Francais - International Union Against Tuberculosis and Lung Disease

la méthode définitive : une solution comportant 1% de fuchsine chauffée
jusqu’au point d’évaporation, décoloration au moyen d’acide sulfurique à
25% et contre-coloration au bleu de méthylène. Toutefois, au fil du temps
de nombreuses variantes de cette technique de base sont apparues et la
pratique actuelle utilise la carbol-fuchsine à 0.3%. On a essayé d’autres colorants
que la fuchsine basique pour la microscopie à fond clair mais ils ne
sont jamais devenus populaires ; par contre, des variantes de la technique
à la fuchsine sont utilisées. Des méthodes de coloration à froid utilisant
comme colorant la fuchsine saturée à 3% sont souvent dénommées coloration
de Kinyoun, bien que la description originale de cet auteur ait inclus
une étape de digestion /flottage à l’hypochlorite de soude. La modification
de Gabett a combiné les solutions de décoloration et de contre-coloration,
réduisant le processus à deux étapes et donc la charge de travail, ce qui a
rendu la méthode populaire particulièrement dans les pays où le coût du
travail est élevé. La technique de coloration de Tan Thiam Hok combine
le colorant primaire saturé à froid avec la modification de Gabett, et a été
elle aussi largement adoptée. Dans une étude comparative très complète
s’intéressant à de nombreuses techniques de coloration avec différentes
concentrations de carbol-fuchsine, les résultats les plus concordants et la
plus haute sensibilité sont obtenus par la coloration à chaud pendant 15 minutes
avec la fuchsine à 1%. La décoloration à l’alcool-acide plutôt qu’à
l’acide sulfurique ou à d’autres acides dilués dans l’eau est actuellement la
règle dans les pays qui peuvent se le procurer car cette technique permet
d’obtenir plus facilement un frottis propre. Au lieu du bleu de méthylène,
on utilise parfois le vert de malachite en routine. Le désavantage de cette
dernière contre-coloration est la fréquence des troubles de discrimination
des couleurs chez le personnel du laboratoire (peut-être jusqu’à 10% des
hommes ont des difficultés à distinguer le rouge et le vert). Des études
comparatives ont trouvé que l’acide picrique était le meilleur contre-colorant,
mais il est trop difficile à employer en routine.
L’examen microscopique sur fond clair a été largement remplacé par
la microscopie à fluorescence dans les pays à faible prévalence, où le coût
d’un technicien de laboratoire est largement plus élevé que celui de l’appareillage
et où la supériorité de la technique pour les échantillons faiblement
positifs est importante. Cette technique exige différentes solutions de coloration.
L’auramine O est pratiquement toujours utilisée comme colorant
primaire, seule ou en combinaison avec la rhodamine pour une meilleure
différenciation. En microscopie à fluorescence, différentes variantes
sont employées pour l’arrière-fond du frottis. On utilise habituellement
le permanganate de potassium pour éteindre la fluorescence non spécifique
mais des méthodes sans aucun contre-colorant ou l’utilisation de
19