Francais - International Union Against Tuberculosis and Lung Disease

Tableau II.1 Fournitures et réactifs utilisés pour
préparer les solutions pour la coloration de Ziehl-Neelsen
et méthode de coloration
Formule pour 1 litre de colorant carbol-fuchsine
Ethanol ou méthanol dénaturé...........................................................................100 ml
Cristaux de phénol.................................................................................................50 g
* Fuchsine basique ................................................................................................ 10 g
Eau, distillée si possible ...................................................................................850 ml
* Dans de nombreuses recommandations, on trouve 3 g de fuchsine basique. Les
auteurs de cette monographie préfèrent une concentration plus forte pour ajouter une
marge de sécurité
Dissoudre le phénol dans l’alcool. Ajouter la fuchsine basique et agiter le mélange
jusqu’à dissolution de tous les cristaux. Ceci peut être difficile pour certaines marques
de fuchsine ; dans ce cas, ajouter une partie de l’eau, puis mélanger en agitant.
Finalement ajouter le reste de l’eau et agiter de nouveau.
Transférer le colorant préparé dans une bouteille (de préférence sombre) et étiqueter
« Colorant carbol-fuchsine, date de préparation = ........................ »
Formule pour 1 litre d’agent décolorant
Eau froide, distillée si possible..........................................................................750 ml
Ajouter lentement l’acide sulfurique (concentré................................................250 ml
ou
Ethanol 96% .....................................................................................................970 ml
Ajouter l’acide chlorhydrique............................................................................. 30 ml
Formule pour 1 litre de solution de contre-colorant
Bleu de méthylène ...................................................................................................3 g
Eau, distillée si possible ............................................................................... 1.000 ml
Pour la coloration, les lames doivent être placées sur un porte-lame pour coloration
disposé sur l’évier, face du frottis au dessus, bords séparés de la largeur d’un doigt
1. Couvrir entièrement la surface des lames avec la carbol-fuchsine de Ziehl, en
laissant couler le colorant au travers d’un entonnoir garni d’un papier filtre (par
exemple Whatman n° 1). Chauffer doucement jusqu’à formation de vapeur. Ne pas
amener le colorant à ébullition ni le laisser sécher sur la lame. Laisser le colorant
chaud pendant au moins 5 minutes.
2. Rincer doucement chaque lame avec de l’eau courante jusqu’à disparition de toutes
les traces macroscopiques visibles de colorant. Couvrir chaque lame avec la solution
décolorante pendant 3-5 minutes et rincer à l’eau courante. Incliner les lames
au moyen de la pince pour laisser s’écouler l’eau de rinçage. Répéter cette étape
pour les frottis qui paraissent encore rouges. Incliner les lames avec la pince pour
évacuer l’eau de rinçage.
3. Couvrir les frottis avec la solution de bleu de méthylène et laisser le colorant agir
au maximum pendant 1 minute. Rincer doucement chaque lame à l’eau courante
jusqu’à disparition de l’excès de colorant. Laisser s’écouler l’eau en inclinant la
lame avec une pince et laisser sécher les lames à l’air ambiant en évitant qu’elles
soient au soleil.
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