Virus d'Epstein-Barr - Diagenode Diagnostics

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Réf.: Dia-EBVQ-050.Vs1 (06.02.2013) 

Virus d’Epstein-Barr 

PCR quantitative en temps réel 

Manuel d’utilisation 

Disponible sur: 

• ABI® 7000 / 7300 / 7500 / 7900HT-StepOnePlus 

• Roche LightCycler® 480 / Lc2.0 

• Biorad iCycler® / IQ5 / CFX96 

• Qiagen Rotor-Gene® 3000/ 6000 

• Agilent Stratagene® MX3000P / 3005P 

En combinaison avec: 

• Contrôle universel d'inhibition (YD) (inclus) 

• Contrôle d'extraction d’ADN et d'inhibition PCR (Réf.): 

DIA-EIC/DNA(YD)-050 

DIA-EIC/DNA(DR)-050 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050 

www.diagenodediagnostics.com

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DIAGENODE QUANTITATIVE CYTOMEGALOVIRUS REAL-TIME PCR MANUEL D'UTILISATION 

Europe Diagenode sa/CHU - Tour GIGA - B34 - 3 e étage//Avenue de l’Hôpital, 1 //4000 Liège (Sart Tilman)//Belgium //Phone : (+32) 4 364 20 50 //Mail : info@diagenode.com

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Sommaire 

Information générale .......................................................................................................................................... 5 

Champs d’application / Intérêt du dispositif .................................................................................................... 5 

Information sur l’agent pathogène ................................................................................................................... 5 

Description du produit ....................................................................................................................................... 6 

Stockage .............................................................................................................................................................. 7 

Avertissements et précautions ......................................................................................................................... 8 

Matériel requis, non fourni............................................................................................................................... 10 

Utilisation d'échantillons humains / Champ d'application de la trousse ................................................... 10 

Prélèvement, stockage et transport d'échantillons humains ...................................................................... 11 

1. Prélèvement d'échantillons ................................................................................................................ 11 

2. Stockage des échantillons ................................................................................................................. 11 

3. Transport des échantillons ................................................................................................................. 11 

Protocole ........................................................................................................................................................... 12 

A. Procédures à suivre 

A.1. Procédure d’extraction (cf. point B2. Extraction d’échantillons / Isolation d’ADN) .............................. 12 

A.2. Procédure de la PCR (cf. point B3. Préparation de la réaction PCR) ................................................. 13 

A.3. Amplification et procédures des systèmes en temps réel ................................................................... 14 

A.4. Interprétation des résultats .................................................................................................................. 14 

B. Annexes de la procédure 

B.1. Contrôle d’extraction d’ADN & d’inhibition (option) ............................................................................. 17 

B.2. Extraction d’échantillons / Isolation d’ADN .......................................................................................... 18 

B.3. Préparation de la réaction PCR ........................................................................................................... 19 

B.4. Programme de PCR ............................................................................................................................ 24 

B.5. Sélection des fluorophores appropriés ................................................................................................ 25 

ABI ® 7000-7300-7500-7900HT / StepOnePlus .............................................................................. 26 

Roche LightCycler ® 480 - Lc2.0 .......................................................................................................... 26 

Biorad iCycler ® -IQ5-CFX96................................................................................................................. 27 

Agilent Stratagene ® MX3000P-3005P ................................................................................................ 27 

Qiagen Rotor-Gene ® 3000 / 6000 ...................................................................................................... 27 

B.6. Interprétation des résultats .................................................................................................................. 28 

Guide de résolution des problèmes .............................................................................................................. 29 

Évaluation des performances ......................................................................................................................... 30 

Sensibilité analytique ............................................................................................................................. 30 

Spécificité analytique ............................................................................................................................. 30 

Investigation clinique.............................................................................................................................. 30 

Restrictions concernant l'utilisation du produit ............................................................................................ 31 

Contrôle qualité ................................................................................................................................................ 31 

Références ........................................................................................................................................................ 31 

Explication des symboles ................................................................................................................................ 32 

Avis à l'acheteur ............................................................................................................................................... 33 


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DIAGENODE VIRUS D’’EPSTEIN-BARR PCR QUANTITATIVE EN TEMPS REEL MANUEL D'UTILISATION 

Europe Diagenode sa / CHU - Tour GIGA - B34 - 3 e étage // Avenue de l’Hôpital, 1 // 4000 Liège (Sart Tilman) // Belgique // Tel: (+32) 4 364 20 50 // Mail: info@diagenode.com

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Information générale 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel de Diagenode est un dosage de 

diagnostic in vitro utilisé par les laboratoires cliniques et par les techniciens de laboratoire qualifiés. 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel de Diagenode est validée pour: 

• ABI ® (7000 /7300 /7500 /7900HT/StepOnePlus) 

• Roche ® (LcC480/Lc2.0) 

• Biorad ® (iCycler/ IQ5/CFX96) 

• Qiagen Rotor-Gene ® (3000/6000) 

• Agilent Stratagene ® (MX3000P/3005P) 

Champ d’application / Intérêt du dispositif 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel est un test de diagnostic in vitro 

quantitatif permettant la détection rapide et spécifique du virus d’Epstein-Barr humain (VEB) dans des 

échantillons de sang total/EDTA et plasma/citraté par la technique de polymérisation en chaîne en 

temps réel après extraction de l’ADN virale. 

Information sur l’agent pathogène 

Le virus d’Epstein-Barr ou human herpesvirus (HHV-4) est un virus à ADN enveloppé qui fait partie de 

la famille des Herpesviridaes et est l'un des virus les plus courants chez l’être humain. La plupart des 

des personnes infectées par ce virus sont le plus souvent asymptomatiques mais peuvent aussi 

développer la mononucléose infectieuse. 

Les symptômes de la mononucléose infectieuse sont la fièvre, des maux de gorge et les ganglions 

lymphatiques enflés. Parfois, une augmentaion de la taille de la rate (splénomégalie) ou une atteinte 

hépatique peut se développer. Dans de très rare cas, le cœur ou le système nerveux central sont 

atteints. La mononucléose infectieuse n'est presque jamais mortelle. Il n'existe pas de lien établi entre 

l’infection au virus d’Epstein-Barr et des problèmes pendant la grossesse, tels que fausses couches ou 

des malformations congénitales. Bien que les symptômes de la mononucléose 

infectieuse disparaissent généralement en 1 ou 2 mois, le virus reste dormant ou latent dans 

l’épithélium oropharyngée et dans certaines cellules du système immunitaire de l'organisme pour le 

reste de la vie de la personne. Périodiquement, le virus peut se réactiver et se trouve couramment 

dans la salive des personnes infectées. Cette réactivation se fait généralement sans symptômes de la 

maladie. 

Ce virus peut induire le développement de cancer comme le lymphome de Burkitt et le carcinome 

nasopharyngé, deux formes rares de cancers. Le virus d’Epstein-Barr semble jouer un rôle important 

dans ces tumeurs malignes, mais n'est probablement pas la seule cause de la maladie. 


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Description du produit 

Le produit contient des amorces, des sondes, une courbe quantitative (5 dilutions), un contrôle positif et 

un contrôle négatif. Le mastermix n’est pas inclus. 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel prévue pour 50 PCR (volume 

50 μl), se compose de 2 pochettes. 

I. Amorces/sondes et pochette de courbe quantitative 

1. Amorces & sonde d'hydrolyse du virus d’Epstein-Barr (FAM, émission 

520 nm): 500 μl, tube rouge. 

2. Amorces & sonde d'hydrolyse du contrôle d'inhibition (Yellow Dye, 548 

nm): 500 μl, tube bleu clair. 

3. Contrôle d'inhibition plasmide: 250 μl, tube gris. 

4. VEB Cal, 400 000 copies/μl: 25 μl, tube jaune (courbe quantitative). 



7. VEB Cal, 400 copies/μl: 25 μl, tube jaune (courbe quantitative). 

8. VEB Cal, 40 copies/μl: 25 μl, tube jaune (courbe quantitative). 

9. H 2 O (PCR grade): 1000 μl, tube bleu foncé. 

10. Contrôle négatif VEB: H 2 O (PCR grade) 500 μl, tube pourpre. 

II. Pochette du contrôle positif: 

1. Contrôle positif VEB: 500 μl, tube vert. 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel (DIA-EBVQ-050) peut être utilisée 

en combinaison avec le contrôle d’extraction d’ADN & d’inhibition PCR (DIA-EIC/DNA-050). 

Contrôle d'extraction d’ADN & d’inhibition de PCR en temps réel: 50 PCR (volume PCR: 50 μl), 

1 boîte. 

I. (virus à ADN) Amorces & sonde d’hydrolyse: 

1. Pour le fluorophore jaune (DIA-EIC/DNA(YD)-050), émission 548 nm : 250 μl, tube 

vert. 

2. Pour fluorophore orange (DIA-EIC/DNA(DR)-050), émission 575 nm : 250 μl, tube bleu. 

3. Pour le Cy5 (DIA-EIC/DNA(Cy5)-050, émission 662 nm : 250 μl, tube bleu foncé. 

II. Culture du virus à ADN: 1000 µl, tube jaune. 


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Stockage 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel doit être stockée à -20°C, jusqu'à 

sa date d'expiration. 

N.B. 

Si vous utilisez le DIA-EIC/DNA-050, la culture de virus à ADN doit être stockée à -20°C. 

Veuillez vérifier la date d'expiration mentionnée sur les étiquettes de la pochette et des tubes. 

Le produit a une durée de vie de 24 mois à -20°C à partir de la date de production. 

N.B. 

Veuillez effectuer un fractionnement des solutions afin d’éviter les cycles de congélation/ décongélation. 

Pendant l’utilisation, tous les composants de la trousse doivent être conservés à 4°C. 

STOCKAGE À L’ABRI DE LA LUMIÈRE. 


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Avertissements et précautions 

Vérifier, dès réception, que l'emballage de la trousse n’est pas abîmé et que le produit n'est 

pas dégelé. N'hésitez pas à contacter le département logistique en cas de problème. 

logistics@diagenode.com / +32 4 364 20 52 

Recommandations générales 

• Veuillez lire toutes les instructions avant de réaliser le test. 

• Après utilisation, les déchets et les réactifs doivent être manipulés comme potentiellement 

infectieux et doivent être éliminés dans une poubelle spécifique prévue pour les substances 

biologiques. 

• Ne remplacez pas les réactifs de la trousse par d’autres provenant d’un numéro de lot ou d’un 

fabricant différent. 

Extraction/PCR 

• Les trousses de PCR en temps réel de Diagenode doivent être utilisées par des 

scientifiques/des techniciens de laboratoire possédant un grand savoir-faire en biologie 

moléculaire et, en particulier, en matière de plateforme PCR en temps réel. 

• Pour obtenir des résultats optimaux, Diagenode suggère quelques méthodes d’extraction 

adaptées afin d’éviter les inhibiteurs de PCR. 

(Cf. point B.2. Extraction d’échantillons/isolation d’ADN) 

• Le contrôle d’extraction et/ou d’inhibition doit être utilisé pour chaque réaction de PCR. 

• Dans le contexte du suivi d’un patient: les scientifiques/les techniciens de laboratoire doivent 

utiliser la même méthode d’extraction, le même mastermix, la trousse du même fabricant et le 

même système d’amplification PCR. 

Attention 

Si les résultats obtenus pour le contrôle d'inhibition et/ou d'extraction ne sont pas 

satisfaisants, il est de la responsabilité de l'utilisateur d'optimiser les méthodes d'extraction 

afin d'obtenir des résultats concluants. 

• Le contrôle d’extraction viral doit être manipulé sous une hotte à flux laminaire dans le 

cas d’une procédure d’extraction manuelle ou dans une zone délimitée dans le cas d’une 

procédure d’extraction automatisée, comme le suggère le fabricant. 

Contamination 

• Veuillez réaliser l'extraction d’acide nucléique et l’amplification en temps réel dans des locaux 

séparés. 

• Gardez tous les tubes et les ampoules fermés lorsque vous ne les utilisez pas. 

• Le laboratoire de PCR (hotte stérile, plateforme d’extraction ADN/ARN, tablier de laboratoire, 

etc.) doit être nettoyé après chaque test PCR avec les produits appropriés. 

• Les trousses contaminées doivent être jetées dans une poubelle spécifique pour les 

substances biologiques. 

• La trousse ne doit pas être utilisée par une personne présentant des symptômes similaires à la 

maladie recherchée. 


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• Les contrôles PCR positifs et négatifs doivent être réalisés à chaque réaction PCR. 

• Il est obligatoire de porter des gants. 

• Il faut utiliser des tips à filtre pour tous les mélanges PCR. 

• Avant ouverture, tous les tubes doivent être centrifugés. 

• Ne jamais pipetter les solutions avec la bouche. Ne pas fumer, ni manger, ni boire dans les 

zones où l’on manipule les échantillons ou les réactifs de la trousse. 

• Ne pas ingérer la trousse de diagnostic. 

• Les tests ne doivent pas être réalisés par une femme enceinte en raison des risques possibles 

pour le fœtus. 

Attention 

Le stockage de la trousse à température ambiante peut entraîner la dégradation des 

amorces/des sondes/du contrôle positif/des plasmides, ce qui peut provoquer une moins 

bonne sensibilité. Nous conseillons dès lors l'utilisation d’une nouvelle trousse. 


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Matériel requis (non fourni) 

• Pipettes 

• Embouts de pipette stériles avec filtre exempt de ARNase/ADNase 

• Gants non poudrés 

• Vortex 

• Centrifugeuse de table 

• Tubes de microcentrifugeuse exempts de ARNase / ADNase (1,5 et/ou 2 ml) 

• Plaques PCR 96 puits 

• Tablier de laboratoire 

• Eau exempte de ARNase/ADNase 

• Trousse d’isolation d’ADN (cf. point B .2. Extraction d’échantillons/isolation d’ADN) 

• Consommables et accessoires (tubes, microcentrifugeuse, plaques, bande adhésive) pour les 

systèmes ABI / Roche/ Biorad / Qiagen / Agilent Stratagene 

• Mastermix (cf. point B .3. Préparation à la réaction de PCR) 

• Matériel de PCR en temps réel: ABI / Roche/ Biorad / Qiagen ou Agilent Stratagene 

• Hotte à flux laminaire (mix / ADN) 

Utilisation d’échantillons humains/ champ d’application 

de la trousse 

La trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel est destinée à la détection et à 

la quantification du virus d’Epstein-Barr dans les échantillons de sang total/EDTA ou de plasma/ 

citraté. 

La trousse s’utilise sur des échantillons de patients potentiellement infectés par le virus d’Epstein-Barr. 


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Prélèvement, stockage et transport d’échantillons 

humains 

1. Prélèvement d’échantillons 

Les échantillons de sang humain tels que le sang total/EDTA et/ou le plasma/citraté. 

2. Stockage des échantillons 

Les échantillons humains doivent être stockés à 4°C jusqu’à 24 heures ou congelés à -20°C ou à -80°C 

dans le cas de périodes plus longues. 

Les échantillons humains doivent être stockés dans des tubes en polypropylène exempts d’ ADNase / 

ARNase. La sensibilité de la PCR peut être compromise si les échantillons humains sont congelés et 

décongelés de façon répétée. Nous recommandons d'éviter les cycles de congélation/décongélation. 

3. Transport des échantillons 

Les échantillons de sang total/EDTA et/ou de plasma/citraté humain doivent être transportés dans des 

containers adaptés. Le transport d'échantillons pathogènes doit se faire dans le respect des normes 

locales et nationales. 

Si le transport dure plus de 24 heures, nous recommandons une conservation à -20°C afin d'éviter la 

dégradation de l'ADN. 

Dans le cas d’un transport d’un échantillon au sein d’un laboratoire, l’échantillon peut être conservé à 

température ambiante. 


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Protocole 

A. Procédures à suivre 

Veuillez réaliser toutes les procédures dans une zone de confinement adaptée. 

A.1. Procédure d’extraction 

(cf. point B.2. Extraction d’échantillons/isolation d’ADN) 

Suivez les étapes suivantes: 

• Placez le ou les échantillons à température ambiante. 

• Choisissez la méthode d’extraction adaptée à votre échantillon (cf. point B.2 concernant les 

méthodes validées par Diagenode). 

• Suivez les instructions du fabricant pour la réalisation de la procédure d’extraction. 

(Option) Si vous utilisez le contrôle d'extraction d’ADN et d'inhibition, ajoutez 10 μl de la culture du 

virus ADN dans le volume à extraire (tube du virus à ADN) (cf. point B.1. Extraction d’ADN & 

contrôle d’inhibition et B.2. Extraction d’échantillons/isolation d’ADN). 

N.B. 

Le contrôle d'extraction d’ADN & d’inhibition de Diagenode est fourni séparément (DIA-EIC/DNA-50). 

Vous pouvez sélectionner le fluorophore adapté à votre système PCR en temps réel (cf. point B.5. 

Sélection des fluorophores appropriés). 

• Lorsque la procédure d’extraction est terminée, placez l’ADN à 4°C avant de l’utiliser (ou à -20°C 

pour un stockage de plus de 24h). 

• Placez le tube du contrôle positif VEB et les cinq tubes de la courbe quantitative VEB à 

4°C. 

N.B. 

Tout échantillon extrait peut être conservé maximum 2 heures à température ambiante. S’il y reste 

pendant un long moment, l’ADN peut se dégrader. Si l’ADN est dégradé, la sensibilité de la PCR sera 

amoindrie! Si le tube de contrôle positif du VEB et/ou les cinq tubes de la courbe quantitative du VEB 

sont à température ambiante pendant une longue période (> 24 heures), les plasmides (contrôle 

positif & courbe quantitative) peuvent être dégradés et influencer les résultats obtenus ! 


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A.2. Procédure de la PCR 

(cf. point B.3. Préparation de la réaction PCR) 

Mastermix suggéré: 

Quantifast TM multiplex PCR + R kit, Qiagen (non fourni) (Réf: 204756) 

(Cf point B.3. Préparation de la réaction PCR) 

Nous vous recommandons pour les systèmes PCR suivants: 

Rotor-Gene Multiplex PCR Kit (Qiagen) (non fourni) pour Qiagen Rotor-Gene (Réf: 204774) 

LightCycler ® TaqMan ® Master (Roche) (non fourni) pour LightCycler 2.0 (Lc2.0) (Réf: 04535286001) 


• Placez la trousse de PCR quantitative en temps réel du virus d’Epstein-Barr à température 

ambiante: le tube rouge (amorces & sonde d'hydrolyse du virus d’Epstein-Barr), le tube bleu 

clair(amorces et sonde d'hydrolyse du contrôle d'inhibition), le tube bleu foncé (ddH2O) (de 

la pochette des amorces/sondes et courbe quantitative). 

• (Option) Si vous utilisez le contrôle d’extraction d’ADN & d’inhibition, placez le tube 

contenant les amorces & la sonde d'hydrolyse à température ambiante (au lieu du tube bleu 

clair, des amorces et de la sonde d'hydrolyse du contrôle d'inhibition). 

• Placez le Mastermix à 4°C. 

N.B. 

Centrifugez brièvement toutes les solutions lorsqu’elles sont dégelées et homogénéisez ces dernières 

à l'aide d'une pipette. 

• Sélectionnez le protocole approprié en fonction du système PCR en temps réel utilisé 

(Cf.point B.3. Préparation de la réaction PCR) et préparez les mélanges sans l’échantillon 

et/ou le contrôle positif et/ou la courbe quantitative. 

N.B. 

Préparez deux mélanges différents (cf. point B3. Préparation de la réaction PCR): 

1) La PCR qualitative 

2) La courbe quantitative 

Remarque importante: 

Pour valider le test, vous devez réaliser une PCR sur un contrôle négatif (H 2 O PCR grade) et une 

PCR sur le contrôle positif Diagenode. 

• Distribuez les mélanges préparés dans les tubes/capillaires appropriés ou sur une plaque 

96 puits. 

• Ajoutez-y les échantillons, le contrôle positif de Diagenode (même volume que les 

échantillons) ainsi que les cinq dilutions de la courbe quantitative VEB. 

• Fermez les tubes/capillaires ou la plaque. 


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N.B. 

Si vous n’utilisez pas de contrôle d’inhibition PCR universel et/ou le contrôle d’inhibition et d’extraction 

(DIA-EIC/DNA-050), remplacer le volume de contrôle par le volume d’eau (H 2 0 PCR grade). 

A.3. Amplification et procédures des systèmes en temps réel 

(cf. point B.4. Cycle PCR et B.5. Sélection des fluorophores appropriés) 

Diagenode conçoit et valide des trousses adaptées aux systèmes PCR en temps réel ABI / Roche/ 

Biorad / Qiagen / Agilent Stratagene. 

Suivez les instructions du fabricant avant d’utiliser les systèmes de PCR en temps réel. 


• Placez les tubes/capillaires ou la plaque de 96 puits fermés dans le système en temps réel. 

• Sélectionnez le cycle PCR (cf. point B.4. Cycle PCR). 

• Sélectionnez les fluorophores adaptés au système en temps réel (cf. point B.5. Sélection des 

fluorophores appropriés). 

• Entrez le nom et la position des échantillons dans le logiciel. 

• Démarrez le test. 

A.4. Interprétation des résultats 

(cf. point B.6. Interprétation des résultats) 

Suivez les instructions du fabricant pour analyser les résultats. 


A .4 .1. PCR qualitative : 

• Analysez le fluorophore FAM (virus d’Epstein-Barr) et Yellow (ou Orange/Cy5 si vous utilisez 

d’autres fluorophores) (Contrôle d'inhibition) séparément (cf. point B.6. Interprétation des 

résultats): 

- Contrôle négatif: le signal FAM ne doit pas apparaître. 

- Contrôle positif: le signal FAM doit apparaître, valeur Ct/Cp de 29.0 ± 3.3 (en fonction du 

système en temps réel utilisé). 

- Pour les échantillons inconnus: 

• L’apparition du signal FAM indique que l’échantillon est positif au virus d’Epstein-Barr. 

• L’absence du signal FAM indique que l’échantillon est négatif au virus d’Epstein-Barr. 


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En cas d’absence du signal FAM : 

• Un signal Yellow (ou Orange/Cy5) au-dessus du seuil (Threshold), 27 ≤ valeur Ct/Cp ≤ 36, doit 

être considéré comme positif pour le contrôle d'inhibition. Le test est valide. 

• Un signal Yellow (ou Orange/Cy5) en-dessous du seuil (Threshold) doit être considéré comme 

négatif pour le contrôle d'inhibition. Le test est invalide, recommencez la procédure d’extraction 

d’ADN et/ou la procédure PCR. 

N.B. 

Si la valeur Ct/Cp du contrôle d'inhibition (ou du contrôle d’extraction d’ADN & d’inhibition) se situe ≥ 36: 

• D’abord, nous suggérons fortement de réaliser une PCR en diluant l’échantillon 10x afin 

d’exclure au maximum les facteurs inhibiteurs. 

• Ensuite, si le problème persiste, nous recommandons de réaliser à nouveau la procédure 

d’extraction et/ou de réaliser une autre procédure d’extraction plus appropriée. 

• Sélectionnez le document de rapport pour obtenir un résumé des résultats Ct/Cp et des 

courbes. 

A.4.2. Courbe quantitative: 

Le signal FAM doit apparaître dans les 5 dilutions ADN du VEB de la courbe quantitative. 

Courbe quantitative 

Tube 1 :VEB Cal 400 000 copies/ μl 



Tube 4 :VEB Cal 400 copies/ μl 


Copies des amplicons VEB/ réaction PCR 

1 000 000 copies/ réaction PCR 

100 000 copies/ réaction PCR 



100 copies/ réaction PCR 

Les valeurs Ct/Cp obtenues doivent être proportionnelles aux dilutions de la courbe quantitative! 

• ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480-Lc2.0/ Biorad iCycler-IQ5- 

CFX96/ Agilent Stratagene MX3000P-3005P/ Qiagen Rotor-Gene: 

Pour valider la courbe quantitative du VEB, vous devez vérifier la valeur de la pente que 

le logiciel du système PCR en temps réel utilisé a calculée. 

La valeur de la pente doit se situer entre: - 3,0 ≤ pente ≤ -3,6 

N.B. 

Si la valeur de la pente est < -3,0, recommencez la préparation de la courbe quantitative. 

Si la valeur de la pente est > -3,6, recommencez la préparation de la courbe quantitative. 

• Roche Lc480/Lc2.0: 

Pour valider la courbe quantitative du VEB, vous devez vérifier la valeur d’efficacité que le 

logiciel du système PCR temps réel a calculée. 

La valeur d’efficacité doit se situer entre: 1,9 ≤ efficacité ≤ 2,1 

N.B. 

Si la valeur d’efficacité est < 1,9 recommencez la préparation de la courbe quantitative. 

Si la valeur d’efficacité est > 2,1 recommencez la préparation de la courbe quantitative. 

N.B. 

Les cinq dilutions de la courbe quantitative doivent être testées lors de chaque expérience. Si 

toutes les conditions de la courbe quantitative sont remplies, les résultats obtenus peuvent 

servir à quantifier les échantillons. 


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A.4.3. Détermination des copies du VEB/ml 

Volume de la courbe quantitative: 2.5 μl de chaque dilution (5) 

Suivre les concentrations suivantes pour la courbe de calibration: 












100 copies/ réaction PCR 

Résultat obtenu (copies/réaction PCR) 

 

volume d ′ échantillon extrait (µl) 

x 

Volumed ′ élution (µl) 

Volume d ′ extraction (µl) 

x 1000 = Résultat (copies/ml)* 

* Nombre de copies dans 1 ml de l’échantillon de départ. 

Volume de la courbe quantitative: 5 μl de chaque dilution (5) 

Suivre les concentrations suivantes pour la courbe de calibration: 













Résultat obtenu (copies/réaction PCR) 

 

volume d′échantillon extrait (µl) 

x 

Volumed ′ élution (µl) 

Volume d ′ extraction (µl) 

x 1000 = Résultat (copies/ml )* 

* Nombre de copies dans 1 ml de l’échantillon de départ. 

Volume d’élution : volume d’échantillon obtenu après l’extraction (ex: 60 µl) 

Volume d’extraction : volume d’échantillon initial avant l’extraction (ex: 200 µl) 

Volume d’échantillon extrait : volume d’échantillon utilisé pour la PCR (ex: 5 µl) 

N.B. 

Dans le contexte du suivi d’un patient: 

• Les scientifiques/les techniciens de laboratoire doivent utiliser la même méthode d’extraction, 

le même mastermix, le même fabricant et le même système d’amplification. 

• Nous conseillons d’utiliser la trousse de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps 

réel de Diagenode exclusivement. 

Pour définir le statut viral du patient, nous conseillons fortement de comparer les résultats de la trousse 

de PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel avec d’autres méthodes de recherche 

diagnostic. 


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B. Annexes de la procédure 

B.1. Contrôle d'extraction d’ ADN & d’inhibition (option) 

Le contrôle d'extraction d’ADN & d’inhibition de Diagenode est une culture virale contenant une charge 

virale de 1.000 TCID50/ml. 

Le contrôle d’extraction d’ADN & d’inhibition est un virus complet, gardant son pouvoir 

infectieux. Ce virus est répertorié dans la classe Ea1* établie par l’EFB (European 

Federation of Biotechnologies). 

Ce virus n’est pas considéré comme dangereux pour l’homme, mais doit être manipulé 

sous une hotte à flux laminaire. 

*(plus de détails à la fin de ce manuel) 

Procédure: 

• 10 μl de chaque dilution à extraire dans 

500 μl d’eau. 

• Système Nuclisens easyMAG ® 

(extraction "on board"). 

• Élution dans 60 μl. 

• 5 μl utilisés pour la PCR. 

• TaqMan ® Universal PCR Mastermix 

(Applied Biosystems). 

• Tests réalisés sur ABI Prism ® 7000 

(Applied Biosystems). 

La valeur Ct pour 1.000 TCID50/ml est de ± 28,5. La figure ci-dessus montre également les résultats 

d’autres dilutions (100 TCID50/ml à ± 31,5 et 10 TCID50/ml à ± 35). 

Pour l’extraction d’échantillons/l’isolation d’ADN, ajoutez 10µl de culture virale ADN du 

contrôle d'extraction (IC) dans l’échantillon avant de lancer la procédure d’extraction. 

(La concentration peut être modifiée afin d’adapter la PCR multiplexe à la méthode d’extraction 

utilisée.) 


PAGE 18 


B.2. Extraction d’échantillons/Isolation d’ADN 

Diagenode suggère les méthodes d’extraction suivantes: 

• Nuclisens EASYMAG ® System (Biomerieux) 

Échantillon clinique: plasma/citraté. 

Suivez les instructions du fabricant comme suit: 

Volume d’échantillon humain extrait: 250 µl 

(+ 10 µl de DIA-EIC/DNA-050, si vous utilisez le contrôle d’extraction d’ADN & d’inhibition) 

Volume d’ADN isolé: 60 µl (volume d’élution) 

• QIAamp DNA Mini Kit (50) (Blood and Body Fluid Spin Protocol) (Qiagen Réf. 51304) 

Échantillons cliniques: sang total/EDTA, plasma/citraté. 





• Maxwell 16 Blood DNA Purification kit (48) (Promega Ref. AS1010) 

Échantillons cliniques: sang total/EDTA 





Information générale concernant l’extraction: 

Si vous réalisez la PCR le même jour, l’ADN extrait peut être conservé à 4°C. Pour une période 

de conservation plus longue, l’ADN doit être stocké à -20°C. 


PAGE 19 

B.3. Préparation de la réaction PCR 

(ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480-Lc2.0/ Biorad iCycler-IQ5-CFX96/ Agilent 

Stratagene MX3000P-3005P/ Qiagen Rotor-Gene) 

Avec: 

Quantifast TM multiplex PCR + R kit, Qiagen (non fourni) (Réf: 204756) 

N.B. 

Pour le Qiagen Rotor-Gene, nous recommandons le kit Rotor-Gene Multiplex PCR, Qiagen (non 

fourni) (Réf: 204 774). 

Pour le LightCycler 2 .0 (Lc2 .0), nous conseillons le LightCycler® TaqMan® Master, Roche (non 

fourni) (Réf: 04535286001). 

• PCR 50 μl 

(ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480/ Biorad iCycler-IQ5/ Agilent 

Stratagene MX3000P-3005P/Qiagen Rotor-Gene) 

Préparation de l’échantillon 

25 μl ................. 2X mastermix 

5 μl ................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

5 μl ................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le contrôle d'inhibition Diagenode 

2.5 μl ................. Contrôle d'inhibition plasmide Diagenode 

10 μl ................. Échantillon humain (ou contrôle positif VEB) 

2.5 μl ................. H 2 O PCR grade Diagenode 

50 μl ................. Volume final 

N.B. 

Avec le système ABI, vous pouvez ajouter 1 μl de solution ROX (Qiagen). 

Ajustez le volume d’eau (H20 PCR grade) à 1,5 μl. 

25 μl ................. 2X mastermix 

Préparation de la courbe standard 


2.5 μl 

. 

................. Courbe quantitative Diagenode: 4 .10 5 ou 4 .10 4 ou 4 .10 3 ou 4 .10 2 

ou 4 .10 1 copies/µl 

17,5 μl ................. H 2 O PCR grade Diagenode 


N.B. 


Ajustez le volume d’eau (H20 PCR grade) à 9 μl. 


PAGE 20 



(ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480-Lc2.0/ Biorad iCycler-IQ5- CFX 96 / 

Agilent Stratagene MX3000P-3005P/ Qiagen Rotor-Gene) 

12.5 μl ................ 2X Mastermix 


2.5 μl ................ Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

2.5 μl ................ Amorces & sonde d'hydrolyse pour le contrôle d'inhibition Diagenode 

2.5 μl ................ Contrôle d'inhibition plasmide Diagenode 

5 μl ................ Échantillon humain (ou contrôle positif VEB) 

25 μl ................ Volume final 

N.B. 




12.5 μl ................ 2X Mastermix 


2.5 μl ................ Courbe quantitative Diagenode: 4 .10 5 ou 4 .10 4 ou 4 .10 3 ou 4 .10 2 ou 

4 .10 1 copies/µl 

7.5 μl ................ H 2 O PCR grade Diagenode 


N.B. 

Avec le système ABI, vous pouvez ajouter 0,5 μl de solution ROX (Qiagen). 



(Roche Lc2.0) 

Pour le LightCycler 2.0 (Lc2.0), nous conseillons le LightCycler ® TaqMan ® Master, Roche (non 

fourni) (Réf : 04535286001). 

4 μl ................. 5X Mastermix 



2 μl ................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le contrôle d'inhibition Diagenode 

2.5 μl ................. Contrôle d'inhibition plasmide Diagenode 

5 μl ................. Échantillon humain (ou contrôle positif VEB) 

4.5 μl ................. H 2 O PCR grade Diagenode 



PAGE 21 


4 μl ................. 5X Mastermix 


2,5 μl ................. Courbe quantitative Diagenode: 4 .10 5 ou 4 .10 4 ou 4 .10 3 ou 4 .10 2 ou 

4 .10 1 copies/µl 

11,5 μl ................. H 2 O PCR grade Diagenode 


Remarque importante : 

Si vous utilisez le DIA-EIC/DNA-050, contrôle d'extraction d’ADN & d'inhibition PCR en temps réel, 

référez-vous au descriptif du produit. 

Veuillez suivre les protocoles suivants: 

• PCR 50 μl: 

(ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480/ Biorad iCycler-IQ5/ Agilent Stratagene 

MX3000P-3005P/Qiagen Rotor-Gene) 

N.B. 

Pour le Qiagen Rotor-Gene, nous conseillons la trousse PCR Rotor-Gene Multiplex, Qiagen (non 

fourni) (Réf: 204 774). 


25 μl .................. 2X Mastermix 

5 μl .................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

5 μl .................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le contrôle d’extraction d’ADN & 

d’inhibition PCR Diagenode 

10 μl .................. Échantillon humain (ou contrôle positif VEB) 

5 μl .................. H 2O PCR grade Diagenode 

50 μl .................. Volume final 

N.B. 




PAGE 22 



25 μl ................ 2X Mastermix 

5 μl ................ Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

2.5 μl ................ Courbe quantitative Diagenode : 4 .10 5 ou 4 .10 4 ou 4 .10 3 ou 4 .10 2 

ou 4 .101 copies/µl 



N.B. 




(ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480-Lc2.0/ Biorad iCycler-IQ5- CFX 96 / 

Agilent Stratagene MX3000P-3005P/ Qiagen Rotor-Gene) 


12.5 μl ............. 2X Mastermix 

2.5 μl ............. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

2.5 μl ............. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le contrôle d'extraction d’ADN & 


5 μl ............. Échantillon humain (ou contrôle positif VEB) 

2.5 μl ............. H 2 O PCR grade Diagenode 

25 μl ............. Volume final 

N.B. 


Ajustez le volume d’eau (H20 PCR grade) à 1, 5 μl. 


12.5 μl ................ 2X Mastermix 


2.5 μl ................ Courbe quantitative Diagenode: 4 .10 5 ou 4 .10 4 ou 4 .10 3 ou 4 .10 2 

ou 4 .101 copies/µl 



N.B. 




PAGE 23 


(Roche Lc2.0) 

Pour le LightCycler 2.0 (Lc2.0), nous conseillons le LightCycler ® TaqMan ® Master, Roche (non 

fourni) (Réf: 04535286001). 

4 μl .................. 5X Mastermix 


2 μl .................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

2 μl .................. Amorces & sonde d'hydrolyse pour le contrôle d’extraction d’ADN & 


5 μl .................. Échantillon humain (ou contrôle positif VEB) 

7 μl .................. H 2 O PCR grade Diagenode 

20 μl .................. Volume final 

4 μl ................ 5X Mastermix 


2 μl ................ Amorces & sonde d'hydrolyse pour le virus d’Epstein-Barr Diagenode 

2.5 μl. ................ Courbe quantitative Diagenode: 4 .10 5 ou 4 .10 4 ou 4 .10 3 ou 4 .10 2 

ou 4 .10 1 copies/µl 



Attention 

Il faut préparer un nouveau mélange pour chaque nouveau test PCR. Le Mastermix (non fourni) et 

les amorces/sondes fournies dans la trousse doivent être placées à 4°C pendant toute l’étape de 

préparation de la PCR. 


PAGE 24 


B.4. Programme PCR 

• ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus/ Roche Lc480/ Biorad iCycler-IQ5- CFX96/ 

Agilent Stratagene MX3000P-3005P/ Qiagen Rotor-Gene 

Niveau 

Description 

1 2 minutes à 50°C (1 cycle) 


3 Programme du cycle (45 cycles) 

Étape 1 : 15 secondes à 95°C 


N.B. 

Lors de la deuxième étape du niveau 3, il est fortement recommandé de diminuer la vitesse 

de changement de température (°C/s) de 50%. 

• Roche Lc2.0 

Niveau 

Description 


2 Programme du cycle (45 cycles) 



Étape 3 : 1 seconde à 72°C 

3 30 secondes à 40°C (1 cycle) 


PAGE 25 

B.5. Sélection des fluorophores appropriés 

• ABI 7000-7300-7500-7900HT-StepOnePlus 

Nom du détecteur Émetteur Absorbeur 

Virus d’Epstein-Barr FAM FAM (aucun) 

Contrôle d'inhibition (YD) 

ou 


Jaune Vic (aucun) 

DIA-EIC/DNA(DR)-050 Orange NED (aucun) 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050* Cy5 Cy5 (aucun) 

Sélectionnez la référence passive: ROX (si vous utilisez un Mastermix avec ROX). 

Sélectionnez la référence passive: néant (si vous utilisez un Mastermix sans ROX) 

Contrôle d'inhibition (YD) ou DIA-EIC/DNA(YD)-050 : ABI 7000 ou 7300 ou 7500 ou 

7900HT ou StepOnePlus 

DIA-EIC/DNA(DR)-050 : ABI 7000 ou 7300 ou 7500 ou 7900HT ou 

StepOnePlus 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050 : ABI 7500 

* DIA-EIC/DNA(Cy5)-050 peut être remplacé par DIA-EIC/DNA(RD)-050 

• Roche Lc480-Lc2 .0 




ou 


Jaune Vic/Hex (aucun) 


Contrôle d'inhibition (YD) ou DIA-EIC/DNA(YD)-050 : Lc2 .0 ou Lc480 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050 : Lc480 



PAGE 26 


N.B 

Avant d’utiliser notre trousse PCR en temps réel sur le système Roche LightCycler 480 ou 2.0, vous 

devez créer un fichier de compensation pour les fluorophores spécifiques à l’application. Une trousse 

“color compensation set” est disponible sous la référence Dia-DAF-005 afin de pouvoir créer le fichier 

de compensation. 

• Biorad iCycler-IQ5-CFX96 




ou 




Contrôle d'inhibition (YD) ou DIA-EIC/DNA(YD)-050: iCycler ou IQ5 ou CFX96 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050: iCycler ou IQ5 ou CFX96 


• Agilent Stratagene MX3000P-3005P 




ou 




Contrôle d'inhibition (YD) ou DIA-EIC/DNA(YD)-050: MX3000P ou 3005P 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050: MX3000P ou 3005P 


N.B. 

Dans les paramètres "Filter Set Gain Settings»: 

• FAM: sélectionnez x8 

• Yellow Dye: sélectionnez x2 

• Cy5: sélectionnez x4 


PAGE 27 

• Qiagen Rotor-Gene 6000 

Nom du détecteur 

Canal 

Virus d’Epstein-Barr FAM Vert 


ou 

DIA-EIC/DNA(YD)-050 Jaune Jaune 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050* Cy5 Rouge 

Contrôle d'inhibition (YD) ou DIA-EIC/DNA(YD)-050: Qiagen Rotor-Gene 6000 

DIA-EIC/DNA(Cy5)-050: Qiagen Rotor-Gene 6000 


N.B. 

Réalisez une optimisation à 60 degrés au début de chaque test pour les canaux vert, jaune et/ou 

rouge. 


PAGE 28 


B.6. Interprétation des résultats 

Virus d’Epstein Barr 

Détection du signal 

FAM 

Contrôle d’inhibition 

DIA-EIC/DNA-050 

Détection du signal 

Jaune 

Orange 

Cy5 

Interprétation des résultats 

Signal au-dessus du seuil 


Signal en dessous du seuil 






L’échantillon est positif au 

virus d’Epstein-Barr 

L’échantillon est positif au 


L’échantillon est négatif au 


Le test est invalide. 

Cf le guide de résolution des 

problèmes. 


PAGE 29 

Guide de résolution des problèmes 

• Isolation de l’acide nucléique 

Référez-vous à la mention du fabricant concernant le produit. 

N.B 

Réalisez l’entretien des postes de travail pour l’extraction automatisée (en fonction des 

recommandations du fabricant). Vérifiez la date d’expiration et les conditions de stockage des solutions 

fournies. 

• PCR 

Le signal détecté pour le contrôle positif du virus d’Epstein-Barr, la courbe quantitative du virus 

d’Epstein-Barr, le contrôle d'inhibition (ou le contrôle d'extraction d’ ADN & d'inhibition de la PCR) sont 

négatifs ou faibles. 

Les conditions de la PCR ne sont pas conformes au protocole. 

1. Vérifiez la procédure d’extraction. 

Il est important de sélectionner la procédure d’extraction appropriée. La procédure d’extraction 

doit être validée et limiter la présence de facteurs inhibiteurs. 

2. Vérifiez la préparation de la réaction PCR. 

Pour obtenir une haute sensibilité, vous devez respecter les volumes décrits et les Mastermix 

suggérés. 

N.B. 

Vérifiez l’étalonnage des pipettes utilisées (en fonction des recommandations du fabricant). 

Vérifiez la date d’expiration et les conditions de stockage des mastermix suggérés. 

3. Vérifiez le cycle de PCR. 

Pour obtenir une haute sensibilité, suivez le protocole adapté à la machine PCR en 

temps réel utilisée. 

4. Vérifiez les fluorophores sélectionnés. 

Vérifiez et sélectionnez les fluorophores adaptés à chaque plate-forme PCR en temps réel. 

5. Interprétation des résultats. 

Vérifiez le tableau et sélectionnez le canal approprié. 

6. Quantification des résultats. 

Vérifiez la pente/l’efficacité de la courbe quantitative. 

Remarque importante: 

Vérifiez les conditions de stockage (pendant et après l’expérience) et la date d’expiration. 

Ces deux conditions influencent fortement les résultats obtenus. 

• Système de PCR en temps réel 

Référez-vous à la mention du fabricant concernant le produit. 

N.B. 

Réalisez l’entretien de la plateforme PCR en temps réel (en fonction des recommandations du 

fabricant). 

Pour tout problème/question, veuillez nous contacter: 

Tél. : +32 4 364 20 50 / info@diagenodediagnostics .com 


PAGE 30 


Évaluation des performances 

1. Sensibilié analytique 

La détermination de la sensibilité analytique a été réalisée à partir des résultats d’un QCMD pour 

le virus d’Epstein-Barr. 

La concentartion minimale de ce QCMD a été détectée (822,4 copies/ml). 

La PCR a été réalisée comme décrit précédemment (voir point B.3 Préparation de la réaction 

de PCR). 

Les conditions de PCR: 

Méthode d'extraction utilisée: EasyMag ® Biomerieux 

Mastermix: Lc 480 Probe Master 

PCR en temps réel: Biorad CFX96 - V 25 µl 

2. Spécificité analytique 

Les amorces et sondes spécifiques ont été sélectionnées dans la littérature (1) (Niesters et al., 2000). 

Nous les avons également vérifiées par rapport aux homologies possibles avec d’autres séquences 

connues par analyse de comparaison des séquences. Les amorces et les sondes sont utilisées 

quotidiennement dans des laboratoires de diagnostic clinique sur des échantillons de plasma/citraté et 

de sang total/EDTA. 

La séquence de contrôle d'inhibition a également été vérifiée par homologie de séquence. 

3. Investigation clinique 

Sera bientôt disponible. 


PAGE 31 

Restrictions concernant l’utilisation du produit 

• Tous les réactifs doivent servir exclusivement au diagnostic in vitro. 

• Le respect strict du manuel d’utilisation est nécessaire pour obtenir des résultats optimaux. 

• La fiabilité des résultats dépend du prélèvement, du transport, du stockage et des procédures 

de traitement adéquates des échantillons. 

• Le test a été validé sur des échantillons de plasma/citraté et de sang total/EDTA. 

• Le test a été validé avec les systèmes PCR en temps réel ABI 7000-7300-7500-7900HT- 

StepOnePlus/ Roche Lc480-Lc2.0/ Biorad iCycler-IQ5-CFX96/ Agilent Stratagene MX3000P- 

3005P/ Qiagen Rotor-Gene. 

Contrôle qualité 

Diagenode a obtenu les certifications ISO 9001 et ISO 13485 pour la conception, la production et la 

vente des trousses de diagnostic clinique basées sur la technologie PCR en temps réel. 

La PCR quantitative du virus d’Epstein-Barr en temps réel est testée en fonction de spécifications 

prédéterminées pour assurer la qualité du produit. 

Références 

(1)Niesters H. G., van Esser J., Fries E., Wolthers K . C., Cornelissen J. and Osterhaus A. D. (2000). 

Development of a real-time quantitative assay for detection of Epstein-Barr virus. J Clin Microbiol 38, 

712-5 . 


PAGE 32 


Explication des symboles 

Référence 

Numéro de lot 

Nombre d'expériences 

Température de conservation 

yyyy-mm 

Date d'expiration 

Dispositif médical de diagnostic In vitro 

Se référer au manuel d'utilisation Risque 

biologique 

Contrôle 

Contrôle négatif 

Contrôle positif 

A protéger de la lumière 

Fabriquant 


PAGE 33 

Avis à l’acheteur 

Ce produit est optimisé dans le cadre d’un usage pour PCR (Réaction en chaine par polymérase) 

couverte par les licences de Roche Molecular Systems, Inc. et F. Hoffmann-La Roche ltd. (Roche). 

Aucune autorisation relative à ces licences pour l’usage du procédé de PCR ne peut être transférée 

expressément ou par implication de l’acheteur suite à l’achat de ce produit. L’autorisation d’utiliser le 

procédé de PCR dans certaines recherches et activités de développement implique l’achat de certains 

réactifs chez les fournisseurs agréés, lorsqu’ils sont utilisés en combinaison avec un thermocycleur 

agréé et sont disponibles chez Applied Biosystems. Pour plus d’informations concernant l’achat des 

licences autorisant le procédé de PCR, contactez le responsable des licences chez Applied 

Biosystems, 850 Lincoln Center Drive, Foster City, California 94404 ou chez Roche Molecular Systems, 

Inc, 1145 Atlantic Avenue, Alameda, California 94501. 

• ABI (Applied Biosystems) Prism 7000 ou 7300 ou 7500 ou 7900HT-StepOnePlus sont des 

marques commerciales de Applera Corporation. 

• Roche LightCycler 480 et 2.0 sont des marques commerciales de Roche. 

• Biorad iCycler ou IQ5 ou CFX96 sont des marques commerciales de Biorad. 

• Agilent Stratagene MX3000P ou 3005P sont des marques commerciales de Agilent 

Stratagene. 

• Qiagen Rotor-Gene est une marque commerciale de Qiagen. 

• Nuclisens EASYMAG System est une marque commerciale de Biomerieux. 

• Maxwell 16 Blood DNA Purification kit (48) est une marque commercial de Promega. 

• QIAamp DNA Mini Kit (50) est une marque commerciale de Qiagen. 

• Quantifast TM multiplex + R kit est une marque commerciale de Qiagen. 

• Rotor-Gene Multiplex PCR Kit est une marque commerciale de Qiagen. 

• LightCycler ® TaqMan ® Master est une marque commerciale de Roche. 

* Classe Ea1: virus pouvant provoquer des maladies chez les animaux et présentant 

les caractéristiques suivantes (à des degrés divers): importance géographique limitée, 

transmissibilité interespèce faible, vecteur ou porteur inexistant.Il ne nécessite 

généralement aucune mesure de confinement particulière. Il existe habituellement une 

prophylaxie et/ou un traitement efficace. 


PAGE 34 



PAGE 35 

MA-EBVQ-FR-V1_06_02_13 


Diagenode sa 

CHU, Tour GIGA, 3e étage 

Avenue de l’hôpital, 1 

4000 Liège – BELGIQUE 

Tel. +32 4 364 20 50 

info@diagenodediagnostics.com

Virus d'Epstein-Barr - Diagenode Diagnostics

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