in C.
perfringens isolates from poultry. We also report on the limited host restricted range of phage
phi3626 and phage phi2084. Thus, further work is necessary to find alternatives to antibiotics
with a higher host range to control C. perfringens NE.

Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 24
Page 47
Identification d’un inhibiteur peptidique de l’adhésine impliquée
dans l’adhérence diffuse
Victoria Girard, , Frederic Berthiaume, Manuel Campos et Michaël Mourez
Chaire de recherche du Canada, Faculté de médecine vétérinaire,
Université de Montréal, Saint-Hyacinthe, Québec, Canada.
An important step in the microbial colonization of the gastrointestinal tract is
bacterial adhesion to host epithelial cells. It is the early critical step of all diarrheal
infections caused by pathogenic Escherichia coli. Those diarrheagenic strains, divided
into six major categories, have different adhesion patterns. One pattern is
characterized by a diffuse adherence of the bacteria to the whole cell and defined
the Diffuse Adhering E.coli or DAEC. The adhesin involved in diffuse adherence (AIDA),
isolated from the DAEC strain 2787, is a surface protein mediating diffuse adherence to
Hep2 cells. AIDA is also able to mediate bacterial autoaggregation and biofilm
formation, both characteristics which possibly contribute to pathogenicity. The
increased antibiotic resistance of bacterial pathogens requires the development of
alternative intervention methods. Adhesion of the bacteria to the host cell is a key step
in pathogenesis. Therefore, targeting adhesion is an attractive goal. As a proof of
principle, we targeted the adhesin AIDA. In order to interfere with the adhesion
mediated by AIDA, we screened phage-display libraries to identify peptides able to
recognize this adhesin on the bacterial surface. We performed selections on the
purified adhesive domain of AIDA or directly on bacterial cells expressing AIDA. We
obtained several peptides with affinity and specificity towards AIDA. The peptides
were then evaluated for their effect on the adhesion mediated by AIDA, as well as on
the autoaggregation of bacterial cells expressing AIDA. Our results suggest that one
peptide is able to inhibit the autoaggregation mediated by AIDA. However, the
peptide will require further modifications and enhancements in order the block the
adhesion mediated by AIDA.

Page 48
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Présentation orale no. 25
Le paradigme de la "fenêtre de sélection des mutants" explique les différences de
sélection de résistances à l'enrofloxacine chez les colibacilles fécaux du porc
Romain Béraud*, Dave Bernier**, Ann Letellier***, Lucie Dutil****, Richard Reid-Smith****,
Louis M. Huneault*, Jérôme R.E. del Castillo**.
Université de Montréal, *département de sciences cliniques, **département de biomédecine
vétérinaire, ***département de pathologie et microbiologie, Faculté de médecine
vétérinaire. ****Agence de Santé Publique du Canada.
Peu de données objectives sont disponibles en médecine vétérinaire pour optimiser l’usage
des antibiotiques, qui maximise l’efficacité thérapeutique et minimise la sélection de bactéries
résistantes. La résistance aux fluoroquinolones (FQ) chez les bactéries fécales du porc et
autres animaux domestiques est associée à l’excrétion intestinale de ces antibiotiques via la
glycoprotéine P. Cette sélection de résistances serait liée à sa capacité du schéma thérapeutique
à exposer les bactéries à des concentrations de FQ qui se situent dans une « fenêtre de sélection
de mutants ». Nos hypothèses énoncent que (1) cette fenêtre de sélection possède une
borne inférieure, en dessous de laquelle la sélection de bactéries résistantes aux FQ serait minime
et (2) le schéma thérapeutique qui produit une forte bactéricidie au niveau intestinal devrait
diminuer la sélection de résistances. Notre objectif est de comparer le niveau d’exposition
et l’évolution de la résistance aux FQ des Escherichia coli fécaux de porcs recevant la même
dose d’enrofloxacine (EFX) par la voie orale, intramusculaire ou locale. De l’EFX a été administrée
à la dose de 5 mg/kg/jr pendant 15 jours à 21 porcs de 15±2 kg exempts d’antibiotiques,
répartis aléatoirement entre les groupes d’administration orale (PO), intramusculare (IM) et sous
la forme d’implant périosseux (OS). Des échantillons fécaux individuels ont été prélevés quotidiennement
pour la numération des E.coli sensibles et résistants, ainsi que des antibiogrammes
chez ces derniers isolats. Des échantillons de sang ont été prélevés pour détermination par
chromatographie liquide – spectrométrie de masse en tandem des concentrations plasmatiques
d’EFX et de ciprofloxacine (CFX). La concentration plasmatique d’EFX était significativement
plus élevée (p IM > OS. Les E.
coli des porcs du groupe OS n’ont pas connu de variation statistiquement significative de sensibilité
aux FQ, tandis que ceux des groupes PO et IM ont connu une diminution de sensibilité significative
à partir du 8ème jour de traitement (p

Présentation orale no. 26
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Il devrait y avoir la présentation
orale numéro 22 BATISTA: à rece-
voir, vu avec Mme Laurent le mardi
ble est nettement insuffisante pour permettre à la bactérie pathogène d’assurera survie et sa multiplica-
15 mai 2007
Page 49
Importance du transport des salmochélines et de l’entérobactine pour la virulence de
Escherichia coli pathogène extra-intestinal
Mélissa Caza, Sylvain Milot, François Lépine et Charles M. Dozois
INRS-Institut Armand-Frappier
Escherichia coli est une espèce bactérienne très versatile qui peut causer des infections extraintestinales
(ExPEC) chez les humains et les animaux. Lors d’une infection, la quantité de fer libre disponi-
tion dans l’organisme hôte. Les bactéries pathogènes ont donc développé diverses stratégies pour subvenir
à leur besoin en fer, particulièrement par la synthèse de sidérophores. Les sidérophores sont des molécules
de faibles poids moléculaire ayant la capacité de lier fortement le fer, permettant ainsi aux bac-
téries d’acquérir cet élément essentiel à leur survie et leur croissance. L’entérobactine et les
salmochélines sont des sidérophores de type catécholates synthétisés et sécrétés par plusieurs entérobactéries
pathogènes dont E. coli et Salmonella spp. Il a été démontré que le locus iroA (iroBCDEN),
impliqué dans la synthèse (iroB), le transport (iroC et iroN) et la dégradation des salmochélines (iroD et
iroE), contribue à lavirulence de la souche pathogène aviaire E. coli χ7122. Les salmochélines sont en fait
des sidérophores modifiés de l’entérobactine auquel la glycosyltransférase IroB ajoute des molécules de
glucoses. Cette modification permet d’éviter la séquestration des salmochélines par la protéine NGAL,
qui est une protéine humaine ayant la capacité de séquestrer l’entérobactine. De plus, le criblage des
gènes iro a démontré qu’ils sont associés aux souches pathogènes extra-intestinales (ExPEC), sont parfois
retrouvés chez les souches causant la diarrhée chez le porc et sont absents de la souche non-pathogène
E. coli K-12.
Bien que la synthèse des salmochélines soit liée étroitement à celle de l’entérobactine, d’autres
interrelations entre les deux systèmes semblent aussi avoir lieu, notamment au niveau de la sécrétion des
sidérophores. Récemment, il a été démontré que la sécrétion de l’entérobactine cyclique était assurée
par EntS, et IroC est soupçonné de participer à celle des salmochélines. Des analyses en chromatographie
liquide couplé au spectre de masse (LC/MS/MS) ont été effectuées à partir des surnageants de
cultures de mutants entS et/ou iroC. La détection et la quantification relative des différentes molécules
ont été réalisées par « Multiple reaction monitoring » (MRM). Il existe en fait neuf molécules appartenant
aux salmochélines et quatre à l’entérobactine. Des variations quantitatives des différentes molécules ont
été notées en fonction de la mutation de la bactérie. Par exemple, la mutation iroC affecte considérablement
la sécrétion de certaines salmochélines spécifiquement, tandis qu’une mutation entSempêche
plutôt l’export de molécules différentes. De plus, l’absence de iroC et entS prévient grandement la détection
de plusieurs salmochélines, ce qui suggère que IroC et EntS sont impliqués dans la sécrétion des
salmochélines et de l’entérobactine, chacun exportant des molécules différentes. Ces souches ont ensuite
été inoculées dans le modèle d’infection aviaire. Des dénombrements bactériens à partir d’échantillons
de sang, du foie, de la rate et des poumons ont été effectués. Les bactéries les plus virulentes ont
typiquement la capacité de coloniser ces organes. Les résultats obtenus démontrent une atténuation
significative du mutant entSdans tous les organes, ainsi que dans les échantillons sanguins. Un double mutant
entS iroCest encore plus atténué dans le model d’infection Cette interrelation de la sécrétion de
deux types de sidérophores catécholates apporte une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires
qui régissent l’utilisation des ces sidérophores. De plus, la détermination de l’importance des ces
deux gènes lors d’une infection pourrait révéler des cibles candidates pour prévenir les infections extraintestinales
chez la volaille, le porc et d’autres espèces.

Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Page 50
Présentation orale no. 27
Rôle du transporteur SitABCD pour la virulence d’Escherichia coli
Proteomic analysis of outer membrane proteins of Actinobacillus pleuropneumoniae:
Il devrait
pathogène
y avoir
extra-intestinal
la
(ExPEC)
présentation
identification PROULX of immunogenic J., , B. AUGUSTIN, candidates A. POIRIER for et vaccine C.M. DOZOIS
development.
INRS - Institut Armand-Frappier, Laval, PQ, CANADA
orale
Jacqueline W. Chung
numéro
(1), Christopher Ng-Thow-Hing
22 BATISTA:
(1), Bernard F. Gibbs (2), John
à
H.E. Nash
rece-
(3), Mario
Jacques (4), and James W. Coulton (1)
Plusieurs facteurs de virulence sont associés aux souches de Escherichia coli causant des infections
extra-intestinales, tel les systèmes de transport d’ions divalents. Ceux-ci auraient pos-
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
voir,siblement
un vu
rôle dans avec
la virulence Mme
et dans la résistance Laurent
au stress oxydatif le
de Escherichia mardi
coli,
ce qui pourrait potentiellement permettre à la bactérie de résister au système immunitaire de
l'hôte, par exemple à la flambée respiratoire des macrophages et autres phagocytes. Ré-
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
15
cemment, mai
un système 2007
de transport de manganèse et de fer (SitABCD) a été identifié chez
une souche de E. coli pathogène aviaire. Le système SitABCD est homologue au Salmonella
(2) Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street, Montreal QC, Canada H3A 3B4
(3) Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive, Ottawa, ON, Canada K1A 0R6
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
iron transporter (Sit) qui est présent chez les sérovars de Salmonella enterica. Le criblage de
pneumonia, SitABCD a démontré highly infectious que respiratory ces gènes disease sont that associés contributes aux souches to major economic pathogènes losses extra-intestinales
in the swine industry.
(ExPEC), sont rares chez les souches causant la diarrhée chez le porc et sont absents de la
With souche pressures non-pathogène to reduce the use E. of coli antibiotics K-12. in Un agricultural autre système livestock, de vaccination transport against d’ions bacterial divalents pathogens (MntH),
has
présent chez toutes les souches de E. coli, pourrait aussi contribuer à la résistance au stress
emerged as a safer and more cost-effective approach for disease control. Current vaccines against APP provide
oxydatif.
only partial protection, have little impact on morbidity, or are serotype-specific. Therefore an effective vaccine
Dans le cadre de ce projet, nous avons tout d’abord inactivé ces systèmes transporteurs
offering d'ions cross-protection divalents (SitABCD against et different MntH) par serotypes mutagenèse of APP is urgently chez la needed. souche Outer uropathogène membrane (OM) CFT073, proteins, en
utilisant la méthode de Datsenko et Wanner (2000). Des mutants simples (ΔsitABCD, ΔmntH)
localized at the bacterial cell surface, are attractive vaccine candidates because they are exposed as targets to
et doubles (ΔsitABCDΔmntH) ont été réalisés. Puis, la virulence de chacun de ces mutants a
the été immune comparée system and à celle play de key la roles souche in infection. sauvage Using the dans genome un modèle sequence de of co-infection APP serotype 5b, du we tractus scanned uri-
in
naire murin. Chacun des mutants a été comparé à la souche CFT073 Dlac. De cette façon,
silico les for comptes proteins predicted bactériens to be ont localized pu être at the réalisés cell surface sur géloses and constructed MacConkey a consensus afin prediction d’avoir list une of 93 plus
OM
proteins. grande We facilité previously de described différentiation. proteomic Aucune analyses diminution utilizing 1D gel de electrophoresis, virulence n'a followed été observée by identification pour les
with
mutants simples. Par contre, une baisse significative de la virulence a été constatée dans le
LC-MS/MS. cas du mutant The outcome double established ΔsitABCDΔmntH, the first OM mais proteome seulement of APP dans grown les under reins. nutrient-rich Le double conditions. mutant est
We
cinq fois moins virulent que la souche sauvage (P

Présentation orale no. 28
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Page 51
Proteomic analysis of
Importance
outer membrane
du transporteur
proteins of
de
Actinobacillus
zinc ZnuABCD
pleuropneumoniae:
Il devrait y avoir la présentation
identification of
pour
immunogenic
la virulence
candidates
et la résistance
for vaccine
au stress
development.
oxydatif des souches d’Escherichia coli pathogènes extra-intestinales (ExPEC)
orale
Jacqueline W. Chung
numéro
(1), Christopher Ng-Thow-Hing
22 BATISTA:
(1), Bernard F. Gibbs (2), John
à
H.E. Nash
rece-
(3), Mario
Mourad Sabri, Julie Jacques Proulx, (4), and Sébastien James W. Houle Coulton et (1) Charles M. Dozois
INRS-Institut Armand Frappier, Laval, Québec, Canada
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
voir,
Le zinc
vu
est un
avec
micronutriment
Mme
indispensable
Laurent
pour la croissance bactérienne.
le mardi
En tant que
cofacteur métabolique le zinc intervient dans des nombreux processus enzymatiques parmi lesquels la
détoxification des intermédiaires réactifs d’oxygène par la superoxyde dismutase périplasmique SodC.
médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada J2S 7C6
15
De plus,
mai
le zinc joue un
2007
rôle structurel dans le repliement des nombreuses protéines, dont les protéines
ribosomales et les régulateurs d’expression de l’information génétique tels que Fur.
(2) Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street, Montreal QC, Canada H3A 3B4
(3) Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive, Ottawa, ON, Canada K1A 0R6
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
Les entérobactéries telles que Salmonella sp. et Escherichia coli ont développé des transpor-
pneumonia, a highly infectious respiratory disease that contributes to major economic losses in the swine industry.
teurs spécifiques afin d’acquérir ce métal en quantité suffisante autant dans l’environnement qu’à l’intérieur
des organismes infectés. Deux transporteurs ZnuACB et ZupT ont été décrits dans les publica-
With pressures to reduce the use of antibiotics in agricultural livestock, vaccination against bacterial pathogens has
tions scientifiques. ZnuACB est un transporteur de type ABC, dépendant d’une protéine de transport
emerged périplasmique as a safer et and utilisant more l’ATP cost-effective en tant que approach source for d’énergie disease control. nécessaire Current au vaccines transport against de l’ion APP Zn2+ provide à
travers la membrane cellulaire. ZupT est un transporteur dont le mode de fonctionnement exact est
only pour partial l’instant protection, inconnu, have mais little qui impact semble on appartenir morbidity, à or la are catégorie serotype-specific. des transporteurs Therefore utilisant an effective le gradient vaccine
chimiosmotique de part et d’autre de la membrane cellulaire pour assurer le transport de Zn2+. L’im-
offering portance cross-protection de ZnuACB against pour la different virulence serotypes a été of démontrée APP is urgently chez needed. Salmonella Outer enterica membrane ser. typhimurium
(OM) proteins,
étant donné qu’un mutant Äznu s’est avéré être moins virulent que la souche de type sauvage.
localized at the bacterial cell surface, are attractive vaccine candidates because they are exposed as targets to
Étant donné la capacité de souches d’Escherichia coli de causer de nombreux types d’infections
chez l’humain et les animaux, nous avons choisi d’étudier l’importance du transporteur ZnuACB pour la
the immune system and play key roles in infection. Using the genome sequence of APP serotype 5b, we scanned in
virulence des souches pathogènes extra-intestinales (ExPEC) de cette espèce bactérienne.
silico De plus, for proteins nous avons predicted vérifié to be expérimentalement localized at the cell l’impact surface and de la constructed perte du transporteur a consensus prediction ZnuACB sur list la of résis- 93 OM
tance à la toxicité des intermédiaires réactifs d’oxygène. Nos résultats indiquent que ZnuACB est im-
proteins. portant We pour previously la virulence described des souches proteomic ExPEC analyses telles utilizing que 1D la gel souche electrophoresis, pathogène followed aviaire by ÷7122 identification et la sou- with
che uropathogène humaine CFT073, impliquées respectivement dans la colibacillose aviaire et dans
LC-MS/MS. les infections The du outcome tractus urinaire. established the first OM proteome of APP grown under nutrient-rich conditions. We
identified 47 OM proteins representing 50% of the predicted OM proteome, most of which have not been
En effet, le mutant ÄznuA de chacune de ces souches a été significativement atténué par rapport
à une souche ÄlacZ isogène, dans le modèle expérimental de la colibacillose aviaire ou le mo-
characterized. We now describe differences in OM protein profiles between APP grown under nutrient rich
dèle expérimental murin de l’infection urinaire. De plus, la perte de la fonction du transporteur ZnuACB
conditions chez ces and souches under mutantes nutrient a deprived entraîné conditions une baisse that de resemble résistance those à la toxicité in vivo: des iron-restriction; intermédiaires growth-factor réactifs
de l’oxygène. Il est donc possible que l’attenuation observée chez les souches mutantes ÄznuA, soit
nicotinamide due au moins adenine en partie dinucleotide-restriction. à une plus grande sensibilité Furthermore, de ces we mutants detected au immunoreactive stress oxydatif généré OM proteins par les by
cellules immunitaires de l’hôte.
immunoblot analyses of 1D and 2D gels probed with post-convalescent sera from infected animals. These studies
Étant donné l’importance des infections causées par E. coli et d’autres entérobactéries, nos
direct our selection of potential vaccine candidates for APP that are immunogenic and are expressed under
résultats indiquent que les transporteurs de zinc , notamment ZnuA, pourraient être des cibles
potentielles pour prévenir ou contrecarrer ces maladies chez diverses espèces animales dont le
conditions that reflect infection in the porcine host.
porc.

Présentation orale no. 29
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Prés entation oral e no. 29
Page 52
CARACTÉRISATION DU MÉCANISME MOLÉCULAIRE IMPLIQUÉ DANS LA VARIATION DE PHASE
DE L’ADHÉSINE FIMBRIAIRE F1651.
Étude Proteomic des interactions analysis of d' outer Actinobacillus membrane pleuropneumoniae proteins of Actinobacillus et d'autres pleuropneumoniae:
Pasteurellaceae
Il devrait y avoir la présentation
identification avec of immunogenic des cellules épithéliales candidates d'origine for vaccine porcine development.
Graveline, R.*, .*, F. Berthiaume*, M. Mourez*, C. Martin**, J. Harel*
orale
Jacqueline Eliane Auger*, W. Chung
numéro
Mahendrasingh (1), Christopher Ramjeet*, Ng-Thow-Hing
22
Irazu
BATISTA:
(1), Bernard Contreras**, F. Gibbs Martin (2), John Olivier**,
à
H.E. Nash
rece-
Marcelo (3), Mario
*Groupe de recherche sur les Jacques Gottschalk* maladies (4), infectieuses and et James Mario W. du Jacques* Coulton porc (GREMIP), (1) Faculté de médecine
vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada; **INRA de Clermont-Ferrand-
(1) Department of Microbiology and Immunology, McGill University, 3775 University Street, Montreal, QC, Canada H3A 2B4
voir, vu
* Theix, GREMIP, Unité avec
Faculté de Microbiologie, de
Mme
médecine Saint-Genes-Champanelle, vétérinaire,
Laurent
St-Hyacinthe, France.
le
QC
mardi
**Departement La présence des of fimbriae Microbiology de type and P chez Immunology, Escherichia coli McGill implique University, un mécanisme Montréal, de variation
QC
de phase basé sur la médecine compétition vétérinaire, entre, Université d’une de part, Montréal, la méthylation St-Hyacinthe, QC, à deux Canada sites J2S GATC 7C6 par la Dam
15
méthylase mai
et, d’autre 2007
part, la fixation, au niveau de la région régulatrice de l’opéron pap, de la protéine
Nous régulatrice avons sensible standardisé à la leucine un modèle Lrp (Leucine-responsive in vitro d’adhérence regulatory pour protein). l’étude Cette de bactéries région
(2) Sheldon Biotechnology Center, McGill University, 3773 University Street, Montreal QC, Canada H3A 3B4
(3) Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, 100 Sussex Drive, Ottawa, ON, Canada K1A 0R6
(4) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc, Département de pathologie et microbiologie, Faculté de
The Gram-negative bacterial pathogen Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) causes porcine
pathogènes contient six sites des de voies fixation respiratoires à Lrp séparés du en porc deux en groupes, utilisant distal deux et lignées proximal, cellulaires selon leur porcines, position par
notamment
pneumonia, rapport au la a promoteur highly lignée infectious de pBA. cellules respiratory La régulation de disease trachée de that l’opéron « contributes Newborn pap to Pig major fait Trachea aussi economic intervenir » (NPTr) losses d’autres in et the la swine lignée facteurs,
industry. de
cellules notamment de poumon le régulateur « St. local Jude PapI Porcine qui favorise Lung la » transcription (SJPL). Avec de l’aide l’opéron de pap.
ce modèle, nous avons
With pressures to reduce the use of antibiotics in agricultural livestock, vaccination against bacterial pathogens has
étudié les
Les interactions
fimbriae F1651 F1651 hôte-pathogène
appartiennent à la de
famille l’agent
des fimbriae étiologique
de type de
P la
et pleuropneumonie
leur synthèse est sous por-
le
contrôle de l’opéron foo. Des études ont déjà montré que leur synthèse fait intervenir Lrp et FooI
cine, emerged Actinobacillus as a safer and more pleuropneumoniae, cost-effective approach ainsi for que disease d’autres control. Pasteurellaceae Current vaccines against comme APP provide Hae-
(homologue de PapI) et est également soumise à la variation de phase. En revanche, si la comparaimophilusson
de séquences parasuis, montre Actinobacillus une très forte suis similitude et Pasteurella entre les multocida. opérons pap En et foo, premier l’opéron lieu foo nous présente
avons
only examiné partial les protection, propriétés have d’adhérence little impact on morbidity, et d’invasion or are de serotype-specific. ces diverses bactéries Therefore an pathogènes effective vaccine
des particularités: alors que la plupart des systèmes d’adhésion sont en phase OFF, les souches F1651 F1651 du
porc. sont préférentiellement Nous avons ensuite en phase étudié ON. la De réponse plus, des cellulaire études ont des aussi lignées montré épithéliales que la leucine suite et l’alanine
à une in-
offering cross-protection against different serotypes of APP is urgently needed. Outer membrane (OM) proteins,
fection inhibent par non A. seulement pleuropneumoniae la variation de serotype phase mais 1 en aussi évaluant le niveau l’expression de transcription de de facteurs base de l’opétrans-
localized cription,ron foo at alors en the quantifiant bacterial que ces cell acides surface, la production aminés are attractive ne de semblent vaccine cytokines pas candidates ainsi intervenir qu’en because dans détectant they le cas are exposed du des système indicateurs
as targets Pap.
to
Par conséquent, il est à supposer que les différences de séquences observées dans la région régula-
d’apoptose. Nos résultats indiquent des différences d’adhérence entre les souches ainsi
the trice immune de l’opéron system and foo play suffisent key roles à modifier in infection. l’affinité Using de the Lrp genome et/ou sequence de FooI of à leurs APP serotype séquences 5b, we cibles scanned et à
in
qu’entre
favoriser ainsi les lignées.
l’action des La
acides croissance
aminés d’
dans A. pleuropneumoniae
la régulation du système sérotype
F1651.
1 sous conditions res-
silico treinte for proteins en Afin fer de predicted ou comprendre en NAD to be n’a au localized niveau pas at affecté the moléculaire cell surface l’adhérence, les and mécanismes constructed et ce impliqués a aux consensus deux dans prediction lignées. la variation list En of ce 93 de
qui OM
concerne phase et dans l’invasion, l’expression la souche de l’opéron d’ foo, A. foo, pleuropneumoniae nous avons comparé les testée interactions n’envahie de Lrp pas avec les la cellules région
proteins. We previously described proteomic analyses utilizing 1D gel electrophoresis, followed by identification with
dans régulatrice notre des modèle opérons tandis foo et que pap les en autres présence espèces ou en absence de Pasteurellaceae de FooI, de leucine testées et d’alanine.
ont démontré
LC-MS/MS. la capacité En combinant The outcome d’envahir le retard established ces de cellules. migration the first OM La sur proteome détection gel aux analyses of APP de grown la par production résonance plasmonique under nutrient-rich de cytokines de sur-
conditions. pro- We
inflammatoiresface, nous avons par montré les deux que Lrp lignées interagit suite avec à une induction affinité comparable par des cellules entre les A. domaines pleuropneumo-
proximal
identified et distal de
niae inactivées 47 de OM l’opéron proteins foo; a démontré representing contrairement une 50% à augmentation of ce the qui predicted est observé de OM dans la proteome, le cas de production most l’opéron de of IL-8 which pap par have pour les not lequel
cellules been
Lrp se lie préférentiellement au fragment proximal. De plus, la présence d’alanine ou de leucine à des
characterized. NPTr, concentrations mais aucune We physiologiques now production describe suffit differences d’autres à inhiber in cytokines la OM liaison protein de n’a profiles Lrp été aux between détectée domaines APP régulateurs pour grown les under deux des nutrient opérons
lignées, rich
ceci pap malgré et foo. Par une ailleurs, augmentation la présence de FooI l’expression augmente du l’affinité facteur de de Lrp transcription aux régions intergéniques NF-kB. A. pleu- des
conditions ropneumoniae deux opérons, and under pap a démontré et nutrient foo, étudiés deprived être alors hautement conditions qu’aucun that cytotoxique retard resemble de migration those mais in n’est n’induit vivo: observé iron-restriction; pas en l’apoptose présence growth-factor de
des
cellules FooI seule épithéliales à l’aide des SJPL deux et techniques NPTr. Cette utilisées. étude De a plus, permis l’action d’augmenter concertée de notre FooI et compréhension
Lrp est inhibée
nicotinamide adenine dinucleotide-restriction. Furthermore, we detected immunoreactive OM proteins by
de en la présence pathogenèse d’alanine des et de espèces leucine.
de Pasteurellacea testées ainsi que des interactions hôte-
immunoblot pathogène
Par l’utilisation analyses durant of 1D une
de la and infection
résonance 2D gels probed par
plasmonique A. with pleuropneumoniae.
de surface, nous post-convalescent sera En
avons from plus,
non infected ces
seulement animals. résultats
confirmer
These démon- studies
les résultats observés par retard de migration sur gel mais aussi mis en évidence l’importance de la
trent le grand potentiel de ces lignées pour l’étude de la pathogenèse et des interactions
direct coopérativité our selection dans of les potential interactions vaccine entre candidates Lrp et la région for APP intergénique that are immunogenic de l’opéron and foo.
are expressed under
hôte-pathogène Ces résultats constituent de micro-organismes une étape importante pathogènes dans la compréhension des voies respiratoires du rôle physiologique du porc. joué par
conditions l’adhésine that fimbriaire reflect infection F1651 F1651 et in apportent the porcine des host. éléments nouveaux sur le mécanisme moléculaire de la
régulation de l’opéron foo par Lrp.

Présentation orale no. 30
Résumés/Abstracts
Delegates/Participants
Il
Étude
devrait
des relations structure-function
y avoir
d’une adhésine
la présentation
impliquée dans l’adhérence
diffuse (AIDA-I) chez Escherichia coli
orale numéro
Charbonneau,
22
M.-È.
BATISTA:
et M. Mourez
à rece-
Chaire de recherche du Canada, Faculté de médecine vétérinaire,
voir, vu Université avec de Montréal, Mme Saint-Hyacinthe, Laurent QC, Canada.
le mardi
15 mai 2007
Page 53
The Escherichia coli Adhesin Involved in Diffuse Adherence (AIDA-I) is a
multifunctional autotransporter protein that mediates bacterial aggregation, biofilm
formation as well as adhesion and invasion of cultured epithelial cells. To elucidate
the structure-function relationships in AIDA-I, we performed a transposon-based linker
scanning mutagenesis and constructed site-directed deletions. We targeted mature
AIDA-I, which corresponds to a fragment of the extracellular portion of the protein
generated after autoproteolytic processing. Twenty-nine different insertions that did
not affect protein expression were obtained throughout the protein. Eleven mutants
were deficient for only some of the functions associated with the expression of AIDA-
I, without affecting the others. Functional characterizations of the transposon and
deletion mutants suggested that the N-terminal third of mature AIDA-I is involved in
biofilm formation and binding to cultured epithelial cells. The purified product of this
putative domain fused to Glutathione S-transferase could bind to cultured epithelial
cells, confirming the importance of this region in adhesion. We have also identified
two different mutants that are deficient for invasion but can still mediate adhesion,
suggesting the existence of different domains for these two related functions. Lastly,
the C-terminal third of mature AIDA-I seems to be involved in bacterial aggregation.
Our results suggest that most functions associated with the expression of AIDA-I are
distinct features and that functional domains can be separated in mature AIDA-I.

Page 54
Présentation orale no. 31
L’entérotoxine STb d’Escherichia coli perméabilise les vésicules de membrane à
bordure en brosse (VMBBs) des cellules de l’épithélium du jéjunum de porc
*, V. VACHON**, J.-L. SCHWARTZ ** et J.D. DUBREUIL *
GONÇALVES C.*, V. VACHON**, J.-L. SCHWARTZ ** et J.D. DUBREUIL *
* Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), Faculté
de médecine vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada;
** Groupe d'étude des protéines membranaires (GÉPROM),
Université de Montréal, QC, Canada
La toxine STb est produite par certaines souches d’Escherichia coli
entérotoxinogènes. Elle conduit à une altération de l’homéostasie intestinale
avec une sécrétion importante ce qui induit une diarrhée chez le porc. STb est
un peptide de 48 acides aminés contenant deux hélices a (une hélice hydrophile,
Cys10 à Lys22, et une hélice hydrophobe, Gly38 à Ala44) reliées par une
boucle riche en glycines. La structure tertiaire est stabilisée par deux ponts disulfure
(Cys10-Cys21 et Cys21-Cys36) essentiels à l’activité entérotoxique.
Le sulfatide (SFT), un glycosphingolipide présent à la surface des cellules intestinales
du jéjunum, joue le rôle de récepteur pour STb. Les effets de STb sur les cellules
intestinales, en particulier au niveau de leur perméabilisation, restent mal
connus. Nous avons donc entrepris d’étudier l’interaction de STb avec la paroi
luminale intestinale au moyen de vésicules de membrane à bordure en brosse
(VMBBs) préparées à partir du tissu épithélial de jéjunum de porc. Ce tissu est la
cible de la toxine et le SFT est présent à sa surface. La perméabilisation des
VMBBs par STb a été observée à l’aide d'une sonde fluorescente sensible au
potentiel membranaire, le 3,3’-dipropylthiadicarbocyanine iodide (diS-C3(5)). La
formation de pores par STb se traduit par la diminution du potentiel de
membrane généré au préalable à l’aide de valinomycine, un ionophore du potassium,
et d’un gradient de KCl dirigé vers l’extérieur des vésicules. Cette
réponse est dose dépendante. La fluorescence des VMBBs porcins exposés à STb
a été mesurée à différents pH (de 5 à 8) et dans diverses solutions ioniques afin
d’établir la sélectivité des pores formés par la toxine. Nos résultats montrent pour
la première fois que STb perméabilise efficacement la membrane apicale des
cellules du jéjunum.

Présentation orale no. 32
Page 55
Application d'une biopuce à ADN spécifique d'Escherichia coli dans le diagnostic
et l'épidémiologie d'isolats cliniques
G. Bruant*, *, L. Masson**, R. Brousseau**, A. Darfeuille-Michaud***, et J. Harel*
* GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Saint-Hyacinthe, QC, Canada.
** Institut de recherche en biotechnologie (IRB), Montréal, QC, Canada.
*** Université d'Auvergne, Clermont-Ferrand, France.
Les souches pathogènes d'Escherichia coli peuvent porter un grand nombre de gènes de virulence et
de résistance aux antibiotiques. En utilisant la technologie des biopuces à ADN, un test de diagnostic
rapide, hautement spécifique et peu coûteux a été développé dans le but de détecter simultanément
une liste exhaustive de gènes de virulence et de résistance aux antibiotiques. L'objectif de cette étude
a été de démontrer l'applicabilité de cette biopuce comme un outil puissant pour le diagnostic et l'épidémiologie
en caractérisant des souches cliniques de E. coli.
Une biopuce à ADN, composée d'oligonucléotides 70-mer et préalablement validée, a été utilisée
pour détecter la présence ou l'absence de 30 gènes acquis de résistance aux antibiotiques et de 189
gènes ou marqueurs de virulence spécifique de E. coli, ainsi que leurs variants. Une collection de 31 souches
de E. coli isolées de patients contrôles ou atteints de la maladie de Crohn ou de colite ulcérative a
été caractérisée. Nous avons également développé un logiciel de bio-informatique nommé
“PathoCheck” pour analyser les résultats de biopuce. Ce logiciel est capable de déterminer le
pathotype d'un isolat ainsi que son contenu génétique directement à partir de l'image d'hybridation.
Approximativement 35% des souches portaient au moins un gène de résistance aux antibiotiques et
environ 25% étaient multi-résistantes. De plus, les souches ont été classées selon leur profil de gènes de
virulence et leur groupe phylogénétique. La plupart des souches appartenant aux groupes phylogénétiques
B2 et D possédaient au moins deux gènes impliqués dans l'acquisition ou le transport du fer et un
gène de capsule tel que kpsM. Plus de la moitié des souches a été classifiée comme E. coli extraintestinaux
(ExPEC). Cinq souches ont été classifiées comme E. coli uropathogèniques (UPEC) et cinq
autres comme E. coli responsables de méningites chez le nouveau-né (MNEC). PathoCheck nous a permis
d'évaluer le virotype des souches ainsi que, dans la plupart des cas, leur pathotype associé.
Ces résultats ont donc validé cette biopuce à ADN comme outil moléculaire efficace pour caractériser
les isolats de E. coli d'origine clinique. Lorsque couplée à l'utilisation du logiciel de bio-informatique
PathoCheck, elle permet la détermination rapide des profils de gènes de virulence, facilitant ainsi
l'identification de pathotypes émergents ainsi que l'évaluation de la plasticité génomique, et est donc
un outil très utile pour les études épidémiologiques et phylogénétiques. Cette biopuce est également
utile pour le suivi de l'évolution de la résistance aux antibiotiques parmi les souches de E. coli.
Finalement, l'utilisation de cette biopuce sert également au contrôle de la qualité microbienne de la
nourriture et de l'eau, ainsi qu'aux études environnementales.

Page 56
Présentation orale no. 33
Mise au point d’un test PCR en temps réel pour la différentiation entre les circovirus
porcin des génogroupes 2a et 2b (CVP-2a et CVP-2b) et utilisation de ce nouveau test
diagnostic dans une étude épidémiologique rétrospective
N. Music, J.R.E. del Castillo, J. Harel, G. Fontaine, D. Tremblay et C. A. Gagnon.
Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP); Service de diagnostic;
Faculté de médecine vétérinaire (FMV),
Université de Montréal, St-Hyacinthe, Québec, Canada.
Le syndrome de dépérissement en post-sevrage (SDPS) a connu une recrudescence au Québec
en 2005, qui serait associée au nouveau génogroupe du circovirus porcin de type 2 nommé CVP-2b
(Gagnon et al., 2007). Selon Carman et al., (2007), le cadre lésionnel histopathologique chez les porcs
affectés par ce nouveau virus serait plus sévère que chez ceux qui sont atteints par l'ancien génogroupe
CVP-2a caractérisé antérieurement. Par conséquent, il était devenu nécessaire de déterminer
le génogroupe des CVP-2 retrouvés dans les échantillons cliniques soumis au laboratoire de diagnostic
de la FMV. Tout d'abord, suite aux analyses génomiques effectués avec plus de 100 souches de CVP-2
du Québec et de ceux disponibles dans Genbank, il a été déterminé que le gène ORF2 codant pour la
protéine de la nucléocapside (NC) du CVP-2 est le gène le plus variable entre les deux génogroupes de
CVP-2 existant soit CVP-2a et 2b. Suite à une analyse plus approfondie, une région hypervariable a été
identifiée entre la position des nucléotides 222 et 279 de l'ORF2. Ainsi, des sondes d'ADN ciblant cette
région hypervariable ont été synthétisées pour la mise au point d'un PCR mutiplex en temps réel CVP-2
permettant de différentier spécifiquement les deux génogroupes de CVP-2. Comparativement au test
PCR multiplex standard (Ouardani et al., 1999) le nouveau test mutiplex PCR en temps réel PCV-2 est
nettement plus sensible et permet de détecter 42% plus de cas positifs. De plus, il peut détecter la présence
simultanée des deux génogroupes. Enfin, le nouveau test PCR est très spécifique, ne produisant
aucun faux positif par rapport à des échantillons contrôles contenant divers virus tel que VSRRP, SIV,
TGEV. Dans un deuxième temps, nous avons procédé à une étude épidémiologique rétrospective avec
122 cas soumis au laboratoire de diagnostic, dont 40.2% des cas avaient du SDPS de modéré à sévère.
De cet ensemble, 95.9%, 4.1% et 4.1% des cas étaient positifs respectivement pour le génogroupe CVP-
2b, 2a ou pour les deux. Nous avons examiné à l'aide de régression logistique l'influence des titres viraux
de CVP-2 et de VSRRP sur le développement du SDPS. Aussi, nous avons examiné l'effet du SDPS et de la
charge virale de CVP-2 et de VSRRP sur la présence de co-infections avec divers pathogènes. Le développement
du SDPS augmentait significativement (p0.73). La présence des sérotypes épidémiques (c.à.d. 1/2, 1, 2, 3, 4 ou 7) de S.
suis était significativement associée à la charge virale de CVP-2 (p=0.0223). La présence de M. hyopneumoniae
était significativement augmentée chez les animaux positifs au CVP-2 mais non encore atteints
de SDPS (p=0.0127). Aucune association statistique solide n'a été identifiée entre le CVP-2 et d'autres
pathogènes tel que le SIV.
Remerciement: Un merci particulier au MAPAQ pour nous avoir donné accès à leur base de données
qui a permis la réalisation de l'étude épidémiologique rétrospective. Ce projet a été financièrement
appuyé par la FPPQ, le CDAQ et le CIPQ.

Titre princi pal
Présentation orale no. 34
Use of serology on colostrum samples for monitoring Actinobacillus
pleuropneumoniae, Mycoplasma hyopneumoniae and porcine reproductive and
respiratory syndrome virus infections in sow herds
* , Lacouture S. * , Broes A. 2 , Desrosiers R. *** , , D’Allaire S. * , Gottschalk M, *
* GREMIP, Faculty of Veterinary Medicine, University of Montreal, St. Hyacinthe, QC, Canada; ** Biovet, St.
Hyacinthe, QC, Canada; *** Batista L.
Boehringer Ingelheim Vetmedica, St. Hyacinthe, QC, Canada
* , Lacouture S. * , Broes A. 2 , Desrosiers R. *** , , D’Allaire S. * , Gottschalk M, *
* GREMIP, Faculty of Veterinary Medicine, University of Montreal, St. Hyacinthe, QC, Canada; ** Biovet, St.
Hyacinthe, QC, Canada; *** Boehringer Ingelheim Vetmedica, St. Hyacinthe, QC, Canada
Introduction
In the last 10 years, the monitoring of several pathogens in sow herds has been mainly based on serological testing.
Blood serum is the preferred sample to evaluate antibodies against pathogens such as Actinobacillus pleurpneumoniae
(APP), Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo.) and porcine reproductive and respiratory syndrome
virus (PRRSV). Since more than 90% of the IgGs present in colostrum are from serum origin (1), the use of colostrum
for antibody detection instead of serum may present some advantage. he objective of this study was to compare
the relative sensitivity and specificity of different serological tests for the detection of antibodies in serum and fresh
and frozen colostrum samples.
Materials and Methods
Five different serological tests were assessed: 2 for PRRSV (IDEXX HerdChek PRRS 2XR ELISA and CIVTEST SUIS PRRS A/
S), 2 for M. hyo (DAKO ® and IDEXX ELISA ®) , and 1 for APP (LC-LPS ELISA). The optimal method of centrifugation and
fat removal of colostrum as well as the optimal dilutions of colostrum for each test were evaluated. To establish
optimal time of colostrum collection, colostrum samples from 24 sows from a farm known to be positive to APP, M.
hyo and PRRSV were collected between 6 hours pre-farrowing to 48 hours post-farrowing. Validation of the strategy
was done with serum and colostrum samples taken from approximately 25 sows from each of 5 positive and 4
negative farms for APP, M. hyo., and PRRSV. Also, samples from 48 sows were collected to determine conservation
time of colostrum (60 days) at -10o Materials and Methods
Five different serological tests were assessed: 2 for PRRSV (IDEXX HerdChek PRRS 2XR ELISA and CIVTEST SUIS PRRS A/
S), 2 for M. hyo (DAKO
C..
® and IDEXX ELISA ®) , and 1 for APP (LC-LPS ELISA). The optimal method of centrifugation and
fat removal of colostrum as well as the optimal dilutions of colostrum for each test were evaluated. To establish
optimal time of colostrum collection, colostrum samples from 24 sows from a farm known to be positive to APP, M.
hyo and PRRSV were collected between 6 hours pre-farrowing to 48 hours post-farrowing. Validation of the strategy
was done with serum and colostrum samples taken from approximately 25 sows from each of 5 positive and 4
negative farms for APP, M. hyo., and PRRSV. Also, samples from 48 sows were collected to determine conservation
time of colostrum (60 days) at -10oC.. Results
A simplified fat removal extraction method (2) was confirmed to be appropriate for colostrum testing. The APP LC-
LPS ELISA, and DAKO ELISA ® for M. hyo. could use colostrum at the same dilution as recommended for serum
samples. However, dilutions used for both
IDEXX ® ELISA (M. hyo. and PRRS) and CIVTEST SUIS PRRS A/S had to be modified for colostrum testing in order to avoid
false positives. The percentage of positive or suspect animals decreased as the interval between farrowing and
collection increased. However, samples could be obtained up to 18h after farrowing without losing significant
numbers of positive samples. Colostrum samples could be frozen for at least 2 months at -10o Results
A simplified fat removal extraction method (2) was confirmed to be appropriate for colostrum testing. The APP LC-
LPS ELISA, and DAKO ELISA
C without affecting
final results. The relative sensitivity and specificity of the different tests were estimated by comparing the results from
colostrum with those obtained from serum. Both sensitivity and specificity showed an excellent correlation between
the two compared samples. The relative sensitivity of the tests on colostrum were 95.7, >96.4, >97.9 for APP, M. hyo.,
and PRRSV, respectively. The specificity was 94.0, >79.3 and >83.7 for APP, M. hyo., and PRRSV, respectively. The
kappa values ranged from 0.62 to 0.91, indicating a substantial to perfect agreement between results from
colostrum and serum.
® for M. hyo. could use colostrum at the same dilution as recommended for serum
samples. However, dilutions used for both
IDEXX ® ELISA (M. hyo. and PRRS) and CIVTEST SUIS PRRS A/S had to be modified for colostrum testing in order to avoid
false positives. The percentage of positive or suspect animals decreased as the interval between farrowing and
collection increased. However, samples could be obtained up to 18h after farrowing without losing significant
numbers of positive samples. Colostrum samples could be frozen for at least 2 months at -10oC without affecting
final results. The relative sensitivity and specificity of the different tests were estimated by comparing the results from
colostrum with those obtained from serum. Both sensitivity and specificity showed an excellent correlation between
the two compared samples. The relative sensitivity of the tests on colostrum were 95.7, >96.4, >97.9 for APP, M. hyo.,
and PRRSV, respectively. The specificity was 94.0, >79.3 and >83.7 for APP, M. hyo., and PRRSV, respectively. The
kappa values ranged from 0.62 to 0.91, indicating a substantial to perfect agreement between results from
colostrum and serum.
Discussion
Monitoring of the health status of a herd is extremely important to establish adequate control strategies and to
reduce the economical impact of certain diseases These results suggest that colostrum samples, when optimally
diluted, can be an excellent and practical alternative to serum for the evaluation of the health status of sow herds
when using the above mentioned serological tests against APP, PRRSV and M. hyo.
References
1 Gottschalk M et al. (1997). Can J Vet Res 61 :62-65
2. Rautiainen E et al. (2000). Acta Vet. Scan. 41 :213-225
Page 57

Page 58

Titre princi pal
Affiche no.1
Page 59
Studies of the interactions between Haemophilus parasuis
and porcine epithelial tracheal cells
B. Bouchet, , G. Vanier, M. Jacques, M. Gottschalk,
Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP),
Saint-Hyacinthe, Québec.
Haemophilus parasuis is a swine pathogen that causes Glässer’s disease in
young pigs. Infected animals present clinical signs of fibrinous polyserositis, polyarthritis,
meningitis and pneumonia. Presently, the pathogenesis of the infection caused by
H. parasuis is not well known, and only few virulence factors have been proposed.
Whether the upper respiratory tract is the site of colonization of H. parasuis is still a
controversial issue. The organism is consistently isolated from the nasal cavities and
trachea, and very rarely from lungs and tonsils. Lesions in the upper respiratory tract of
pigs are usually associated to an important infiltration of neutrophils with cell damage.
These alterations to the mucosal surface may affect defense mechanisms and allow
H. parasuis to invade the mucosa and gain access to the bloodstream. In vitro studies
have recently demonstrated that H. parasuis is able to adhere to newborn pig trachea
cells (NPTr). The aim of this work was to study the ability of H. parasuis to induce the
production of inflammatory mediators by NPTr and to evaluate the role of H. parasuis
lipooligosaccharide (LOS) in such activation. Using the reference strain of H. parasuis
serotype 5 (Nagasaki strain), results showed that live and heat-killed H. parasuis can
induce the release of interleukin (IL)-8 by NPTr in a time-dependent manner. Purified
LOS also induced the production of IL-8 by NPTr but to a considerably lower extent.
In fact, whole-cell bacteria treated with polymyxin B, an inhibitor of LOS, still
significantly activated NPTr cells. Field strains of H. parasuis serotypes 4 and 5 (the most
prevalent serotypes recovered from diseased animals in North America) also induced
the production of this inflammatory mediator. In general, similar results were obtained
with interleukin-6, and endothelin-1. Results suggest that H. parasuis stimulates epithelial
tracheal cells, and this activation is only partially mediated by its LOS. Locally induced
pro-inflammatory cytokines may play an imperative role in the pathogenesis of the
infection caused by this important pathogen.

Page 60
Titre princi pal
Affiche no. 2
Comparative Genomics Profiling of Canadian Isolates of
Actinobacillus pleuropneumoniae
GOURÉ J.*, *, J.W. CHUNG***, J.H.E. NASH**, V. DESLANDES*,
J.W. COULTON*** and M. JACQUES*
• Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal, Saint-Hyacinthe,
Québec, Canada, J2S 7C6 (julien.goure@umontreal.ca)
• ** Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada,
Ottawa, Ontario, Canada, K1A 0R6
*** Department of Microbiology and Immunology, McGill University,
Montréal, Québec, Canada, H3A 2B4
The gram-negative bacterium Actinobacillus pleuropneumoniae is the etiologic agent
of porcine pleuropneumonia, a highly contagious respiratory infection causing severe
economic losses to the swine industry worldwide. A. pleuropneumoniae is classified into two
biotypes on the basis of the requirement for NAD; there are 15 serotypes based on surface
polysaccharide antigens. Our objective is to identify new vaccine candidates conserved
across the 15 serotypes of A. pleuropneumoniae. In silico analysis of the A. pleuropneumoniae
serotype 5b strain L20 genome lead to identification of 93 proteins predicted to be localised in
the outer membrane (OM). The goal of the present study is to identify genes coding for OM
proteins or lipoproteins that are conserved across the serotypes prevalent in North America
(serotypes 1, 5, 7 and 15). To characterize 24 A. pleuropneumoniae isolates, either reference
strains or field strains from different geographic locations in Canada, we performed
microarray-based comparative genomic hybridizations (M-CGH) versus the sequenced A.
pleuropneumoniae L20 genome. The probes on our DNA microarray represent more than 95%
of the 2042 ORFs of the A. pleuropneumoniae genome with a size greater than 160
nucleotides. The microarray analysis showed limited intraserotype genetic variation in
Canadian strains. Hierarchical clustering analysis of the data revealed that serotype 5 strains
formed a distinct cluster. Serotype 1 and 7 strains clustered together, except for serotype 7
field strains from Ontario which clustered with the serotype 15 strains. In total, we identified
more than 200 divergent genes or absent genes among the 24 strains tested. Among these
genes, 15 were previously identified in silico as encoding OM proteins or lipoproteins and
therefore may be excluded as potential vaccine candidates. Experiments with reference
strains representing the 11 other serotypes are currently underway. We conclude that M-CGH is
a powerful screening tool to identify conserved genes among A. pleuropneumoniae strains.

Remarque: Titre princi pal c’est la 1ère affiche...
Affiche no.3
Page 61
Transcriptional Profiling in Actinobacillus pleuropneumoniae After Co-cultivation and
Adherence to SJPL Cells.
1 *, E. Auger * , J. H. E. Nash ** , J. Harel * , J.W. Coulton *** and M. Jacques * .
* Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc, Faculté de médecine
vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, Québec, Canada.
** Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, Ottawa,
Ontario, Canada. *** V. Deslandes
Department of Microbiology and Immunology, McGill University,
Montréal, Québec, Canada
1 *, E. Auger * , J. H. E. Nash ** , J. Harel * , J.W. Coulton *** and M. Jacques * .
* Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc, Faculté de médecine
vétérinaire, Université de Montréal, St-Hyacinthe, Québec, Canada.
** Institute for Biological Sciences, National Research Council of Canada, Ottawa,
Ontario, Canada. *** Department of Microbiology and Immunology, McGill University,
Montréal, Québec, Canada
Actinobacillus pleuropneumoniae (App) is the etiological agent of porcine
pleuropneumonia, a respiratory disease that causes economic losses worldwide.
Several virulence factors have been implicated in pathogenesis of App: capsular
polysaccharide, RTX toxins, LPS and iron acquisition systems. Previous studies under
iron-restricted conditions highlighted significant changes in the App transcriptome: 210
genes showed differential expression, 92 of which were up-regulated. Some of these
genes may code for new iron acquisition systems and could therefore be involved in
virulence. Transcript profiling of App after co-cultivation with St. Jude Porcine Lung
(SJPL) cells using a DNA microarray with 2033 ORFs may enable us to discover further
new potential vaccine candidates that are expressed under infection conditions.
Preliminary results indicate that 39 genes are differentially expressed with at least 1.9
fold variation. Genes coding for known iron acquisition systems as well as putative new
systems that were identified in our previous study showed down-regulation. Gene
aspA, previously shown to be up-regulated by bronchoalveolar lavage fluid and to
have a potential role in virulence, was up-regulated after co-cultivation with SJPL cells.
tadB coding for tight adherence protein B was also up-regulated in App. Tad proteins
of Aggregatibacter (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, another
Pasteurellaceae, are implicated in assembly and secretion of long, bundled fibrils that
are essential for colonization and pathogenesis. Use of DNA microarrays has enabled
us to identify a several potential new antigens that could be used

Affiche no. 4
Titre Remarque: Titre princi pal c’est la 1ère affiche...
Page 62
Identification et caractérisation d’une nouvelle adhésine
chez Streptococcus suis
*,** , Y. LI *,** G. VANIER *,** , M. HANCOCK *** , J. HAREL *,** ,
J.D. DUBREUIL1,2 et M. GOTTSCHALK1,2 ESGLEAS M.
.
*,** , Y. LI *,** G. VANIER *,** , M. HANCOCK *** , J. HAREL *,** ,
J.D. DUBREUIL1,2 et M. GOTTSCHALK1,2 .
1Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc (GREMIP) and 2Centre de
Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP), Faculté de Médecine Vétérinaire, Université
de Montréal, Saint-Hyacinthe, Qc, Canada. 3 1Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc (GREMIP) and 2Centre de
Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP), Faculté de Médecine Vétérinaire, Université
de Montréal, Saint-Hyacinthe, Qc, Canada. Sheldon Biotechnology Center,
McGill University, Montréal, Qc, Canada.
3Sheldon Biotechnology Center,
McGill University, Montréal, Qc, Canada.
Streptococcus suis est une importante bactérie pathogène chez le porc causant
principalement la septicémie, la méningite, l'endocardite et l'arthrite. Des 35 sérotypes
connus, le sérotype 2 est le plus fréquemment associé à la maladie. S. suis est un pathogène
extracellulaire qui peut adhérer à certaines composantes de la matrice extracellulaire
tel que la fibronectine (Fn). L'objectif de cette étude était de caractériser
des adhésines de S. suis impliquées dans l'adhérence des bactéries à la Fn en utilisant
la souche fortement virulente SS166 de sérotype 2. Les protéines liant la Fn ont été purifiées
à l’aide d’une colonne d'affinité. Le séquençage a permis d’identifier une protéine
majeure de 52 kDa liant la Fn comme étant une a-énolase (SsEno). Les énolases
bactériennes sont bien connues pour leur capacité de liaison au plasminogène (Plg).
Pour adhérer à des protéines de l’hôte, la SsEno doit être exprimée à la surface de la
bactérie. La présence en surface de cette protéine a été confirmée par microscopie
électronique. L’adhérence de SsEno à la Fn et au Plg a été corroborée par la technique
de Résonance plasmonique de surface. Des études in vitro d’adhésion et d’invasion
de S. suis à des cellules endothéliales de microvaisseaux cérébraux de porc ont
démontré que cette protéine participe à l’adhésion et l’invasion de S. suis de ces cellules.
SsEno s'est aussi avérée fortement immunogène et des anticorps contre SsEno ont
été détectés chez des porcs convalescents. De plus, des anticorps mono-spécifiques
contre cette protéine ont augmenté l’effet bactéricide de neutrophiles porcins sur S.
suis. Ces nouvelles découvertes semblent indiquer que SsEno pourrait s’avérer un important
facteur de virulence chez S. suis.

Affiche no. 5
Page 63
Inactivation of the dltA gene impairs virulence of Streptococcus suis
in the murine model of infection.
FITTIPALDI N.* SEKIZAKI T.** TAKAMATSU D.** HAREL J.*
DOMINGUEZ-PUNARO MC.* et GOTTSCHALK M.*
*Centre de Recherche en Infectiologie Porcine, Faculté de médecine vétérinaire,
Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada,
**National Institute of Animal Health, Tsukuba, Japan.
Streptococcus suis is a major pathogen of swine causing, mainly, meningitis. It is also a
zoonotic agent responsible for sporadic but deadly outbreaks in humans. Knowledge
on S. suis virulence factors remains limited. Lipoteichoic acid (LTA) D-alanylation
depends on the concerted activity of several dlt genes and plays an important role in
the virulence of many streptococcal species. Using the selective capture of
transcribed sequences approach, we found that S. suis upregulates its dlt operon,
which comprises genes dltABCD, after interaction with porcine brain microvascular
endothelial cells (PBMEC), a main component of the blood brain barrier. Thus, we
hypothesized that LTA D-alanylation is important for the S. suis pathogenesis of
infection. In this study we evaluated the contribution of the dltA gene to S. suis
virulence. We generated by allelic replacement a ΔdltA mutant from S. suis virulent
strain 31533 and tested adhesion to and invasion of PBMEC as well as the resistance of
the mutant to killing by porcine neutrophils. In addition, we assessed in vivo the
virulence of the ΔdltA mutant at high and intermediate doses of infection (5 x 107 and
5 x 106 CFU) using a well standardized CD1 murine model of infection. Compared to
the wild-type (WT) strain, the ΔdltA mutant showed diminished attachment to and
invasion of PBMEC. In addition, in contrast to the WT strain, the ΔdltA mutant was
efficiently killed by porcine neutrophils. Finally, the ΔdltA mutant was less virulent in the
mouse model of infection. At the intermediate dose, no mice in the mutant group
died or presented meningitis, while 5 out of 15 animals died from meningitis in the WT
group. At the high dose, clinical signs and mortality were recorded in both groups.
However, a lower mortality and a lower incidence of meningitis were observed in the
mutant group than were in the WT group. Inactivation of the dltA gene diminishes the
ability of S. suis to attach to and to invade PBMEC, increases susceptibility to killing by
porcine neutrophils, and reduces but does not abolish virulence of S. suis in mice.

Page 64
Affiche no. 6
Propriétés antibactériennes et anti-inflammatoires d’oligomères de chitosane
C. Bleau 1 , R. Savard 1 , I. Boucher 2 , S. Brunet 2 et L. Lamontagne 1 .
1 Dép. Sciences Biologiques, Université du Québec à Montréal et
2 DNP Canada Inc. Granby, QC.
La recherche de nouveaux produits antibactériens naturels est un objectif important
dans la diminution ou le remplacement des antibiotiques utilisés pour la santé des
animaux en croissance. Le chitosane est une molécule dérivée de la chitine que l’on
retrouve en grande quantité dans la nature, principalement dans les crustacés, et ne
montrant aucune cytotoxicité. La compagnie DNP Canada a innové en développant
des plates-formes enzymatiques permettant la production de différents oligomères de
chitosane. Le but de ce travail était d’évaluer le potentiel antibactérien de différents
oligomères de chitosane autant au niveau de la bactérie elle-même que de l’effet de
ces produits sur la phagocytose et les propriétés inflammatoires de macrophages. A
l’aide d’un spot test, les dérivés de chitosane nommés D, W et Y ont inhibés la croissance
bactérienne de E. coli et S. aureus à des niveaux comparables à ceux des sulfamidés.
Ces effets des dérivés de chitosane sur la croissance bactérienne ont alors été
étudiés par le niveau de production de déshydrogénases mitochondriales (test MTS/
PMS) sur une période de 24 hrs. Les dérivés nommés W, X et Y ont inhibés la croissance
de S. aureus autant à pH 3 et/ou pH 7 alors que les dérivés D, JF et Y ne montraient aucun
effet inhibiteur. Tous les dérivés testés n’ont pas affecté la croissance de E. coli à
différents pH alors que la plupart de ces dérivés augmentaient la croissance d’une
souche de Lactobacillus rhamnosus (probiotiques). Par contre, les dérivés A, B , D et W
ont augmenté la phagocytose des macrophages spléniques de poussins de 14 jours,
activés ou non par le LPS. Le produit W a fortement stimulé la production de TNF-a,
d’IL-1 et d’IL-6 par les macrophages péritonéaux. De plus, les dérivés W, E, G, X et Y ont
induit une forte augmentation d’interféron-g par les lymphocytes de poussins incubés
avec du milieu conditionné de macrophages traités avec ces différents dérivés. Les
dérivés D, X et W ont aussi augmenté la production de TGF-b. Par contre, les dérivés de
chitosane n’ont pas significativement augmenté la phagocytose des hétérophiles
(neutrophiles), pas plus que la production de ROS par ces cellules. Pris dans leur ensemble,
ces résultats suggèrent que certains dérivés du chitosane peuvent être utiles
pour le contrôle de bactéries potentiellement pathogènes en diminuant la viabilité
bactérienne et en stimulant la phagocytose et la production de cytokines inflammatoires.

Affiche no. 7
Page 65
Étude des propriétés anti-inflammatoires des
exopolysaccharides de bactéries lactiques
L. Lamontagne, 1 C. Bleau 1 et M.‑R. Van Calsteren 2
1 Département des sciences biologiques, Université du Québec à Montréal, Montréal,
QC; 2 Agriculture et Agroalimentaire Canada, Saint‑Hyacinthe, QC
Plusieurs espèces bactériennes sécrètent des exopolysaccharides leur conférant
des propriétés rhéorologiques particulières intéressant l’industrie alimentaire. Ainsi, plusieurs
souches de lactobacilles et de streptocoques produisent des EPS qui diffèrent entre
eux par leur composition et la structure de leur unité répétitive. Récemment, il a été
montré que les EPS pouvaient moduler la production de cytokines par les macrophages
et ainsi jouer un rôle dans le contrôle des réactions inflammatoires.
Nous avons obtenu les EPS de deux souches de Streptococcus thermophilus
MR‑1C et MTC360, et avons produit, isolé et purifié les EPS de Lactobacillus casei type V
et de S. thermophilus RD534 à partir des cultures bactériennes. Leur structure primaire a
été déterminée par des méthodes chimiques (hydrolyse, solvolyse, dérivation, modification
chimique), chromatographiques (GC, HPLC, TLC) et spectroscopiques (RMN du 1 H
et du 13 C, MS). Tous les EPS ont été purifiés par filtration sur gel pour les études immunologiques.
Leurs propriétés inflammatoires ont été vérifiées sur des macrophages péritonéaux
de souris. Ainsi, les EPS de L. casei type V et de S. thermophilus RD534 se sont avérés
d’excellents activateurs de la production de TNF‑a et d’IL‑6 par des macrophages péritonéaux
non stimulés, au contraire des EPS de S. thermophilus MR‑1C et MTC360.
Ces effets stimulants étaient dépendants de la concentration des EPS. Par contre, lorsque
les macrophages ont été stimulés par le LPS, les EPS n’augmentaient pas la production
de TNF‑a et d’IL‑6 et ce, avec toutes les concentrations et les EPS testés. Par
contre, tous les EPS, et particulièrement celui de L. casei type V, induisaient la production
d’IL‑10, mais pas celle de l’IL‑12 chez des macrophages non activés. Chez les macrophages
activés par le LPS, tous les EPS, et plus particulièrement ceux des souches de
S. thermophilus MR‑1C et RD534, induisaient une synergie avec le LPS dans la production
d’IL‑10 alors qu’ils inhibaient la production d’IL‑12 par les macrophages activés.
Ces résultats indiquent que les EPS de certaines souches bactériennes possèdent un fort
potentiel anti-inflammatoire et pourraient être très utiles pour diminuer les lésions inflammatoires
intestinales lors de gastroentérites infectieuses, tout en maintenant une production
de cytokines inflammatoires favorisant une réponse immune humorale.

Page 66
Affiche no. 8
Formulation de protéines végétales à des fins vaccinales par voie orale
De Koninck Patrick 1,3 , Denis Archambault 2,3 , Fathey Sarhan 2 et
Mircea Alexandru Mateescu 1,3 .
(1) Université du Québec à Montréal, Département de Chimie;
(2) Université du Québec à Montréal, Département des Sciences Biologiques;
(3) Centre de Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP).
Plusieurs organismes pathogènes ont comme porte d’entrée dans l’organisme les muqueuses
comme par exemple celles tapissant les tractus respiratoire et gastro-intestinal. Dans ce contexte, il est
important, dans une procédure de vaccination, de cibler l’induction de l’immunité mucosale au site
même de l’infection afin d’obtenir une protection optimale. L’objectif global de ce projet de recherche
est d’induire une immunité mucosale par expression d’une protéine immunogène d’un organisme pathogène
d’intérêt dans des plantes transgéniques comme vecteurs d’expression. Ces protéines végétales
incluant des immunogènes peuvent ensuite être utilisées à des fins d’immunisation orale avec comme
résultante une stimulation de l’appareil lymphoïde de la muqueuse intestinale et, sur la base du concept
du système immunitaire commun aux muqueuses, de celui d’autres muqueuses comme celle du système
respiratoire. Une limite inhérente à cette approche de vaccination orale est la barrière stomacale en
égard du pH gastrique et de l’activité protéolytique pouvant dégrader le matériel immunogène d’intérêt.
Afin de palier à ce problème, il s’avère important de protéger les protéines immunogènes en incorporant
les extraits végétaux dans une matrice polymérique utilisée à des fins de transport jusqu’à la muqueuse
intestinale où la réponse immunitaire, via les interactions des cellules immunitaires s’y retrouvant
(tissu lymphoïde associé aux muqueuses sous-jacentes ou GALT), pourra alors avoir lieu. Pour ce faire, les
protéines végétales, contenant la protéine immunogène d’intérêt, doivent être formulées avec un excipient
polymérique chargé de libérer les protéines au site d’action. L’excipient sélectionné est le carboxyméthyl
amidon (CMA) qui offre, en plus de la protection gastrique et de la libération ciblée de l’actif au
niveau intestinal (Calinescu et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 2005), une stabilisation des protéines au sein du
comprimé. L’étape de compression de la formulation sous forme de comprimés monolithiques de 200
mg, contenant 20 % d’extrait végétal préalablement lyophilisé, fut réalisée pendant 1 minute à la pression
de 2,5 T/cm 2 dans un moule de 9 mm de diamètre. L’étude du profil électrophorétique des protéines
végétales a démontré l’importance de la dégradation protéique issue du passage gastrique, d’où la nécessité
de protéger les protéines avec le CMA. Après formulation de ces mêmes protéines avec l’excipient
et simulation in vitro du passage gastrique, le profil électrophorétique des protéines végétales obtenu
est comparable à celui des protéines avant formulation et traitement. D’autres expériences sont en
cours afin de valider le concept de gastro-protection des protéines végétales et la libération de protéines
immunogènes dans des conditions simulant l’environnement physiologique de l’intestin grêle. Cette
technologie sera ensuite appliquée à un modèle d’infection virale porcine associée au virus du syndrome
reproducteur et respiratoire du porc (VSRRP), une des infections porcines les plus importantes économiquement,
le but étant d’induire une immunité mucosale spécifique à ce virus suite à l’immunisation
par des protéines immunogènes virales exprimées chez la plante.
Ce projet est financé grâce à une subvention du CRSNG, programme stratégique.

Affiche no. 9
Page 67
La vaccination génétique pour prévenir l’infection par Staphylococcus aureus ;
Évaluation de trois nouveaux antigènes bactériens.
Roseline Therrien, 1 Pierre Lacassse 2 , et Brian Talbot 1
1 Département de biologie, Université de Sherbrooke
2 Agriculture et Agroalimentaire Canada,
Centre de recherche et de développement sur le bovin laitier et le porc, Lennoxville
Récemment l’apparition de Staphylococcus aureus résistante à la méthicilline
(SARM) a été observée dans les porcheries. Une étude réalisée aux Pays-Bas a trouvé
que 40 % des porcs examinés étaient porteurs de SARM. D’autres études ont démontré
que SARM d’origine porcine se retrouvent dans une forte proportion parmi les éleveurs
de porcs et leurs familles. Une souche porcine de SARM a été trouvée chez les porcs et
les éleveurs de porcs en France, et cette souche était présente aussi aux Pays-Bas. Ces
résultats suggèrent que les porcs pourraient constituer une mode de transmission des
SARM entre pays. À ce jour, aucun vaccin efficace contre le Staphylococcus aureus
n’est disponible sur le marché. Le vaccin à ADN viendrait donc répondre à un besoin
de notre société qui semble être de plus en plus à risque des maladies infectieuses
émergentes.
Les objectifs sont de construire 3 nouveaux vaccins à ADN et de tester la réponse
immune contre chacun dans un modèle murin. Le degré de protection a été vérifié
dans un modèle d’infection intra-péritonéale. Les antigènes choisis sont CNA (adhésine
permettant à la bactérie de se lier au collagène) RAP et TRAP (protéines régulant la sécrétion
de plusieurs facteurs de virulence).
L’immunisation chez les souris à l’aide des 3 vaccins a permis de dresser un portrait
de la réponse immunitaire provoquée par chaque antigène. Suite à l’infection des
souris avec S. aureus, nous avons été en mesure de déterminer que les vaccins contre
RAP et TRAP assuraient chacun une protection partielle contre l’infection expérimentale.
Ainsi, ces 2 antigènes pourront être combinés à d’autres antigènes déjà testés par
le laboratoire (et ayant démontré une certaine protection), afin de construire un vaccin
encore plus immunogène. Si ce dernier se révèle efficace chez les souris, l’expérience
pourra être transférée chez les porcs et les bovins, afin que nous puissions juger
de l’efficacité réelle du vaccin

Page 68
Affiche no. 10
Carboxyméthyl amidon comme excipient pour le transport et la libération des bactéries
d'Escherichia coli et des fimbriae F4 au niveau du tractus gastro-intestinal
CALINESCU C.* # , NADEAU É.** # , MULHBACHER J.*,
FAIRBROTHER J.M.** # et MATEESCU M.A.* #
* Département de chimie et Centre BioMed, Université du Québec à Montréal,
Montréal, QC, Canada; ** Faculté de Médecine Vétérinaire, Université de Montréal,
Saint-Hyacinthe, QC, Canada; # Centre de Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP).
Les espèces pathogènes d’Escherichia coli sont généralement responsables d’infections intestinales
se manifestant par des diarrhées chez les porcelets nouveau-nés ou plus âgés, qu’ils soient sevrés ou
non. L’adhésion des bactéries aux cellules de la muqueuse intestinale peut être réalisée par des fimbriae
– des structures protéiques qui se trouvent à la surface des bactéries et qui ont un rôle important dans la
pathogenèse. En tant qu’élément principal dans le processus d’adhésion des bactéries aux cellules de
l’épithélium intestinal, les fimbriae sont des candidates pour un vaccin sous-unitaire qui pourrait être utilisé
pour prévenir la diarrhée post-sevrage chez le porc. Le problème central de l’administration orale des
agents bioactifs est représenté par le milieu particulièrement agressif au niveau du système digestif. La
majorité des principes bioactifs sont inactivés ou détruits par l’acidité gastrique et/ou par les enzymes du
système gastro-intestinal. Par conséquent, il y a un besoin de développer des systèmes de transport et
relargage de ces agents bioactifs. Cette étude in vitro a été dédiée à la mise au point d’un probiotique
bactérien à base d’Escherichia coli et d’un vaccin sous-unitaire à base des fimbriae F4 contre la diarrhée
post-sevrage chez le porc, les deux administrés par la voie orale. Le carboxyméthyl amidon riche en
amylose (CMA) a été proposé comme un nouvel excipient pour la formulation de ces agents bioactifs
sous forme de comprimés pour l’administration orale. Ces formulations ont protégé les agents bioactifs
contre l’acidité gastrique et la dégradation des enzymes et ont assuré leur libération au niveau des milieux
qui simulent les conditions intestinales. Trois variantes de CMA, avec des différents degrés de substitution,
ont été synthétisées en traitant l’amidon avec des différentes quantités d’acide monochloroacétique.
Les produits ont été séchés sous forme de poudre et des comprimés ont été obtenus par compression
directe du mélange des poudres de l’excipient polymérique (CMA) et des bactéries Escherichia coli
ou fimbriae F4 lyophilisées. Les comprimés à base de CMA ont resté compacts dans le milieu gastrique et
ont assuré une bonne protection des agents bioactifs contre l’acidité gastrique même après deux heures
de traitement. Le processus de libération des bactéries ou des fimbriae F4 a été basé sur l’hydratation, le
gonflement et la dissolution de la matrice. De plus, une érosion enzymatique par l’alpha-amylase a accéléré
le relargage de l’actif dans le milieu qui simulait les conditions intestinales. Les tests de viabilité
bactérienne et de stabilité des fimbriae F4 ont montré que les variantes de CMA, testées sous forme de
comprimés, ont été capables d’assurer une très bonne protection des bactéries Escherichia coli / fimbriae
F4 contre la dénaturation acide / enzymatique, contrairement aux comprimés d’amidon nonsubstitué
ou aux agents bioactifs non-protégés. En plus, nous avons montré que les fimbriae F4 nonformulées
ont présenté une bonne stabilité dans le milieu intestinal pour une période de cinq heures. Le
CMA pourrait être considéré comme étant un possible système matriciel qui assure un bon transport des
agents bioactifs (Escherichia coli, fimbriae F4) au niveau du tractus gastro-intestinal. Des études in vivo
seront réalisées pour tester l’efficacité d’une formulation des fimbriae F4 à base de CMA dans le processus
d’induction des anticorps spécifiques (IgM et IgA) au niveau du jéjunum et d’iléum des porcelets sevrés.

Affiche no. 11
1,2 ET DAIGLE F. 1,2
FOREST C. 1,2 ET DAIGLE F. 1,2
Page 69
Étude fonctionnelle du fimbriae Saf de Salmonella enterica
1 Département de microbiologie et immunologie, Faculté de médecine,
Université de Montréal, QC, Canada.
2 Centre de Recherche en Infectiologie Porcine (CRIP)
Les infections à Salmonella enterica sont une cause significative de morbidité chez
l’homme et l’animal. Le sérovar Typhi est responsable de la fièvre typhoïde, une infection systémique
spécifique à l’humain causant plus de 16 millions de nouveaux cas par année et plus
de 600 000 morts. Le sérovar Typhimurium cause une gastro-entérite localisée qui peut parfois
évoluer en infection systémique. L’infection à Typhimurium peut survenir suite au contact avec
un animal ou de la nourriture contaminée. Cette bactérie est reconnue pour être un pathogène
chez le porc et a récemment été associée à des cas de septicémies. Notre laboratoire
tente de découvrir les facteurs de virulence impliqués dans la propagation systémique et la
persistance de la bactérie. Les fimbriae sont reconnus pour aider l’adhésion des bactéries aux
cellules de l’hôte. Avec la progression des recherches, de nouvelles fonctions, autres que l’adhésion,
sont associées aux fimbriae. Le fimbriae Saf (Salmonella atypical fimbriae) a été choisi
puisque notre laboratoire a démontré qu’il était fortement exprimé lors de l’infection de macrophages
humains par Typhi. Son nom vient du fait qu’il ressemble à un sous-groupe de structures
d’adhésion qui forment de minces fimbriae ou des adhésines afimbriaires. Le rôle de ce
fimbriae reste à déterminer puisqu’aucune étude n’a été effectuée sur ce fimbriae atypique.
Nous voulons caractériser le fimbriae Saf de la bactérie pathogène Salmonella enterica.
Notre hypothèse est que ce fimbriae pourrait avoir un impact dans la propagation systémique
de la bactérie.
Plusieurs études seront réalisées sur ce fimbriae dans le but de découvrir son rôle dans certaines
étapes-clés retrouvées lors de l’infection de cellules. Nous allons cloner l'opéron dans une
souche de E. coli afimbriaire. Le clone sera utilisé pour effectuer des tests d'adhésion sur différentes
lignées de cellules épithéliales, pour déterminer sa spécificité d’adhésion. Un mutant du
fimbriae Saf sera construit par échange allélique, puis l'impact de sa délétion sera vérifié au
niveau de l'adhérence cellulaire. Un anticorps contre un peptide de la sous-unité majeure du
fimbriae sera produit. Cet anticorps sera utilisé pour visualiser le fimbriae en microscopie électronique.
La production de Saf sera aussi évaluée par Western. Une fusion chromosomique
transcriptionnelle avec le gène rapporteur lacZ sera effectuée afin de pouvoir évaluer l’expression
du fimbriae dans différentes conditions de croissance.
Il a été observé que le mutant pour l’opéron saf possède un taux d’adhésion aux cellules épithéliales
significativement diminué en comparaison avec la souche sauvage.
Comme les fimbriae peuvent être reconnus par le système immunitaire, il serait possible d’utiliser
Saf comme vaccin ou de générer un peptide inhibant ses propriétés d’adhérence. Ainsi, la
colonisation par Salmonella pourrait être réduite et les risques de zoonoses diminués, ce qui
permettra d’améliorer à la fois la santé animale et humaine.

Page 70
Affiche no. 12
Intérêt des polymères à empreintes moléculaires pour le dépistage des
résidus médicamenteux dans les denrées d’origine animale
Hamza Zouaoui*, Sonia Lafleur**, Jean-Michel Rabanel*, Francis Beaudry***, Bich Van Le
Thanh****, Daniel Scholl****, Akier A. Mafu**, Patrice Hildgen*, Jérôme R.E. del Castillo***
* Université de Montréal, Faculté de pharmacie ; ** Centre de Recherche et
Développement sur les Aliments, Agriculture et Agro-alimentaire Canada ;
Université de Montréal, *** Département de biomédecine vétérinaire, et
**** Département de pathologie et microbiologie, Faculté de médecine vétérinaire.
Les antibiotiques causent des effets indésirables chez les animaux et l’homme, entre autres
des réactions allergiques et la sélection de bactéries résistantes. Des études rapportent que
la fiabilité des tests de dépistage rapide des résidus médicamenteux est inadéquate, ce qui serait
associé à la variabilité des chaînes latérales des antibiotiques. Notre hypothèse énonce que
des polymères dont la conformation moléculaire est complémentaire à celle des antibiotiques
peuvent être synthétisés afin d’améliorer la fiabilité des épreuves de dépistage des résidus médicamenteux.
Nos objectifs sont (1) synthétiser des polymères à empreintes moléculaires (MIP, «
molecular imprinted polymer ») pour des médicaments vétérinaires, (2) mettre au point une méthode
quantification des résidus de ces antibiotiques pouvant servir d’épreuve de référence et
(3) développer une trousse de dépistage à base de MIP pour résidus médicamenteux dans les
denrées animales. En raison de leur importance vétérinaire et de leur convenance, l’antibiotique
modèle est l’oxytétracycline (OTC) et l’aliment modèle est le lait. Nous avons d'abord synthétisé
des MIP de méthacrylate selon le procédé de Cai et Gupta (2004) et avons développé
un procédé de synthèse (Nadeau et coll., 2005) afin d’obtenir des MIP de polyester. Ensuite,
nous avons évalué l’interaction des MIP de méthacrylate avec l’OTC et la tétracycline. En parallèle,
nous avons mis au point une méthode de quantification par chromatographie liquide –
spectrométrie de masse en tandem avec ionisation par électrospray (LC-ESI-MS/MS) pour les
résidus d’OTC et de chlortétracyline (CTC) dans le lait ou autres matrices biologiques (Beaudry
et del Castillo, 2005). Enfin, nous avons caractérisé la fiabilité de deux trousses commerciales de
dépistage rapide des résidus de tétracyclines en fonction de la composition chimique du lait.
Nos MIP de méthacrylate lient environ 81% des molécules d’OTC présente dans des échantillons
de lait fortifiés, dont 65% sur les sites spécifiques. Nous avons complété la synthèse de MIP de
polyester. Notre méthode de LC-ESI-MS/MS détecte des fragments spécifiques ayant des transitions
m/z de 461 à 426 (OTC) et de 479 à 444 (CTC). Sa limite inférieure de quantification est de
10 ppb, avec une précision et une exactitude minimales de 9% et 95%, respectivement. La sensibilité
des trousses commerciales de dépistage des résidus de tétracyclines dans le lait augmente
significativement avec du lait mammiteux (régression logistique : p

Affiche no. 13
Page 71
Évaluation de la réponse immunitaire suite à une infection à E. coli entérotoxinogène
chez des porcelets traités avec des probiotiques.
J. F. Daudelin (1, 2), M. Lessard (2), E. Nadeau (1),
F. Beaudoin (2) et J.M. Fairbrother (1)
(1) GREMIP, FMV, U d M; (2)Agriculture et agroalimentaire Canada, Sherbrooke (Lennoxville)
PROBLÉMATIQUE : L’utilisation d’antibiotique est de plus en plus contestée en élevage
depuis l’augmentation de bactéries intestinales résistantes aux antibiotiques. Il est donc
essentiel d’effectuer de la recherche afin de tester l’efficacité d’alternatives visant la
réduction de l’utilisation d’antibiotique en production porcine. En ce sens, les probiotiques
Pediococcus acidilactici (Pa) et Saccharomyces cerevisiae boulardii (Scb) constituent
une alternative intéressante comme additif dans la nourriture donnée aux porcelets
pour augmenter la résistance aux infections entériques.
HYPOTHÈSE : L’administration par voie orale de P. acidilactici et S. cerevisiae boulardii,
seul ou en combinaison, module les réponses immunitaires innées et acquises du porcelet
sevré et augmente leur résistance aux infections causées par E. coli
entérotoxinogène (ETEC).
OBJECTIFS : Les objectifs sont : 1) Déterminer l’efficacité des probiotiques à protéger le
porcelet sevré à une infection causée par ETEC; 2) Déterminer l’effet d’administrer des
probiotiques sur l’immunité intestinale spécifique et non spécifique des porcelets.
MÉTHODOLOGIE : Quarante truies gestantes seront réparties en cinq groupes de huit
truies. Trois groupes de truies seront affectés respectivement aux traitements Pa, Scb et
Pa + Scb alors que les deux autres ne recevront pas de probiotiques et constitueront les
groupes de porcelets témoin et témoin plus antibiotique. Après la mise-bas, tous les porcelets
de la portée recevront le même traitement que celui administré à leur mère dès
le premier jour. Sept jours après le sevrage, soit à 28 jours d’âge, des porcelets positifs
pour le récepteur spécifique aux fimbriae F4 seront inoculés avec une souche E. coli
0149 F4-positive et entérotoxinogène. Les porcelets seront euthanasiés 24 heures après
l’infection et des échantillons de sang, de tissus intestinaux et de ganglions mésentériques
seront prélevés. Des analyses seront faites pour évaluer l’effet des traitements sur
la colonisation intestinale, l’attachement à la muqueuse intestinale, et la translocation
bactérienne de la souche ETEC infectante. D’autres tests seront réalisés pour déterminer
les différentes populations leucocytaires (macrophages, lymphocytes T CD4+ et/ou
CD8+ et lymphocytes B) dans les différents tissus par cytométrie en flux et l’expression
par PCR en temps réel de différents facteurs (IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-gamma, TGBbêta,
TNF-alpha, défensines) impliqués dans la régulation des réponses immunitaires
innées et acquises.
RÉSULTATS : Des résultats préliminaires seront présentés notamment des exemples de
profils leucocytaires dans différents tissus et de cultures bactériennes au niveau des
fèces.

Page 72
Affiche no. 14
Pharmacocinétique de l'absorption intestinale de l’amoxicilline orale chez le porc:
étude de stationnarité en rapport à la dose.
Dave Bernier*, Romain Béraud**, Francis Beaudry*, Ann Letellier***,
Candido Pomar****, Jérôme R.E. del Castillo*
Université de Montréal, *département de biomédecine vétérinaire, **département de
sciences cliniques et ***département de pathologie et microbiologie,
Faculté de médecine vétérinaire.****Centre de recherches et de développement
sur le bovin laitier et le porc, Agriculture et Agro-alimentaire Canada.
Dans les élevages porcins, les infections à Streptococcus suis et Haemophilus parasuis se
traduisent par des retards de croissance importants et de la mortalité. L'amoxicilline est un antibiotique
de choix et son administration s’effectue principalement via l'eau de boisson chez les
porcelets en pouponnière, mais son efficacité thérapeutique est variable et ce même pour les
souches sensibles à cet antibiotique. Il est à noter que l'absorption intestinale de l’amoxicilline,
une substance peptidomimétique, s'effectue via le co-transporteur PepT1 selon une cinétique
saturable de type Michaelis-Menten. Cependant, la capacité d’absorption de ce système de
transport d’antibiotique demeure inconnue chez le porc. Notre hypothèse énonce que l’absorption
de l’amoxicilline saturerait aux doses couramment employées par les vétérinaires, ce
qui limiterait leur efficacité thérapeutique en élevage porcin. L’objectif de cette étude est d’étudier
la pharmacocinétique d’absorption orale de l’amoxicilline en fonction de la dose administrée
chez le porcelet sevré. Pour ce faire, 36 porcelets de 20 kg ont été instrumentés chirurgicalement
avec des cathéters dans l’artère fémorale et la veine porte, ainsi qu’une canule
gastrique et un drain urinaire de type Blake. Des suspensions aqueuses d’amoxicilline ont été
administrées à des doses de 4, 8, 12, 16, 20 ou 30mg/kg aux porcs, préalablement soumis à 8 h
de jeûne et nourris avant le traitement avec une diète sans protéines. Des échantillons sanguins
veineux et artériels ont été prélevés à 0, 0.1, 0.2, 0.4 0.7, 0.8, 1, 1.2, 1.4, 1.6, 2, 3, 4, 6 et 8h, transférés
dans des tubes EDTA et centrifugés. La quantité totale d’urine produite durant les 12 heures
post-traitement a aussi été récoltée à 4 intervalles. La concentration d’amoxicilline des
échantillons plasmatiques et urinaires a été mesurée par chromatographie liquidespectrométrie
de masse en tandem. Nous avons effectué une analyse pharmacocinétique par
moments statistiques des données individuelles de temps-concentration veineuse, artérielle et
urinaire d’amoxicilline à l’aide du logiciel WinNonlin, suivie de l’analyse statistique pour évaluer
la stationnarité des paramètres pharmacocinétiques et la proportionnalité de l’AUC et de
Cmax par rapport à la dose. Les premiers résultats obtenus suggèrent que la saturation du
transporteur Pep T1 serait manifeste au delà de la dose de 12 mg/kg : l’AUC n'était pas proportionnelle
à la dose administrée. Suite à l’atteinte de Cmax, l’élimination de l’amoxicilline serait
biphasique. Ces résultats indiquent que la cinétique de l’amoxicilline n’est pas stationnaire en
fonction de la dose. Nous envisageons d’étudier l’effet de la diminution de la biodisponibilité
orale de l’amoxicilline sur la sélection des bactéries fécales résistantes, ainsi que l’effet de la teneur
en protéines de la ration sur la biodisponibilité orale de cet antibiotique.

Affiche no. 15
Page 73
Antimicrobial resistance of porcine Enterococcus faecium and
Enterococcus faecalis from Quebec.
C.L. Tremblay 1 , A. Letellier 1 , S. Quessy 1 , J. Harel 1 ,
D. Daigneault 2 et M. Archambault 1 .
1CRIP. Université de Montréal, St-Hyacinthe, QC, Canada,
2 Agence de Santé Publique du Canada, St-Hyacinthe, PQ.
Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium swine isolates (156 and
17 isolates respectively) from Québec were examined for their antimicrobial susceptibilities.
All isolates were also examined for the presence of genes encoding vancomycin
resistance by multiplex PCR. All isolates were resistant to three or more antimicrobial
agents. Antimicrobial resistance has not been noted for kanamycin, linezolid and vancomycin;
and vanA and vanB genes were not present in any of the isolates tested.
In most cases, E. faecium isolates seemed to have acquired more resistance than
E. faecalis isolates. Our data show, for the first time in Quebec, a high level of
antimicrobial resistance to bacitracin, erythromycin, lincomycin, quinupristin/
dalfopristin, tetracycline, streptomycin and tylosin but a lower level of resistance to ciprofloxacin,
flavomycin, gentamicin, nitrofurantoin and penicillin in swine isolates of
E. faecalis and E. faecium.

Page 74
Affiche no. 16
Développement d’un modèle de culture de cellules intestinales d’origine porcine pour
l’étude de l’interaction hôte-pathogène lors d’infection par les
Escherichia coli de type attachant-effaçant
Brïte Pauchet, John M. Fairbrother et Éric Nadeau
Laboratoire E. coli (EcL), Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc
(GREMIP), Faculté de médecine vétérinaire,
Université de Montréal, Saint-Hyacinthe, QC, Canada
Les Escherichia coli de type attachant-effaçant (AEEC) sont une cause de diarrhée
sanguinolente chez l’homme et sont associés à la diarrhée post-sevrage chez le
porc. Bien que l’adhérence aux cellules épithéliales intestinales des souches AEEC
d’origine humaine ait été grandement étudiée dans diverses lignées cellulaires, l’adhérence
des souches AEEC d’origine porcine dans les cellules en culture n’a été
rapportée que récemment dans une lignée cellulaire, nommée IPEC-J2, isolée du
jéjunum de porcelet nouveau-né.
L’objectif de cette étude est d’étudier l’interaction hôte-pathogène lors des infections
dues aux AEEC d’origine porcine, dont la réponse cytokinaire, dans la lignée
IPEC-J2.
Nous avons tout d’abord démontré par microscopie optique ainsi que par microscopie
électronique à balayage et à transmission que la souche EcL1001, une souche
AEEC isolée d’un cas clinique de diarrhée de post-sevrage chez le porc, adhère
de façon intime aux cellules IPEC-J2. Nous avons de plus observé une cinétique dans le
développement des lésions, les bactéries apparaissant d’abord isolées après 2h d’infection
puis formant de multiples microcolonies après 6h. Par la suite, des analyses de
RT-PCR pour évaluer la réponse cytokinaire ont démontré l’expression d’IL(interleukine)-
6, IL-8, IL-12p40 et IL-18 mais pas de TNF-α dans ce modèle.
Ce modèle nous permettra d’étudier la cinétique de l’évolution des lésions en relation
avec l’expression cytokinaire lors d’infection par les AEEC d’origine porcine.

Affiche no. 17
Page 75
Membrane Perturbations Occur in Escherichia coli Phosphate Specific Transport (Pst)
Mutant Strains
Martin G. Lamarche 1 , Sang-Hyun Kim 2,3 , Michael Mourez 1 , Sébastien Crépin 1 ,
Nicolas Bertrand 1 , Russell E. Bishop 2 , J. Daniel Dubreuil 1 , Josée Harel 1
(1) Groupe de recherche sur les maladies infectieuses du porc (GREMIP), Université de
Montréal, Faculté de médecine vétérinaire, C. P. 5000, Saint-Hyacinthe, Québec,
Canada J2S 7C6, (2) Departments of Biochemistry and biomedical sciences, McMaster
university, Hamilton, Ontario, Canada, L8N 3Z5, (3) The National Primate Research
Center, KRIBB, Daejeon, 305-333, REPUBLIC OF KOREA
Environmental phosphate is an important signal for microorganism gene regulation. Phosphate
has recently been shown to trigger various bacterial virulence mechanisms. In many bacteria, the Pho
regulon is the major circuit involved in adaptation to phosphate limitation. The Pho regulon is controlled
jointly by the two-component regulatory system PhoB/PhoR and by the phosphate specific transport
system (Pst), which both belong to the Pho regulon. Constitutive expression of the Pho regulon occurs in
pst mutant strains. We showed that a pst mutation results in virulence attenuation in extra-intestinal
pathogenic Escherichia coli strains. Resistance to the bactericidal effects of serum and to acid shock is
affected in these mutants. We hypothesized that the bacterial cell surface of the pst mutants is altered.
Several assays were used to compare wild-type strains and their isogenic pst mutants. Experiments were
conducted using either high phosphate (LB) or low phosphate (LP) medium. The minimal inhibitory
concentration (MIC) of polymyxin B and cecropin P1 was measured by serial dilutions. Radiolabeled lipid
A of each strain was analyzed by TLC. Lipid A variants were analyzed by spectrometry. Membrane
permeability was assessed by measuring vancomycin and nitrocefin permeation across the outermembrane.
When strains were grown in LB, the polymyxin B and cecropin P1 MIC were significantly lower
for E. coli pst mutants compared to the wild-type strains. All strains grown in LP medium showed polymyxin
B MIC similar to that of pst mutants grown in LB medium. Modifications of the lipid A structure could
account for this phenomenon. The lipid A analyses revealed a 66% reduction of the hexa-acylated 1pyrophosphate
lipid A in pst mutants compared to the wild-type strains, when grown in LB medium. No
such difference between strains was observed when the LP medium was used. Collectively, those results
lead us to hypothesize that changes in membrane permeability could occur in pst mutants. Accordingly,
the pst mutants were shown to be more sensitive to vancomycin when compared to the wild-type strains.
Moreover, the outer-membrane of a b-lactamase positive wild-type strain was shown to be less
permeable to nitrocefin than the outer-membrane of its isogenic pst mutant, when grown to stationary
phase. In conclusion, the reduced amount of hexa-acylated 1-pyrophosphate lipid A observed in pst
mutants could lead to cationic peptides and antibiotics sensitivity by reducing cross bridging between
lipopolysaccharides (LPS) molecules. Increased outer-membrane permeability to nitrocefin, a small
hydrophilic molecule, supports the role of LPS cross bridging in non-dividing cells regarding the
membrane permeability. Finally, our results raised the possibility that the Pho regulon, which is constitutive
in pst mutants, may be involved in lipid A modifications.

Page 76
Affiche no. 18
Global Gene Expression Profile in an Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC)
Pst Mutant
Sébastien Crépin 1 , Martin G. Lamarche 1 and Josée Harel 1 ;
1 University of Montreal, Saint-Hyacinthe, PQ, CANADA.
Avian pathogenic E. coli (APEC) are associated with extra-intestinal diseases in
poultry. The pstSCAB-phoU operon is part of the Pho regulon and encodes the
phosphate specific transport system (Pst). A functional Pst system is required for full
virulence, resistance to serum and acid shock. Our results suggest that Pst mutations
induce modifications of cell surface components. We hypothesized that this
phenomenon explains, at least in part, the virulence attenuation observed in Pst
mutants. However, the interplay between the Pst system and virulence has an unknown
molecular basis. In an effort to understand effects of a Pst mutation on APEC strain, we
undertook transcript profiling study. The APEC strain χ7122 and its isogenic Pst mutant
were grown in LB media to mid log phase, RNAs were extracted and converted into
cDNA. Fragmented and biotinylated cDNAs were hybridized onto Affymetrix
GeneChip ® E. coli Genome 2.0 Array. Robust Multi-array Average (RMA) analysis
showed a total of 486 genes differentially expressed (258 up-regulated and 228 downregulated).
Differential expression of known genes belonging to the Pho regulon
validated our results. Moreover, of the up-regulated genes, 24,9% were involved in
transport and binding proteins. A similar proportion of up- and down-regulated genes
belonged to the general metabolism functional group (21,43% and 23,25%,
respectively). Of the up-regulated genes, 8,93% were associated with acid and
oxidative stresses. Some of the down-regulated genes were also associated to the SOS
and stringent responses (9,21%). Of the overall differentially expressed genes, about 20%
were encoding for membrane components and 20% were of unknown function. In silico
analysis revealed that 24% of the differentially expressed genes possessed putative Pho
box(es). Our results show that the Pst mutant, in which Pho regulon is constitutive, mimics
bacteria in phosphate-limiting environment. It is likely that metabolism adaptation,
altered stress responses and membrane gene regulation occurring in the Pst APEC
mutant contribute to its multiple impaired phenotypes.

Affiche no. 19
Page 77
Rôle de Paa dans la formation des lésions attachantes et effaçantes chez les EPEC
Élodie DESTABLE, Sébastien LECLERC, Frédéric BERTHIAUME, Martin G. LAMARCHE,
Michael MOUREZ et Josée HAREL
GREMIP, Faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal,
3200 Sicotte, Saint-Hyacinthe, Québec
L'infection par les Escherichia coli attachants et effaçants (AEEC) se caractérise
entre autre, par l'effacement des microvillosités et conduit à la diarrhée. Ces lésions
sont formées grâce à l'action coordonnée de plusieurs facteurs de virulence codés par
des gènes spécifiques qui sont présents sur un îlot de pathogénicité appelé Locus of Enterocyte
Effacement (LEE) qui contient les gènes du sytème de sécrétion de type trois.
Cependant d'autres gènes de virulence ont été localisés en dehors du LEE comme par
exemple la gène paa (porcine attaching effacing associated). Ce gène paa a été initialement
découvert chez une souche porcine EPEC (PEPEC) Ecl1001 de sérogroupe
O45 causant des diarrhées post-sevrage chez le porc. La protéine Paa a un rôle important
dans la formation des lésions attachantes et effaçantes chez la souche Ecl1001 et
la souche de lapin EPEC E22 puisque ex vivo des mutants paa de ces souches ne présentent
plus le phénotype attachant et effaçant. Le cadre de lecture de paa code
pour une protéine de 27,6 kDa. De plus, Paa EPEC est identique au Paa des souches
E. coli entérohémorrhagiques O157:H7 (EDL933 and Sakai), et partage 51.8% et 49%
d'homologie avec PEB3, un antigène majeur de Campylobacter jejuni et AcfC, un facteur
putatif de colonisation de Vibrio cholerae. Des études ultérieures ont montré que
PEB3 est à la surface de la bactérie et AcfC est sécrétée. Le but de notre étude est de
déterminer la localisation bactérienne de Paa ainsi que son rôle dans la pathogénicité
des AEEC. Nos résultats indiquent que Paa est localisée au niveau périplasmique confirmant
la prédiction par bioinformatique. De plus, l’expression de Paa affecte la quantité
d'effecteurs sécrétés par le LEE. Paa pourrait influencer la transcription des gènes du
LEE. Afin de vérifier cette hypothèse, une RT-PCR quantitative a été réalisée chez les
souches AEEC sauvages, mutantes et complémentées.

Page 78
Affiche no. 20
A surface plasmon resonance study of Escherichia coli STb toxin
interaction with its receptor
GONÇALVES C., BERTHIAUME F., MOUREZ M., et DUBREUIL J.D.
Centre de recherche en infectiologie porcine, Faculté de médecine vétérinaire,
Université de Montréal, Saint-Hyacinthe, Québec, Canada.
The STb toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli causes a reversible
change in intestinal homeostasis leading to diarrhea in piglets. The enterotoxin STb is
a 48 amino acids peptide (5.2kDa) containing a hydrophilic a-helix (Cys10 to Lys22)
and a hydrophobic a-helix (Gly38 to Ala44) linked by a glycine-rich loop and
stabilized by two disulfide bridges (Cys10-Cys48 and Cys21-Cys36). Reduction of
both bridges affects the enterotoxicity. STb was shown to interact specifically with
sulfatide (3’-sulfogalactosylceramide) present on the surface of epithelial cells of
piglet jejunum. Basic data are lacking on STb binding to sulfatide in solution and
more precisely on the possible inhibition of this interaction. Using surface plasmon
resonance technology, we compare binding of STb to sulfatide and other
glycolipids (lactoceramide and glucoceramide). In addition, inhibition of STbsulfatide
binding was studied using free galactose, galactose-sulfate residues and a
polymer of sulfated galactans known as carragenan. We determinated a
dissociation constant of 2.4 ± 0.6nM for the STb-sulfatide interaction. This data
indicated that STb was binding to sulfatide with high affinity. Much lower affinities
were observed for lactoceramide and glucoceramide. The binding of STb to
sulfatide was clearly inhibited by l-carragenan but not by galactose, 4-SO4galactose
or 6-SO4-galactose. For the first time, inhibition of STb binding to its
receptor was achieved using l-carragenan.

Affiche no. 21
Page 79
Comparison of different sampling sites and materials for detection of porcine reproductive and respiratory
syndrome virus (PRRSV)
L. Batista 1 , S. D’Allaire 1 , G. Remmers 1 , C. Gagnon, J. Harel, M. Gottschalk 1
1 Université de Montréal, St-Hyacinthe, Québec, Canada
Keywords: Diagnostic, PRRS, PRRSV, Sampling
Introduction : PRRSV is one of the most important pathogens in swine production (1). Among others, it
can be intriduced into a herd by infected animals, semen and contaminated fomites ;therefore, it is
critical to detect early infection to prevent downstream contamination. Presently, field veterinarians use
many different sampling sites and materials for early detection and monitoring of PRRSV infection ; however,
their sensitivy has not been compared in a simultaneous study. The objective of this study was to
compare the sensitivy of different testing materials and sampling sites to detect PRRSV infection, using
different infectious doses and methods of inoculum preparation.
Materials and Methods : Thirty seven 30 kg PRRSV negative barrows were randomly divided into four
experimental (n=8) and one control group (n=5). On day 0, groups 1 to 4 were intranasally inoculated
with 10 2 TCID50 AND 10 4 TCID50 from cell culture and 10 2 TCID50 and 10 4 TCID50 from viremic serum,
respectively ; group was sham inoculed. On day 0,1,2,3,7,14,21 and 28 post inoculation (pi) blood was
collected from the jugular vein and from the ear vein with dacron and standard cotton swabs (Becton,
Dickinson & Co., Sparks, MD) and FTA classical card (Whatman Inc., Flotham Park, NJ). Samples of saliva
were also obtained using standard coton swab. Viremia was assessed by quantitative PCR (Tetracore
Inc., Rockville, MD).
Results : Results on proportion of positive samples per day of collection according to the type of samples
are presented in fig.1.
On day 0 all samples were negative by PCR. One day 1 pi, results of PCR were positive in 3, 53, 56, 65 and
0% of the samples obtained from saliva, dacron swab, standard swab, serum and FTA card, respectively.
One day 1 there was no statistical difference between the serum, dacron or cotton awabs ; however statistical
diffrences were detected on saliva and FTA card samples. Nevertheless, these differences disappeared
after day 2. Positive PCR samples increased reaching 100% on day 7 pi., except for FTA card results
(80%) and then decreased until day 28 pi, at which time 23, 26, 53, 0 and 0% were PCR positive in
samples from dacron and standard swabs, serum, saliva and FTA classical card, respectively (data not
shown).
Discussion : PCR allowed detection of PRRSV during the 28 day period of this experiment either on serum
or blood samples using dacron or standard swabs. However, the proportion of positive samples was lower
for blood samples possibly due to a dilution effect as reported by Riecks et al.2005 (2), since swabs were
conserved in 0.75 ml of saline.
Therefore, to avoid false negative results , a highly sensitive quantitative PCR is necessary. Also, the
number of positive samples was inferior with saliva and FTA card. However, the FTA card offers ehe advantages
that it can be store at room temperature and for long periods of time ; therefore it appears to
be an interesting material, and perhaps some more testing is required to improve the technique since
this card were originally commercialized for human DNA and not for an RAN virus.
The results of this study offer veterinarians reliable, practical and welfare oriented alternatives for monitoring
early and late PRRSV infection in na ï ve herds offering extra advantages to artificial insemination centers
and/or breeding stock companies that rely on early detection of PRRSV infection to avoid downsteam
contamination.
References : 1.Dee SA et al.An evaluation of test and removal for the elimination of porcine reproductive
and respiratory syndrome from 5 swine farms. Can J Vet Res 2001 ; 65 : 22-27.
2. Reicks DL. An overview of blood collection strategies for boar studs. Proc 2005 Allen D. Leman Swine
Conference. P. 54-55.

Nous remercions pour leur contribution financière à cet évènement:
Faculté de médecine vétérinaire
1500, rue des Vétérinaires
Saint-Hyacinthe (Québec) J2S 6N9
ou
3200, rue Sicotte
Saint-Hyacinthe (Québec) J2S 2M2

l
Colloque international francophone
de microbiologie animale
Du 22 au 24 septembre 2008
À Saint-Hyacinthe (Province du Québec, Canada)
Venez partager les émotions de la science et la beauté de la nature au cœur des festivités du
400 e anniversaire de la fondation de Québec
Organisé conjointement par la Belgique, la Suisse, la France et le Québec,
ce colloque au thème élargi à la microbiologie animale, inaugure sa première édition
tout en s’inscrivant dans la continuité des trois colloques internationaux
francophones de bactériologie vétérinaire qui l’ont précédé.
La caractéristique principale de ce colloque est l’utilisation orale exclusive de la
langue française, ce qui permet aux scientifiques de la francophonie d’exposer leurs
travaux de recherche dans leur langue d’usage courant.
Des présentations par affiches sont également prévues, qui pourront être rédigées
en français ou en anglais. Les modalités relatives aux inscriptions, soumissions de
résumés, etc. feront l’objet d’une nouvelle affiche en début d’année 2008 et d’une
mise à jour régulière sur le site Web du colloque: www.microanimale.com.
Cet événement réunira des chercheurs ayant un intérêt commun pour la
microbiologie animale et couvrira des domaines aussi variés que la bactériologie, la
virologie, l’immunologie, l’épidémiologie, les prophylaxies anti-infectieuses, la
biosécurité, la salubrité des viandes et la santé publique. Une des journées sera
consacrée plus spécifiquement aux travaux du Centre de recherche en infectiologie
porcine (CRIP), seul centre au Canada qui concentre de façon significative, sous la
forme d’un réseau intégré de recherche, les forces vives travaillant sur les maladies
infectieuses porcines.