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4. Hinweise Gebrauch nur durch Fachpersonal. Lizenz für Endanwender Das Kit enthält modifizierte Beads. Diese sind von Luminex autorisiert. Durch den Erwerb dieses Kits erhält der Kunde die Rechte zu Verwendung dieses Produkts nur in Kombination mit dem Luminex-Analysesystem. Die Nutzung von Luminex-Beads ist durch ein US- Patent geschützt. Sicherheitshinweise *Die Kontrollen NEG G, POS G und REF G sind durch anerkannte Methoden für HIV 1 und HIV 2, HbS Ag und Antikörper gegen HCV getestet und negativ befundet worden. Trotzdem sollten Kontrollen und Proben als potentiell infektiös behandelt werden. Empfehlung: in der WASTE-Flasche geeignetes Desinfektionsmittel vorlegen, Feststoff-Abfall autoklavieren (30 Min., 121 °C). Regeln guter Laborpraxis beachten! Flüssige Komponenten enthalten Natriumazid 0,09 % als Konservierungsmittel. Kontakt mit Augen, Haut oder Schleimhaut vermeiden. Entsorgungshinweise Bei der Beseitigung der Testpackung sind die nationalen gesetzlichen Bestimmungen in der jeweils aktuellen Fassung zu beachten. Chemikalien und Zubereitungen, die als Reststoffe anfallen, sind in der Regel Sonderabfälle. Besondere Hinweise zur Entsorgung sind zusätzlich im Sicherheitsdatenblatt aufgelistet. Maßnahmen bei Beschädigung Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist der Händler zu benachrichtigen. Bei erheblicher Beschädigung einzelner Komponenten sind diese nicht zur Testdurchführung zu verwenden. Sie sollten so lange aufbewahrt werden, bis der Transportschaden geregelt ist. Danach sollten sie ordnungsgemäß entsorgt werden. 5. Benötigte, zusätzliche Materialien • Reaktionsgefäße (1,5 ml) für Probenverdünnungen • Präzisionspipetten (5-1000 µl) • Schüttler (Vortex) • Orbitalmischer • Inkubationsschrank 37 °C • Luminex-Analysesystem • Stoppuhr • Handschuhe 6. Haltbarkeit Die Komponenten sind ungeöffnet bei sachgerechter Lagerung (2-8 °C) bis zu den auf den Etiketten angegebenen Daten haltbar. Nach Anbruch beträgt die Haltbarkeit 6 Wochen. Nicht Einfrieren! Beads sind lichteempfindlich! Direkte Lichteinstrahlung vermeiden! Außer des Assay-Puffers ist eine Mischung der Komponenten verschiedener Chargen nicht zulässig. 7. Probenmaterial Humane Serumproben und Liquorproben sollten frisch eingesetzt werden. Bei Lagerung unterhalb von –20 °C, können die Proben jedoch auch nach mehreren Monaten Lagerung eingesetzt werden. Mehrfaches Frieren/Tauen ist dabei zu vermeiden. Hämolysierte, lipämische, ikterische oder kontaminierte Proben, sowie präzipitierte oder viskose Proben sollten nicht analysiert werden, da sie zu Resultatverfälschungen führen können. Bei der Testung von Serum-Liquor-Paaren ist unbedingt darauf zu achten, dass die Abnahme der Serum- und Liquorproben am selben Tag erfolgt und die Serum-Liquor-Paare im selben Testlauf untersucht werden. 8. Testvorbereitung Luminex-Analysesystem gemäß Handbuch vorbereiten. Die zur Erstellung eines Templates notwendigen Parameter sind im Anhang aufgeführt. Zum Test passendes Template aufrufen. Name der Messreihe eintragen. Bezeichnungen der Proben gemäß Pipettierschema (s. u.) eintragen. Inhalt der Testpackung auf Raumtemperatur bringen (20-25 °C). BMG Bead-Mix IgG (BMG) unbedingt unmittelbar vor Gebrauch durch sorgfältiges Vortexen resuspendieren. Direkte Lichtexposition vermeiden, Beads sind lichtempfindlich! Probenverdünnung 1. Serumproben Serum in zwei Schritten auf 1:3015 verdünnen mit gebrauchsfertigem Assay-Puffer. Auf gleichmäßige Durchmischung der Verdünnungen achten! Schritt I: 1+200** 5 µl Serum + 1000 µl Puffer Schritt II: 1+14 50 µl 1:201 + 700 µl Puffer **Bei gleichzeitiger Testung auf IgG und IgM kann die Serumverdünnung des Multimetrix Borrelia IgM Tests verwendet werden. 2. Liquorproben Liquor in zwei Schritten auf 1:80 verdünnen mit gebrauchsfertigem Assay-Puffer. Auf gleichmäßige Durchmischung der Verdünnungen achten! Schritt I: 1+19** 5 µl Liquor + 95 µlPuffer Schritt II: 1+3 25 µl 1:20 + 75 µl Puffer **Bei gleichzeitiger Testung auf IgG und IgM kann die Liquorverdünnung des Multimetrix Borrelia IgM Tests verwendet werden. 9. Testdurchführung Die Arbeitsanleitung ist strikt zu befolgen, um eine optimale Funktion des Nachweises zu gewährleisten. Die Inkubationszeiten haben Toleranzen von ± 5 Minuten, die Inkubationstemperaturen besitzen Toleranzen von ± 2 °C. Um eine optimale Durchmischung der Reagenzien zu gewährleisten und die Messzeit pro Probe zu minimieren, wird folgendes Vorgehen empfohlen: Die MTP ist vor jeder Inkubation bzw. unmittelbar vor der Messung für 15-30 sec. auf einem Orbitalmischer bei 600-800 U/min zu schütteln. Ist eine Messung direkt nach der letzten Inkubation nicht möglich, so kann der Ansatz maximal 30 Minuten bei 2-8 °C zwischengelagert werden. MM2102 Borrelia IgG de_V12 2/8
1. 25 µl Negativkontrolle (NEG G) in Kavität A1 geben. 2. 25 µl Positivkontrolle (POS G) in Kavität B1 geben. 3. 25 µl Referenzkontrolle (REF G) in Kavität C1 geben. 4. 25 µl verdünnte Serum/Liquorprobe in die benötigten Kavitäten der Mikrotiterplatte vorlegen. 5. 25 µl Bead-Mix (BMG) zu jeder Kavität zugeben. 6. Mikrotiterplatte mit Folie abkleben. 7. 60 min bei 37°C im Dunkeln inkubieren. 8. 50 µl Konjugat (CON G) zu jeder Kavität zugeben. 9. Mikrotiterplatte mit Folie abkleben. 10. 60 min bei 37°C im Dunkeln inkubieren. 11. Ansatz umgehend im Luminex-Analysesystem analysieren. 10. Qualitätskontrolle Als Qualitätskontrollparameter für die Durchführung des gesamten Assays dienen die gemessenen Werte der Referenz-, Positiv- und Negativkontrolle. Für eine zuverlässige Bewertung müssen die Werte der Referenzkontrolle innerhalb der im Chargenzertifikat angegebenen Grenzwerte liegen. Die Negativkontrolle muss für alle Antigene als negativ bewertet werden und die Positivkontrolle muss gemäß dem Chargenzertifikat für bestimmte Antigene positiv sein. Als Validitätskriterium für die Tests der einzelnen Proben dienen in allen Kavitäten die Fluoreszenzsignale der Kontroll-Bead-Sets. Über die CR1 Werte werden die Zugabe und das Verhältnis von verdünnter Serumprobe und Konjugat kontrolliert. Bei ordnungsgemäßer Durchführung müssen die Messwerte innerhalb der im Chargenzertifikat angegebenen Grenzwerte liegen. 11. Testauswertung Im Luminex-Analysesystem werden in jeder Kavität von jedem individuellen Bead-Set des Mixes 70 Beads fluorimetrisch vermessen. Die gemessenen Fluoreszenzintensitäten werden über die Software des Luminex-Analysesystems ausgewertet und in einem nach der Messreihe benannten Ordner in der Datei „Output.csv“ gespeichert. Die gemessenen Fluoreszenzintensitäten jeder Probe sind in dieser Datei unter dem Punkt „Data Type: Median“ tabellarisch aufgeführt. Aus den Messwerten der Referenzkontrolle in der Kavität C1 wird für jedes Bead-Set - außer OspC - mit Hilfe der im Chargenzertifikat angegebenen Indizes der für diesen Testlauf spezifische Cut-off berechnet gemäß: Messwert REF G, Ag n Index REF G, Ag n = Cut − off Ag n Das Antigen OspC, ein Frühborreliose-Marker, gilt als spezifischer IgM-Marker. Dieses, im Multimetrix Borrelia IgG Test daher nur in Einzelfällen spezifisch reaktive Bead-Set, wird über den im Chargenzertifikat angegebenen fixierten Cut-off-Wert ausgewertet. Die Fluoreszenzintensitäten der mit den Serumproben inkubierten Beads werden durch den Cut-off der entsprechenden Bead-Sets geteilt, um den Cut-off- Index zu berechnen: Messwert Probe xy, Agn = Cut - off -Index Cut - off Probe, Ag Ag n n Der Cut-off-Index zeigt an, um welchen Faktor die auf diesem Bead-Set gemessene Fluoreszenz der jeweiligen Probe unter oder über dem berechneten testspezifischen Cut-off-Wert liegt. Auswertung von Serumproben: Negativ: Cut-off-Index < 1 Keine Antikörper gegen das Antigen dieses Bead- Sets nachgewiesen. Schwach positiv: 1 ≤ Cut-off-Index < 1,5 Verdacht auf Antikörper gegen das Antigen dieses Bead-Sets. Positiv: Cut-off-Index ≥ 1,5 Antikörper gegen das Antigen dieses Bead-Sets nachgewiesen. Auswertung von Serum-Liquor-Paaren: Antikörper- Index-Berechnung Zur Differenzierung einer intrathekalen Antwort von einer Blut-Hirn-Schrankenstörung ist die AI- Berechnung nach REIBER notwendig (12). In die Berechnung des AI nach Reiber sollten Cut-off- Indizes ab 0,5 für die Einzelantigene und das Voll-Lysat einbezogen werden. Die Erstellung einer virtuellen Standardkurve ist nicht erforderlich. Der Reaktionsindex wird mit der Ausgangsverdünnung multipliziert und dann in die bekannte REIBER-Formel (12) eingesetzt. Die Vorgehensweise bei der AI- Berechnung ist im Anhang dargestellt. 12. Interpretation der Ergebnisse Auf Grundlage der Kombination der spezifischen Nachweise von Antikörpern gegen verschiedene Borrelia-Antigene ergibt sich folgendes Bewertungsschema: 1. Alle Bead-Sets "negativ" oder höchstens ein Bead- Set "schwach positiv" → Immunserologisch kein Hinweis für Borreliose 2. Ein Bead-Set "positiv" oder mindestens zwei Bead- Sets "schwach positiv" → Immunserologisch Borreliose nicht sicher ausgeschlossen In diesem Fall sollte eine Überprüfung der Probe mit Multimetrix Borrelia IgM Test durchgeführt werden. Jeweils eine "positive" Antigen-Gruppe in beiden Nachweisen erhärtet einen Verdacht auf Borreliose. Bei weiterhin unklarem Befund ist eine erneute Testung nach ca. 10 Tagen erforderlich. 3. Mehr als ein Bead-Set "positiv" → Immunserologisch dringender Verdacht auf Borreliose. MM2102 Borrelia IgG de_V12 3/8
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Seite 5 und 6: 15. Problembehandlung Messwerte der
Seite 7 und 8: Vorgaben zur Template-Erstellung f

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