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Multimetrix
Borrelia IgG Test
Multiplex Bead Assay (MBA) zum simultanen
Nachweis von IgG-Antikörpern in humanem
Serum und Liquor basierend auf semiquantitativen
Messungen gegen Borrelia-
Antigene.
Artikel-Nr:
MM2102
Anzahl der Messungen: 96 Bestimmungen
Lagerung: 2–8 °C
IVD
Gebrauchsanweisung/ Instruction sheet / Carnet
d’instruction / instrucciones de uso / gebruiksaanwijzing
/ istruzioni per l'uso / σελίδα οδηγιών / bruksanvisning /
modo de emprego: www.progen.de
1. Einleitung
Die Lyme-Borreliose ist die häufigste durch Zecken
übertragene Infektionskrankheit in der nördlichen
Hemisphäre. Die Prävalenz von Antikörpern gegen
Borrelia spec. beträgt bei Blutspendern 5-19 % mit
regionalen Unterschieden. Der serologische Nachweis
von IgM-Antikörpern gelingt in der Regel frühestens
3 Wochen nach der Infektion (2) und damit oft erst
nach Abklingen eines Erythema migrans (EM). Mit
beginnender Generalisierung der Infektion nach ca.
6 Wochen lassen sich steigende IgG-Antikörper-Titer
gegen eine zunehmende Zahl von Borrelia-Antigenen
nachweisen (4,5) während die IgM-Antwort langsam
abklingt (Serokonversion). Für die späten Borrelioseformen
sind hohe spezifische IgG-Titer bei geringen bis
nicht nachweisbaren IgM-Titern charakteristisch (3,6).
Bei klinischem Verdacht auf Neuroborreliose sollte
untersucht werden, ob intrathekal gebildete IgM-/IgG-
Antikörper nachgewiesen werden können.
Das Auftreten von intrathekal gebildeten Borrelienspezifischen
IgM-/IgG-Antikörpern gilt in Verbindung
mit den klinischen Symptomen als sicherer Nachweis
einer Neuroborreliose. Dazu werden in Serum-Liquor-
Paaren die Borrelien-spezifischen Antikörper bestimmt
und zum jeweiligen Gesamt-Immunglobulingehalt in
Serum und Liquor ins Verhältnis gesetzt. Daraus lässt
sich der Borrelien-spezifische Antikörper-Index AI
berechnen, mit dem passiv in den Liquorraum
diffundierte Antikörperfraktionen von intrathekal
gebildeten unterschieden werden können.
2. Testprinzip
Dieser MBA detektiert die IgG-Antikörperklassen gegen
9 Borrelien-Antigene in verdünnten humanen Seren
und Liquores.
Der MBA besteht aus optisch unterscheidbaren Sets
von Beads, die mit verschiedenen Kombinationen
zweier unterschiedlicher Farbstoffe gekennzeichnet
sind. Jedes Bead-Set ist mit einem anderen Antigen
beschichtet.
Die Testdurchführung beinhaltet 2 Inkubationsschritte.
Verdünnte Seren und Liquores werden zunächst mit
der multiplexen Mischung der Bead-Suspension
inkubiert.
Wenn vorhanden, binden spezifische Antikörper an das
Antigen eines Bead-Sets aus dem MBA.
Die verschiedenen Bead-Sets des MBA sind mit
folgenden, von verschiedenen Borrelia-Arten isolierten
Antigenen beschichtet (1):
Antigen Spezies Antigen-Typ
Lysat B. garinii nativ
OspA B. afzelii PKo rekombinant
OspC B. afzelii PKo rekombinant
p100 B. afzelii PKo rekombinant
p18 B. afzelii PKo rekombinant
p39 B. afzelii PKo rekombinant
p41-I B. afzelii PKo rekombinant
p58 B. garinii PBi rekombinant
VlsE-C6 Übergreifend Peptid (IR6)
Im 2. Inkubationsschritt werden Phycoerythrinkonjugierte
Ziege-anti-human IgG-Nachweismoleküle
("Konjugat") zugegeben, um die an Beads
gebundenen IgG-Antikörper detektieren zu können. Die
Beads werden basierend auf der Bead-spezifischen
Farbkombination und der Menge an gebundenen
Phycoerythrin-markierten Nachweismolekülen (anti-
IgG), welche die anti-Borrelia-Antigen-spezifischen
Antikörper anzeigen, im Luminex Analysesystem
identifiziert. Binden Konjugatmoleküle an freies IgG aus
der Probe, so werden sie nicht vom Gerät detektiert.
Der gesamte Nachweis kann daher ohne Waschschritte
zur Entfernung von ungebundenen Antikörpern
erfolgen.
Das 10. Kontroll-Bead-Set des MBAs, CR1, dient zur
Überprüfung des IgG-Levels der Probe und zur
Kontrolle der Nachweisreaktion des Konjugats.
3. Inhalt der Testpackung
DIL Assay-Puffer; 2 x 100 ml gebrauchsfertig.
NEG G Negativkontrolle (Serum)*; 1 x 300 µl
gebrauchsfertig, enthält keine detektierbaren
Borrelia-spezifischen IgG-Antikörper.
POS G Positivkontrolle (Serum)*; 1 x 300 µl
gebrauchsfertig, enthält humane Borreliaspezifische
IgG-Antikörper.
REF G Referenzkontrolle (Serum)*; 1 x 300 µl
gebrauchsfertig, enthält humane Borreliaspezifische
IgG-Antikörper.
BMG Bead-Mix; 1 x 2,6 ml gebrauchsfertig, enthält
10 Bead-Sets.
CON G Konjugat; Phycoerythrin-konjugiertes Ziegeanti-human
IgG; 1 x 6,5 ml gebrauchsfertig.
MTP Mikrotiterplatte (Break-Apart-Strips); 1 Stück.
Arbeitsanleitung, Chargenzertifikat, Abklebefolien
MM2102 Borrelia IgG de_V12 1/8

4. Hinweise
Gebrauch nur durch Fachpersonal.
Lizenz für Endanwender
Das Kit enthält modifizierte Beads. Diese sind von
Luminex autorisiert.
Durch den Erwerb dieses Kits erhält der Kunde die
Rechte zu Verwendung dieses Produkts nur in
Kombination mit dem Luminex-Analysesystem.
Die Nutzung von Luminex-Beads ist durch ein US-
Patent geschützt.
Sicherheitshinweise
*Die Kontrollen NEG G, POS G und REF G sind durch
anerkannte Methoden für HIV 1 und HIV 2, HbS Ag und
Antikörper gegen HCV getestet und negativ befundet
worden. Trotzdem sollten Kontrollen und Proben als
potentiell infektiös behandelt werden. Empfehlung: in
der WASTE-Flasche geeignetes Desinfektionsmittel
vorlegen, Feststoff-Abfall autoklavieren (30 Min.,
121 °C). Regeln guter Laborpraxis beachten!
Flüssige Komponenten enthalten Natriumazid 0,09 %
als Konservierungsmittel. Kontakt mit Augen, Haut oder
Schleimhaut vermeiden.
Entsorgungshinweise
Bei der Beseitigung der Testpackung sind die
nationalen gesetzlichen Bestimmungen in der jeweils
aktuellen Fassung zu beachten. Chemikalien und
Zubereitungen, die als Reststoffe anfallen, sind in der
Regel Sonderabfälle. Besondere Hinweise zur
Entsorgung sind zusätzlich im Sicherheitsdatenblatt
aufgelistet.
Maßnahmen bei Beschädigung
Im Falle einer erheblichen Beschädigung der
Testpackung ist der Händler zu benachrichtigen. Bei
erheblicher Beschädigung einzelner Komponenten sind
diese nicht zur Testdurchführung zu verwenden. Sie
sollten so lange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden
geregelt ist. Danach sollten sie
ordnungsgemäß entsorgt werden.
5. Benötigte, zusätzliche Materialien
• Reaktionsgefäße (1,5 ml) für Probenverdünnungen
• Präzisionspipetten (5-1000 µl)
• Schüttler (Vortex)
• Orbitalmischer
• Inkubationsschrank 37 °C
• Luminex-Analysesystem
• Stoppuhr
• Handschuhe
6. Haltbarkeit
Die Komponenten sind ungeöffnet bei sachgerechter
Lagerung (2-8 °C) bis zu den auf den Etiketten
angegebenen Daten haltbar. Nach Anbruch beträgt die
Haltbarkeit 6 Wochen.
Nicht Einfrieren! Beads sind lichteempfindlich! Direkte
Lichteinstrahlung vermeiden!
Außer des Assay-Puffers ist eine Mischung der
Komponenten verschiedener Chargen nicht zulässig.
7. Probenmaterial
Humane Serumproben und Liquorproben sollten frisch
eingesetzt werden. Bei Lagerung unterhalb von –20 °C,
können die Proben jedoch auch nach mehreren
Monaten Lagerung eingesetzt werden. Mehrfaches
Frieren/Tauen ist dabei zu vermeiden. Hämolysierte,
lipämische, ikterische oder kontaminierte Proben,
sowie präzipitierte oder viskose Proben sollten nicht
analysiert werden, da sie zu Resultatverfälschungen
führen können.
Bei der Testung von Serum-Liquor-Paaren ist
unbedingt darauf zu achten, dass die Abnahme der
Serum- und Liquorproben am selben Tag erfolgt und
die Serum-Liquor-Paare im selben Testlauf untersucht
werden.
8. Testvorbereitung
Luminex-Analysesystem gemäß Handbuch vorbereiten.
Die zur Erstellung eines Templates notwendigen
Parameter sind im Anhang aufgeführt. Zum Test
passendes Template aufrufen. Name der Messreihe
eintragen. Bezeichnungen der Proben gemäß Pipettierschema
(s. u.) eintragen.
Inhalt der Testpackung auf Raumtemperatur bringen
(20-25 °C).
BMG
Bead-Mix IgG (BMG) unbedingt unmittelbar vor
Gebrauch durch sorgfältiges Vortexen resuspendieren.
Direkte Lichtexposition vermeiden, Beads sind
lichtempfindlich!
Probenverdünnung
1. Serumproben
Serum in zwei Schritten auf 1:3015 verdünnen mit
gebrauchsfertigem Assay-Puffer. Auf gleichmäßige
Durchmischung der Verdünnungen achten!
Schritt I: 1+200** 5 µl Serum + 1000 µl Puffer
Schritt II: 1+14 50 µl 1:201 + 700 µl Puffer
**Bei gleichzeitiger Testung auf IgG und IgM kann die
Serumverdünnung des Multimetrix Borrelia IgM Tests
verwendet werden.
2. Liquorproben
Liquor in zwei Schritten auf 1:80 verdünnen mit
gebrauchsfertigem Assay-Puffer. Auf gleichmäßige
Durchmischung der Verdünnungen achten!
Schritt I: 1+19** 5 µl Liquor + 95 µlPuffer
Schritt II: 1+3 25 µl 1:20 + 75 µl Puffer
**Bei gleichzeitiger Testung auf IgG und IgM kann die Liquorverdünnung
des Multimetrix Borrelia IgM Tests verwendet
werden.
9. Testdurchführung
Die Arbeitsanleitung ist strikt zu befolgen, um eine
optimale Funktion des Nachweises zu
gewährleisten.
Die Inkubationszeiten haben Toleranzen von
± 5 Minuten, die Inkubationstemperaturen besitzen
Toleranzen von ± 2 °C. Um eine optimale
Durchmischung der Reagenzien zu gewährleisten und
die Messzeit pro Probe zu minimieren, wird folgendes
Vorgehen empfohlen: Die MTP ist vor jeder Inkubation
bzw. unmittelbar vor der Messung für 15-30 sec. auf
einem Orbitalmischer bei 600-800 U/min zu schütteln.
Ist eine Messung direkt nach der letzten Inkubation
nicht möglich, so kann der Ansatz maximal 30 Minuten
bei 2-8 °C zwischengelagert werden.
MM2102 Borrelia IgG de_V12 2/8

1. 25 µl Negativkontrolle (NEG G) in Kavität A1
geben.
2. 25 µl Positivkontrolle (POS G) in Kavität B1
geben.
3. 25 µl Referenzkontrolle (REF G) in Kavität C1
geben.
4. 25 µl verdünnte Serum/Liquorprobe in die
benötigten Kavitäten der Mikrotiterplatte vorlegen.
5. 25 µl Bead-Mix (BMG) zu jeder Kavität zugeben.
6. Mikrotiterplatte mit Folie abkleben.
7. 60 min bei 37°C im Dunkeln inkubieren.
8. 50 µl Konjugat (CON G) zu jeder Kavität zugeben.
9. Mikrotiterplatte mit Folie abkleben.
10. 60 min bei 37°C im Dunkeln inkubieren.
11. Ansatz umgehend im Luminex-Analysesystem
analysieren.
10. Qualitätskontrolle
Als Qualitätskontrollparameter für die Durchführung
des gesamten Assays dienen die gemessenen Werte
der Referenz-, Positiv- und Negativkontrolle. Für eine
zuverlässige Bewertung müssen die Werte der
Referenzkontrolle innerhalb der im Chargenzertifikat
angegebenen Grenzwerte liegen. Die Negativkontrolle
muss für alle Antigene als negativ bewertet werden und
die Positivkontrolle muss gemäß dem Chargenzertifikat
für bestimmte Antigene positiv sein.
Als Validitätskriterium für die Tests der einzelnen
Proben dienen in allen Kavitäten die Fluoreszenzsignale
der Kontroll-Bead-Sets. Über die CR1 Werte
werden die Zugabe und das Verhältnis von verdünnter
Serumprobe und Konjugat kontrolliert. Bei
ordnungsgemäßer Durchführung müssen die
Messwerte innerhalb der im Chargenzertifikat
angegebenen Grenzwerte liegen.
11. Testauswertung
Im Luminex-Analysesystem werden in jeder Kavität von
jedem individuellen Bead-Set des Mixes 70 Beads
fluorimetrisch vermessen. Die gemessenen
Fluoreszenzintensitäten werden über die Software des
Luminex-Analysesystems ausgewertet und in einem
nach der Messreihe benannten Ordner in der Datei
„Output.csv“ gespeichert. Die gemessenen
Fluoreszenzintensitäten jeder Probe sind in dieser
Datei unter dem Punkt „Data Type: Median“ tabellarisch
aufgeführt.
Aus den Messwerten der Referenzkontrolle in der
Kavität C1 wird für jedes Bead-Set - außer OspC - mit
Hilfe der im Chargenzertifikat angegebenen Indizes der
für diesen Testlauf spezifische Cut-off berechnet
gemäß:
Messwert
REF G, Ag n
Index
REF G, Ag n
= Cut −
off
Ag n
Das Antigen OspC, ein Frühborreliose-Marker, gilt als
spezifischer IgM-Marker. Dieses, im Multimetrix
Borrelia IgG Test daher nur in Einzelfällen spezifisch
reaktive Bead-Set, wird über den im Chargenzertifikat
angegebenen fixierten Cut-off-Wert ausgewertet.
Die Fluoreszenzintensitäten der mit den Serumproben
inkubierten Beads werden durch den Cut-off der
entsprechenden Bead-Sets geteilt, um den Cut-off-
Index zu berechnen:
Messwert
Probe xy, Agn = Cut - off -Index
Cut - off
Probe, Ag
Ag n
n
Der Cut-off-Index zeigt an, um welchen Faktor die auf
diesem Bead-Set gemessene Fluoreszenz der
jeweiligen Probe unter oder über dem berechneten
testspezifischen Cut-off-Wert liegt.
Auswertung von Serumproben:
Negativ: Cut-off-Index < 1
Keine Antikörper gegen das Antigen dieses Bead-
Sets nachgewiesen.
Schwach positiv: 1 ≤ Cut-off-Index < 1,5
Verdacht auf Antikörper gegen das Antigen dieses
Bead-Sets.
Positiv: Cut-off-Index ≥ 1,5
Antikörper gegen das Antigen dieses Bead-Sets
nachgewiesen.
Auswertung von Serum-Liquor-Paaren: Antikörper-
Index-Berechnung
Zur Differenzierung einer intrathekalen Antwort von
einer Blut-Hirn-Schrankenstörung ist die AI-
Berechnung nach REIBER notwendig (12).
In die Berechnung des AI nach Reiber sollten Cut-off-
Indizes ab 0,5 für die Einzelantigene und das Voll-Lysat
einbezogen werden.
Die Erstellung einer virtuellen Standardkurve ist nicht
erforderlich.
Der Reaktionsindex wird mit der Ausgangsverdünnung
multipliziert und dann in die bekannte REIBER-Formel
(12) eingesetzt. Die Vorgehensweise bei der AI-
Berechnung ist im Anhang dargestellt.
12. Interpretation der Ergebnisse
Auf Grundlage der Kombination der spezifischen
Nachweise von Antikörpern gegen verschiedene
Borrelia-Antigene ergibt sich folgendes Bewertungsschema:
1. Alle Bead-Sets "negativ" oder höchstens ein Bead-
Set "schwach positiv"
→ Immunserologisch kein Hinweis für
Borreliose
2. Ein Bead-Set "positiv" oder mindestens zwei Bead-
Sets "schwach positiv"
→
Immunserologisch Borreliose nicht sicher
ausgeschlossen
In diesem Fall sollte eine Überprüfung der Probe
mit Multimetrix Borrelia IgM Test durchgeführt
werden. Jeweils eine "positive" Antigen-Gruppe in
beiden Nachweisen erhärtet einen Verdacht auf
Borreliose. Bei weiterhin unklarem Befund ist eine
erneute Testung nach ca. 10 Tagen erforderlich.
3. Mehr als ein Bead-Set "positiv"
→
Immunserologisch dringender Verdacht auf
Borreliose.
MM2102 Borrelia IgG de_V12 3/8

Tabellarische Darstellung:
Anzahl der
"schwach
positiven"
Bead-Sets
Anzahl der
"positiven"
Bead-Sets
Gesamtbewertung:
Gesamtergebnis
Borreliose-
Erkrankung
0 0 neg a Kein Hinweis
1 0 neg Kein Hinweis
b Nicht sicher
≥ 2 0 spos
ausgeschlossen
0 1 spos
≥ 1 1 spos
Nicht sicher
ausgeschlossen
Nicht sicher
ausgeschlossen
0 ≥ 2 pos c Dringender Verdacht
Weiterhin wurden nicht selektionierte Blutspenderseren
untersucht. Dabei wurde eine Seroprävalenz im IgG
von 12 % und im IgM von 8 % gefunden, was einer
Gesamtprävalenz von 19 % (IgG/IgM) entspricht. In die
Auswertung wurden sowohl positive als auch schwach
positive Proben miteinbezogen.
Auf Anfrage wird von der Firma PROGEN
BIOTECHNIK GmbH eine Software zur
automatischen Kontrolle der Qualitätsparameter
und Auswertung der Messergebnisse kostenlos zur
Verfügung gestellt.
13. Testkenndaten
Die Inter-Assay Varianz wurde bestimmt in 5
unabhängigen Messungen an 2 Luminex Analysesystemen.
In die Berechnung gingen Messwerte ein,
die mindestens eine schwach positive Bewertung
zeigten (Cut-off Index > 1).
Inter-Assay Varianz: VK < 10 %
Die Intra-Assay Varianz wurde bestimmt durch
12 fache Messung von Seren mit einer Reaktivität
gegen alle im Multimetrix Borrelia IgG Test
eingesetzten Antigene.
Intra-Assay Varianz: VK < 7 %
In einer Studie wurden insgesamt 106 klinisch
definierte Seren untersucht. In die Auswertung wurden
sowohl positive als auch schwach positive Proben
miteinbezogen.
Die Ergebnisse sind im Folgenden zusammengefasst:
14. Einschränkungen
Die Resultate des Multimetrix Borrelia IgG Tests
sollten nur zusammen mit der klinischen Diagnose
interpretiert werden.
Bei der serologischen Befundung von Patienten mit
klinischem Verdacht auf Borreliose sollten sowohl die
Ergebnisse des Multimetrix Borrelia IgM Tests als
auch die des Multimetrix Borrelia IgG Tests mit
einbezogen werden.
Die Ergebnisse von Serum-Liquor-Paaren sollten nur
von einem Facharzt interpretiert werden. Bei widersprüchlichem
Liquorbefund gegenüber der klinischen
Symptomatik sollte eine erneute Messung mit höherer
Liquorverdünnung durchgeführt werden. Bei der
Berechnung ist das veränderte Verdünnungsverhältnis
zu beachten.
Eine im frühen Infektionsstadium durchgeführte
Antibiotikatherapie kann eine immunologische Antwort
gegen Borrelia sp. verhindern.
Polyklonale B-Zellstimulationen (z. B. durch EBV-
Infektionen), Autoimmun-Erkrankungen oder Immundefekte
können zu verfälschten Ergebnissen führen
(8,10). Entsprechende Befunde sind differentialdiagnostisch
auszuschließen.
Flagellin-Antigene (p41) sind auch bei anderen
Gattungen der Spirochaeten (Treponema spec.,
Leptospira spec.) verbreitet und können zu
entsprechenden Kreuzreaktivitäten führen (7,8,9).
Plasmidkodierte Antigene (z. B. OspC) können durch
lateralen Transfer auch auf andere Arten übertragen
werden (11). Kreuzreaktionen können bei solchen
pathogenitätsassoziierten Antigenen auch mit anderen
Erregern (z. B. Yersinien und Chlamydien) auftreten.
In seltenen Fällen treten Seren mit unspezifischen
Bindungseigenschaften gegen die Bead-Sets auf. Sie
sind i.d.R. gekennzeichnet durch niedrige Cut-off-
Indizes bei den Borreliose-Frühmarkern und hohen
Indizes bei den Bead-Sets der für die Spätphase
typischen IgG-Marker. Solche Seren sollten durch
alternative Technologien bewertet werden.
a neg, "negativ"
b spos, "schwach positiv"
c pos, "positiv"
MM2102 Borrelia IgG de_V12 4/8

15. Problembehandlung
Messwerte der Kontrollen sind außerhalb der
Grenzwerte
→ Überprüfung des Pipettiervolumens der Kontrollen
und des Konjugats;
→ Wiederholungsmessung der Kontrollen.
Sollte das Problem weiterbestehen, bitte den Händler
kontaktieren.
CR1-Werte der Serumproben sind außerhalb der
Grenzwerte
→ Pipettiervolumen der Serumproben und die
Serumverdünnung kontrollieren;
→ Wiederholungsmessung mit frisch verdünnten
Seren.
Sollte das Problem weiterbestehen, bitte den Händler
kontaktieren.
Einzelne, besonders hoch- oder niedrigtitrige Seren
können ebenfalls zu Messwerten außerhalb der
Grenzwerte führen. In diesen Fällen wird eine
Bestimmung des Antikörper-Gehalts und ggf. eine
individuell angepasste Verdünnung empfohlen.
Stark streuende CR1-Werte innerhalb einer Testreihe
sind ein Indiz für eine inhomogene Verdünnung oder
schlechte Durchmischung.
16. Literatur
1. Hauser U., Lehnert G., Wilske B. (1998): Diagnostic
Value of Proteins of Three Borrelia Species (Borrelia
burgdorferi Sensu Lato) and Implications for
Development and Use of Recombinant Antigens for
Serodiagnosis of Lyme Borreliosis in Europe. Clin. Diagn.
Lab. Immunol. 5: 456-462
2. Vogt A (1990): Die Labordiagnostik der Borreliaburgdorferi-Infektion,
Fortschr Med 108:194-197
3. Wilske B, Fingerle V, Herzer P, Hofmann A, Lehnert G,
Peters H, Pfister H-W, Preac-Mursic V, Soutschek E,
Weber K (1993): Recombinant immunoblot in the
serodiagnosis of Lyme borreliosis. Med Microbiol
Immunol 182:255-270
4. Steere A C (1989): Medical progress - Lyme disease. N
Engl J Med 321:586-596
5. Putzker M, Sauer H (1995): Labordiagnostik von
Infektionen mit Borrelia burgdorferi sensu lato, Klin. Lab.;
41:431-439
6. Herzer P, Wilske B, Preac-Mursic V, Schierz G,
Schattenkirchner M, Zöllner N (1986): Lyme arthritis:
clinical features, serologicalal and radiographic findings
of cases in Germany. Klin Wochenschr 64:206-215
7. Bruckbauer H, Preac-Mursic V, Fuchs R, Wilske B
(1992): Cross-reactive proteins of Borrelia burgdorferi.
Eur J Clin Microbiol Infect Dis 11:1-9
8. Horst H (1997): Einheimische Zeckenborreliose (Lyme-
Krankheit) bei Mensch und Tier, 3. überarb.Aufl., Spitta
Verlag 126-130
9. Tewald F, Braun R (1998): Durchführung und
Interpretation serologischer Tests bei Verdacht auf
Borrelia-Infektionen, Clin.Lab 44: 697-902
10. Goosens HAT, van den Boogard AE, Nohlmans MKE
(1999): Epstein-Barr-Virus and Cytomegalovirus
infections cause false positive resuts in IgM two-test
protocoll for early lyme borreliosis, Infection 27: 231
11. Wie-Gang Q, Schutzer SE, Bruno JF, Attie O, Xu Y,
Dunn JJ, Fraser CM, Casjens SR, Luft BJ (2004):
Genetic exchange and plasmid transfers in Borrelia
burgdorferi sensu stricto revealed by three-way genome
comparisons and multilocus sequence typing, PNAS 101:
14150-14155
12. Reiber H. (1994): Flow rate of cerebrospinal fluid (CSF) –
a concept common to normal blood-CSF barrier function
and to dysfunction in neurological diseases. J Neurol Sci
122:189-203
Multimetrix GmbH
Josef-Engert-Str.9
93053 Regensburg
Deutschland
Laboratorium:
Maaßstr. 30
69123 Heidelberg
Deutschland
E-mail: info@multimetrix.com
Vertrieb in Deutschland durch:
Mikrogen GmbH
Floriansbogen 2-4
82061 Neuried
Deutschland
T: +49 (0) 89 / 54801-0
F: +49 (0) 89 / 54801-100
E-mail: mikrogen@mikrogen.de
Internet: www.mikrogen.de
Vertrieb durch:
PROGEN Biotechnik GmbH
Maaßstr. 30
69123 Heidelberg
Deutschland
T: +49 (0) 6221 / 8278-0
F: +49 (0) 6221 / 8278-23
E-mail: info@progen.de
Internet: www.progen.de
Gültig ab: 23.08.2011
MM2102 Borrelia IgG de_V12 5/8

Kurzanleitung Multimetrix Borrelia IgG Test
Serumverdünnung, 1:3015 vorbereiten:
Schritt I: 1+200: 5 µl Serum+ 1000 µl Puffer
Schritt II: 1+14: 50 µl 1:201 + 700 µl Puffer
Liquorverdünnung, 1:80 vorbereiten:
Schritt I: 1+19 5 µl Liquor + 95 µl Puffer
Schritt II: 1+3 25 µl 1:20 + 75 µl Puffer
Proben: 25 µl
NEG G, POS G, REF G (unverdünnt),
Serumproben/Liquorproben (verdünnt), siehe Pipettierschema
BMG in jede Kavität (unmittelbar vor Gebrauch mischen!) 25 µl
15 - 30 sec bei 600 - 800 U/min schütteln, Inkubation: 60 Min. 37 °C, im Dunkeln
CON G in jede Kavität 50 µl
15 - 30 sec bei 600 - 800 U/min schütteln, Inkubation: 60 Min. 37 °C, im Dunkeln
15 - 30 sec bei 600 - 800 U/min schütteln
Umgehende Messung
Pipettierschema
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B
C
NEG G
POS G
REF G
D
E
F
G
H
MM2102 Borrelia IgG de_V12 6/8

Vorgaben zur Template-Erstellung für Multimetrix Borrelia IgG Test
unter Luminex IS Software (ab Version 2.2 SP1)
Eingaben Seite 1:
Template Name:
MM_Borrelia_IgG
Version No.: 2.0
Template Type:
Data collection only
Sample Vol. (µl): 70
Sample Timeout (sec): 100
Doublet Discriminator Gate Low Limit: 6800
High Limit: 16000
Eingaben Seite 2:
Tests: 10
Name Units Description Bead ID MinBeads
CR1 MFI 61 70
Lysat MFI 17 70
OspA MFI 36 70
OspC MFI 52 70
p100 MFI 9 70
p18 MFI 58 70
p39 MFI 34 70
p41-I MFI 30 70
p58 MFI 32 70
VlsE-C6 MFI 56 70
Die Reihenfolge und Schreibweise der Bead-Sets ist bei Verwendung der durch die PROGEN Biotechnik GmbH
gestellten Auswerte-Software strikt zu beachten.
Eingaben Seite 3:
Template Commands
Wash from reservoir
Acquire Test specimen
Zur Sicherung des Templates:
Save + Export
MM2102 Borrelia IgG de_V12 7/8

AI – Berechnung nach Reiber zur Auswertung von Serum-Liquor-Paaren
1 Korrektur der berechneten Cut-off-Indizes der Liquorproben pro Antigen
Cut − off
− Index
korr , Liquor , Agn
=
Liquorverdünnung aktuell
Serumverdünnung
* Cut − off
− Index
Liquor, Agn
Serumverdünnung (lt. Arbeitsanleitung): im IgM Test = 201
im IgG Test = 3015
Für Liquor ergibt sich aus Liquorverdünnung aktuell/Serumverdünnung lt. Arbeitsanleitung folgender Korrekturfaktor:
Im IgM-Test: 20/201 = 0,0995
Im IgG-Test: 80/3015 = 0,02653
2 Berechnung der Borrelia-spezifischen Antikörperindizes im IgM- und IgG-Test
Hinweis: Zur besseren Übersicht werden die Ergebnisse mit einem Faktor von 1000 multipliziert.
Q
Cut − off − Index
korr , Liquor , Agn
−3
Spez
=
*1000 = QSpez
* 10
Cut − off − IndexSerum,
Agn
3 Berechnung des Gesamtalbumin-Quotienten (IgM und IgG):
Q
Alb
Albuminkonz. Liquor
= * 1000 = QAlb
* 10
Albuminkonz.
Serum
−3
4 Berechnung des Immunglobulin-Quotienten (IgM und IgG):
Immunglobulinkonz. Liquor
−3
QGesamt =
*1000 = QGesamt
* 10
Immunglobulinkonz. Serum
5 Berechnung von Q Lim
3
Q
Q
Lim IgG
Lim IgM
2
−6
= 0 93*
( Q ) + 6*
10 −1,
7*
10
, Alb
2
−6
= 0 67*
( Q ) + 120*
10 − 7,
1*
10
, Alb
−
−3
6 Berechnung des AI unter Berücksichtigung von Q Lim
Für Q Lim > Q ges gilt:
Q
AI =
Q
spez
Gesamt
Für Q Lim < Q ges: gilt:
Q
AI =
Q
spez
Lim
7 Interpretationshilfen für den Facharzt
AI < 1,3 passive Diffusion
AI 1,3 – 1,5 auffällig / grenzwertig
AI > 1,5 dringender Verdacht auf intrathekale Bildung von Borrelia Antikörpern
MM2102 Borrelia IgG de_V12 8/8