recomBlot BorreliaNB IgG e IgM - Mikrogen

GIRBBB015IT.DOC - 1 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
recomBlot BorreliaNB IgG e IgM
Test in immunoblot con antigeni ricombinanti separati mediante elettroforesi su gel, per il riscontro di
anticorpi IgG e IgM diretti contro Borrelia burgdorferi sensu stricto, B. garinii e B. afzelii in siero, plasma
o liquor (liquido cerebrospinale) umani.
1. Aspetti generali
recomBlot BorreliaNB è un test qualitativo in vitro per il riscontro e l’identificazione accurata di anticorpi
IgG o IgM diretti contro Borrelia burgdorferi in siero o plasma umani. recomBlot BorreliaNB è utilizzato
per confermare i risultati ottenuti da campioni che sono risultati positivi o dubbi nel test di screening.
Inoltre, recomBlot BorreliaNB può essere impiegato per il riscontro di anticorpi IgG e IgM umani
sintetizzati in sede intratecale contro Borrelia burgdorferi sensu lato (analisi di coppie di campioni di
siero/liquor). A differenza dei test immunoenzimatici o dei test a spot, questo test consente
l’identificazione accurata e la localizzazione di anticorpi specifici, in quanto gli antigeni vengono separati
mediante elettroforesi. Gli anticorpi diretti contro i singoli antigeni possono fornire ulteriori informazioni
sullo stadio dell’infezione.
2. Borrelia burgdorferi e borreliosi di Lyme
Il batterio Borrelia burgdorferi appartiene alla famiglia Spirochaetaceae ed è l’agente eziologico della
borreliosi di Lyme (1-4). Tale patogeno è stato descritto e caratterizzato per la prima volta da W.
Burgdorfer e A. Barbour nel 1982 (5). Viene trasmesso da diverse specie di zecche del genere Ixodes.
In Europa, il vettore è la zecca Ixodes ricinus (6). La borreliosi di Lyme è la più comune malattia infettiva
da puntura di zecca che colpisce gli esseri umani nel mondo. Si riscontra in tutte le aree della Germania
e, a differenza della meningoencefalomielite che compare all’inizio dell’estate, non è confinata a poche
regioni endemiche. Nella Germania meridionale, il tasso di infezione di Ixodes ricinus con Borrelia
burgdorferi è del 10-15% (7).
La borreliosi di Lyme è stata descritta da A. Steere negli Stati Uniti nel 1977 (8). In Europa, anche in
rapporti precedenti sono state segnalate diverse manifestazioni di borreliosi di Lyme. Afzelius in Svezia
(9) e Lipschütz in Austria (10) hanno descritto una lesione cutanea - eritema migrans (EM) - che
potrebbe essere associata a puntura di zecca. Un’altra malattia cutanea - acrodermatite cronica
atrofizzante (ACA) - è stata caratterizzata da Herxheimer e Hartmann (11). Infine, Garin e Bujadoux (12)
in Francia e Bannwarth (13) hanno fornito indicazioni delle manifestazioni neurologiche della borreliosi di
Lyme.
La borreliosi di Lyme presenta un vasto numero di manifestazioni cliniche che includono lesioni cutanee,
patologie della muscolatura scheletrica, sintomi neurologici, deficit del sistema linfatico, disordini
cardiaci, infiammazione oculare, lesioni a fegato, polmoni e reni e sintomi generali dell’organismo (14).
La borreliosi di Lyme, in modo simile alla sifilide, progredisce attraverso differenti stadi clinici. Steere ha
proposto tre stadi (15). La lesione cutanea Erythema migrans (EM), che compare come un esantema
circolare sul sito della puntura di zecca, è caratteristica dello stadio 1. Questo può essere seguito da
disordini del sistema nervoso (sindrome di Garin-Bujadoux-Bannwarth) e sintomi di paralisi (paresi
facciale) (stadio 2). L’artrite di Lyme è tipica dello stadio 3. Asbrink ha modificato tale divisione in
infezione precoce e infezione tardiva (16). L’infezione precoce è caratterizzata da EM localizzato, che
viene seguito dall’infezione disseminata nell’arco di pochi giorni o settimane, se non viene trattato.
Sintomi di varia natura possono presentarsi periodicamente nell’arco di settimane o mesi. L’infezione
tardiva, che può essere caratterizzata dall’artrite di Lyme o anche da acrodermatite cronica atrofizzante
(ACA), viene infine osservata uno o più anni dopo la prima comparsa della malattia. Un paziente può
attraversare uno solo o tutti e tre gli stadi della malattia; quest’ultima può rimanere asintomatica fino agli
stadi 2 e 3.
La somiglianza tra le manifestazioni della borreliosi di Lyme e altre malattie propone una grande sfida
diagnostica.
Mentre negli USA il microrganismo associato alla malattia di Lyme è quasi esclusivamente la
genospecie B. burgdorferi sensu stricto, in Europa fino ad ora sono state descritte tre specie patologiche
per l’uomo, in quanto organismi responsabili della malattia di Lyme: B. burgdorferi sensu stricto, B.
garinii e B. afzelii (35).

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
Una ulteriore classificazione in sierotipi è stata intrapresa sulla base delle analisi con anticorpi
monoclonali da parte del Prof. Dr. B. Wilske (36).
Pertanto, la diagnosi microbiologica dei pazienti europei deve prendere in considerazione l’eterogeneità
delle specie di borrelia responsabili della malattia di Lyme per lo sviluppo di test diagnostici (37).
3. Diagnosi
Escludendo la diagnosi clinica, la coltivazione diretta di Borrelia burgdorferi (riscontro del patogeno) è la
prova più accurata dell’infezione. Si raccomanda il riscontro del patogeno in campioni prelevati dal
paziente, quali biopsie cutanee, liquor o liquido sinoviale, specialmente negli stadi precoci. La coltura a
partire da biopsie cutanee ha successo nel 50-70% dei casi che presentano manifestazioni cutanee, ma
solo nel 3-5% dei casi di neuroborreliosi. Tuttavia, la coltura è difficoltosa e richiede molto tempo,
pertanto può essere eseguita esclusivamente in laboratori specializzati (17-19).
Per tale motivo, l’esame sierologico è la soluzione più conveniente per le pratiche di laboratorio
routinarie. Vengono utilizzati test in immunofluorescenza indiretta (IFT) con sieri preassorbiti con
Treponema phagedenis, test di emoagglutinazione indiretta (IHA) e saggi immuoenzimatici (EIA) (20-23,
25). Qualora si sospetti una manifestazione neurologica, il riscontro di anticorpi sintetizzati a livello
intratecale rimane un importante criterio diagnostico (24). Il risultato sierologico dipende dallo stadio
della malattia, dalla durata dei sintomi e da una possibile terapia antibiotica antecedente.
In confronto alle tecniche immunologiche sopra menzionate, l’immunoblot presenta ulteriori
caratteristiche per quanto riguarda sensibilità e specificità. Consente il riscontro e l’identificazione di
anticorpi IgM e IgG e viene utilizzato per confermare i risultati dei test di immunofluorescenza indiretta e
dei saggi immunoenzimatici (26, 27).
L’utilizzo di ceppi differenti di Borrelia burgdorferi come antigene può provocare una variazione dei
risultati in EIA. I test sopra menzionati di frequente falliscono nella fase iniziale. Un altro problema è la
reattività crociata con diversi altri batteri patogeni, specialmente con Treponema pallidum, che provoca
la sifilide (27a). Dal momento che gli antigeni utilizzati nei test generalmente sono rappresentati da lisati
totali del patogeno, vengono anche rilevati anticorpi diretti contro antigeni comuni. Questi ultimi sono
proteine largamente distribuite caratterizzate da una sequenza altamente conservata, p.es. le proteine
da shock termico (heat shock proteins).
Tutti questi limiti possono essere evitati utilizzando antigeni ottenuti mediante metodiche di ingegneria
genetica, quali quelle messe a punto da MIKROGEN (28-32).
4. Principio del test
Per recomBlot BorreliaNB, gli antigeni specifici di Borrelia burgdorferi sono prodotti mediante l’utilizzo di
cellule di E. coli ricombinanti.
Rispetto ai blot con lisati convenzionali, l’utilizzo di proteine ricombinanti offre il vantaggio di poter
presentare proteine espresse principalmente in vivo (p.es. VIsE) e di mettere a disposizione in un solo
test combinazioni di proteine da diverse genospecie di Borrelia. Inoltre, la scelta di antigeni specifici
importanti per una diagnosi sierologica di precisione minimizza l’interferenza di antigeni di disturbo o
cross-reattivi (37).
Al contrario dei blot con proteine ricombinanti, nell’immunoblot con antigene lisato da cellule di Borrelia
burgdorferi, gli antigeni p100, p39, p18 e VIsE sono sottorappresentati. Ciò vale soprattutto per
l’antigene OspC. Esso non viene prodotto o viene espresso solo in minime quantità dal ceppo B31 di
Borrelia burgdorferi. Inoltre le numerose differenti bande potenziali presenti nel blot con antigene lisato
possono rendere assai difficile la differenziazione di bande rilevanti dal punto di vista immunologico dai
cosiddetti antigeni comuni, p.es. le proteine da shock termico (heat shock proteins).
Gli antigeni utilizzati in recomBlot BorreliaNB, oltre alle proteine della superficie esterna OspA (31 kD) e
OspC (22 kD), comprendono gli antigeni altamente specifici di Borrelia burgdorferi p100, VIsE, p39 e
p18 (= decorin binding protein A, DbpA = Osp17) (38), così come p41 (flagellina) e una porzione interna
specifica dell’antigene p41-p41/i.
OspC, p18 e VIsE sono proteine in vivo che non vengono espresse in coltura, o lo sono soltanto in
minime quantità. La tecnica ricombinante pertanto consente di ottenere questi antigeni in quantità
sufficienti. Nello stesso tempo, sono presenti in uno stesso test le proteine omologhe di diverse
genospecie. Ciò vale soprattutto nei casi di proteine altamente eterogenee quali OspC e VIsE. In
- 2 - GIRBBB015IT.DOC

GIRBBB015IT.DOC - 3 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
recomBlot BorreliaNB sono presenti le proteine OspC di tutte e tre le genospecie, oltre a quelle di due
diversi ceppi della genospecie B. garinii, ceppo 20047 (OspA sierotipo 0) (36) e ceppo T25 (OspA
sierotipo 7), indicate di seguito come OspC da B. garinii 1 e B. garinii 2.
Analizzando i sieri di pazienti a diversi stadi della borreliosi di Lyme, si è rilevato che OspC (22 kD)
presenta una reattività particolarmente buona con i sieri ottenuti da pazienti in fase precoce di infezione
(EM) (33). Insieme alla p41, questa proteina è immunodominante per la risposta di tipo IgM. In
paragone con p41, OspC presenta una specificità considerevolmente superiore. Mentre l’antigene OspC
è un indicatore immunodominante per la risposta immunitaria precoce, gli antigeni p100, p39 e p18 sono
indicatori particolarmente affidabili per la risposta immunitaria tardiva (28). La produzione di anticorpi per
VIsE è rilevabile soprattutto come risposta IgG, sostituendo spesso i tipici indicatori IgG sopra
menzionati (39-42).
Per il rilievo di anticorpi specifici contro Borrelia, le strisce sono incubate con il campione di siero o di
plasma diluiti, in modo tale che gli anticorpi si leghino agli antigeni presenti sulle strisce. Gli anticorpi
non legati vengono quindi eliminati mediante lavaggio e le strisce vengono incubate in un secondo
passaggio con anticorpi anti-IgG o IgM umane coniugati con perossidasi di rafano. Gli anticorpi legati in
modo specifico vengono rilevati mediante una reazione colorimetrica catalizzata dalla perossidasi. Se si
è verificata una reazione antigene-anticorpo, compare una banda scura al corrispondente punto della
striscia.
Come controllo di una adeguata incubazione con il siero, delle immunoglobuline anti-anticorpi umani
vengono applicate circa 2-6 mm al di sotto del numero di identificazione di ogni striscia.
5. Contenuto del kit
I reagenti contenuti in una confezione sono sufficienti per 20 determinazioni.
Ogni set di reagenti contiene:
100 ml Tampone di lavaggio B (cinque volte concentrato)
Contiene tampone Tris, NaCl, un detergente, i conservanti MIT (0,01%),
ossipirione (0,1%) e una proteina
40 ml Soluzione di substrato Tetrametilbenzidina (TMB, pronta all’uso)
2 pezzi Vassoi di incubazione con 10 pozzetti ciascuno
1 Striscia di controllo pre-sviluppata (specifica per il kit)
1 Istruzioni per l’uso
1 Modulo di valutazione
Informazioni aggiuntive per la diagnosi da liquor
Le istruzioni per l’uso per la diagnosi di Borrelia burgdorferi da liquor possono essere fornite, a richiesta,
da MIKROGEN.
5.1. recomBlot BorreliaNB IgG
In aggiunta ai componenti elencati al punto 5 ogni set di reagenti contiene:
Disponibile su richiesta:
Codice: 24217
2 pezzi Provette di test con 10 strisce in Western blot numerate progressivamente,
sensibilizzate con antigeni di Borrelia burgdorferi
95 µl Siero di controllo IgG debole positivo (tappo a vite bianco)
Di origine umana, negativo per anticorpi anti-HIV-1/2, anti-HCV e HBsAg,
contiene MIT (0,1%) e ossipirione (0,1%)
500 µl Coniugato anti-IgG umane (tappo a vite verde, cento volte
concentrato)
Da coniglio, contiene NaN3 (

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
Codice: 24213
5.2. recomBlot BorreliaNB IgM
130 µl Siero di controllo negativo (tappo a vite blu)
Di origine umana, negativo per anticorpi anti-HIV-1/2, anti-HCV e HBsAg,
contiene MIT (0,1%) e ossipirione (0,1%)
In aggiunta ai componenti elencati al punto 5 ogni set di reagenti contiene:
Disponibile su richiesta:
Codice: 24218
Codice: 24213
2 pezzi Provette di test con 10 strisce in Western blot numerate progressivamente,
sensibilizzate con antigeni di Borrelia burgdorferi
170 µl Siero di controllo IgM debole positivo (tappo a vite giallo)
Di origine umana, negativo per anticorpi anti-HIV-1/2, anti-HCV e HBsAg,
contiene MIT (0,1%) e ossipirione (0,1%)
500 µl Coniugato anti-IgM umane (tappo a vite lilla, cento volte
concentrato)
Da coniglio, contiene NaN3 (

GIRBBB015IT.DOC - 5 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
Mescolare accuratamente i sieri di controllo e i coniugati concentrati prima dell’uso. Inoltre, mescolare
accuratamente i sieri dei pazienti prima dell’uso.
Non aprire la provetta contenente le strisce di test fino al momento di iniziare il test, in modo da evitare
la formazione di acqua di condensa. Le strisce non utilizzate devono essere lasciate nella provetta e
conservate a 2°-8°C (richiudere accuratamente la provetta; le strisce non devono inumidirsi prima del
test!).
Le strisce sono numerate consecutivamente e segnalate con l’abbreviazione del test corrispondente.
Indipendentemente dal numero di sieri sottoposti a test, devono sempre essere analizzati dei sieri di
controllo deboli positivi in parallelo ai sieri da sottoporre a test. Questo è l’unico modo di garantire una
corretta interpretazione del test. Il controllo positivo ed il controllo negativo possono essere forniti da
MIKROGEN.
La qualità del test viene garantita solo fino alla data di scadenza riportata sulla confezione.
Proteggere tutti i componenti del kit dalla luce solare diretta.
Il test deve essere eseguito da personale qualificato ben addestrato e autorizzato.
In caso di modifiche sostanziali del prodotto o delle istruzioni per l’uso, l’applicazione del test potrebbe
differire dallo scopo inteso da MIKROGEN.
È possibile automatizzare il test; per dettagli rivolgersi a MIKROGEN.
7.3. Preparazione delle soluzioni
7.3.1. Preparazione del tampone di lavaggio B pronto all’uso
Questo tampone viene utilizzato sia per l’incubazione di siero e coniugato, sia per le fasi di lavaggio.
Prima della diluizione, determinare il volume richiesto di tampone di lavaggio B per il numero di test da
eseguire. Preparare il tampone di lavaggio pronto all’uso immediatamente prima del suo utilizzo.
La soluzione concentrata di tampone di lavaggio B contiene una proteina solubile. Non è necessario
agitare il tampone.
Viene diluita una parte di tampone di lavaggio B concentrato con quattro parti di acqua deionizzata
(diluizione 1 + 4). Vedere la Tabella 1 per le quantità richieste. I volumi per quantità di strisce non
elencate in tabella devono essere calcolati.
Il tampone di lavaggio B pronto all’uso in eccedenza deve essere eliminato.
Tabella 1: Tampone di lavaggio B utilizzato per ogni striscia di test
Strisce di test
utilizzate
Tampone di lavaggio B
concentrato
Acqua
deionizzata
Tampone di lavaggio B
pronto all’uso
1 5 ml 20 ml 25 ml
2 10 ml 40 ml 50 ml
3 15 ml 60 ml 75 ml
5 25 ml 100 ml 125 ml
10 50 ml 200 ml 250 ml
15 75 ml 300 ml 375 ml
20 100 ml 400 ml 500 ml
7.3.2. Preparazione delle soluzioni di coniugato
La soluzione di coniugato deve essere preparata immediatamente prima dell’uso. Non è possibile
conservare la soluzione di coniugato pronta all’uso.
Viene diluita una parte di IgG o IgM coniugate concentrate con 100 parti di tampone di lavaggio B
pronto all’uso (1 + 100).
Le quantità utilizzate sono riportate in Tabella 2. I volumi per quantità di strisce non elencate in tabella
devono essere calcolati.

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
Tabella 2: Volumi per la diluizione di anticorpi coniugati anti-IgG/anti-IgM umane
Strisce di test
utilizzate*
Coniugato IgG o IgM
concentrato
Tampone di lavaggio B
pronto all’uso
1 20 µl 2 ml
2 40 µl 4 ml
3 60 µl 6 ml
5 100 µl 10 ml
10 200 µl 20 ml
15 300 µl 30 ml
20 400 µl 40 ml
25 500 µl 50 ml
* I volumi sono stati calcolati senza considerare il volume morto. A seconda del tipo di manipolazione (manuale o procedura
automatica) preparare una quantità di soluzione di coniugato addizionale, sufficiente per 1-3 strisce.
7.3.3. Soluzione del substrato
Il substrato è pronto all’uso! Prima di dare inizio alla reazione colorimetrica portare a temperatura
ambiente (18°-25°C).
Evitare assolutamente la contaminazione della soluzione di substrato non utilizzato da parte di puntali di
pipette non sterili, ecc., in quanto può interferire con la sensibilità del test.
7.4. Conservazione e stabilità
Conservare i reagenti a 2°-8°C prima e dopo l’uso.
Il tampone di lavaggio B pronto all’uso non può essere conservato.
La soluzione di coniugato deve essere sempre preparata fresca.
8. Campioni
I campioni possono essere rappresentati da siero o plasma separati dal coagulo prima possibile dopo il
prelievo. Deve essere assolutamente evitata una contaminazione microbica del campione. Le sostanze
insolubili devono essere rimosse dal campione prima dell’incubazione mediante centrifugazione.
L’utilizzo di campioni lipemici, emolizzati o torbidi può determinare una colorazione di fondo scura nel
recomBlot BorreliaNB. Questi campioni possono anche determinare risultati errati e pertanto non
devono essere utilizzati.
Importante!
Se i test non vengono eseguiti immediatamente, i campioni possono essere conservati per un
massimo di 2 settimane a 2°-8°C. Una conservazione prolungata dei campioni è possibile a
temperatura di -20°C o inferiore. Non è consigliabile un congelamento/scongelamento ripetuto
dei campioni in quanto può interferire con la qualità dei risultati.
9. Procedura del test
9.1. Generalità
La riproducibilità dei risultati dipende in massima parte dal lavaggio accurato delle strisce. Devono
pertanto essere sempre osservate le frequenze di lavaggio descritte nei paragrafi 9.3 e 9.5.
Importante! Differenze tra test IgG e IgM
9.2. Incubazione dei campioni
1. Per ogni campione da sottoporre a test è richiesto un pozzetto nel vassoio di incubazione. In ogni
pozzetto vengono pipettati 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso. Quindi una striscia di test
viene immersa con attenzione mediante pinzette di plastica in uno dei pozzetti contenenti il tampone
di lavaggio B. Il numero della striscia deve essere rivolto in alto.
Importante!
- 6 - GIRBBB015IT.DOC

GIRBBB015IT.DOC - 7 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
La striscia deve essere completamente inumidita e immersa nel tampone di lavaggio B
pronto all’uso.
Registrare i numeri della provetta e della striscia sul modulo di valutazione.
2. Aggiunta dei campioni
Procedura per il test IgG: 10 µl di un campione non diluito (siero o plasma umano), del
corrispondente controllo debole positivo o eventualmente del controllo negativo e/o del controllo
positivo vengono pipettati nei rispettivi pozzetti (diluizione 1 + 200).
Procedura per il test IgM: 20 µl di un campione non diluito (siero o plasma umano), del
corrispondente controllo debole positivo o eventualmente del controllo negativo e/o del controllo
positivo vengono pipettati nei rispettivi pozzetti (diluizione 1 + 100).
Assicurarsi di aggiungere il campione a un’estremità della striscia immersa nel tampone di lavaggio
B e mescolare non appena possibile mediante agitazione accurata del vassoio.
Registrare i numeri dei campioni e la classe di immunoglobuline (IgG o IgM) sul modulo di
valutazione.
Coprire il vassoio di incubazione con il coperchio di plastica e incubare overnight (10-16 ore) a
temperatura ambiente sotto lieve agitazione.
Importante!
Assicurarsi che le soluzioni di incubazione non vengano veicolate in altri pozzetti; porre
particolare attenzione per evitare spruzzi al momento dell’apertura e della chiusura del
coperchio.
Nel caso in cui si sia formata acqua di condensa all’interno del coperchio, questa va asciugata.
Dopo lunghi periodi di funzionamento gli agitatori possono emettere calore. Per evitare la
condensazione del liquido di incubazione sul coperchio, si dovrebbe collocare materiale idoneo
all’isolamento tra la superficie dell’agitatore e il vassoio di incubazione (p.es. una lastra di
polistirolo).
9.3. Lavaggio
1. Dopo l’incubazione, i coperchi di plastica vengono rimossi con cautela dai vassoi di incubazione.
2. Il siero diluito viene attentamente aspirato dai singoli pozzetti.
Importante!
Quando le soluzioni sono state aspirate da un pozzetto, il puntale della pipetta deve essere
cambiato o risciacquato accuratamente con acqua deionizzata dopo ogni procedura di
aspirazione, al fine di evitare la contaminazione dei successivi pozzetti.
In caso di procedura automatica, devono essere tenute in considerazione le indicazioni del
produttore della strumentazione.
3. Aggiungere quindi 2 ml del tampone di lavaggio B pronto all’uso in ogni pozzetto e lavare
sull’agitatore sotto lieve agitazione per 5 minuti. Il tampone di lavaggio B viene aspirato dopo la
procedura di lavaggio.
4. Eseguire la fase di lavaggio descritta al punto 3 per un totale di quattro volte.
9.4. Incubazione con il coniugato perossidato
Dopo aver lavato le strisce, pipettare 2 ml della soluzione di coniugato adeguatamente diluita (vedere
Tabella 2) in ogni pozzetto e incubare per 1 ora sotto lieve agitazione a temperatura ambiente, con il
vassoio di incubazione coperto con il coperchio di plastica.
9.5. Lavaggio
Le soluzioni di coniugato vengono aspirate dai pozzetti e le strisce vengono nuovamente lavate (vedere
9.3).

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
9.6. Reazione con il substrato
Aggiungere 1,5 ml di soluzione di substrato in ogni pozzetto e incubare per 3-5 minuti, sotto lieve
agitazione e sotto osservazione, a temperatura ambiente.
Importante!
Osservare il processo di reazione cromatica e lasciare tutte le strisce nella soluzione di
substrato finché le strisce incubate con il siero di controllo debole positivo mostrano le seguenti
bande:
test IgG: p100, VIsE, p41, p18, p41/i da B. garinii e B. afzelii
test IgM: p41, OspC e p41/i da B. garinii e B. afzelii
La reazione cromatica può essere eccessiva con sieri altamente positivi. Raccomandazione:
Interrompere prima la reazione cromatica in queste strisce.
9.7. Arresto della reazione
1. Dopo che la soluzione è stata aspirata, lavare brevemente le strisce per tre volte con acqua
deionizzata.
2. Utilizzare pinzette di plastica per rimuovere attentamente le strisce dall’acqua e porle tra 2 strati di
carta assorbente e lasciarle asciugare per circa 2 ore. Le strisce possono essere attaccate con
adesivo al modulo di valutazione allegato ed i risultati possono essere riportati nel protocollo.
3. Le strisce devono essere conservate al riparo dalla luce.
Incubazione rapida (2 ore)
Il test recomBlot BorreliaNB può essere eseguito in alternativa con un tempo di incubazione del
campione di sole 2 ore.
A tale scopo, i campioni da sottoporre a test ed i sieri di controllo devono essere utilizzati a
concentrazioni superiori.
I seguenti passaggi sono diversi in confronto alla procedura del test descritta al punto 9:
9.2. Incubazione dei campioni, punto 2: Aggiunta dei campioni
Procedura per il test IgG: 25 µl di un campione non diluito (siero o plasma umano) e del
corrispondente controllo debole positivo (eventualmente del controllo negativo e/o del controllo positivo)
vengono pipettati nel pozzetto assegnato (diluizione 1 + 80).
Procedura per il test IgM: 50 µl di un campione non diluito (siero o plasma umano) e del
corrispondente controllo debole positivo (eventualmente del controllo negativo e/o del controllo positivo)
vengono pipettati nel pozzetto assegnato (diluizione 1 + 40).
Il vassoio viene incubato per 2 ore a temperatura ambiente.
9.3. Lavaggio
La fase di lavaggio viene eseguita per un totale di tre volte.
9.4. Incubazione con coniugato
Le strisce devono essere incubate per 45 minuti con la soluzione di coniugato opportunamente
preparata.
9.5. Lavaggio
La fase di lavaggio viene eseguita per un totale di 3 volte.
9.6. Reazione con il substrato
Incubare per 5-15 minuti, sotto lieve agitazione e sotto osservazione, a temperatura ambiente.
- 8 - GIRBBB015IT.DOC

10. Riassunto della procedura del test
GIRBBB015IT.DOC - 9 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
Incubazione over night Incubazione per 2 ore
1. portare tutti i reagenti a temperatura ambiente
2. depositare le strisce in 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso e verificare che siano
completamente immerse nello stesso
3.
aggiungere il campione del paziente / siero di controllo
IgG: 10 µl IgM: 20 µl IgG: 25 µl IgM: 50 µl
4. incubare a temperatura ambiente sotto lieve agitazione
Overnight 2 ore
5. lavaggio in agitazione con 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso (5 minuti ogni lavaggio)
quattro volte tre volte
6. aggiungere 2 ml di soluzione di coniugato opportunamente preparata
7. incubare a temperatura ambiente sotto lieve agitazione
1 ora 45 minuti
8. lavaggio in agitazione con 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso (5 minuti ogni lavaggio)
quattro volte tre volte
9. aggiungere 1,5 ml di soluzione di substrato, incubare sotto lieve agitazione a temperatura
ambiente (per le bande si veda 9.6)
3-5 minuti 5-15 minuti
10. lavare le strisce almeno tre volte con acqua deionizzata
11. asciugare le strisce tra 2 fogli di carta assorbente per 2 ore e leggere il risultato
11. Valutazione
11.1. Valutazione dell’intensità delle bande
1. In ogni test deve essere incluso un controllo debole positivo, indipendentemente dal numero di
campioni. La reattività del controllo debole positivo serve come valore soglia e come discriminante
rispetto alla reattività del fondo.
2. Riportare la data, il lotto, il numero di provetta e la classe anticorpale rilevata sul modulo di
valutazione allegato.
3. Riportare il numero di identificazione del campione sul modulo di valutazione.
4. Incollare le strisce di test mediante colla a stick sui campi corrispondenti del modulo di valutazione.
A tale scopo, posizionare le strisce di test con la banda di controllo della reazione all’altezza delle
linee segnate. Utilizzare quindi un nastro adesivo trasparente per fissare le strisce a sinistra rispetto
alla linea segnata. L’adesione completa della striscia di test con colla o con nastro adesivo può
comportare aberrazioni della colorazione.
5. Posizionare la striscia di test di controllo pre-sviluppata con le bande di antigene segnate sulle
strisce di test fissate, in modo che le bande di controllo della reazione siano allineate. La striscia di
test pre-sviluppata è specifica per il kit e ha origine dallo stesso foglio di nitrocellulosa delle strisce di
test presenti nel kit. Sono riportati i pesi molecolari e le indicazioni delle bande degli antigeni.
6. Le intensità delle bande vengono valutate per confronto con la reattività del controllo debole positivo
in modo indipendente per ciascuna classe di immunoglobuline (si confrontino il paragrafo 11.2 e la
tabella 3). Riportare sul modulo di valutazione i valori ottenuti.

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
11.2. Risultati dei controlli
I controlli deboli positivi devono essere sempre utilizzati in parallelo ai sieri che vengono testati. Si
devono esaminare le condizioni di test (sensibilità) e la reattività con le bande di ogni antigene deve
essere confermata. La localizzazione delle bande di antigene deve essere in accordo con la striscia di
controllo (specifica del kit).
La banda di controllo (controllo di reazione) al di sotto del numero della striscia viene utilizzata per
verificare il corretto funzionamento del test. Tale banda deve presentare una colorazione evidente.
Le strisce di test incubate con il siero di controllo debole positivo devono presentare i seguenti modelli di bande.
Controllo IgG debole positivo:
Controllo di
reazione
Devono essere visibili le seguenti bande: controllo di reazione, p100, VIsE, p41, p18, p41/i di B. garinii e
di B. afzelii (bande di cutoff – valore soglia).
Al fine di valutare l’intensità della banda nel siero del paziente, vengono utilizzate come riferimento le
bande di cutoff sopra riportate per il controllo IgG debole positivo. Tutte le altre bande vengono
valutate in riferimento alla banda p100 del controllo IgG debole positivo.
Controllo IgM debole positivo:
Controllo di
reazione
reazione
Devono essere visibili le seguenti bande: controllo di reazione, p41, OspC e p41/i di B. garinii e di B.
afzelii (bande di cutoff).
Al fine di valutare l’intensità della banda nel siero del paziente, vengono utilizzate come riferimento le
bande di cutoff sopra riportate per il controllo IgM debole positivo. Tutte le altre bande vengono
valutate in riferimento alla banda OspC intermedia del controllo IgM debole positivo.
Controllo negativo IgG/IgM:
Controllo di reazione.
Controllo positivo IgG:
Controllo di reazione, p100, VIsE, p41, p18.
Controllo positivo IgM:
Controllo di reazione, p41, OspC, p41/i (B. garinii).
Tabella 3: Intensità delle bande
Bande Intensità
Assenza di reattività
p100 VlsE p41 p39 OspA OspC p41/i p41/i p18
p100 VlsE p41 p39 OspA OspC p41/i p41/i p18
Intensità più debole rispetto al controllo debole positivo
Stessa intensità del controllo debole positivo (cutoff)
Intensità maggiore rispetto al controllo debole positivo
B. garinii 1
B. garinii 1
B. sensu stricto
+ B. afzelii
B. sensu strico
+ B. afzelii
B. garinii 2
B. garinii 2
B.garinii
B.garinii
+/
+
++
B.afzelii
B.afzelii
- 10 - GIRBBB015IT.DOC

11.3. Risultati e interpretazione del test
GIRBBB015IT.DOC - 11 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
Sulla base dei test clinici e dell’analisi matematica, è stata eseguita una valutazione dei punteggi degli
antigeni di B. burgdorferi nel kit recomBlot Borrelia, per una sicura e facile valutazione del test. In base
a ciò, il risultato del test può essere ottenuto mediante somma dei punteggi e successiva valutazione.
Il risultato del test viene ottenuto mediante addizione dei valori dei punteggi delle singole bande, che
vengono valutate come + o ++ (Tabella 4 e Tabella 5). Il totale dei punteggi risultanti viene riportato
nella colonna e contrassegnato con il simbolo della somma. Indipendentemente dall’intensità della
reazione, sia che siano stati assegnati i punteggi + o ++, i valori dei punti rimangono gli stessi. Si deve
rilevare che il valore del punteggio per le OspC deve essere calcolato una sola volta, anche se
tutte e tre le bande OspC presenteranno una reazione.
Infine, il risultato positivo, dubbio o negativo viene determinato in rapporto al valore del punteggio e
riportato nella colonna “interpretazione”.
Tabella 4: Valutazione del punteggio degli antigeni di B. burgdorferi nel test recomBlot BorreliaNB
Proteina/ Antigene
Peso molecolare [kDa]
Nome Funzione/Origine Punteggio
IgG
Punteggio
IgM
100 p100 B. afzelii 8 4
66* VIsE Proteina di fusione, rappresenta gli
epitopi immunodominanti VIsE di
differenti genospecie
41 p41 Flagellina
B. burgdorferi sensu stricto
4 3
1 1
39 BmpA B. afzelii 8 3
31 OspA Proteina di superficie
B. afzelii
22 OspC Proteina di superficie
B. garinii 1
B. burgdorferi sensu stricto, B. afzelii
B. garinii 2
20 p41/i Parte specifica della Flagellina
B. garinii
18,5 p41/i Parte specifica della Flagellina
B. afzelii
18 p18 Antigene di superficie
B. afzelii
4 4
6 8
1 3
1 1
8 4
* VIsE è descritta come lipoproteina da 40 kDa. Nel kit recomBlot BorreliaNB viene utilizzata una proteina di
fusione VIsE da 66 kDa.

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
Tabella 5: Valutazione del test
Somma del punteggio Valutazione delle IgG Valutazione delle IgM
4 negativo negativo
5 - 6 dubbio dubbio
7 positivo positivo
Software di interpretazione delle strisce di test: recomScan
Il software recomScan è progettato per supportare l’interpretazione delle strisce di test per
recomBlot Borrelia.
Se desiderate maggiori informazioni, fatene richiesta a MIKROGEN.
Attenzione:
Non utilizzare il sistema di interpretazione automatica senza prima prendere in considerazione le
sotto menzionate “Indicazioni per l’interpretazione”.
11.4. Indicazioni per l’interpretazione
Un risultato negativo al test recomBlot BorreliaNB non può escludere un’infezione con Borrelia
burgdorferi. Specialmente nella fase precoce dell’infezione è possibile che gli anticorpi siano assenti
o non siano ancora presenti in quantità rilevabili. Il trattamento con antibiotici in fase precoce può
prevenire la formazione di anticorpi rilevabili. Se clinicamente si sospetta una borreliosi di Lyme e il
risultato del test sierologico è negativo o dubbio, il prelievo e il test devono essere ripetuti dopo tre
settimane.
In campioni ottenuti in fase precoce di infezione, gli anticorpi di classe IgM sono di solito
predominanti. Pertanto nel test recomBlot BorreliaNB IgM deve essere attesa una colorazione più
intensa. La reazione con OspC è caratteristica della risposta immunitaria precoce (IgM).
Nel caso di sieri ottenuti in fase tardiva di infezione (IgG), di solito si verifica una intensa reazione per
p100, p18, p39 e/o VIsE. Raramente si rilevano anticorpi contro OspA.
VIsE è un indicatore molto precoce per la risposta IgG, ma spesso accompagna anche la risposta
immunitaria nelle manifestazioni tardive della borreliosi di Lyme ed in questi casi compare unitamente
a p100 e/o p18.
Un risultato positivo al test recomBlot BorreliaNB IgG non indica in ogni caso una borreliosi di Lyme
attiva. Poiché gli anticorpi di classe IgG persistono abitualmente per tempi lunghi, possono essere
ancora rilevabili anticorpi originati da una pregressa infezione con Borrelia burgdorferi.
In caso di sospetto clinico di neuroborreliosi, il riscontro di anticorpi prodotti in sede intratecale
rappresenta la prova più comunemente accettata. Ciò richiede l’esame parallelo di coppie di campioni
di siero/fluido cerebrospinale in un test quantitativo (p.es. recomWell Borrelia). In base alla
procedura di diagnosi sierologica in due stadi, i risultati positivi o dubbi ottenuti possono essere
confermati con il test recomBlot BorreliaNB. Le relative istruzioni d’uso (Diagnosi di Borrelia
burgdorferi da liquor) possono essere ottenute da MIKROGEN. Al fine di facilitare i calcoli necessari
(secondo Reiber) MIKROGEN fornisce su richiesta un programma Excel.
Viene esclusa nel migliore dei modi una reazione crociata con anticorpi indotti dall’infezione con i
patogeni di sifilide (Treponema pallidum), febbre ricorrente (Borrelia recurrentis, Borrelia duttonii,
Borrelia hermsii) o leptospirosi (Leptospira sp.), grazie all’uso selettivo di antigeni ricombinanti di
Borrelia burgdorferi (34). Nel caso di un’infezione attiva da Treponema pallidum o una cicatrice da
Treponema pallidum, le attività anticorpali contro gli antigeni p41 o p41/i sono state rilevate solo
occasionalmente. Deve essere esclusa un’infezione da Treponema pallidum.
In presenza di mononucleosi infettiva (malattia di Pfeiffer, infezione da EBV), si può verificare
stimolazione policlonale dei linfociti B. Ciò può dare origine a reazioni aspecifiche nel riscontro di
anticorpi di classe IgM. Se l’anamnesi non è chiara e la risposta IgM è debole, si raccomanda di
escludere un’infezione da EBV mediante diagnosi differenziale.
- 12 - GIRBBB015IT.DOC

GIRBBB015IT.DOC - 13 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
I risultati dei test sierologici devono sempre essere considerati in concomitanza con il quadro clinico.
Se i risultati sierologici sono non chiari o dubbi, si raccomanda di ripetere il test nel corso
dell’infezione.
Strisce con colore scuro: Alcuni sieri di pazienti possono dare origine a una colorazione scura
generalizzata o a settori dell’intera striscia di nitrocellulosa (p.es. sieri di pazienti con allergia alle
proteine del latte). Diversi fattori nel siero del paziente sono responsabili di ciò. La valutazione di
queste strisce è di solito possibile solo in modo limitato. P.es. bande “invertite” (bande bianche su un
fondo scuro) devono essere valutate come negative. Il siero corrispondente deve essere in ogni caso
analizzato utilizzando altri metodi sierologici.
12. Risultati clinici
In uno studio sono stati sottoposti a test 127 sieri ben caratterizzati di pazienti con borreliosi di Lyme.
I risultati sono riportati in Tabella 6.
Tabella 6: Sieri caratterizzati clinicamente
Numero Positivi per IgG Positivi per IgM Positivi per IgG/IgM
Artrite 28 28 (100%) 11 (39%) 28 (100%)
Acrodermatite 11 11 (100%) 2 (18%) 11 (100%)
Neuroborreliosi 45 38 (84%) 27 (60%) 43 (95%)
Erythema migrans 43 21 (49%) 28 (65%) 35 (81%)
Sono stati inoltre esaminati sieri di donatori di sangue della Germania meridionale. Con il test IgG è
stata rilevata una sieroprevalenza fino al 12,5% e con il test IgM fino al 4,5% (Tabella 7).
Tabella 7: Sieri di donatori di sangue
Sieri di donatori
di sangue
Numero Positivi per IgG Positivi per IgM Positivi per IgG/IgM
200 25 (12,5 %) 9 (4,5 %) 30 (15,0 %)
In una valutazione al computer, si può ottenere un’ottimizzazione dell’interpretazione del test
valutando la frequenza della reattività delle singole bande nel caso di sieri positivi e negativi. I valori
dei punteggi sono stati assegnati ai singoli antigeni di Borrelia burgdorferi rilevanti ai fini diagnostici, e
i risultati del test sono stati stabiliti come la somma dei valori dei punteggi individuali. Mediante
un’assegnazione ottimale dei corrispondenti valori dei punteggi, si ottiene un miglioramento della
specificità a sensibilità elevate, soddisfacendo in modo ottimale le esigenze di un saggio di conferma.

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
13. Bibliografia
(1) Steere A.C., Grodzicki R.L., Komblatt A.N., Craft J.E., Barbour A.G., Burgdorfer W., Schmidt G.P., Johnson E., Malawista S.E. (1983)
The spirochetal etiology of Lyme disease. N Engl J Med 308, 733 - 740
(2) Johnson R.C., Schmid G.P., Hyde F.W., Steigerwaldt A.G., Brenner D.J. (1984) Borrelia burgdorferi sp. nov.: etiologic agent of Lyme
disease. Int J Syst Bacteriol 34, 496 - 497
(3) Paster B.J., Dewhirst F.E., Weisburg W.G., Tordoff L.A., Fraser G.J., Hespell R.B., Stanton T.B., Zablen L., Mandelco L., Woese
C.R. (1991) Phylogenetic Analysis of the Spirochetes. Journal of Bacteriology Vol. 173 No. 19, 6101 - 6109
(4) Benach J.L., Bosler E.M., Hanrahan, J.P., Coleman J.L., Habicht G.S., Bast T.F., Cameron D.J., Ziegler J.L., Barbour A.G.,
Burgdorfer W., Edelman R., Kaslow R.A. (1983) Spirochetes isolated from the blood of two patients with Lyme disease. N Engl J Med
308, 740 - 742.
(5) Burgdorfer W., Barbour A.G., Hayes S.F., Benach J.L., Grunwaldt E., Davis J.P. (1982) Lyme disease, a tick-borne spirochetosis?
Science 216, 1317 - 1319
(6) Krampitz H.E. (1986) In vivo isolation and maintenance of some wild strains of European hard tick spirochetes in mammalian and
arthropod hosts: a parasitologist`s view. Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg A 263, 21 - 28.
(7) Wilske B., Steinhuber R., Bergmeister H., Fingerle V., Schierz G., Preac-Mursic V., Vanek E., Lorbeer B. (1987) Lyme Borreliose in
Süddeutschland. Dtsch Med Wschr 112, 1730 - 1736.
(8) Steere A.C., Malawista S.E., Snydman D.R. et al. (1977) Lyme arthritis: an epidemic of oligoarticular arthritis in children and adults in
three Connecticut communities. Arthritis Rheum. 20, 7 - 17
(9) Afzelius A. (1921) Erythema chronicum migrans. Acta Derm Venereol (Stockh) 2, 120 - 125.
(10) Lipschütz B. (1923) Weiterer Beitrag zur Kenntnis des "Erythema chronicum migrans". Arch Dermatol Syph 143, 365 - 374.
(11) Herxheimer K., Hartmann K. (1902) Ueber Acrodermatitis chronica atrophicans. Arch Dermatol Syph 61, 57 - 76, 255 - 300.
(12) Garin M. M. Ch., Bujadoux R. (1922) Paralysie par les tiques. J Med Lyon 71, 765 - 767.
(13) Bannwarth A. (1941) Chronische lymphocytäre Meningitis, entzündliche Polyneuritis und Rheumatismus. Arch Psychatr Nervenkr
113, 284 - 376.
(14) Steere A.C. (1989) Lyme Disease. N Engl J Med 321, No. 9, 586 - 596.
(15) Steere A.C., Bartenhagen Nh.H., Craft J.E. et al. (1983) The early clinical manifestations of Lyme disease. Ann Intern Med 99, 76 -
82.
(16) Asbrink E., Hovmark A. (1988) Early and late cutaneous manifestations of Ixodes-borne borreliosis (erythema migrans borreliosis,
Lyme Borreliose). Ann N Y Acad Sci 539, 4 - 15.
(17) Karlson M., Hovind-Hougen K., Svenungsen B., Stiernsted G. (1990) Cultivation and characterization of Spirochetes from
cerebrospinal fluid of patients with Lyme borreliosis. J Clin Microbiol 28, 473 - 479.
(18) Preac-Mursic V., Wilske B., Schierz G. (1986) European Borrelia burgdorferi isolated from humans and ticks: Culture conditions and
antibiotic susceptibility. Zbl Bakt Hyg A 263, 112 - 118.
(19) Preac-Mursic V., Wilske B., Schierz G., Pfister H.W., Einhäupl K. (1984) Repeated isolation of spirochetes from the cerebrospinal
fluid of a patient with meningoradiculitis Bannwarth. Eur J Clin Microbiol 3, 564 - 565.
(20) Stiernstedt G. T., Granström M., Hederstedt B., Sköldenberg B. (1985) Diagnosis of spirochetal meningitis by enzyme-linked
immunosorbent assay and indirect immunofluorescent assay in serum and cerebrospinal fluid. J Clin Microbiol 21, 819 - 825.
(21) Steere A.C., Berardi V.P., Weeks K.E., Logigian E.L., Ackermann R. (1990) Evaluation of the intrathecal antibody response to
Borrelia burgdorferi as a diagnostic test for Lyme Neuroorreliosis. J Infect Dis 161, 1203 - 1209.
(22) Berardi V.P., Weeks K.E., Steere A.C. (1988) Serodiagnosis of early lyme disease: analysis of IgM and IgG antibody responses by
using an antibody-capture enzyme immunoassay. J Infect Dis 158, 754 - 760.
(23) Wilske B., Preac-Mursic V., Fuchs R., Schierz G. (1990) Diagnostik der Lyme Borreliose. Diagnose und Labor, Laboratoriumsblätter
40, 24 - 36.
(24) Wilske B., Bader L., Pfister H.W., Preac-Mursic V. (1991) Diagnostik der Lyme-Neuroborreliose. Fortschr. Med. 109, 22, 441 - 446.
(25) Hansen K., Hindersson P., Pedersen N.S. (1988) Measurement of antibodies to the Borrelia burgdorferi flagellum improves
serodiagnosis in Lyme disease. J Clin Microbiol 26, 338 - 346.
(26) Grodzicki R.L., Steere A.C. (1988) Comparison of immunoblotting and indirect enzyme-linked immunosorbent assay using different
antigen preparations for diagnosing early lyme disease. J Infect Dis 157, 790 - 797.
(27) Bingnan Ma, Christen B., Leung D., Vigo-Pelfrey C. (1992) Serodiagnosis of Lyme Borreliosis by Western Immunoblot: reactivity of
various significant antibodies against Borrelia burgdorferi. J Clin Microbiol 30, 370 - 376
(28) Wilske B., Preac-Mursic V., Fuchs R., Bruckbauer H., Hofmann A., Zumstein G., Jauris S., Soutschek E., Motz M. (1990)
Immunodominant proteins of Borrelia burgdorferi: implications for improving serodiagnosis of lyme borreliosis. In Neu HC (ed) New
Antibacteriological Strategies. Churchill Livingstone, London, 47 - 63.
(29) Wilske B., Preac-Mursic V., Fuchs R., Soutschek E. (1991) Immunodominant proteins of Borrelia burgdorferi, the etiological agent of
lyme borreliosis. World J Microbiol Biotech 7, 130 - 136.
(30) Fuchs R., Jauris S., Lottspeich F., Preac-Mursic V., Wilske B., Soutschek E. (1992) Molecular analysis and expression of a Borrelia
burgdorferi gene encoding a 22kDa protein (pC) in Escherichia coli. Mol Microbiol 6(4), 503 - 509.
(31) Wilske B., Barbour A.G., Bergström S., Burman N., Restrepo B.I., Rosa P.A., Schwan T., Soutschek E., Wallich R. (1992) Antigenic
variation and strain heterogeneity in Borrelia spp.. Res Microbiol 143, 583 - 596.
(32) Zumstein G., Fuchs R., Hofmann A., Preac-Mursic V., Soutschek E., Wilske B. (1992) Genetic polymorphism of the gene encoding
the outer surface protein A (OspA) of Borrelia burgdorferi. Med Microbiol Immunol 181, 57 - 70.
(33) Wilske B., Preac-Mursic V., Schierz G., von Busch K. (1986) Immunochemical and immunological analysis of European Borrelia
burgdorferi strains. Zbl Bakt Hyg A 263, 92 - 102.
- 14 - GIRBBB015IT.DOC

GIRBBB015IT.DOC - 15 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
(34) Bruckbauer H.R., Preac-Mursic V., Fuchs R., Wilske B. (1992) Cross-reactive Proteins of Borrelia burgdorferi. Eur J Clin Microbiol
Infect Dis 11, 224 - 232
(35) Baranton G., Marti Ras N., Postic D. (1998): Molecular epidemiology of the aetiological agents of Lyme borreliosis. Wien Klin
Wochenschr 110, 850 - 855
(36) Wilske B., Preac-Mursic V., Göbel U. B., Graf B., Jauris S., Soutschek E., Schwab E., Zumstein G. (1993): An OspA Serotyping
System for Borrelia burgdorferi Based on Reactivity with Monoclonal Antibodies and OspA Sequence Analysis. J Clin Microbiol 31,
340 – 350
(37) Wilske B. (2003): Review Diagnosis of Lyme Borreliosis in Europe. Vector-Borne and Zoonotic Diseases 3, No 4, 215 – 227
(38) Jauris-Heipke S., Wilske B. et al (1999): Osp17, a novel immunodominant outer surface protein of Borrelia afzelii: recombinant
expression in Escherichia coli and its use as a diagnostic antigen for serodiagnosis of Lyme borreliosis. Med Microbiol Immunol 187,
213 – 219
(39) Schulte-Spechtel U., Lehnert G., Liegl G., Fingerle V., Heimerl C., Johnson B., Wilske B. (2003): Significant Improvement of the
Recombinant Borrelia-Specific Immunoglobulin G Immunoblot Test by Addition of VlsE and a DbpA Homologue Derived from Borrelia
garinii for Diagnosis of Early Neuroborreliosis. J Clin Microbiol 41, 1299 – 1303
(40) Eicken C., Sharma V., Klabunde T., Lawrenz M. B., Hardham J. M., Norris S. J., Sacchettini J. C. (2002): Crystal Structure of Lyme
Disease Variable Surface Antigen VlsE of Borrelia burgdorferi. J Biol Chem 277, 21691 – 21696
(41) Wang D., Botkin D. J., Norris S. J. (2003): Characterisation of the vls antigenic variation loci of the Lyme disease spirochaetes
Borrelia garinii lp90 and Borrelia afzelii ACAI. Mol Microbiol 47(5), 1407 – 1417
(42) Ohnishi J., Schneider B., Messer W. B., Piesman J., de Silva A. M. (2003): Genetic Variation at the vlsE Locus of Borrelia burgdorferi
within Ticks and Mice over the Course of a Single Transmission Cycle. Journal of Bacteriology 185, 4432 – 4441
(43) Eissfeller P., Bauer P., Riemer A., Goettner G., Wassenberg D., Matz E., Soutschek E. (2005): Recombinant test systems from
MIKROGEN allow the presentation of antigens from all genospecies. Poster, 10 th International Conference on Lyme Borreliosis and
other Tick-Borne Diseases, 11-15 Sept., Vienna, Austria
Saremo lieti di inviarvi ulteriore materiale bibliografico sulla diagnosi della borreliosi di Lyme.

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
14. Legenda dei simboli
x°C
y°C
Contiene una quantità sufficiente
per < n > test
(numero di test)
Inhalt ist ausreichend für < n > Ansätze
(Anzahl der Ansätze)
Leggere le istruzioni per l’uso Gebrauchsinformation beachten
Contiene Inhalt, enthält
Per uso diagnostico in vitro In vitro Test
Codice di lotto Chargen-Nummer
Non congelare Nicht einfrieren
Numero di catalogo Bestell-Nummer
Utilizzare entro
data di scadenza
Limite di temperatura
Conservare tra x°C e y°C
Verwendbar bis
Mindesthaltbarkeitsdatum
Lagerung bei x°C bis y°C
recomBlot BorreliaNB IgG Artikel-Nr./ Codice: 4202
recomBlot BorreliaNB IgM Artikel-Nr./ Codice: 4203
Gebrauchsinformation Version/ Versione di Istruzioni per l’uso: GIRBBB015IT.DOC
gültig ab/ valida da: Oktobter/ottobre 2007
MIKROGEN
molekularbiologische
Entwicklungs-GmbH Tel: +49 (0)89 54 80 1-0
Floriansbogen 2-4 Fax: +49 (0)89 54 80 1-100
D-82061 Neuried
Germania
www.mikrogen.de mikrogen@mikrogen.de
QM-SYSTEM zertifiziert durch:
SISTEMA QM certificato da:
- 16 - GIRBBB015IT.DOC