OCDE 476 - Institut Pasteur de Lille

476 OCDE/OECDConcentrations d’exposition14. La cytotoxicité, la solubilité dans le mélange d'essai final et les modifications de pH etd’osmolalité sont des critères à prendre en considération pour déterminer la dose la plus élevée àmettre en oeuvre.15. La cytotoxicité doit être mesurée, avec et sans système d’activation métabolique, dansl'expérience principale par un indicateur pertinent de l’intégrité et de la croissance cellulaire, tel quel’efficacité de clonage relative (survie) ou la croissance totale relative. Il peut être utile de déterminerla cytotoxicité et la solubilité dans un essai préliminaire.16. Il convient d'utiliser au moins quatre concentrations susceptibles d’être analysées. Dans lecas d’une substance cytotoxique, ces concentrations doivent recouvrir un domaine allant de pas oupeu de toxicité à une toxicité maximale. Ceci mènera généralement à utiliser des concentrationsséparées par un facteur compris entre 2 et √10. Si la concentration la plus forte est basée sur lacytotoxicité, elle devrait donner une survie relative (efficacité de clonage relative) ou une croissancetotale relative entre 10 et 20% et pas inférieure à 10%. En ce qui concerne les composés relativementnon cytotoxiques, la concentration maximale doit être choisie comme la plus basse parmi 5 mg/ml, 5µl/ml ou 0.01M.17. Les substances relativement insolubles doivent être testées jusqu’à des concentrationségales ou supérieures à la limite de solubilité aux conditions de culture. L’insolubilité doit être miseen évidence dans le milieu auquel les cellules sont exposées pendant le traitement. Il peut être utiled'évaluer la solubilité au début et à la fin du traitement, celle-ci pouvant varier au cours del'exposition dans le système d'essai en raison de la présence de cellules, mélange S9, sérum, etc. Onconclut à l’insolubilité lorsqu’une précipitation est observée à l’oeil nu. Le précipité ne doit pasinterférer avec le comptage.Témoins18. Des témoins positifs et négatifs (solvant ou véhicule), avec et sans activation métabolique,doivent être inclus dans chaque expérience. Quand l’essai est fait avec activation métabolique, lasubstance utilisée comme témoin doit avoir besoin d’activation pour donner une réponse positive demutagénicité.19. Ci-après, quelques exemples de témoins positifs :4/12